第三章生物物證常見(jiàn)技術(shù)

1、第三章第三章 生物物證常見(jiàn)技術(shù)生物物證常見(jiàn)技術(shù)第一節(jié)第一節(jié) 電泳技術(shù)電泳技術(shù)第二節(jié)第二節(jié) 層析法層析法第三節(jié)第三節(jié) 比色分析技術(shù)比色分析技術(shù)第四節(jié)第四節(jié) 離心技術(shù)離心技術(shù)第五節(jié)第五節(jié) 顯微鏡技術(shù)顯微鏡技術(shù)第一節(jié)第一節(jié) 電泳技術(shù)電泳技術(shù) 電泳是指在電場(chǎng)中的帶電粒子電泳是指在電場(chǎng)中的帶電粒子向電性相反方向發(fā)生位移的現(xiàn)象。向電性相反方向發(fā)生位移的現(xiàn)象。是蛋白質(zhì)、核酸分析鑒定的主要技是蛋白質(zhì)、核酸分析鑒定的主要技術(shù)之一。術(shù)之一。 電泳原理電泳原理 在同一電泳條件下，不同帶電顆粒因其分子大小和帶電量的不同具有不同的泳動(dòng)速度。因此電泳一定時(shí)間，就能相互分開(kāi)。 電泳的分類(lèi)電泳的分類(lèi) v自由界面電泳 ：電泳可

2、以直接將樣品放在緩沖液中進(jìn)行 。v區(qū) 帶 電 泳 ：將樣品放在固體支持物上進(jìn)行電泳，因待測(cè)樣品各組分的泳動(dòng)率不同被分離成不同的區(qū)帶 。區(qū)帶電泳分類(lèi)區(qū)帶電泳分類(lèi)v（一）據(jù)電場(chǎng)強(qiáng)度分：（一）據(jù)電場(chǎng)強(qiáng)度分：高壓；常壓；低壓高壓；常壓；低壓。 v（二）據(jù)支持物種類(lèi)分：濾紙；醋酸纖維（二）據(jù)支持物種類(lèi)分：濾紙；醋酸纖維薄膜；瓊脂糖凝膠；聚丙烯酰胺凝膠。薄膜；瓊脂糖凝膠；聚丙烯酰胺凝膠。v（三）據(jù)支持物形狀分：水平板；垂直板；（三）據(jù)支持物形狀分：水平板；垂直板；柱狀；圓盤(pán)；柱狀；圓盤(pán)；U U 形管；毛細(xì)管。形管；毛細(xì)管。v（四）據(jù)原理分（四）據(jù)原理分 ：等速；免疫；等電聚焦。：等速；免疫；等電聚焦。v（

3、五）據(jù)方向分（五）據(jù)方向分 ：?jiǎn)蜗?；雙向。：?jiǎn)蜗?；雙向。v（六）據(jù)目的分：分析；制備。（六）據(jù)目的分：分析；制備。v（七）據(jù)緩沖液（七）據(jù)緩沖液 pH pH 分分 ：連續(xù)：連續(xù) pH pH ；非連；非連續(xù)續(xù) pHpH。 電泳槽電泳槽電泳儀電泳步驟電泳步驟v電泳的一般操作程序包括支持物的準(zhǔn)備、電泳的一般操作程序包括支持物的準(zhǔn)備、加樣、電泳、固定、染色、脫色、定性加樣、電泳、固定、染色、脫色、定性觀(guān)察及定量測(cè)定等過(guò)程。觀(guān)察及定量測(cè)定等過(guò)程。請(qǐng)觀(guān)看視頻請(qǐng)觀(guān)看視頻v1、高壓電極槽與進(jìn)樣機(jī)構(gòu) 2、填灌清洗機(jī)構(gòu) 3、毛細(xì)管 4、檢測(cè)器 5、鉑絲電極 6、低壓電極槽 7、恒溫機(jī)構(gòu) 8、記錄/數(shù)據(jù)處理 第二節(jié)

4、第二節(jié) 層析法層析法 所有的層析系統(tǒng)都由兩個(gè)相組成：一是所有的層析系統(tǒng)都由兩個(gè)相組成：一是固定相，另一是流動(dòng)相。當(dāng)待分離的混合物固定相，另一是流動(dòng)相。當(dāng)待分離的混合物隨流動(dòng)相通過(guò)固定相時(shí)，由于各組分的理化隨流動(dòng)相通過(guò)固定相時(shí)，由于各組分的理化性質(zhì)存在差異，與兩相發(fā)生相互作用（吸附、性質(zhì)存在差異，與兩相發(fā)生相互作用（吸附、溶解、結(jié)合等）的能力不同，在兩相中的分溶解、結(jié)合等）的能力不同，在兩相中的分配（含量比）不同，且隨流動(dòng)相向前移動(dòng)，配（含量比）不同，且隨流動(dòng)相向前移動(dòng)，各組分不斷地在兩相中進(jìn)行再分配。分部收各組分不斷地在兩相中進(jìn)行再分配。分部收集流出液，可得到樣品中所含的各單一組分，集流出液，

5、可得到樣品中所含的各單一組分，從而達(dá)到將各組分分離的目的。從而達(dá)到將各組分分離的目的。 層析操作層析操作第三節(jié)第三節(jié) 比色技術(shù)比色技術(shù)v分光光度法是通過(guò)測(cè)定被測(cè)物質(zhì)在分光光度法是通過(guò)測(cè)定被測(cè)物質(zhì)在特定波長(zhǎng)處或一定波長(zhǎng)范圍內(nèi)光的特定波長(zhǎng)處或一定波長(zhǎng)范圍內(nèi)光的吸光度或發(fā)光強(qiáng)度，對(duì)該物質(zhì)進(jìn)行吸光度或發(fā)光強(qiáng)度，對(duì)該物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析的方法。定性和定量分析的方法。比色技術(shù)分類(lèi)比色技術(shù)分類(lèi)v光譜分析技術(shù)可分為發(fā)射光譜、吸收光譜和光譜分析技術(shù)可分為發(fā)射光譜、吸收光譜和散射光譜三大類(lèi)。基于發(fā)射光譜分析的方法散射光譜三大類(lèi)?；诎l(fā)射光譜分析的方法有火焰光度法、原子發(fā)射光譜法和熒光光譜有火焰光度法、原子發(fā)射光

6、譜法和熒光光譜法，基于吸收光譜分析的方法有紫外法，基于吸收光譜分析的方法有紫外 - 可見(jiàn)可見(jiàn)光分光光度法，原子吸收分光光度法和紅外光分光光度法，原子吸收分光光度法和紅外光譜法；基于散射光譜分析的方法有比濁法。光譜法；基于散射光譜分析的方法有比濁法。 vA=abcv式中式中A為吸光度，為吸光度，b為溶液層厚度（為溶液層厚度（cm），），c為溶液的濃度（為溶液的濃度（g/dm3)， a為吸光系數(shù)。為吸光系數(shù)。v當(dāng)固定溶液層厚度當(dāng)固定溶液層厚度l和吸光系數(shù)和吸光系數(shù)a時(shí)，吸光時(shí)，吸光度度A與溶液的濃度成線(xiàn)性關(guān)系。與溶液的濃度成線(xiàn)性關(guān)系。 比色儀器比色儀器v紫外分光光度計(jì)，可見(jiàn)分光光度計(jì)（或紫外分光光

7、度計(jì)，可見(jiàn)分光光度計(jì)（或比色計(jì)）、紅外分光光度計(jì)或原子吸收比色計(jì)）、紅外分光光度計(jì)或原子吸收分光光度計(jì)。分光光度計(jì)。 722第四節(jié)第四節(jié) 離心技術(shù)離心技術(shù)v離心技術(shù)是實(shí)驗(yàn)室常采用的技術(shù)，主要離心技術(shù)是實(shí)驗(yàn)室常采用的技術(shù)，主要是利用離心力將懸浮液中的懸浮微粒快是利用離心力將懸浮液中的懸浮微?？焖俪两?，借以分離比重不同的各種物質(zhì)速沉降，借以分離比重不同的各種物質(zhì)成分的方法。成分的方法。vF重力浮力重力浮力 VPg Vg Vg（ p ）v式中式中:v F 下沉力；下沉力；vV 微粒體積；微粒體積；vP 微粒密度；微粒密度；v 介質(zhì)密度；介質(zhì)密度；vg 重力加速度。重力加速度。v當(dāng)當(dāng) P 時(shí)，微粒下沉

8、；時(shí)，微粒下沉； P與與 差值差值越大，微粒下沉速度越快。因此，加大離心越大，微粒下沉速度越快。因此，加大離心機(jī)轉(zhuǎn)速可加快離心微粒的沉降速度機(jī)轉(zhuǎn)速可加快離心微粒的沉降速度 離心機(jī)分類(lèi)離心機(jī)分類(lèi)v（一）根據(jù)轉(zhuǎn)速 分類(lèi)v1 、常速離心機(jī)：轉(zhuǎn)速少于 5000r/min ，用于一般液體可沉淀顆粒的分離，或制備一般的組織勻漿。v2 、高速離心機(jī)：轉(zhuǎn)速 5000 - 25000r/min ，用于細(xì)胞器的分離和生物大分子的制備。v3 、超速離心機(jī)：轉(zhuǎn)速超過(guò) 25000-85000r/min ，多用于亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)的分離和生物大分子的制備。vv（二）根據(jù)溫度 分類(lèi)v1 、常溫離心機(jī)：室溫（ 25 ）下工作。常速離

9、心時(shí)使用。v2 、低溫離心機(jī)：在 4 下工作。高速離心時(shí)使用。v3 、冷凍離心機(jī)：在 0 25 工作。超速離心時(shí)使用。v（三）根據(jù)體積大小和放置方式分類(lèi)（三）根據(jù)體積大小和放置方式分類(lèi)1 1 、臺(tái)式離心機(jī)：體積小，放在操作臺(tái)上，、臺(tái)式離心機(jī)：體積小，放在操作臺(tái)上，用于微量物質(zhì)的提取。用于微量物質(zhì)的提取。2 2 、落地式離心機(jī)：體積大，放在地面上，、落地式離心機(jī)：體積大，放在地面上，用于大量物質(zhì)的提取。用于大量物質(zhì)的提取。v（四）根據(jù)供能方式（四）根據(jù)供能方式 分類(lèi)分類(lèi)1 1 、自動(dòng)式離心機(jī)：設(shè)置程序后，電腦程、自動(dòng)式離心機(jī)：設(shè)置程序后，電腦程序控制離心速度和時(shí)間。序控制離心速度和時(shí)間。2 2

10、、電動(dòng)式離心機(jī)：由操作者接通電源、電動(dòng)式離心機(jī)：由操作者接通電源、利用旋鈕控制離心速度和時(shí)間的離心機(jī)。利用旋鈕控制離心速度和時(shí)間的離心機(jī)。3 3 、手動(dòng)式離心機(jī)：、手動(dòng)式離心機(jī)：第五節(jié) 顯微鏡技術(shù)一、發(fā)明一、發(fā)明 最早的顯微鏡是16世紀(jì)末期在荷蘭制造出來(lái)的。發(fā)明者可能是札恰里亞斯詹森（眼鏡商）或漢斯利珀希（科學(xué)家），他們用兩片透鏡制作了簡(jiǎn)易的顯微鏡，但并沒(méi)有用于觀(guān)察。 第一個(gè)使用者是伽利略。第二個(gè)是荷蘭商人安東尼凡列文虎克。 1931年，恩斯特魯斯卡研制了電子顯微鏡，1986年他被授予諾貝爾獎(jiǎng)。二、分類(lèi)二、分類(lèi)（一）（一）光學(xué)顯微鏡光學(xué)顯微鏡：通常皆由光學(xué)部分、照明部分和：通常皆由光學(xué)部分、照

11、明部分和機(jī)械部分組成。目前光學(xué)顯微鏡主要有機(jī)械部分組成。目前光學(xué)顯微鏡主要有明視野顯微明視野顯微鏡鏡（普通光學(xué)顯微鏡）、（普通光學(xué)顯微鏡）、暗視野顯微鏡暗視野顯微鏡、熒光顯微熒光顯微鏡鏡、相差顯微鏡相差顯微鏡、激光掃描共聚焦顯微鏡激光掃描共聚焦顯微鏡、偏光顯偏光顯微鏡微鏡、微分干涉差顯微鏡微分干涉差顯微鏡、倒置顯微鏡倒置顯微鏡。（二）電子（二）電子顯微鏡顯微鏡：有與光學(xué)顯微鏡相似的基本結(jié)構(gòu)：有與光學(xué)顯微鏡相似的基本結(jié)構(gòu)特征，但它將電子流作為一種新的光源，使物體成特征，但它將電子流作為一種新的光源，使物體成像?？砂盐矬w放大到像。可把物體放大到200萬(wàn)倍。種類(lèi)有萬(wàn)倍。種類(lèi)有 掃描電鏡掃描電鏡、分析

12、電鏡、超高壓電鏡等。分析電鏡、超高壓電鏡等。三、顯微鏡的使用方法三、顯微鏡的使用方法v 1.對(duì)光：對(duì)光： （1）將低倍鏡轉(zhuǎn)至鏡筒下方與鏡筒成一直線(xiàn)。）將低倍鏡轉(zhuǎn)至鏡筒下方與鏡筒成一直線(xiàn)。 （2）撥動(dòng)反光鏡，調(diào)節(jié)至視野最亮無(wú)陰影。反光鏡有）撥動(dòng)反光鏡，調(diào)節(jié)至視野最亮無(wú)陰影。反光鏡有平、凹兩面，光源強(qiáng)時(shí)用平面，較暗時(shí)用凹面，需要平、凹兩面，光源強(qiáng)時(shí)用平面，較暗時(shí)用凹面，需要強(qiáng)光時(shí)，將聚光器提高，光圈放大；需要弱光時(shí)，將強(qiáng)光時(shí)，將聚光器提高，光圈放大；需要弱光時(shí)，將聚光器降低，或光圈適當(dāng)縮小。聚光器降低，或光圈適當(dāng)縮小。 （3）將待觀(guān)察的標(biāo)本置載物臺(tái)上，轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)器使鏡）將待觀(guān)察的標(biāo)本置載物臺(tái)上，轉(zhuǎn)

13、動(dòng)粗調(diào)節(jié)器使鏡筒下降至接物鏡接近標(biāo)本。于轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)器的同時(shí)，筒下降至接物鏡接近標(biāo)本。于轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)器的同時(shí)，須俯身在鏡旁仔細(xì)觀(guān)察接物鏡與標(biāo)本之間的距離。須俯身在鏡旁仔細(xì)觀(guān)察接物鏡與標(biāo)本之間的距離。 （4）左眼于接目鏡觀(guān)察，同時(shí)左手轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)，使鏡）左眼于接目鏡觀(guān)察，同時(shí)左手轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)，使鏡筒徐徐上升以調(diào)節(jié)焦距，使視野內(nèi)的物象看到上時(shí)即筒徐徐上升以調(diào)節(jié)焦距，使視野內(nèi)的物象看到上時(shí)即停，再調(diào)微調(diào)節(jié)器，至標(biāo)本清晰為止。停，再調(diào)微調(diào)節(jié)器，至標(biāo)本清晰為止。 v2 接物鏡的使用及光線(xiàn)的調(diào)節(jié)：接物鏡的使用及光線(xiàn)的調(diào)節(jié)： 顯微鏡一般具有三個(gè)接物鏡，即低顯微鏡一般具有三個(gè)接物鏡，即低倍、高倍及油鏡，固定于接物鏡轉(zhuǎn)

14、換盤(pán)倍、高倍及油鏡，固定于接物鏡轉(zhuǎn)換盤(pán)孔中。觀(guān)察標(biāo)本時(shí)，孔中。觀(guān)察標(biāo)本時(shí)，先先使用使用低倍低倍接物鏡，接物鏡，此時(shí)，視野較大，標(biāo)本較易查出，但放此時(shí)，視野較大，標(biāo)本較易查出，但放大倍數(shù)較小。大倍數(shù)較小。后高倍后高倍接物鏡放大的倍數(shù)接物鏡放大的倍數(shù)較大，能觀(guān)察微小的物體或結(jié)構(gòu)。較大，能觀(guān)察微小的物體或結(jié)構(gòu)。再再使使用用油鏡油鏡觀(guān)察，一般加一滴油后直接將油觀(guān)察，一般加一滴油后直接將油鏡頭浸入油滴中進(jìn)行鏡檢觀(guān)察。鏡頭浸入油滴中進(jìn)行鏡檢觀(guān)察。 v3 低倍、高倍、油鏡頭的識(shí)別： （1）標(biāo)明放大倍數(shù)10，40，100，或10/0.25，40/0.65，100/1.30。 （2）低倍鏡最短，高倍鏡較長(zhǎng)，油鏡

15、最長(zhǎng)。 （3）鏡頭前面的鏡孔低倍鏡最大，高倍鏡較大，油鏡最小。 （4）油鏡頭上?？逃泻谏h(huán)圈，或“油”字。 v 4（1）光線(xiàn)對(duì)好后，移動(dòng)推進(jìn)器尋找需要觀(guān)）光線(xiàn)對(duì)好后，移動(dòng)推進(jìn)器尋找需要觀(guān)察的標(biāo)本。察的標(biāo)本。 （2）如標(biāo)本的體積較大，不能清楚查見(jiàn)其）如標(biāo)本的體積較大，不能清楚查見(jiàn)其構(gòu)造因而不能確認(rèn)時(shí)，則將標(biāo)本移至視野構(gòu)造因而不能確認(rèn)時(shí)，則將標(biāo)本移至視野中央，再旋轉(zhuǎn)高倍接物鏡于鏡筒下方。中央，再旋轉(zhuǎn)高倍接物鏡于鏡筒下方。 （3）旋轉(zhuǎn)微調(diào)節(jié)器至物象清晰為止。）旋轉(zhuǎn)微調(diào)節(jié)器至物象清晰為止。 （4）調(diào)節(jié)聚光器及光圈，使視野內(nèi)的物象）調(diào)節(jié)聚光器及光圈，使視野內(nèi)的物象達(dá)到最清晰的程度。達(dá)到最清晰的程度。 v

16、 5 油鏡的使用方法：油鏡的使用方法： （1）原理：）原理：v油鏡的透氣孔最小，這樣進(jìn)入的光線(xiàn)就少，油鏡的透氣孔最小，這樣進(jìn)入的光線(xiàn)就少，物體不易看清楚。物體不易看清楚。v同時(shí)又因自玻片透過(guò)的光線(xiàn)，由于發(fā)生了折同時(shí)又因自玻片透過(guò)的光線(xiàn)，由于發(fā)生了折射散光，因此射入鏡頭的光線(xiàn)就更少，物體射散光，因此射入鏡頭的光線(xiàn)就更少，物體更看不清楚。更看不清楚。v采用一種采用一種和玻片折光率相接近的介質(zhì)如香柏和玻片折光率相接近的介質(zhì)如香柏油油，加于標(biāo)本與玻片之間，使光線(xiàn)不通過(guò)空，加于標(biāo)本與玻片之間，使光線(xiàn)不通過(guò)空氣，這樣射入鏡頭的光線(xiàn)就較多，物象就看氣，這樣射入鏡頭的光線(xiàn)就較多，物象就看得清楚。得清楚。v（2

17、）油鏡的使用：）油鏡的使用： a將光線(xiàn)調(diào)至最強(qiáng)（聚光器提高，光圈開(kāi)將光線(xiàn)調(diào)至最強(qiáng)（聚光器提高，光圈開(kāi)放）。放）。 b轉(zhuǎn)粗調(diào)節(jié)器使鏡筒上升，滴香柏油轉(zhuǎn)粗調(diào)節(jié)器使鏡筒上升，滴香柏油1小小滴于接物鏡正下方標(biāo)本上。滴于接物鏡正下方標(biāo)本上。 c轉(zhuǎn)動(dòng)接物鏡轉(zhuǎn)換盤(pán)，使油鏡頭于鏡筒下轉(zhuǎn)動(dòng)接物鏡轉(zhuǎn)換盤(pán)，使油鏡頭于鏡筒下方。方。 d俯身鏡旁側(cè)面在肉眼的觀(guān)察下，轉(zhuǎn)動(dòng)俯身鏡旁側(cè)面在肉眼的觀(guān)察下，轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)器使油鏡頭徐徐下降浸入香柏油內(nèi)，粗調(diào)節(jié)器使油鏡頭徐徐下降浸入香柏油內(nèi)，輕輕接觸玻片為止。輕輕接觸玻片為止。 e慢慢轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)器，使油鏡頭徐徐上慢慢轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)器，使油鏡頭徐徐上升至見(jiàn)到標(biāo)本的物象為止。升至見(jiàn)到標(biāo)本的物象

18、為止。 f轉(zhuǎn)動(dòng)微調(diào)節(jié)器，使視野物象達(dá)到最清轉(zhuǎn)動(dòng)微調(diào)節(jié)器，使視野物象達(dá)到最清的程度。的程度。 g左手徐徐移動(dòng)推進(jìn)器，并轉(zhuǎn)動(dòng)微調(diào)節(jié)左手徐徐移動(dòng)推進(jìn)器，并轉(zhuǎn)動(dòng)微調(diào)節(jié)器以觀(guān)察標(biāo)本。器以觀(guān)察標(biāo)本。 h標(biāo)本觀(guān)察完畢后，轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)器將鏡標(biāo)本觀(guān)察完畢后，轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)器將鏡筒升起，取下標(biāo)本玻片。立即用擦鏡紙筒升起，取下標(biāo)本玻片。立即用擦鏡紙將鏡頭上的香柏油擦凈。將鏡頭上的香柏油擦凈。 v 6 注意事項(xiàng)：注意事項(xiàng)： （1）使用顯微鏡之前，應(yīng)熟悉顯微鏡的）使用顯微鏡之前，應(yīng)熟悉顯微鏡的各部名稱(chēng)及使用方法，特別應(yīng)掌握識(shí)別各部名稱(chēng)及使用方法，特別應(yīng)掌握識(shí)別三種接物鏡之特征。三種接物鏡之特征。 （2）觀(guān)察無(wú)色和顏色較淺的標(biāo)本時(shí)，必）觀(guān)察無(wú)色和顏色較淺的標(biāo)本時(shí)，必須注意光線(xiàn)的調(diào)節(jié)。須注意光線(xiàn)的調(diào)節(jié)。 （3）新鮮標(biāo)本觀(guān)察時(shí)，須加蓋玻片，以）新鮮標(biāo)本觀(guān)察時(shí)，須加蓋玻片，以免標(biāo)本因蒸發(fā)而干燥變形或污染侵蝕接免標(biāo)本因蒸發(fā)而干燥變形或污染侵蝕接物鏡，同時(shí)可使標(biāo)本表面勻平，光線(xiàn)得物鏡，同時(shí)可使標(biāo)本表面勻平，光線(xiàn)得以集中，有利于觀(guān)察。以集中，有利于觀(guān)察。四、顯微鏡的保養(yǎng)四、顯微鏡的保養(yǎng)v1顯微鏡在從木箱中取出或裝箱時(shí)，右手緊顯微鏡在從木箱中取出或裝箱時(shí)，右手緊握鏡臂，左手穩(wěn)托鏡座，輕輕取出。不要只握鏡臂，左手穩(wěn)托鏡座，輕輕取出。不要只用一只手提取，以防顯微鏡墜落，然后輕輕用一只手提取，以防顯微鏡墜落，然后輕