腎綜合征出血熱患者血小板內(nèi)游離鈣離子濃度的變化

1、腎綜合征出血熱患者血小板內(nèi)游離鈣離子濃度的變化                       作者：趙千子，劉正穩(wěn)，韓群英，高麥倉(cāng)【關(guān)鍵詞】  細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子    摘要：目的  探討腎綜合征出血熱(HFRS) 患者血小板內(nèi)游離鈣離子濃度(Ca2+i)與疾病的相關(guān)性。方法  用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞中Fluo3的熒光強(qiáng)度，

2、對(duì)42例確診的HFRS患者血小板內(nèi)Ca2+i進(jìn)行測(cè)定，并以30例正常人作為對(duì)照。結(jié)果  檢測(cè)顯示，多尿期HFRS患者的Ca2+i顯著高于正常對(duì)照組(P<0.01)，而發(fā)熱期、少尿期及恢復(fù)期的Ca2+i與對(duì)照組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。結(jié)論  HFRS發(fā)病過(guò)程中有多種因素可以活化血小板，多尿期患者的血小板處于活化狀態(tài)，而發(fā)熱期和少尿期患者的血小板可能由于各種原因的功能缺陷導(dǎo)致其Ca2+i并不升高。關(guān)鍵詞：腎綜合征出血熱；血小板；細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子Study on the platelet intracellular free calcium concentr

3、ationof patients with hemorrhagic fever with renal syndromeABSTRACT: Objective  To investigate the relationship between hemorrhagic fever with renal syndrome (HFRS) and intracellular free calcium concentration (Ca2+i) of platelets. Methods  Fluorescence of Fluo3 was measured in platelets o

4、f 42 patients with HFRS and 30 healthy individuals as controls by flow cytometry. Results  Platelet Ca2+i of patients with HFRS at the polyuric phase was significantly higher than that of the control group(P<0.01), while platelet Ca2+i of patients at the fever, oliguric and convalescence pha

5、ses showed no significant difference from that of the control group(P>0.05). Conclusion  Platelets from patients at the polyuric phase are highly activated, possibly in response to many factors in the progress of the disease. There is no significant difference between platelet Ca2+i of patie

6、nts at the fever and oliguric phase and that of the control group, which is as widely accepted, possibly due to the functional deficiency of platelets during this disease.KEY WORDS: HFRS; platelets; intracellular free calcium腎綜合征出血熱( hemorrhagic fever with renal syndrome, HFRS) 是各種病毒性出血熱中分布最廣、發(fā)病數(shù)量最多

7、、危害最大的一種急性傳染病1。臨床以發(fā)熱、出血、腎臟功能損害為主要特征。出血見(jiàn)于HFRS整個(gè)病程，其程度輕重不一。引起HFRS患者出血的原因復(fù)雜多樣，血小板減少及功能障礙是公認(rèn)的原因之一。鈣離子對(duì)血小板發(fā)揮正常生理功能起重要作用，闡明HFRS患者血小板功能狀態(tài)及其Ca2+i變化的機(jī)制對(duì)HFRS發(fā)病機(jī)理的深入理解和新的有針對(duì)性的治療方法的設(shè)計(jì)具有重要意義。因此，我們對(duì)HFRS患者血小板Ca2+i進(jìn)行了檢測(cè)并分析其與疾病的相關(guān)性。1  材料與方法1.1  材料  病例為2004年12月至2005年6月本院及西安市第八醫(yī)院住院患者42例，有典型的HFRS臨床癥狀和體征，

8、均經(jīng)HFRS特異性IgM 抗體檢測(cè)陽(yáng)性而確診。其中男32例，女10例，年齡18-65歲，平均(44.0±12.8)歲。臨床分型危重型15例，重型12例，中型8例，輕型7例。對(duì)照組為正常健康人30例，其中男25例，女5例，年齡19-50歲，平均(33.8±7.6)歲。Fluo3 AM (美國(guó)Biotium公司) 用二甲亞砜配成0.5mmol/L，置-20冰箱保存。1.2   方法  空腹采肘靜脈血1mL，用EDTA抗凝，以800r/min的速度離心10min，取富血小板血漿200L裝入試管，加入Fluo3使其終濃度為4mol/L。37孵育30mi

9、n后用PBS稀釋50倍，然后用流式細(xì)胞儀(FACSCalibur，美國(guó)BD公司)檢測(cè)10000個(gè)血小板的熒光強(qiáng)度。在1mmol/L CaCl2存在的情況下加入Triton X100測(cè)定最大熒光值Fmax，加入20mmol/L EGTA測(cè)定最小熒光值Fmin。細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度計(jì)算公式為： Ca2 +i=Kd(F-Fmin)/(Fmax-F)nmol/L(Kd為Fluo3與Ca2 +反應(yīng)的解離常數(shù)，Kd=450nmol/L)23。1.3  數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析  實(shí)驗(yàn)結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，以t檢驗(yàn)和方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，P<0.05表明差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。用SPSS1

10、2.0統(tǒng)計(jì)分析系統(tǒng)完成處理過(guò)程。2  結(jié)果檢測(cè)結(jié)果顯示，HFRS患者多尿期血小板Ca2+i與正常對(duì)照組之間有顯著性差異(P<0.01)，而發(fā)熱期、少尿期和恢復(fù)期血小板Ca2+i與正常對(duì)照組無(wú)顯著性差異(P>0.05)。HFRS各期血小板Ca2+i之間沒(méi)有顯著性差異(P>0.05)。HFRS患者多尿期和正常對(duì)照組血小板Ca2+i的Fluo3熒光強(qiáng)度流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖1、圖2。HFRS患者發(fā)熱期、少尿期、多尿期和恢復(fù)期血小板Ca2+i檢測(cè)結(jié)果及其與正常對(duì)照組的比較見(jiàn)表1 。圖1  正常對(duì)照組的血小板內(nèi)Fluo3熒光強(qiáng)度流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果（略）Fig.1 Fluorescence of Fluo3 in platelets of control by flow cytometry圖2  HFRS患者的血小板內(nèi)Fluo3熒光強(qiáng)度流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果（略）Fig.2 Fluorescence of Fluo3 in platelets of patient with HFRS by flow cytometry表1  HFRS患者和正常對(duì)照組的血小板內(nèi)游離鈣離子濃度（略）Table 1  Results of platelet Ca2+i in HFRS patients and controls3