生孢梭菌制備

1、不知樓主是要計可培養(yǎng)的數(shù)量還是測菌液內(nèi)菌的數(shù)量。如果計可培養(yǎng)的數(shù)量的話就直接涂布到瓊脂培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后計數(shù)就可以。若是要計菌液里的數(shù)量可以測一下OD值或者用熒光燃料染色后再在顯微鏡下計數(shù)。作者：yushanyou12你是在藥廠工作的？恩，菌懸液的濃度要求的確是每毫升小于100cfu，但是最好在50到100cfu之間，小于50的話容易出現(xiàn)假陰性。還有你是要做無菌的方法驗證還是無菌培養(yǎng)基的靈敏度檢查呢？至于確定菌的量，是在硫乙醇中計數(shù)的。其實無菌方法驗證中的菌懸液的制備也是依中國藥典（2005年版二部）附錄XI H無菌檢查法中“培養(yǎng)基靈敏度檢查”項下的方法，制備成小于100 CFU/ml的對照用菌

2、液。所以無論你做什么，菌懸液的制備方法都是一樣的。具體方法就是，先把生孢梭菌在硫乙醇中培養(yǎng)24小時，然后吸取1毫升培養(yǎng)液用生理鹽水進(jìn)行10倍稀釋，我的經(jīng)驗是，稀釋到10的-7次方就是在100cfu以下了（這個你得自己多做幾次平行實驗或驗證實驗，看到底稀釋到多少倍。最初不好把握的時候可以同時培養(yǎng)幾個臨近的梯度），然后取至少200ml的硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基到試管里（要求無菌），然后接種1ml制備好的菌懸液到硫乙醇試管里，在32.5度下培養(yǎng)18h，然后開始計數(shù)。生孢梭菌在液體的硫乙醇里會長成梭子一樣的單個菌落，這時拿的時候千萬不要震動，然后開始計數(shù)（一個單獨的“梭子”計一個菌落）。注：如果培養(yǎng)時間太長會

3、產(chǎn)生渾濁，不便于計數(shù)。如果震動試管也會渾濁。硫乙醇的量盡量大一點，這樣便于計數(shù)。一些具體的東西，還需要你實際去操作后，發(fā)現(xiàn)問題，再解決問題。貌似你現(xiàn)在的經(jīng)驗不是很足，最好的是找個懂的人帶你做幾次，或去別的公司或研究所參觀學(xué)習(xí)，這樣學(xué)起來會快一點。最后祝賀你成功。 方便的生孢梭菌計數(shù)方法附件: 生孢梭菌計數(shù)采用流體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基(含瓊脂),稱取培養(yǎng)基15g,再加入純化瓊脂粉0.40.5g加入500ml蒸餾水后加熱使溶解后分裝至30*200的大試管中,50ml/管,加塞,包扎后滅菌,培養(yǎng)基溫度保持在4550攝氏度時,將稀釋好的生孢梭菌菌液用吸管吸取1ml加入至培養(yǎng)基中,輕輕搖勻后置3035攝氏度培養(yǎng)1620小時(不強求厭氧環(huán)境培養(yǎng)),立即觀察點計菌數(shù),切記培養(yǎng)期間不可搖動試管,生長的微生物群體在培養(yǎng)基中分散成小米狀,注意選擇菌數(shù)在3050之間的試管,便于點計.把我計數(shù)時的圖附上,以便大家參考生孢梭菌計數(shù)采用流體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基(含瓊脂),稱取培養(yǎng)基15g,再加入純化瓊脂粉0.40.5g加入500ml蒸餾水后加熱使溶解后分裝至30*200的大試管中,50ml/管,加塞,包扎后滅菌,培養(yǎng)基溫度保持在4550攝氏度時,將稀釋好的生孢梭菌菌液用吸管吸取1ml加入至培養(yǎng)基中,輕輕搖勻后置3035攝氏度培養(yǎng)1620小時(不強求厭氧環(huán)境培養(yǎng)),立即