冠心病大鼠心房肌KV1.5蛋白表達(dá)變化及意義

1、冠心病大鼠心房肌KV1.5蛋白表達(dá)變化及意義丁紹祥咸陽(yáng)市第一人民醫(yī)院，陜西咸陽(yáng)712000【摘要】目的：檢測(cè)冠心病大鼠心房肌KV1.5 蛋白表達(dá)變化，探討器質(zhì)性心臟病時(shí)心肌電重構(gòu)的目的和意義。方法：SD大鼠30只，隨機(jī)分兩組，實(shí)驗(yàn)組20只，對(duì)照組10只。建立冠心病大鼠模型，6W后免疫組化檢測(cè)其心房肌KV1.5 蛋白。結(jié)果：冠心病組大鼠KV1.5蛋白平均光密度值為: 0.0987±0.0031；對(duì)照組為: 0.1013±0.0024，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.292， p0.05)。結(jié)論：冠心病大鼠心房肌KV1.5蛋白表達(dá)下降致其有效不應(yīng)期延長(zhǎng)，該變化可能是機(jī)體對(duì)損傷

2、效應(yīng)的一種預(yù)適應(yīng)，降低心律失常的易感性，在一定范圍內(nèi)利于心房肌電生理穩(wěn)定而保障其生理功能?！娟P(guān)鍵詞】 冠心?。浑x子通道；電重構(gòu)；結(jié)構(gòu)重構(gòu)【中圖分類(lèi)號(hào)】R541.7+5 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】 A心血管疾病是目前人類(lèi)死亡的最大殺手，特別是發(fā)展中國(guó)家，冠心病患病人數(shù)仍在持續(xù)增多1。盡管有研究顯示其死亡率在發(fā)達(dá)國(guó)家逐年下降，但仍然是死亡的首要病因2，且多數(shù)患者對(duì)本病危險(xiǎn)因素控制不佳3。冠心病患者由于心肌供血不足，心肌興奮性和傳導(dǎo)性受不同程度累及，因此，研究冠心病心肌細(xì)胞膜上離子通道改變對(duì)揭示心律失常的發(fā)生機(jī)制及治療無(wú)疑具有重要意義4。超速延遲整流鉀通道（Kur）在人類(lèi)心臟僅存在心房肌，是重要的復(fù)極電流5，縮

3、短心房有效不應(yīng)期（AERP）6。在心臟受損而心房肌尚未發(fā)生明顯電紊亂，該離子通道的變化是優(yōu)先保證心肌的除極抑或復(fù)極的同步性尚不明確，也未見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。冠心病大鼠Kur改變有助于對(duì)心肌電紊亂早期發(fā)展趨勢(shì)的認(rèn)識(shí)，并促進(jìn)人們對(duì)器質(zhì)性心臟病心律失常發(fā)生機(jī)制及其預(yù)保護(hù)機(jī)制的進(jìn)一步研究，更好地指導(dǎo)相應(yīng)疾病的預(yù)防和治療。 材料與方法1 材料 SD大鼠由蘭州大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK(甘)2011-0001。KV1.5多克隆抗體（一抗，山羊抗鼠，美國(guó)SANTACRUZ）；兔抗山羊多克隆抗體（二抗，北京中杉金橋）；PCR擴(kuò)增儀（美國(guó)ABI9700）；生物組織自動(dòng)脫水機(jī)（湖北惠達(dá)HD-300）

4、；石蠟包埋機(jī)（湖北惠達(dá)HD-310B）；IMAGEPRO plus 6.0軟件（美國(guó)Media Cybernetics）。2 方法2.1 冠心病大鼠造模及心房組織制備：20只SD大鼠喂飼高脂飼料(2%膽固醇、10%豬油、0.2%丙基硫氧嘧啶、0.5%膽酸鈉、87.3%基礎(chǔ)飼料)6W，于后3天每次灌胃30 min后，腹腔注射垂體后葉素30 U/kg，1次/d。6W后處死大鼠，取適量左心耳，滅菌生理鹽水沖洗后置20%甲醛中浸泡。2.2 免疫組化：將心房組織置全自動(dòng)脫水機(jī)自動(dòng)處理后行石蠟包埋，按3um厚度切片，每一標(biāo)本組織切3片，行免疫組化染色并鏡檢。隨機(jī)于每標(biāo)本取一切片，設(shè)置相應(yīng)區(qū)域面積，用Ima

5、gepro plus6.0 軟件行光密度定量分析。2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法： 用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，行t檢驗(yàn)，P0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)驗(yàn)結(jié)果 1 免疫組化染色結(jié)果：對(duì)照組大鼠心房肌細(xì)胞著色較深，見(jiàn)較多棕黃色顆粒(見(jiàn)圖1)；實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞著色較淺，棕黃色顆粒較少(見(jiàn)圖2) 圖1 圖2 DAB顯色，蘇木素復(fù)染，×1002 免疫組化檢測(cè)值： 對(duì)照組免疫組化切片平均光密度值為0.1013±0.0024，實(shí)驗(yàn)組為0.0987±0.0031。兩組比較， t=2.902， p0.05(見(jiàn)表1)。表 1兩組大鼠心房肌免疫組化切片光密度平均值（±s）組別例

6、數(shù)光密度值t值p值對(duì)照組100.1013±0.00242.2920.03實(shí)驗(yàn)組200.0987±0.0031討 論心房在心臟中的重要性不及心室，但作為接納血液回流并適時(shí)增加心室灌注，心房有效承載并緩沖了心臟結(jié)構(gòu)復(fù)雜性和電生理異質(zhì)性中更多不穩(wěn)定因素，最大限度保證心室完成其射血功能，從而滿足臟器血流灌注的需要。冠心病時(shí)，心房同樣存在心肌缺血、缺氧，加之心室功能減退、房室瓣膜結(jié)構(gòu)及血流動(dòng)力學(xué)改變加重其負(fù)荷，易致心房結(jié)構(gòu)重構(gòu)。心肌結(jié)構(gòu)重構(gòu)因其興奮性和傳導(dǎo)性改變誘發(fā)電紊亂7，表現(xiàn)為心肌除極和復(fù)極的非同步。在心動(dòng)周期中，心肌有效不應(yīng)期（ERP）與可興奮間期是一對(duì)矛盾的統(tǒng)一。ERP延長(zhǎng)利

7、于除極同步，更多異位激動(dòng)點(diǎn)落在ERP內(nèi)而失去其生物學(xué)效應(yīng)。但由于心臟異質(zhì)性，這種延長(zhǎng)并非均一性存在，特別是心肌缺血缺氧時(shí)，細(xì)胞間縫隙連接不均一關(guān)閉使心肌電傳導(dǎo)改變，致相鄰細(xì)胞間高低電位并存的風(fēng)險(xiǎn)升高而為心肌復(fù)極的非同步提供了可能8，甚至誘導(dǎo)尖端扭轉(zhuǎn)型室性心動(dòng)過(guò)速9；心肌可興奮間期延長(zhǎng)利于復(fù)極同步完成，但于心肌興奮性增高時(shí)易致快速心律失常。正常心臟結(jié)構(gòu)中，心房由于沒(méi)有明確神經(jīng)傳導(dǎo)系統(tǒng)，其平臺(tái)期縮短為最后除極細(xì)胞能與最初除極細(xì)胞在同一心動(dòng)周期復(fù)極同步提供足夠時(shí)間儲(chǔ)備。在心室肌，因蒲肯野纖維存在，于一定范圍內(nèi)保證心肌復(fù)極同步性，其傳導(dǎo)功能改善利于心肌除極同步而近似于合胞體10。若無(wú)蒲肯野纖維，ERP

8、延長(zhǎng)于傳導(dǎo)減慢易致復(fù)極非同步誘導(dǎo)觸發(fā)活動(dòng)11。因此，心肌電生理是與其結(jié)構(gòu)相適應(yīng)。另外，心肌除復(fù)極非同步只是相對(duì)而言，ERP絕對(duì)或相對(duì)延長(zhǎng)易致后除極，表現(xiàn)為復(fù)極的非同步致除極非同步；而可興奮間期的延長(zhǎng)在心肌興奮性增高時(shí)易致除極非同步，多合并有心肌電傳導(dǎo)障礙為復(fù)極非同步提供了可能。冠心病時(shí)，心肌存在缺血、缺氧而易致心肌電紊亂12。于心房肌，由于可興奮間期的延長(zhǎng)易致除極非同步，于復(fù)極外向陽(yáng)離子減弱和內(nèi)向陽(yáng)離子增大均致ERP延長(zhǎng)，利于心肌電穩(wěn)定而盡可能保證其生理功能的完成。本研究顯示，冠心病時(shí)，大鼠心房肌KV1.5 蛋白表達(dá)下調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示于該病變過(guò)程中，心房肌心肌電變化存在預(yù)適應(yīng)性改變，

9、延長(zhǎng)ERP，優(yōu)先保證心肌除極的同步，這與房顫時(shí)心肌電變化相似13。提示心肌電紊亂時(shí)，這種相應(yīng)離子蛋白密度下調(diào)并非促進(jìn)心肌電紊亂，而是與其結(jié)構(gòu)損傷相適應(yīng)改變以適應(yīng)心臟生理功能的需要，但損傷程度必需在一定范圍內(nèi)才能彰顯機(jī)體自身調(diào)節(jié)的有效性和適用性，超越其調(diào)節(jié)范圍則無(wú)法顯示其意義和價(jià)值，但調(diào)節(jié)的最終目的依然是為臟器回歸生理功能而存在，并非加重心肌電紊亂14。已有研究表明，在心衰動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中KV1.5 蛋白通道密度表達(dá)下調(diào)15，而在心房結(jié)構(gòu)改善時(shí)表達(dá)上調(diào)16，說(shuō)明心肌電改變是盡可能與其結(jié)構(gòu)相適應(yīng)以保證臟器生理功能需要17。同時(shí)，本研究也提示，心臟器質(zhì)性損害的慢性疾病，其心律失常最根本的原因在于結(jié)構(gòu)的改變

10、，控制心律失常更多的是對(duì)癥措施，而兼顧改善結(jié)構(gòu)重構(gòu)的上游治療應(yīng)是較好的策略18。參考文獻(xiàn)1 Zhu KF, Wang YM, Zhu JZ, et al. National prevalence of coronary heart disease and its relationship with human development index: A systematic reviewJ. Eur J Prev Cardiol, 2016,23(5): 530-543. DOI:10.1177/204748731558740

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