LC_MS_MS法測(cè)定人血漿中多潘立酮的濃度_余鵬

1、論著LC MS /MS 法測(cè)定人血漿中多潘立酮的濃度12323311余鵬，陽國(guó)平，冉黎靈，譚鴻毅，范志宏，劉智，金亞超，程澤能*（1中南大學(xué)藥學(xué)院，長(zhǎng)沙410013；2中南大學(xué)湘雅三醫(yī)院，長(zhǎng)沙410013；3湖南泰格湘雅藥物研究有限公司，長(zhǎng)沙410013）摘要目的：建立人血漿中多潘立酮濃度的LC MS /MS測(cè)定法，用于臨床試驗(yàn)中多潘立酮血藥濃度的測(cè)試。方法：以泮托拉15唑?yàn)閮?nèi)標(biāo)，血漿樣本經(jīng)0. 1mol L 氫氧化鈉溶液堿化后用乙醚萃取處理。采用Agilent TC C 18色譜柱（4. 6mm 150mm ，1Phenomenex Gemini C 18柱（4mm 3. 0mm ，10m

2、）為保護(hù)柱，v /v）m ）為分析柱，以甲醇20mmol L 甲酸銨水溶液（70 30，為流動(dòng)相，使用電噴霧離子源（ESI ），以正離子多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM ）方式進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果：每個(gè)樣本分析時(shí)間為5min 。血漿中11內(nèi)源性物質(zhì)對(duì)測(cè)定無干擾，多潘立酮線性范圍為0. 6970 44. 60g L ，定量下限（LLOQ ）為0. 6970g L 。日內(nèi)、日間多潘立酮與內(nèi)標(biāo)的平均提取回收率分別為100. 7%和98. 7%，平均基質(zhì)效應(yīng)分別為為101. 4%和精密度（RSD ）均小于10%，98. 9%，且均不存在濃度依賴性。結(jié)論：本方法特異性強(qiáng)，靈敏度高，測(cè)定結(jié)果可靠，適用于臨床試驗(yàn)中血漿樣本的高

3、通量分析。關(guān)鍵詞：多潘立酮；血藥濃度；液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜中圖分類號(hào)：R917文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：02541793（2011）04061906LC MS /MS determination of domperidone in human plasmaYU Peng 1，YANG Guo ping 2，RAN Li ling 3，TAN Hong yi 2，F(xiàn)AN Zhi hong 3，LIU Zhi 3，JIN Ya chao 1，CHENG Ze neng 1*（1School of Pharmaceutical Science ，Central South University ，Chan

4、gsha 410013，China ；2Third Xiangya Hospital ，Central South University ，Changsha 410013，China ；3Hunan Tiger Xiangya Drug RDCo，Ltd，Changsha 410013，China ）Abstract Objective ：To establish an LC MS /MSmethod for the determination of domperidone in human plas-and to assay the biological samples from clini

5、cal trialsMehods ：Pantoprazole was used as internal standardAl-ma ，kalified by 0. 1mol L 1sodium hydroxide solution ，plasma samples were extracted with ethyl etherThe extractive was separated on an Agilent TC C 18column （4. 6mm 150mm ，5m ）guarded by a Phenomenex Gemini C 18col-umn （4mm 3. 0mm ，10m ）

6、The mobile phase consisted of methanol 20mmol L 1ammonium formate （70 30，v /v）Electrospray ionization （ESI ）source was applied and operated in the positive multiple reaction monitoring （MRM ）modeResults ：Each analysis was completed within 5minChromatograms showed no endogenous interfer-ing peaks wit

7、h blank samplesThe linear calibration curve was obtained over the concentration on range of 0. 697044. 60g L 1The limit of quantification was 0. 6970g L 1The inter and intra day precision （RSD ）was less than 10%The average extraction recovery of domperidone and pantorazole was respectively 100. 7%an

8、d 98. 7%，and the average matrix effects of of domperidone and pantorazole were respectively 101. 4%and 98. 9%，in which no concentration dependences were observedConclusion ：The method is specific ，sensitive and accuracy ，and proved to be suitable for the determination of domperidone in human plasma

9、in clinical plasma samplesKey words ：domperidone ；plasma drug concentration ；LC MS /MS多潘立酮（domperidone ）是一種多巴胺2（DA2）受體拮抗劑，它作用于血腦屏障外的化學(xué)受*通訊作者體觸發(fā)區(qū)，發(fā)揮其抗嘔吐作用。由于DA2受體也同樣存在于胃腸道，因此多潘立酮作為DA2受體拮抗Tel ：（0731）82650446；E mail ：chengzenengcsuyahoocn劑可減少多巴胺介導(dǎo)的胃平滑肌松弛。在胃腸道中，多潘立酮作為一種促動(dòng)力藥，能增加消化道的動(dòng)力。多潘立酮不易透過血腦屏障而進(jìn)入大腦，罕

10、見1有中樞神經(jīng)系統(tǒng)不良反應(yīng)發(fā)生。多潘立酮血藥濃度的測(cè)定方法在國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)中已有不少報(bào)道。早期曾采用兔體內(nèi)提取的抗體，進(jìn)行放免法分析，但該法線性范圍較窄（0. 2 10. 051g L ），選擇性相對(duì)較差，易受代謝產(chǎn)物干擾，且有放射性污染2甲醇與甲酸銨（色譜純）購(gòu)自美國(guó)Tedia 公司；實(shí)驗(yàn)用水為實(shí)驗(yàn)室自制去離子超純水，其他試劑（分析純）均購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。實(shí)驗(yàn)中所使用的空白血漿均采集自健康中國(guó)志愿者。2色譜/質(zhì)譜條件2. 1色譜條件色譜柱：Agilent TC C 18（4. 6mm 150mm ，5m ）；保護(hù)柱：Phenomenex Gemini C 18（4mm 3. 0mm

11、，10m ）；流動(dòng)相：甲醇20mmoL L 1甲酸銨水溶液（70 30，v /v）；流速：1mL min 1；柱溫：30 ；進(jìn)樣量：5L 。柱后流出液的1/5分流進(jìn)入到質(zhì)譜儀檢測(cè)。質(zhì)譜條件：采用電噴霧離子源（ESI ），正離子MRM 模式檢測(cè)。多潘立酮：監(jiān)測(cè)離子m /z426. 3175. 1，碎裂電壓為180V ，碰撞能量為27eV 。內(nèi)標(biāo)碎裂電壓為120泮托拉唑：監(jiān)測(cè)m /z384. 2200. 2，V ，碰撞能量為6eV 。離子源參數(shù)設(shè)置如下：Gas 300 ；Gas Flow ，8L min 1；Nebulizer ，0. 2Temp ，MPa ；Capilary ，4. 0kV 。3

12、3. 1對(duì)照品溶液與對(duì)照品血漿的配制對(duì)照品儲(chǔ)備溶液精密稱取多潘立酮對(duì)照品11. 15mg ，置于10mL 量瓶中，以少量甲醇溶解后，加甲醇至刻度，搖勻，即得含多潘立酮濃度為1. 115g L 1的對(duì)照品儲(chǔ)備溶液，置于4 冰箱保存。3. 2內(nèi)標(biāo)溶液精密稱取泮托拉唑?qū)φ掌?0. 05mg ，置于10mL 量瓶中，用少量甲醇溶解后，加甲醇1至刻度，搖勻，即得濃度為1. 005g L 的泮托拉唑內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備溶液，置于4 冰箱保存。臨用前將內(nèi)標(biāo)1儲(chǔ)備溶液用甲醇稀釋成濃度為40. 00g L 的內(nèi)標(biāo)溶液。之后，高效液相色譜法大量應(yīng)用到多潘立酮的體內(nèi)藥物分析中，經(jīng)文獻(xiàn)報(bào)道的有5HPLC UV 法3、HPLC F

13、LD 法4，等。當(dāng)多潘立酮給藥劑量為20mg 時(shí)，由于其首過作用明顯，生物1利用度低，血漿中藥物濃度低至約1g L ，之前報(bào)道的HPLC UV 法無法達(dá)到要求的靈敏度。雖然HPLC FLD 法靈敏度能滿足要求，但該法對(duì)樣本處理要求較高，且測(cè)定比較費(fèi)時(shí)（每次分析約10min ），不適合大量樣本的分析。近年來，隨著LC MS 儀器的日益普及，其在多6，7。但在潘立酮體內(nèi)藥物分析中的應(yīng)用也有報(bào)道有些LC MS 測(cè)定法涉及到中國(guó)受試者的文獻(xiàn)中，在色譜分離中，多潘立酮的容量片面追求分析速度，8，9；而有些報(bào)道還是與蛋白因子（k ）甚至不到1. 010質(zhì)沉淀的樣本處理方法相搭配。這些方法中，多潘立酮與各種

14、內(nèi)源性雜質(zhì)的色譜分離很不完全，而報(bào)道中的方法學(xué)考察內(nèi)容卻未涉及基質(zhì)效應(yīng)的影響。本實(shí)驗(yàn)室在方法建立過程中，注意到保留時(shí)間較小時(shí)，基質(zhì)效應(yīng)的影響不可忽略。為此，本文重新優(yōu)化了LC MS /MS測(cè)定方法中的各種條件，并對(duì)方法進(jìn)行了充分的方法學(xué)驗(yàn)證，并將新方法成功應(yīng)用于臨床試驗(yàn)樣本的測(cè)試。1儀器與試藥Agilent 6410B 型三級(jí)四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀，配有3. 3取多潘立酮濃度為1. 115g L 1的對(duì)照品儲(chǔ)備溶液，用流動(dòng)相逐級(jí)稀釋，即得含對(duì)照品血漿自動(dòng)進(jìn)樣器、液相色譜儀、柱溫箱、電噴霧電離離子源（ESI ）及Agilent MassHunter Workstation Software 數(shù)據(jù)處理系

15、統(tǒng)（Agilent ，美國(guó)）；METTLER TOLEDO AB135S 十萬分之一天平（梅特勒，瑞士）；XW 80A 渦旋混合器（上海滬西分析儀器廠）；TGL16M 型冷凍離心機(jī)（長(zhǎng)沙英泰儀器有限公司）；MTN 2800D 氮吹儀（AUTO SCIENCE 公司）；AHL 2001P 型實(shí)驗(yàn)室純水系統(tǒng)（艾科浦，重慶頤洋企業(yè)發(fā)展有限公司）。多潘立酮對(duì)照品（批號(hào)100304200502）購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所；內(nèi)標(biāo)泮托拉唑?qū)φ掌罚ㄅ?hào)20080509）由株洲金泰藥業(yè)有限公司提供。223. 0，111. 5，55. 75，多潘立酮濃度分別為446. 0，27. 88，13. 94，6. 970

16、g L 1的系列對(duì)照品溶液。分別精密吸取上述系列對(duì)照品溶液50L ，置于10mL 尖底玻璃試管中，在40 微弱氮?dú)饬飨麓蹈珊?，精密加?00L 空白血漿，渦旋混勻30s ，即可得22. 30，11. 15，到含多潘立酮濃度分別為44. 60，5. 575，2. 788，1. 394，0. 6970g L 1濃度級(jí)別的系列對(duì)照品血漿。4血漿樣本處理精密吸取含藥血漿500L ，置于10mL 尖底玻1璃試管中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液（40. 00g L ）501L ，加入0. 1mol L 氫氧化鈉水溶液50L 后，渦旋混勻30s ，加入乙醚4mL ，渦旋振蕩3min ，離40 水心（440g 5min

17、），取上層有機(jī)溶劑3mL ，浴中微弱氮?dú)饬鲹]干，殘?jiān)?00L 流動(dòng)相復(fù)溶后，吸取5L 進(jìn)樣到色譜系統(tǒng)分析。55. 1方法學(xué)考察特異性在優(yōu)化后的色譜/質(zhì)譜條件下，多潘立酮及內(nèi)標(biāo)泮托拉唑的質(zhì)譜見圖1 。圖1Fig 1（B ）多潘立酮（A ）與內(nèi)標(biāo)泮托拉唑（B ）的質(zhì)譜圖Typical MRM mass spectras of domperidone （A ）and pantoprazole圖2Fig 2sampleA空白血漿（blank plasma ）B多潘立酮濃度0. 6970g L 1C受試者服用600（blank plasma spiked level of domperidone ）血

18、漿administration of 600mg domperidone tablets ）典型血漿色譜圖Typical MRM chromatograms for domperidone in human plasma空白血漿、對(duì)照品血漿和受試者血漿的典型色譜圖見圖2。多潘立酮和內(nèi)標(biāo)泮托拉唑的保留時(shí)間分別為4. 6和3. 7min ，峰形良好，血漿中內(nèi)源性物質(zhì)不干擾多潘立酮和內(nèi)標(biāo)的測(cè)定。5. 2按照“3. 3”項(xiàng)下方法配制不同濃度級(jí)別的系列對(duì)照品血漿。加入內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線與最低定量限1mg 藥物后3h 血漿（plasma sample from a volunteer 3h after sing

19、le oral溶液（40. 00g L ）50L 后，按“4”項(xiàng)下方法處理后進(jìn)行分析，記錄多潘立酮與內(nèi)標(biāo)泮托拉唑色譜峰面積。以多潘立酮峰面積與內(nèi)標(biāo)泮托拉唑峰面積的比值（Y ）為縱坐標(biāo)，以多潘立酮在血漿樣本中的濃度（X ）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸（權(quán)重為1/X ），得到多潘立酮的直線回歸方程為：Y =0. 6882X +0. 0251r =0. 99781結(jié)果表明多潘立酮濃度在0. 6970 44. 60g L 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。最低定量限0. 6970g 2L 1濃度水平上，5份樣本的精密度RSD 為8. 9%，準(zhǔn)確度為92. 1%。5. 3精密度與準(zhǔn)確度取潔凈的10mL 玻璃離心“3. 3”試

20、管，按照項(xiàng)下所述方法，分別配制含多潘立酮11. 15，35. 68g L 13個(gè)濃度的濃度分別為1. 394，“4”項(xiàng)下方法試驗(yàn)，在不同天的質(zhì)控血漿樣本。按照時(shí)間內(nèi)連續(xù)制備并測(cè)定3個(gè)分析批，每批樣本分為低、中、高3個(gè)濃度水平，每個(gè)濃度進(jìn)行5樣本分析，計(jì)算日內(nèi)和日間精密度、準(zhǔn)確度，數(shù)據(jù)見表1。表1精密度、準(zhǔn)確度、提取回收率與基質(zhì)效應(yīng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果（ s ）Precision ，accuracy ，recovery and matrix effects of domperidone in human plasma日內(nèi)（intra day ）測(cè)得濃度（found ）/g L 11. 344 0. 1231

21、0. 49 0. 3533. 13 2. 44RSD /%9. 23. 47. 4準(zhǔn)確度（accuracy ）/%96. 494. 192. 9日間精密度（inter day ）測(cè)得濃度（found ）/g L 11. 407 0. 11411. 31 0. 8534. 19 2. 54RSD /%8. 17. 57. 4準(zhǔn)確度（accuracy ）/%100. 9101. 495. 8提取回收率（extraction recovery ）/%99. 2 9. 3103. 1 3. 499. 8 6. 1基質(zhì)效應(yīng)（matrix effects ）/%102. 2 4. 3106. 5 3. 6

22、95. 5 3. 2Tab 1C /g L 11. 39411. 1535. 685. 4提取回收率和基質(zhì)效應(yīng)取潔凈的10mL 玻璃離心試管，按照前述方法配制含多潘立酮低、中、凍融循環(huán)后的穩(wěn)定性；將質(zhì)控血漿樣本于40 條15，30d 后將樣本取出，件下凍存0，室溫下自然解凍，放置至室溫后，按“4”項(xiàng)下所述方法處理后進(jìn)樣，考察血漿樣本在40 條件下存放30d 的穩(wěn)定性。結(jié)果，在上述穩(wěn)定性考察條件下，多潘立酮的濃度均保持穩(wěn)定，未出現(xiàn)明顯變化（測(cè)得值與標(biāo)示值的偏差均小于10%）。6應(yīng)用本文所建立的多潘立酮血藥濃度測(cè)試方法已成功應(yīng)用于20名健康受試者中進(jìn)行的一項(xiàng)生物等效性研究。20名男性健康志愿者在試

23、驗(yàn)前進(jìn)行病史詢問和體格檢查（包括心電圖、胸透、肝功、腎功、血常規(guī)、尿常規(guī)和乙肝表面抗原檢查等），在被告知試驗(yàn)?zāi)康?、藥物特性、可能出現(xiàn)的藥物不良反應(yīng)、受試者與試驗(yàn)者的權(quán)益和義務(wù)的前提下，簽署知情同意書。入選受試者年齡為（24 4）歲，體重均大于50kg ，2BMI =體體重指數(shù)（BMI ）在19 24kg m 之間22，重（kg ）/身高（m ）同批體重相差不超過 15%。采用隨機(jī)、開放、雙周期交叉試驗(yàn)設(shè)計(jì)。20例11. 15，35. 68g L 1）3個(gè)濃度的質(zhì)控高（1. 394，血漿樣本，每個(gè)濃度平行制備5份，按照“4”項(xiàng)下方法處理后進(jìn)樣到色譜系統(tǒng)分析，記錄多潘立酮的峰面積（A 1）和內(nèi)標(biāo)的

24、峰面積（B 1）。另取潔凈的10mL 玻璃離心試管數(shù)支，加入含多潘立酮低、中、高（13. 94，111. 5，356. 8g L 1）3個(gè)濃度的對(duì)照品1再分別加入內(nèi)標(biāo)溶液（40. 00g L ）溶液50L ，50L ，40 水浴微弱氮?dú)饬鲹]干，200L 流動(dòng)相復(fù)取5L 進(jìn)樣到色譜系統(tǒng)分析，記錄多潘立酮溶后，的色譜峰面積（A 2）和內(nèi)標(biāo)的色譜峰面積（B 2）。再取潔凈的10mL 玻璃離心試管數(shù)支，分別加入含多111. 5，356. 8g L 1）3潘立酮低、中、高（13. 94，個(gè)濃度的對(duì)照品溶液50L 和內(nèi)標(biāo)工作溶液（40. 00140 水浴微弱氮?dú)饬鲹]干，g L ）50L ，殘?jiān)谩?”空白

25、血漿樣本按項(xiàng)下方法處理后得到的200L溶液進(jìn)行復(fù)溶處理，最后取5L 進(jìn)樣到色譜系統(tǒng)分析，記錄多潘立酮的色譜峰面積（A 3）和內(nèi)標(biāo)的色譜峰面積（B 3）。則血漿樣本中多潘立酮的提取回收率為R =4/3 A 1/A 2 100%，內(nèi)源性物質(zhì)引起的基質(zhì)效應(yīng)為E =A 3/A 2 100%，測(cè)試結(jié)果見表1；血漿樣本中內(nèi)標(biāo)的提取回收率（R =4/3 B 1/B 2 100%）為（98. 7 2. 7）%，基質(zhì)效應(yīng)（E =B 3/B 2 100%）為（98. 9 4. 7）%。5. 5穩(wěn)定性考察按照前述方法配制低、中、高（1. 394，11. 15，35. 68g L 1）3個(gè)濃度的多潘立受試者隨機(jī)分為2

26、組，于試驗(yàn)前禁食10h ，試驗(yàn)日晨空腹用200mL 溫開水送服試驗(yàn)制劑多潘立酮片（海南澳美華制藥有限公司，規(guī)格10mg ，批號(hào)090201）或參比制劑多潘立酮片（西安揚(yáng)森制藥有限公司，規(guī)格10mg ，批號(hào)090301）20mg 。服藥后2h 內(nèi)禁水；服藥后4h 統(tǒng)一進(jìn)食標(biāo)準(zhǔn)餐。20名受試者服藥7d 后交叉給藥，重復(fù)上述試驗(yàn)。每位受試0. 25h ，0. 5h ，者于給藥前（0min ）及給藥后5min ，0. 75h ，1h ，1. 5h ，2h ，3h ，4h ，6h ，8h ，12h ，24h ，36h 采集肘靜脈血5mL ，置于肝素管中，離心分離血漿，血漿樣本置于40 低溫保存箱內(nèi)保存待

27、測(cè)。采用LC MS /MS法測(cè)定給藥后不同時(shí)間多潘立酮的血藥濃度。20名健康受試者口服多潘立酮片試驗(yàn)制劑和參比制劑20mg 后平均血藥濃度時(shí)間曲線見圖3。血藥濃度時(shí)間數(shù)據(jù)經(jīng)DAS 2. 0軟酮質(zhì)控血漿樣本。按“4”項(xiàng)下方法操作后，將得到6，12h 后的樣本處理液分別在進(jìn)樣條件下放置0，進(jìn)樣分析，考察樣本處理液在進(jìn)樣條件下存放12h的穩(wěn)定性；將配制后的質(zhì)控血漿樣本在室溫條件下放置4h 后進(jìn)行處理分析，考察質(zhì)控血漿樣本在室溫條件下放置4h 的穩(wěn)定性；將質(zhì)控血漿樣本于40 凍存24h 后，在室溫下放置至完全融解，再將“4”其置于40 冷凍，如此反復(fù)凍融3次后，按項(xiàng)下方法處理后進(jìn)樣分析，考察質(zhì)控血漿樣

28、本經(jīng)3個(gè)件統(tǒng)計(jì)分析，得到主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)見表2 。，內(nèi)源性物質(zhì)雖然“看不見”卻仍然對(duì)良好分離時(shí)，色譜后共流出組分的響應(yīng)值產(chǎn)生或強(qiáng)或弱的影11響。因此，目前對(duì)基質(zhì)效應(yīng)的考察已成為L(zhǎng)C MS /MS法分析生物樣本時(shí)的重要內(nèi)容。本研究在建立方法之初，為了提高分析通量，曾嘗試使用較為以降低大簡(jiǎn)單的蛋白沉淀法配合較短的分析時(shí)間，樣本量測(cè)試時(shí)的成本，結(jié)果顯示基質(zhì)效應(yīng)導(dǎo)致的響應(yīng)值波動(dòng)會(huì)引起精密度與準(zhǔn)確度下降。本文使用液圖3Fig 320名健康受試者口服20mg 多潘立酮片劑后平均血藥濃度Mean plasma concentration time curves of two domperidone時(shí)間曲線圖p

29、reparations in 20healthy Chinese，液萃取法將樣本處理得較為“干凈”并配以較為充分的色譜分離時(shí)，基質(zhì)效應(yīng)得以消除。參考文獻(xiàn)1LIU Ai fen （劉愛芬）Analysis of gastrointestinal motility drugs （促胃腸動(dòng)力藥物探析）China Pract Med （中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥），2008，34（3）：2002XU Dong hang （許東航），YUAN LOU Hong gang （樓洪剛），Hong （袁虹），et al Pharmacokinetics and bioequivalence of domp-eridone

30、chewable tablets in healthy volunteers （多潘立酮咀嚼片的人體藥動(dòng)學(xué)和生物等效性）Chin Pharm J （中國(guó)藥學(xué)雜志），2009，44（1）：433ZHUANG Xiao qing （莊曉慶）Determination of domperidone in domperidone tablets and its content uniformity by HPLC （HPLC 法測(cè)定多潘立酮片含量及含量均勻度）Qilu Pharm Aff （齊魯藥2007，5：278事），4Maria K ，Kamila KHigh performance liqui

31、d chromatographic a-nalysis for the determination of domperidone in human plasmaJ Chromatogr B ，2000，744（1）：2075Chantal S ，Jacques TAn improved HPLC assay with Veronique M ，fluorescence detection for the determination of domperidone and three major metabolites for application to in vitro drug metabo

32、lism studiesJ Chromatogr B ，2007，852（12）：6116Smit MJ ，Sutherland FCW ，Hundt HKL ，et al Rapid and sensitive liquid chromatography tandem mass spectrometry method for the quantitation of domperidone in human plasmaJ Chromatogr A ，2002，949（12）：657Courtney M ，Errol B ，et al Determination of domperidone

33、Paul A Z ，in human serum and human breast milk by high performance liq-uid chromatography electrospray mass spectrometryJ Chromatogr 1999，730（1）：9B ，8HAO Guang tao （郝光濤），DONG Rui hua （董瑞華），GAO et al Quantitative determination of domperi-Hong zhi （高洪志），done in human plasma by high performance liquid

34、chromatography tandem mass spectrometry （HPLC MS MS 法定量測(cè)定人血漿中多潘立酮的濃度）Chin J Drug Appl Monit （中國(guó)藥物應(yīng)用2008，5（5）：19與監(jiān)測(cè)），9SHI Ai ming （施愛明），HUA Wen yan （華雯研），ZHANG Quan ying （張全英）Determination of domperidone in human plasma by LC MS /MSmethod 高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用（LC MS /MS）法測(cè)定人血漿中多潘立酮的濃度Pharm Clin Res （藥學(xué)與臨床研究），20

35、08，16（1）：68表2健康受試者單劑量口服20mg多潘立酮片后的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)（n =20）Tab 2Main pharmacokinetic parameters （mean SD ）of domperidone after an oral administration of 20mg dompe-ridone test or reference tablets in healthy volunteers參數(shù)（parameters ）T max /hC max /ngmL 1AUC 036/ngh mL 1AUC 0 /ngh mL 1t 1/2/hF /%受試制劑（test prepa

36、ration ）0. 7 0. 328. 5 9. 474. 4 24. 280. 2 24. 14. 1 1. 5102. 9 12. 6參比制劑（reference preparation ）0. 6 0. 229. 4 8. 072. 5 23. 478. 8 23. 94. 2 1. 67討論采用液質(zhì)聯(lián)用法進(jìn)行定量分析時(shí)，理想的內(nèi)標(biāo)物為待測(cè)組分的同位素標(biāo)記物，但由于同位素標(biāo)記物合成難度較大，成本較高，不易獲得，本研究對(duì)的氨多種化合物進(jìn)行了篩選。其中文獻(xiàn)報(bào)道溴索作為內(nèi)標(biāo)時(shí)，方法精密度不佳，可能是因?yàn)榛|(zhì)效應(yīng)或樣本提取回收率上的差異，氨溴索不能很好補(bǔ)償由此引起的多潘立酮響應(yīng)波動(dòng)。血漿樣本處

37、理?xiàng)l件摸索階段對(duì)比了沉淀蛋白法與液液萃取法。沉淀蛋白法處理樣本時(shí)，質(zhì)譜響應(yīng)值偏低，分析原因可能是沉淀法處理血漿樣本，不能徹底去除內(nèi)源性物質(zhì)，多潘立酮與內(nèi)源性物質(zhì)在LC MS 接口處競(jìng)爭(zhēng)性地與初級(jí)離子反應(yīng)，降低待測(cè)物離子的生成效率，進(jìn)而使其響應(yīng)值偏低。當(dāng)采用氫氧化鈉溶液堿化血漿樣本后以有機(jī)溶劑萃取的方法時(shí)，提取效果較好，內(nèi)標(biāo)與多潘立酮有相似的回收率，且均不存在濃度依賴性。由于LC MS /MS法的高特異性，分析工作者一度認(rèn)為色譜分離對(duì)于質(zhì)譜檢測(cè)的重要性下降了。但越來越多的事實(shí)表明，生物樣本分析中不能實(shí)現(xiàn)10，12 624 10 31 （ 4 ） 藥物分析雜志 Chin J Pharm Anal 2011 ， 12 LIU Qian（ 劉茜） ， ZHENG Xiao nan （ 鄭小楠） ， WANG Qian （ 王 et al Determination of domperidone concentration in human 茜） ， plasma by LC MS MS and its pharmacokinetics（ 人血漿中多潘 立酮的含量測(cè)定及藥物動(dòng)力學(xué)考察） Chin J Pharm （ 中國(guó)藥劑 2009 ， 7 （ 3 ） ： 135 學(xué)雜志） ， （ 本文于 2010 年 5 月 24 日收到） YU