中藥制劑分析實(shí)驗(yàn)

1、中藥制劑分析實(shí)驗(yàn)一、中藥制劑分析實(shí)驗(yàn)的一般知識(shí)（一）中藥制劑分析實(shí)驗(yàn)的任務(wù)和要求中藥制劑分析是一門實(shí)踐性很強(qiáng)的學(xué)科。中藥制劑分析實(shí)驗(yàn)的任務(wù)是使學(xué)生加深對(duì)中藥制劑分析基本理論的理解，掌握中藥制劑分析的基本操作技能，學(xué)習(xí)中藥制劑分析實(shí)驗(yàn)的基本知識(shí)，養(yǎng)成嚴(yán)格、認(rèn)真和實(shí)事求是的科學(xué)態(tài)度，提高觀察、分析和解決問題的能力，為將來參加工作打下良好的基礎(chǔ)。為了完成上述任務(wù)，提出以下要求：1、實(shí)驗(yàn)前認(rèn)真預(yù)習(xí)，領(lǐng)會(huì)實(shí)驗(yàn)原理，明確本次實(shí)驗(yàn)的目的和要求，了解實(shí)驗(yàn)步驟和注意事項(xiàng)，做到心中有數(shù)，實(shí)驗(yàn)前可以先寫好實(shí)驗(yàn)報(bào)告的部分內(nèi)容，查好有關(guān)數(shù)據(jù)，以便實(shí)驗(yàn)時(shí)及時(shí)、準(zhǔn)確地記錄和進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。2、實(shí)驗(yàn)時(shí)要嚴(yán)格按照規(guī)范操作進(jìn)行，仔

2、細(xì)觀察實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象，認(rèn)真記錄有關(guān)數(shù)據(jù)。要善于思考，學(xué)會(huì)運(yùn)用所學(xué)理論知識(shí)解釋實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象，研究實(shí)驗(yàn)中的問題。3、要認(rèn)真寫好實(shí)驗(yàn)報(bào)告，實(shí)驗(yàn)報(bào)告要清楚、簡(jiǎn)練、整潔。4、學(xué)生進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室必須嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室規(guī)則，服從帶教老師的指導(dǎo)。5、愛護(hù)實(shí)驗(yàn)室的儀器設(shè)備，不準(zhǔn)將實(shí)驗(yàn)室的儀器設(shè)備私自帶出室外。使用時(shí)，經(jīng)老師允許后，按照儀器使用說明書進(jìn)行操作，使用完畢要進(jìn)行登記。實(shí)驗(yàn)中如有儀器損壞應(yīng)立即報(bào)告老師。6、嚴(yán)格遵守操作規(guī)程及實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)注意的事項(xiàng)，在使用不熟悉其性能的儀器和藥品之前，應(yīng)查閱有關(guān)資料或請(qǐng)教指導(dǎo)教師，不要隨意進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，以免損壞儀器，浪費(fèi)試劑，使實(shí)驗(yàn)失敗，更重要的是預(yù)防發(fā)生意外事故。7、實(shí)驗(yàn)過程中應(yīng)注意防火災(zāi)、防爆

3、炸、防腐蝕、防污染工作，牢固樹立“安全第一”意識(shí)。濃酸、濃堿具有強(qiáng)烈的腐蝕性，切勿濺在皮膚和衣服上。用濃酸溶解樣品時(shí)，應(yīng)在通風(fēng)廚中操作。8、實(shí)驗(yàn)室嚴(yán)禁吸煙，不許會(huì)客，不許帶入食物。9、使用易燃的有機(jī)溶劑時(shí)，應(yīng)遠(yuǎn)離火焰和熱源。低沸點(diǎn)有機(jī)溶劑應(yīng)在水浴上加熱，用過的此類溶劑應(yīng)倒入回收瓶，不要倒入水槽。10、實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，一切儀器試劑應(yīng)放回原處，玻璃儀器要清洗干凈，一些有毒、有腐蝕性的廢液應(yīng)倒入廢液缸內(nèi)。11、實(shí)驗(yàn)臺(tái)面要擦試干凈，由值日生負(fù)責(zé)安全衛(wèi)生工作，包括清理實(shí)驗(yàn)室，檢查水、電的開關(guān)，清除垃圾和污物，關(guān)好門窗后方可離開實(shí)驗(yàn)室。（二）中藥制劑分析實(shí)驗(yàn)的基本操作技能根據(jù)藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，評(píng)價(jià)一個(gè)藥物的質(zhì)

4、量一般包括鑒別、檢查和含量測(cè)定三個(gè)方面。判斷一個(gè)藥物的質(zhì)量是否符合要求，必須全面考慮三者的檢測(cè)結(jié)果。這些檢測(cè)結(jié)果的可靠性，又是建立在基本操作技能的基礎(chǔ)上，過硬的基本操作技能是進(jìn)行藥品全面質(zhì)量檢測(cè)與研究的基本條件，也是使藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)真正符合法規(guī)要求的必要條件。否則會(huì)使合格的產(chǎn)品被誤認(rèn)為“不合格”，給生產(chǎn)單位造成不必要的損失，或者使不合格的產(chǎn)品，誤認(rèn)為“合格”，則危害更大。中藥制劑分析課正是培養(yǎng)學(xué)生掌握好基本操作技能的重要教學(xué)環(huán)節(jié)。學(xué)生在校期間經(jīng)過了中藥制劑分析基礎(chǔ)理論的學(xué)習(xí)和基本技能的嚴(yán)格訓(xùn)練，從而獲得檢驗(yàn)和研究藥品質(zhì)量的基本思路和方法，為今后做好藥品質(zhì)量的控制和提高工作打下堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。中藥制劑

5、分析實(shí)驗(yàn)將選擇一些有代表性的內(nèi)容，包括鑒別、檢查和含量測(cè)定，以中國藥典和中國藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范中的分析方法為主要內(nèi)容，加強(qiáng)對(duì)學(xué)生的基本操作的訓(xùn)練。中藥制劑分析的對(duì)象大多是復(fù)方中藥制劑，被測(cè)成分相對(duì)含量低，干擾大，會(huì)給分析工作帶來一定的難度，再者有些分析方法（如薄層色譜法）易受眾多因素影響，有時(shí)結(jié)果重復(fù)性、可控性不太理想，要想獲得可靠、準(zhǔn)確、重復(fù)性好的分析結(jié)果，需要學(xué)生有過硬的基本操作技能，規(guī)范的操作理念，科學(xué)、嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)，以滿足藥品檢驗(yàn)和藥品研究工作的實(shí)際需求。實(shí)驗(yàn)中所用術(shù)語要規(guī)范、準(zhǔn)確，要與中國藥典相一致。為了保證藥物分析結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性，中國藥典對(duì)一些基本操作中的專用術(shù)語都有嚴(yán)格

6、的定義，現(xiàn)將中國藥典規(guī)定的取樣量的準(zhǔn)確度和試驗(yàn)的精確度摘錄如下：（1）稱取“0.1g”系指稱取量可為0.060.14g；稱取“2g”系指稱取量可為1.52.5g；稱取“2.0g”系指稱取量可為1.952.05g；稱取“2.00g”系指稱取量可為1.9952.005g。（2）“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確到所取重量的千分之一；“稱定”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所取重量的百分之一；“精密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該體積移液管的精度要求；“量取”系指可用量筒或按照量取體積的有效數(shù)位選用量具。取用量為“約”若干時(shí)，系指取用量不能超過規(guī)定量的±10。（3）恒重，除另有規(guī)定外，系指連

7、續(xù)兩次干燥或灼燒后的重量差異在0.3mg以下的重量。干燥至恒重的第二次及以后各次稱重均應(yīng)在規(guī)定條件下繼續(xù)干燥1小時(shí)后進(jìn)行，熾灼至恒重的第二次稱重應(yīng)在繼續(xù)熾灼30分鐘后進(jìn)行。中國藥典有關(guān)溫度的規(guī)定為：水浴溫度指98100；熱水指7080；微溫或溫水指4050；室溫指1030；冷水指210；冰浴指2以下；放冷指放冷至室溫。（三）實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的記錄、處理和實(shí)驗(yàn)報(bào)告1、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的記錄學(xué)生應(yīng)備有專用的記錄本，不允許將數(shù)據(jù)記在小紙片上或隨便記在其他地方。實(shí)驗(yàn)過程中所得的各種測(cè)量數(shù)據(jù)及現(xiàn)象，應(yīng)及時(shí)記錄下來，有特殊要求的，要按規(guī)定進(jìn)行，如薄層色譜法要用繪圖、復(fù)印件或彩照表示。記錄數(shù)據(jù)時(shí)，要實(shí)事求是，決不能拼湊數(shù)據(jù)

8、。若發(fā)現(xiàn)數(shù)據(jù)讀錯(cuò)、算錯(cuò)，而需要改動(dòng)時(shí)，可將該數(shù)據(jù)用一橫線劃去，并在其上方或旁邊寫上正確的數(shù)據(jù)。記錄內(nèi)容一般包括供試藥品名稱，來源、批號(hào)、數(shù)量、規(guī)格、外觀性狀、包裝情況、檢驗(yàn)中觀察到的現(xiàn)象、檢驗(yàn)數(shù)據(jù)等。記錄實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)時(shí)，保留幾位有效數(shù)字應(yīng)和所用儀器的準(zhǔn)確程度相適應(yīng)。2、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和處理在實(shí)驗(yàn)中，測(cè)得一組數(shù)據(jù)后，對(duì)其中可疑數(shù)據(jù)是保留還是舍棄，可用Q檢驗(yàn)法或Grubbs檢驗(yàn)法進(jìn)行檢驗(yàn)，決定取舍，然后算出平均值，作為實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，決不允許主觀臆斷，決定其取舍。3、實(shí)驗(yàn)報(bào)告中藥制劑分析實(shí)驗(yàn)報(bào)告一般包括以下內(nèi)容：（1）實(shí)驗(yàn)名稱、實(shí)驗(yàn)日期。（2）實(shí)驗(yàn)?zāi)康?寫明通過本實(shí)驗(yàn)要達(dá)到的訓(xùn)練目的。（3）實(shí)驗(yàn)原理 用文字表述本

9、實(shí)驗(yàn)的基本原理。（4）操作步驟 簡(jiǎn)明扼要敘述實(shí)驗(yàn)的操作步驟。（5）實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的處理及結(jié)果 定性鑒別和檢查實(shí)驗(yàn)要寫明本次實(shí)驗(yàn)的結(jié)果如何，如定性鑒別要說明是否可檢出被測(cè)成分、檢查項(xiàng)目是否符合規(guī)定。（6）問題及討論應(yīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)中觀察到的現(xiàn)象及實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析和討論，如果實(shí)驗(yàn)失敗，要尋找失敗原因，總結(jié)經(jīng)驗(yàn)教訓(xùn)，以提高自己的基本操作技能。藥品檢驗(yàn)報(bào)告書與實(shí)驗(yàn)報(bào)告不同。藥品檢驗(yàn)報(bào)告中是藥品檢驗(yàn)部門對(duì)檢品檢驗(yàn)所作出的檢測(cè)結(jié)果報(bào)告，報(bào)告書有一定的格式要求，常見的藥品檢驗(yàn)報(bào)告書如下：藥 品 檢 驗(yàn) 報(bào) 告 書報(bào)告書編號(hào)：檢品名稱批號(hào)規(guī)格生產(chǎn)單位或產(chǎn)地包裝供樣單位效期檢驗(yàn)?zāi)康臋z品數(shù)量檢驗(yàn)項(xiàng)目收檢日期檢驗(yàn)依據(jù)報(bào)告日期檢驗(yàn)

10、項(xiàng)目 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定 檢驗(yàn)結(jié)果結(jié)論：報(bào)告書中檢驗(yàn)項(xiàng)目是指性狀、定性鑒別、檢查、含量測(cè)定等內(nèi)容；標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定是指標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的檢驗(yàn)結(jié)果或數(shù)據(jù)；檢驗(yàn)結(jié)果是指實(shí)際檢驗(yàn)結(jié)果或數(shù)據(jù)；經(jīng)檢驗(yàn)所有項(xiàng)目符合規(guī)定者，應(yīng)作出決定性的結(jié)論，否則應(yīng)提出不符合規(guī)定的項(xiàng)目及相應(yīng)結(jié)論。實(shí)驗(yàn)一 中藥制劑的顯微定性鑒別一、目的要求熟悉中藥制劑的常規(guī)分析方法顯微鑒別法。二、實(shí)驗(yàn)原理通過用顯微鏡來觀察中藥制劑中保留有原藥材的組織、細(xì)胞或內(nèi)含物等顯微特征，從而鑒別制劑的處方組成。三、儀器與試藥1、顯微鏡、載玻片、蓋玻片、酒精燈、乳缽、镲鏡紙、小鑷子、小刀。2、水合氯醛試液、甘油醋酸試液、稀甘油（AR）。3、牛黃解毒片、蛇膽川貝散、銀翹解毒片、六

11、味地黃丸（市售品）。四、操作步驟（一）牛黃解毒片顯微鑒別操作方法：取本品片心，研成粉末，取少許，置載玻片上，滴加適量水合氯醛試液，透化后加稀甘油1滴，蓋上蓋玻片，用吸水紙吸干周圍透出液，置顯微鏡下觀察。1、草酸鈣簇晶大，直徑60140m；2、不規(guī)則碎塊金黃色或橙黃色，有光澤。（二）蛇膽川貝散顯微鑒別操作方法：取本品粉末少許，置載玻片上，用甘油醋酸試液裝片，置顯微鏡下觀察：淀粉粒廣卵形或貝殼形，直徑4064m，臍點(diǎn)短縫狀，人字狀或馬蹄狀，層紋可觀察。（三）銀翹解毒片顯微鑒別操作方法：取本品粉末少許，置載玻片上用水合氯醛試液裝片，透化后加稀甘油1滴，蓋上蓋玻片，置顯微鏡下觀察：1、花粉粒黃色，類球

12、形，直徑5468m，有三孔溝；表面具細(xì)密短刺及圓粒狀皺紋。2、草酸鈣簇晶成片，直徑517m，存在于薄壁細(xì)胞中。3、聯(lián)結(jié)乳管直徑1425m，含淡黃色顆粒狀物。（四）六味地黃丸顯微鑒別操作方法：取本品適量，采取適當(dāng)方法解離后，取少許，觀察淀粉粒和不規(guī)則分枝狀團(tuán)塊用甘油醋酸試液裝片，其他用水合氯醛試液透化后滴加適量稀甘油，置顯微鏡下觀察。1、淀粉粒三角狀卵形或矩圓形，直徑2440m，臍點(diǎn)短縫狀或人字狀。2、不規(guī)則分枝狀團(tuán)塊無色，遇水合氯醛試液溶化，菌絲無色，直徑46m。3、薄壁組織灰棕色至黑棕色，細(xì)胞多皺縮，內(nèi)含棕色核狀物。4、草酸鈣簇晶存在于無色薄壁細(xì)胞中，有時(shí)數(shù)個(gè)排列成行。5、果皮表皮細(xì)胞橙黃色

13、，表面觀類多角形，垂周壁略連珠狀增厚。6、薄壁細(xì)胞類圓形，有橢圓形紋孔，集成紋孔群。五、思考題1試述你觀察到的顯微特征各代表何種中藥材？2通過以上4種中成藥的顯微鑒別，請(qǐng)你總結(jié)出中成藥顯微鑒別的方法及注意事項(xiàng)。實(shí)驗(yàn)二 中藥制劑的理化定性鑒別一、目的要求1、掌握TLC的鑒別方法。2、熟悉中成藥分析的理化定性方法。二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容（一）化學(xué)定性鑒別和紫外分光光度法定性鑒別 1、牛黃解毒片： （1）鑒別方法 取本品1片，研細(xì)，進(jìn)行微量升華，所得的白色升華物，加新制的1香草醛的硫酸溶液12滴，液滴邊緣漸顯玫瑰紅色。取本品6片（包衣者除去包衣），研細(xì)，加乙醇10ml，溫?zé)?0分鐘，濾過，取濾液5ml，加鎂粉

14、少量與鹽酸0.5ml，加熱，即顯紅色；另取濾液4ml，加氫氧化鈉試液，即顯紅色，再加30過氧化氫溶液，紅色不消失，加酸成酸性時(shí)，則紅色變?yōu)辄S色。（2）思考題試述法的化學(xué)定性原理。2、復(fù)方丹參片（1）鑒別方法分光光度法：取本品1片，研細(xì)，分次加水少量，攪拌，濾過，濾液移置100ml量瓶中，并加水至刻度，取溶液2ml，加水至25ml。在283±2nm的波長處有最大吸收。取本品1片，研細(xì)，進(jìn)行微量升華，所得白色升華物，加新制的1香草醛的硫酸溶液1滴，液滴邊緣漸濕玫瑰紅色。（3）思考題試述法的化學(xué)定性原理。3、穿心蓮片（1）本品為穿心蓮浸膏片（2）鑒別方法取本品5片，除去包衣，研細(xì)，加乙醇1

15、0ml，置水浴中加熱至沸，加活性炭0.5g，攪拌，濾過。取濾液1ml，加二硝基苯甲酸試液與乙醇制氫氧化鉀試液的等容混合溶液2滴，搖勻，即顯紫色；另取濾液1ml，加堿性三硝基苯酚試液35滴，顯橙紅色。取本品3片，除去包衣，研細(xì)，加無水乙醇25ml，置水浴中加熱回流1小時(shí)，放冷，濾過，濾液蒸干，加水5ml，再加2鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至1.0，在水浴上加熱30分鐘，濾過。取濾液，加10亞硝酸鈉溶液和10硝酸鋁溶液各3滴，搖勻，再加氫氧化鈉試液0.51ml，顯橙紅色。（3）思考題試述法的化學(xué)定性原理。4、銀黃口服液（1）本品為金銀花提取物、黃芩提取物經(jīng)加工制成的口服液。（2）鑒別方法取本品1ml，加5硝

16、酸鈉溶液與10硝酸鋁溶液各0.3ml，生成黃色沉淀，再加5氫氧化鈉溶液使成堿性，沉淀即溶解，溶液顯棕紅色。取本品0.1ml，加水10ml，搖勻，取溶液2ml，加5二氯氧化鋯溶液12滴，溶液顯黃色，再加鹽酸12滴，黃色不褪。（3）思考題試述法的化學(xué)定性原理。5、板藍(lán)根顆粒劑（1）本品為板藍(lán)根制成的顆粒劑。（2）鑒別方法取本品0.5g，加5ml甲醇使溶解，靜置，取上清液點(diǎn)于濾紙上，晾干，置紫外光燈（365nm）下觀察，顯藍(lán)紫色。取本品0.5g，加10ml甲醇使溶解，濾過，取濾液1ml，加茚三酮試液0.5ml，置水浴中加熱數(shù)分鐘，顯藍(lán)紫色。（3）思考題試述第（2）點(diǎn)中法的鑒別原理。（二）薄層色譜鑒別

17、1、牛黃解毒片（1）薄層板制備 參看本書附錄。（2）供試品溶液制備：取本品2片，粉碎，加氯仿10ml研磨，濾液蒸干，加乙醇0.5ml使溶解，作為供試品溶液。（3）對(duì)照品溶液制備：取膽酸對(duì)照品，加乙醇制成每1ml中含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。（4）點(diǎn)樣與展開：吸取上述兩種溶液各5l，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正已烷醋酸乙酯醋酸甲醇（20：25：2：3）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10硫酸乙醇溶液，在105烘約10分鐘。置紫外光燈（365nm）下檢視。在供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。（5）思考題：試述本法分析原理？是鑒別處方中何種中藥材？2、

18、銀翹解毒片薄層色譜法。（1）薄層板制備：同1、（1）項(xiàng)。（2）供試液制備：取本品10片，研細(xì)，加石油醚（6090）20ml，密塞，時(shí)時(shí)振搖，浸漬過夜，濾過，濾液揮散至1ml，作為供試品溶液。（3）對(duì)照溶液制備：取荊芥對(duì)照藥材0.8g，加石油醚（6090）20ml，按供試品溶液制備法制備。再取薄荷腦對(duì)照品，加乙醇，制成每1ml含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。（4）點(diǎn)樣、展開、顯色：吸取上述三種溶液各10l, 分別點(diǎn)于同一含羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以正已浣一醋酸乙酯（17：3）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以茴香醛試液，于105加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，分別在與對(duì)照品相應(yīng)的

19、位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。（5）思考題：試述本法測(cè)定原理，并說明本法與牛黃解毒片的薄層色譜法的區(qū)別要點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)三 更年安片薄層色譜鑒別一 目的要求1 掌握薄層熒光法的原理及操作。2 掌握薄層色譜法在中藥制劑鑒別中的應(yīng)用。二 基本原理 更年安片由地黃、澤瀉、五味子、制何首烏等藥味組成，可利用薄層色譜法對(duì)五味子和制何首烏進(jìn)行鑒別。五味子中主要有效成分為木脂素類，五味子甲素為其主要有效成分之一，可吸收UV光，在硅膠GF254薄層板上形成暗斑，用對(duì)照藥材和對(duì)照品進(jìn)行對(duì)照，可鑒別制劑中五味子；制何首烏中主要有效成分為蒽醌類，主要為大黃素和大黃素甲醚等成分，在可見光下呈黃色，在氨蒸氣中斑點(diǎn)呈紅色，紫外光（2

20、54nm或365nm）照射下產(chǎn)生熒光，在硅膠G薄板上可在可見光、紫外光或顯色后檢視其斑點(diǎn)，用對(duì)照藥材和對(duì)照品進(jìn)行對(duì)照，可鑒別制劑中何首烏。三 儀器與試藥1、 雙槽層析缸、玻璃板10×20cm、三用紫外線分析儀、分析天平(0.01mg)。2、硅膠G、硅膠GF254。3、五味子、何首烏（中國藥品生物制品檢定所）4、五味子甲素、大黃素、大黃素甲醚（中國藥品生物制品檢定所）5、更年安片（市售）四 操作步驟（一） 五味子鑒別1 薄層板制備：含0.3%的羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠GF254薄層板（實(shí)驗(yàn)前自制）。2 供試品溶液制備：取更年安片20片，除去糖衣，研碎，加氯仿30mL，置水浴上加熱回

21、流90分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)勇确?mL使溶解，作為供試品溶液。3 對(duì)照溶液制備：取五味子對(duì)照藥材0.5g，同上法制成對(duì)照藥材溶液。取五味子甲素對(duì)照品，加氯仿制成每1mL含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。4 薄層層析：將薄層板的邊緣修飾整齊，作好標(biāo)記。用毛細(xì)管吸取上述三種溶液各4L，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以石油醚（3060）-甲酸乙酯-甲酸（1551）的上層溶液為展開劑，預(yù)平衡1530分鐘，展距10cm，取出，晾干，置紫外光燈（254nm）下檢視。供試品色譜中，分別在與對(duì)照藥材色譜及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。（二） 何首烏鑒別1 薄層板制備：含0.5%氫氧化鈉溶

22、液的硅膠G板（實(shí)驗(yàn)前自制）。2 供試品溶液制備：取更年安片，除去糖衣，研碎，加甲醇100mL，置水浴中加熱回流1小時(shí)，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0mL使溶解，再加鹽酸2mL，置水浴上加熱30分鐘，立即冷卻，用乙醚20mL分2次提取，合并乙醚提取液，蒸干，殘?jiān)勇确?mL使溶解，作為供試品溶液。3 對(duì)照溶液的制備：取何首烏對(duì)照藥材1.5g，同上法制成對(duì)照藥材溶液。取大黃素、大黃素甲醚對(duì)照品，加甲醇制成每1mL各含1mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液。4 薄層層析：將薄層板邊緣修飾整齊，作好標(biāo)記。用毛細(xì)管吸取上述三種溶液各2L，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸（1521）為展開劑，預(yù)

23、平衡1530分鐘，展距10cm，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，分別在與對(duì)照藥材色譜和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的橙色熒光斑點(diǎn)；置氨氣中熏后，可見光下檢視，斑點(diǎn)變?yōu)榧t色。五 思考題硅膠GF254、硅膠G、硅膠H有何不同？實(shí)驗(yàn)中如何選擇和使用？實(shí)驗(yàn)四 Ag-DDC法測(cè)附子理中丸中砷鹽限量一、 目的要求1、掌握砷鹽的測(cè)定方法（Ag-DDC法）。2、了解中藥制劑含砷量的測(cè)定步驟及操作。二、 基本原理本法為中國藥典規(guī)定砷鹽檢查第二法。金屬鋅與酸作用產(chǎn)生新生態(tài)的氫，與藥品中的微量亞砷酸鹽反應(yīng)生成具揮發(fā)性的砷化氫，用二乙基二硫代氨基甲酸銀（Ag-DDC）溶液吸收，使之還原生成

24、紅色膠態(tài)銀，與同條件下一定量標(biāo)準(zhǔn)砷溶液所產(chǎn)生的紅色膠態(tài)銀在510nm處測(cè)吸收度，進(jìn)行比較，以判定砷鹽的限量或含量。 二乙基二硫代氨基甲酸銀 二乙基二硫代氨基甲酸 （簡(jiǎn)稱Ag-DDC） （簡(jiǎn)稱HDDC）三、 儀器與試藥1、分光光度計(jì)。2、測(cè)砷裝置（見附圖）。3、馬福爐、坩堝。4、二乙基二硫代氨基甲酸銀（Ag-DDC）試液、標(biāo)準(zhǔn)砷試液（1µgAs/ml）、碘化鉀試液、酸性氯化亞錫試液、醋酸鉛棉花。5、附子理中丸（市售品）。四、 操作步驟測(cè)試前，先于導(dǎo)氣管C中裝入醋酸鉛棉花60mg（裝管高度約80mm）；并于D管中精密加入Ag-DDC試液5ml。1、標(biāo)準(zhǔn)砷對(duì)照液的制備 精密量取標(biāo)準(zhǔn)砷溶液5

25、ml，置A瓶中，加鹽酸5ml與水2ml，再加碘化鉀試液5ml與酸性氯化亞錫試液5滴，在室溫放置10分鐘后，加鋅粒2g，立即將導(dǎo)氣管C與A瓶密塞，使生成的砷化氫氣體導(dǎo)入D管中，并將A瓶置2540水浴中反應(yīng)45分鐘，取出D管，添加氯仿至刻度，混勻，即得。2、供試品的制備 取附子理中丸樣品約1.0g，精密稱定，加等量氫氧化鈣，加水少量調(diào)勻呈糊狀，干燥后，先用小火使炭化，再在550600熾灼至完全灰化，取出放冷。1、 檢查法 將上述供試品置A瓶中加蒸餾水5ml，照標(biāo)準(zhǔn)砷對(duì)照液的制備，自“加鹽酸5ml與水2ml”起，依法操作。將標(biāo)準(zhǔn)液和樣品液移至1cm比色皿中，用分光光度計(jì)在510nm波長處以Ag-DD

26、C試液作空白，測(cè)定吸收度，樣品液吸收度不能比標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照液吸收度大。五、注意事項(xiàng)1、由于砷化氫氣體導(dǎo)入盛有準(zhǔn)確5mlAg-DDC試液中，在2540水浴中反應(yīng)45分鐘后，有部分氯仿?lián)]發(fā)損失，故在比色前應(yīng)添加氯仿至5ml。2、因Ag-DDC試液呈淺黃綠色，應(yīng)考慮背景補(bǔ)償，故測(cè)吸收度時(shí)應(yīng)以Ag-DDC-三乙胺-氯仿液作空白。六、 思考題1、導(dǎo)氣管中加醋酸鉛棉花的目的是什么？2、根據(jù)以上測(cè)定結(jié)果，附子理中丸樣品砷鹽限量是多少？實(shí)驗(yàn)五 礦物藥石膏與玄明粉中重金屬的檢查一、目的要求 1、掌握重金屬檢查的方法與原理。 2、熟悉目視比色法的操作與判斷。二、基本原理 目視比色法是以肉眼直接觀察比較樣品溶液與標(biāo)準(zhǔn)品溶

27、液的顏色深淺，判斷樣品所含雜質(zhì)是否超出規(guī)定限度。重金屬在實(shí)驗(yàn)條件下都能與硫代乙酰胺或硫化鈉反應(yīng)顯色，生成黑色硫化物沉淀，標(biāo)準(zhǔn)溶液常以Pb2+為代表，其原理為： 在酸性溶液中 CH3CSNH2+H20 CH3CONH2+H2S Pb2+H2S pbS(黑色)在堿性溶液中 Pb2+Na2S pbS(黑色)+2Na+ 三、儀器與試藥 1、電爐、25ml納氏比色管及比色管架。 2、萬分之一分析天平。3、量瓶、刻度吸管、燒杯、錐形瓶、量筒等。4、其他試劑均為AR級(jí)。 5、石膏、玄明粉（市售品）。 四、操作步驟 1.石膏重金屬檢查 取樣品16g，加冰醋酸4ml與水96ml，煮沸10分鐘，放冷，濾過，用水洗

28、滌并定容至100ml。取25ml納氏比色管2支，甲管中加標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液2ml與醋酸鹽緩沖液(pH=3.5)2ml后加水使成25ml。乙管加樣品濾液25ml，在甲乙兩管中分別加硫代乙酰胺試液2ml，搖勻，放置2分鐘，同置白紙上，自上向下透視，乙管中顯出的顏色與甲管比較，不得更深。 2.玄明粉重金屬檢查 取25ml納氏比色管2支，甲管中加標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液2ml與醋酸鹽緩沖液(pH=3.5)2ml后，加水使成25ml，乙管取玄明粉1.0g，加醋酸鹽緩沖液2ml與適量水溶解成25ml。在甲乙兩管中分別加入硫代乙酰胺試液各2ml，搖勻，同置白紙上，自上向下透視，乙管中顯出的顏色與甲管比較，不得更深。 附 注 1.

29、標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液的配制 精密稱取在105干燥至恒重的硝酸鉛0.1598g置1000ml量瓶中，加硝酸5ml，水50ml溶解后，用水稀釋至刻度，搖勻，作為儲(chǔ)備液。 臨用前，精密量取儲(chǔ)備液10ml，置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得(每1ml相當(dāng)于10g的Pb)。 2.硫代乙酰胺試液的配制 取硫代乙酰胺4g，加水使溶解成100ml，置冰箱中保存，臨用前取混合液(由1mol/L 氫氧化鈉溶液15ml，水5.0ml及甘油20ml組成)5.0ml，加上述硫代乙酰胺溶液1.0ml，置水浴上加熱20秒鐘，冷卻，立即使用。 3.醋酸鹽緩沖液的配制(pH3.5) 取醋酸銨25g加水25ml溶解后，加7mo

30、l/L鹽酸溶液38ml，用2mol/L鹽酸溶液或5mol/L氨溶液準(zhǔn)確調(diào)節(jié)pH值至3.5(電位法指示)，用水稀釋至100ml，即得。 五、思考題 1石膏及玄明粉的重金屬限量分別是多少?2在酸性溶液中重金屬能否用Na2S作顯色劑?為什么?實(shí)驗(yàn)六 黃連上清丸重金屬的檢查一、目的要求1、 掌握中成藥熾灼的基本方法和操作。2、 熟悉中成藥消化后進(jìn)行重金屬檢查的方法與原理。二、基本原理 中藥制劑常含有大量有機(jī)化合物，在進(jìn)行重金屬檢查前必須先進(jìn)行有機(jī)破壞，進(jìn)行有機(jī)破壞時(shí)，熾灼溫度對(duì)重金屬的影響很大，溫度越高重金屬損失越多，藥典規(guī)定熾灼溫度應(yīng)控制在500600使完全灰化，熾灼殘?jiān)?.5ml硝酸加熱處理，使

31、消化完全，必須蒸干除盡氧化氮，蒸干后加鹽酸使成鹽酸鹽，水浴加熱蒸干，趕除殘留鹽酸，加水溶解，調(diào)pH 3.5，依法檢查，重金屬檢查的化學(xué)反應(yīng)原理同實(shí)驗(yàn)六。三、儀器與試藥 1、電爐、馬福爐、坩堝、恒溫水浴鍋。 2、25ml納氏比色管及比色管架。 3、萬分之一分析天平。4、量瓶、刻度吸管、燒杯、量筒、蒸發(fā)皿等。5、其他試劑為AR級(jí)。 6、黃連上清丸（市售品）。四、操作步驟 取本品5丸，切碎，過二號(hào)篩，取1.0g，精密稱定重量，置已熾灼至恒重的坩堝中，精密稱定，緩緩熾灼至完全炭化(或在電爐上緩緩加熱至冒白煙，但不得起明火)，放冷至室溫，加硫酸0.51ml使?jié)駶?，低溫加熱硫酸蒸氣除盡后，再在馬福爐中50

32、0600熾灼使完全灰化，移置于干燥器內(nèi)，放冷至室溫，精密稱定后，再在500600熾灼至恒重，放冷，加硝酸0.5ml蒸干，至氧化氮蒸氣除盡后，放冷，加鹽酸2ml，置水浴上蒸干后，加水15ml，滴加氨試液至對(duì)酚酞指示液顯中性，再加醋酸鹽緩沖液(pH3.5)2ml，微熱溶解后，完全轉(zhuǎn)移至納氏比色管中，加水稀釋成25ml；另取配制供試品溶液的試劑，置瓷皿中蒸干后，加醋酸鹽緩沖液（pH=3.5）2ml與水15ml，微熱溶解后，移至納氏比色管中，加標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液2.5ml，再用水稀釋成25ml，再在樣品與對(duì)照品納氏比色管中分別加硫代乙酰胺試液2ml，搖勻，放置2分鐘，同置白紙上，自上向下透視，樣品管中顯出顏色

33、與對(duì)照品管比較，不得更深。五、注意事項(xiàng)： 1、對(duì)馬福爐的使用要嚴(yán)格按操作規(guī)程操作。 2、對(duì)照品的配制要從加0.5ml硝酸蒸干開始。六、思考題 1、根據(jù)試驗(yàn)計(jì)算對(duì)黃連上清丸的重金屬含量限度。 2、配制對(duì)照品時(shí)，為什么要取配制供試品溶液的試劑?3、本次實(shí)驗(yàn)應(yīng)注意哪些安全事項(xiàng)?實(shí)驗(yàn)七 冰片中砷鹽限量檢查一、 目的要求1、熟悉砷鹽檢查法的基本操作。2、了解砷鹽檢查的原理和方法（古蔡法）。二、 基本原理 本法為中國藥典規(guī)定砷鹽檢查第一法。鋅和酸作用所產(chǎn)生的初生態(tài)氫與供試品中微量砷鹽化合物反應(yīng)生成揮發(fā)性砷化氫，再與溴化汞試紙作用生成黃色至棕色砷斑。與同條件下一定量標(biāo)準(zhǔn)砷溶液所產(chǎn)生的砷斑比較，以判定供試品的

34、砷鹽限量。AsO33-+3Zn+9H+AsH3+3Zn2+3H2O產(chǎn)生的砷化氫與溴化汞試紙作用。AsH3+2HgBr22HBr+AsH(HgBr)2 (黃色)AsH3+3HgBr23HBr +As(HgBr)3 (棕色)因?yàn)锳sO43-在酸性溶液中被Zn還原的速度很慢，為提高反應(yīng)速度，常在反應(yīng)液中加入KI及酸性SnC12將AsO43還原為AsO33，KI被氧化生成I2，以SnC12來還原，使反應(yīng)液中維持有KI的還原劑存在。AsO43-+2I-+2H+ AsO33-+I2+H2O AsO43-+Sn2+2H+AsO33-+Sn4+H2OI2+Sn2+2I-+ Sn4+溶液中的碘離子，與反應(yīng)中產(chǎn)生

35、的鋅離子能形成配合物，使生成砷化氫的反應(yīng)不斷進(jìn)行。4I-+Zn2+ZnI42-供試品和鋅粒中可能含有少量硫化物，在酸性溶液中產(chǎn)生H2S氣體，干擾實(shí)驗(yàn)，故需采用醋酸鉛棉花吸收除去H2S。H2S+Pb(CH3COO)2 PbS+2CH3COOH三、 儀器與試藥1、古蔡法測(cè)砷裝置（見附圖）。2、標(biāo)準(zhǔn)砷試液（1µgAs/ml）；碘化鉀試液；酸性氯化亞錫試液；醋酸鉛棉花；鋅粒；溴化汞試紙。3、冰片（市售品）。四、 操作步驟測(cè)試前，先于導(dǎo)氣管C中裝入醋酸鉛棉花60mg（裝管高度為6080mm）；再于旋塞D的頂端平面上放一片溴化汞試紙（試紙大小以能覆蓋孔徑而不露出平面為宜），蓋上旋塞E并旋緊，即得

36、。1. 標(biāo)準(zhǔn)砷斑的制備 精密量取標(biāo)準(zhǔn)砷溶液2ml，置A瓶中，加鹽酸5ml與水2ml，再加碘化鉀試液5ml與酸性氯化亞錫試液5滴，在室溫放置10分鐘后，加鋅粒2g，立即將照上法裝妥的導(dǎo)氣管C密塞于A瓶上，并將A瓶置2540水浴中反應(yīng)45分鐘，取出溴化汞試紙，即得。2. 供試品的檢查 取冰片1g，加氫氧化鈣0.5g與水2ml，混勻，置水浴上加熱使冰片揮發(fā)后，放冷，加鹽酸中和，再加鹽酸5ml與水適量使成28ml，照標(biāo)準(zhǔn)砷斑的制備，自“再加碘化鉀試液5ml”起，依法操作。將生成的砷斑與標(biāo)準(zhǔn)砷斑比較，不得更深。五、 注意事項(xiàng)1、標(biāo)準(zhǔn)砷斑的制備應(yīng)與樣品檢查法平行操作。2、制備標(biāo)準(zhǔn)砷斑應(yīng)與供試品檢查同時(shí)進(jìn)行

37、。因砷斑不穩(wěn)定，反應(yīng)中應(yīng)保持干燥及避光，并立即比較。3、浸入乙醇制溴化汞試液的濾紙的質(zhì)量，對(duì)生成砷斑的色澤有影響，因此必須選用質(zhì)量較好，組織疏松的中速定量濾紙，溴化汞試紙一般宜新鮮制備。六、思考題1、砷鹽檢查第一法和第二法的異同何在？各自的關(guān)鍵環(huán)節(jié)是什么？2、根據(jù)以上測(cè)定結(jié)果，冰片中砷鹽限量是多少？實(shí)驗(yàn)八 中藥制劑麻仁丸中砷鹽的含量測(cè)定一、目的要求1、掌握中藥制劑中砷鹽含量測(cè)定方法。2、熟悉砷鹽檢查法操作。二、基本原理見實(shí)驗(yàn)七。三、儀器與試藥1、分光光度計(jì)。2、測(cè)砷裝置（見實(shí)驗(yàn)七附圖）。3、馬福爐、坩堝。4、二乙基二硫代氨基甲酸銀（Ag-DDC）試液、標(biāo)準(zhǔn)砷試液（1µgAs/ml）、

38、碘化鉀試液、酸性氯化亞錫試液、醋酸鉛棉花。5、麻仁丸（市售品）。四、操作步驟測(cè)試前，先于導(dǎo)氣管C中裝入醋酸鉛棉花60mg（裝管高度約80mm）；并于D管中精密加入Ag-DDC試液5ml。1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密量取標(biāo)準(zhǔn)砷溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml，分別置于砷化氫發(fā)生裝置A瓶中，加鹽酸5ml，加水使成12ml，再加碘化鉀試液5ml與酸性氯化亞錫試液5滴，在室溫放置10分鐘后，加鋅粒2g，立即將導(dǎo)氣管C與A瓶密塞，使生成的砷化氫氣體導(dǎo)入D管中，并將A瓶置2540水浴中反應(yīng)45分鐘，取出D管，添加氯仿至刻度，混勻，移至1cm比色皿中，用分光光度計(jì)在510nm波長處以Ag

39、-DDC試液作空白，測(cè)定吸收度，以濃度對(duì)吸光度作線性回歸，得回歸方程A=aX+b 2. 供試品的制備 取麻仁丸樣品約2.0g，精密稱定，加等量氫氧化鈣，加水少量調(diào)勻呈糊狀，干燥后，先用小火使炭化，再在550600熾灼至完全灰化，取出放冷。3. 測(cè)定法 將上述供試品置A瓶中加蒸餾水5ml，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備，自“加鹽酸5ml與水2ml”起，依法操作。將樣品液移至1cm比色皿中，在510nm波長處以Ag-DDC試液作空白，測(cè)定吸收度，用回歸方程求出麻仁丸樣品中砷含量。五、注意事項(xiàng)進(jìn)行砷鹽含量測(cè)定時(shí)，要保證砷化氫發(fā)生裝置磨口處不漏氣，以免引起測(cè)量誤差。六、思考題 為什么Ag-DDC法可用于砷鹽含量測(cè)定

40、？能否可用古蔡法？實(shí)驗(yàn)九 甲苯法測(cè)定中藥制劑中水分含量一、目的要求掌握甲苯法測(cè)定中藥制劑中水分的原理和操作方法。二、基本原理中藥制劑水分測(cè)定的常用方法有烘干法和甲苯法，烘干法適用于不含或少含揮發(fā)性成分的藥品，甲苯法用于含揮發(fā)性成分的藥品。香砂養(yǎng)胃丸是由木香、砂仁、白術(shù)、陳皮、香附、廣藿香、茯苓、半夏等十二味中藥制成的水丸，其中有多味中藥中含揮發(fā)性成分，應(yīng)選用甲苯法測(cè)定該制劑中水分的含量。三、儀器與試藥1、甲苯法水分測(cè)定裝備（見附圖）（包括500ml短頸圓底燒瓶、水分測(cè)定管、直形冷凝管、外管長40cm）。2、電熱套、分析天平。 3、甲苯、亞甲藍(lán)（AR）。4、銅絲。5、香砂養(yǎng)胃丸（市售品）。甲苯法

41、水分測(cè)定裝置四、操作步驟將香砂養(yǎng)胃丸研碎，取約25g（約相當(dāng)于含水量14ml），精密稱定，置A瓶中，加甲苯約200ml，必要時(shí)加入玻璃珠數(shù)粒，將儀器各部分連接，自冷凝管頂端加入甲苯，至充滿B管的狹細(xì)部分。將A瓶置電熱套中或用其他適宜方法緩緩加熱，待甲苯開始沸騰時(shí)，調(diào)節(jié)溫度，使每秒鐘餾出2滴。待水分完全餾出，即測(cè)定管刻度部分的水量不再增加時(shí)，將冷凝管內(nèi)部先用甲苯?jīng)_洗，再用飽蘸甲苯的長刷或其他適宜的方法，將管壁上附著的甲苯推下，繼續(xù)蒸餾5分鐘，放冷至定溫，拆卸裝置，如有水黏附在B管的管壁上，可用蘸甲苯的銅絲推下，放置，使水分與甲苯完全分離（可加亞甲藍(lán)粉末少量，使水染成藍(lán)色，以便分離觀察）。檢讀水量

42、，并計(jì)算供試品中的含水量（）。五、注意事項(xiàng)1、用化學(xué)純甲苯直接測(cè)定，必要時(shí)甲苯可先加水少量，充分振搖后，將水層分離棄去，經(jīng)蒸餾后使用。2、樣品應(yīng)先粉碎成直徑不超過3mm的顆粒。六、思考題1、實(shí)驗(yàn)中所用儀器、器皿是否要烘干？為什么？2、為什么說本法適用于含揮發(fā)性成分的中藥制劑中水分的測(cè)定？實(shí)驗(yàn)十 中藥制劑中烏頭堿限量檢查一、目的要求1、掌握烏頭堿在中藥制劑中的限量檢查方法。2、熟悉用薄層色譜法進(jìn)行中藥制劑的限量檢查。二、儀器與試藥1、薄層鋪板儀、分析天平（1/10萬）、水浴鍋、振蕩器。2、乙醚、無水乙醇、苯、醋酸乙酯、二乙胺、羧甲基纖維素鈉、硅膠G（薄層層析用）、其他試劑均為分析純。3、氨試液，

43、稀碘化鉍鉀試液。4、烏頭堿對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所）。5、附子理中丸（市售品）。三、操作步驟取本品水蜜丸25g或大蜜丸36g，切碎，置表面皿中，加氨試液4ml，拌勻，放置2小時(shí)，加乙醚60ml，振搖1小時(shí)，放置24小時(shí)，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)訜o水乙醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另精密稱取烏頭堿對(duì)照品，加無水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。精密吸取供試品溶液12l、對(duì)照品溶液5l，照薄層色譜法試驗(yàn)，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以苯醋酸乙酯二乙胺（14：4：1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上出

44、現(xiàn)的斑點(diǎn)應(yīng)小于對(duì)照品的斑點(diǎn)或不出現(xiàn)斑點(diǎn)。四、思考題1、除薄層色譜法外，還可用什么方法進(jìn)行酯型生物堿的限量檢查？2、烏頭堿在本品中的限量是多少？實(shí)驗(yàn)十一 可見分光光度法測(cè)定大山楂丸中總黃酮的含量一、目的要求1、掌握用分光光度法測(cè)定中藥制劑中總黃酮含量。2、掌握可見分光光度計(jì)的使用方法。二、基本原理大山楂丸由山楂、神曲和麥芽組成，主要功能為開胃消食，其中山楂主要成分為有機(jī)酸、黃酮類及多種維生素。黃酮類化合物具有、 結(jié)構(gòu)，可與鋁鹽、鉛鹽、鎂鹽等金屬鹽類試劑反應(yīng)，生成有色配合物，可用可見分光光度法測(cè)定其含量。本實(shí)驗(yàn)利用黃酮類化合物在亞硝酸鈉的堿性溶液中，與Al3+產(chǎn)生高靈敏度的橙紅色配合物（max=5

45、10nm），從而用可見分光光度法（比色法）測(cè)定大山楂丸中總黃酮的含量。三、儀器與試藥1、 可見分光光度計(jì)、分析天平、索氏提取器。2、 乙醇（A.R）、5%亞硝酸鈉溶液、10%硝酸鋁溶液、1mol/l氫氧化鈉溶液。3、 槲皮素（中國藥品生物制品檢定所）。4、 大山楂丸（市售品）。四、操作步驟1、標(biāo)準(zhǔn)液的配制：精密稱取槲皮素對(duì)照品20mg，置100ml容量瓶中，加95%乙醇50ml使溶解，然后加50%乙醇稀釋至刻度，即得0.2mg/ml的對(duì)照品溶液。2、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：精密量取對(duì)照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml，分別置于10ml容量瓶中，各加50%乙醇溶液使成5ml，精密

46、加入5%亞硝酸鈉溶液0.3ml，搖勻，放置6分鐘，加入10%硝酸鋁溶液0.3ml，搖勻，再放置6分鐘，加入1%氫氧化鈉溶液4ml，分別用50%乙醇稀釋至刻度，搖勻，放置15分鐘。以第一瓶作空白，用可見分光光度計(jì)在510nm處測(cè)其吸收度，作A-C標(biāo)準(zhǔn)曲線（或計(jì)算其回歸方程）。3、樣品液的制備：精密稱取120干燥2小時(shí)的大山楂丸6.5g，置索氏提取器中，用95%乙醇125ml回流提取1.5小時(shí)，將提取液移至250ml容量瓶中，補(bǔ)加蒸餾水至刻度，搖勻即得。4、含量測(cè)定：精密量取提取液1ml，按上述標(biāo)準(zhǔn)曲線制備方法進(jìn)行測(cè)定，并由標(biāo)準(zhǔn)曲線或回歸方程計(jì)算樣品中總黃酮的含量。五、注意事項(xiàng)1、實(shí)驗(yàn)證明，提取時(shí)

47、間為1.5小時(shí)，基本能提盡樣品中黃酮。2、實(shí)驗(yàn)證明，樣品顯色后，在30分鐘內(nèi)測(cè)定總黃酮含量，無明顯改變，超過30分鐘，含量有所改變。六、思考題1、 比色法操作的注意事項(xiàng)是什么？2、 總黃酮與單體黃酮的測(cè)定方法有何不同？實(shí)驗(yàn)十二 萬氏牛黃清心丸中硫化汞含量測(cè)定一 目的要求1、掌握沉淀滴定法原理和操作。2、掌握沉淀滴定法在中藥制劑定量分析中的應(yīng)用。二 基本原理沉淀滴定法是利用沉淀反應(yīng)為基礎(chǔ)的滴定分析方法。滴定時(shí)，以沉淀劑為標(biāo)準(zhǔn)溶液與被測(cè)物作用，形成難溶性化合物，根據(jù)滴定至終點(diǎn)沉淀劑用量來計(jì)算被測(cè)物的含量。萬氏牛黃清心丸為中國藥典2000年版（一部）收載品種，由牛黃、朱砂、黃連、黃芩、梔子、郁金等組

48、成，其中朱砂主要成分為HgS，有毒，為此標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)其進(jìn)行含量測(cè)定并規(guī)定了硫化汞（HgS）含量范圍。測(cè)定時(shí)須先對(duì)樣品進(jìn)行消化處理，再加硫酸鐵銨指示液，用硫氰酸銨滴定液滴定，計(jì)算，即得。三 儀器與試藥1、 酸式滴定管、電爐、分析天平。2、硝酸銀、氯化鈉、糊精、碳酸鈣、熒光黃指示劑、硫氰酸銨、硝酸、硫酸鐵銨、硫酸、硝酸鉀、高錳酸鉀、硫酸亞鐵均為分析純；水為重蒸餾水。3、萬氏牛黃清心丸（市售品）。四 操作步驟（一）、硝酸銀滴定液的配制與標(biāo)定1、配制：取硝酸銀17.5g，加水適量使溶解成1000mL，搖勻。2、標(biāo)定：取在110干燥至恒重的基準(zhǔn)氯化鈉約0.2g，精密稱定，加水50mL使溶解，再加糊精溶液（1

49、50）5mL，碳酸鈣0.1g與熒光黃指示液8滴，用本液滴至渾濁由黃綠色變?yōu)槲⒓t色。每1mL硝酸銀滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于5.844mg的氯化鈉，根據(jù)本液的消耗量與氯化鈉的取用量，算出本液的濃度，即得。（二）、硫氰酸銨滴定液的配制與標(biāo)定1、配制：取硫氰酸銨8.0g，加水使溶解成1000mL，搖勻。2、標(biāo)定：精密量取硝酸銀滴定液（0.1mol/L）25mL，加水50mL，硝酸2mL與硫酸鐵銨指示液2mL，用本液滴定至溶液微顯淡棕紅色，經(jīng)劇烈振搖后仍不褪色，即為終點(diǎn)。根據(jù)本液的消耗量算出本液的濃度，即得。（三）、樣品測(cè)定取本品，剪碎，取5g，精密稱定，置250mL凱氏燒瓶中，加硫酸30mL與

50、硝酸鉀8g，加熱俟溶液至近無色，放冷，轉(zhuǎn)入250mL錐形瓶中，加水50mL分次洗滌燒瓶，洗液并入溶液中，加1%高錳酸鉀溶液至顯粉紅色，兩分鐘內(nèi)不消失，再滴加2%硫酸亞鐵溶液至紅色消失后，加硫酸鐵銨指示劑2mL，用硫氰酸銨滴定液（0.1mol/L）滴定。每1mL硫氰酸銨滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于11.63mg的硫化汞（HgS）。計(jì)算式：樣品中硫化汞（HgS）含量=（CV）NH4SCN×11.63/W樣五、思考題1、 本實(shí)驗(yàn)為何要將樣品消化后進(jìn)行測(cè)定？2、 常見的消化有機(jī)樣品的方法有幾種？如何選擇？實(shí)驗(yàn)十三 酸性染料比色法測(cè)定華山參片總生物堿的含量一、目的要求 1、掌握酸性染料比色

51、法的基本原理及操作方法。 2、熟悉片劑中總生物堿（以莨菪堿計(jì)）的測(cè)定方法及計(jì)算方法。二、基本原理 華山參片為華山參浸膏片，其中莨菪堿（pKa=9.65），東莨菪堿（pKa=6.20）等生物堿為其主要成分，該實(shí)驗(yàn)利用生物堿（B）在一定pH介質(zhì)中（pH4.0）與H+結(jié)合成鹽（BH+），在此條件下，一些酸性染料（HIn）解離為陰離子（In-）與BH+的陽離子定量結(jié)合成有色的離子對(duì)（BH+·In-）。此離子對(duì)可定量地溶于某些有機(jī)溶劑。測(cè)定有機(jī)相的吸收度，以阿托品（莨菪堿的外消旋體）為對(duì)照品，用對(duì)照品比較法測(cè)定樣品中總生物堿（以莨菪堿計(jì)）的含量。三、儀器與試藥 1可見分光光度計(jì)、分液漏斗、具塞

52、錐形瓶、定量濾紙。2枸椽酸-磷酸氫二鈉緩沖液（pH4.0）、0.04%溴甲酚綠溶液（用上述緩沖液配制）、氯仿（AR）。3硫酸阿托品(C17H23NO3)2·H2SO4·H2O（中國藥品生物制品檢定所）。 4華山參片（市售品）。四、操作步驟 1對(duì)照品溶液的制備 精密稱取在120干燥至恒重的硫酸阿托品，加水制成每1ml含莨菪堿75g的溶液，即得。 2供試品溶液的制備 取本品40片，除去糖衣，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于12片重量），置具塞錐形瓶?jī)?nèi)，精密加入枸椽酸-磷酸氫二鈉緩沖液（pH4.0）25ml，振搖5min，放置過夜，用干燥濾紙濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液，即得

53、。 3樣品測(cè)定 精密量取供試品溶液與對(duì)照品溶液各2ml，分別置分液漏斗中，各精密加枸椽酸-磷酸氫二鈉緩沖液（pH4.0）10ml，再精密加入0.04%溴甲酚綠溶液2ml，搖勻，用10ml氯仿振搖提取5min，待溶液完全分層后，分取氯仿液，用氯仿濕潤的濾紙濾入25ml量瓶中，再用氯仿提取3次，每次5ml，依次濾入量瓶中，并用氯仿洗滌濾紙，濾入量瓶中，加氯仿至刻度，搖勻。分別在415nm波長處測(cè)定吸收度，計(jì)算，即得。 本品含生物堿以莨菪堿（C17H23NO3）計(jì)，應(yīng)為標(biāo)示量的80.0%120%（標(biāo)示量為0.12mg/片）。五、思考題 1按下列方法配制對(duì)照品溶液，應(yīng)稱取干燥的硫酸阿托品多少mg？稱取

54、一定量的干燥硫酸阿托品，用水定容到25ml后，精密吸取5ml再定容到50ml，得每1ml相當(dāng)于含莨菪堿75g的溶液。已知換算因數(shù) 2（C17H23NO3）/(C17H23NO3)2·H2SO4=0.8551。 2酸性染料比色法的成敗關(guān)鍵是什么？影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素有哪些？3為什么在對(duì)照品和供試品的操作中，例如振搖方法、次數(shù)、速度、力度及放置時(shí)間等均應(yīng)盡量一致。實(shí)驗(yàn)十四 柱色譜-紫外分光光度法測(cè)定萬氏牛黃清心丸 中總生物堿的含量一、目的要求 1、掌握用連續(xù)回流提取法定量提取中藥制劑中生物堿的原理和操作方法。2、掌握柱色譜法凈化樣品和用吸收系數(shù)法測(cè)定鹽酸小檗堿的基本原理和操作方法。二、基本

55、原理 用連續(xù)回流提取法，將生物堿以鹽的形式提取后，用氧化鋁作凈化劑進(jìn)行液一固萃取凈化處理，使提取液中的具有紫外吸收的黃酮類及其他極性大的干擾組分保留于柱上，小檗堿，藥根堿等小檗堿型生物堿被洗脫，以消除干擾。鹽酸小檗堿在345±1nm處有最大吸收波長，在此波長處測(cè)定洗脫液的吸收度，以吸收系數(shù)法按鹽酸小檗堿計(jì)算總生物堿含量。三、儀器與試藥 1分析天平、恒溫水浴鍋、分光光度計(jì)。2量瓶、三角瓶、燒杯、刻度吸管、量筒、索氏提取器、色譜柱。3中性氧化鋁（色譜用），其它試劑均為AR級(jí)。4萬氏牛黃清心丸（市售品）。四、操作步驟 1提取 取剪碎的萬氏牛黃清心丸約4g，精密稱定，置索氏提取器中，加鹽酸-甲醇（1:100）適量，加熱回流提取至提取液無色，提取液移至50ml量瓶中，用鹽酸-甲醇（1:100）稀釋至刻度，搖勻。 2凈化 精密量取上述提取液5ml，置氧化鋁柱（內(nèi)徑約0.9cm，中性氧化鋁5g，濕法裝柱，用30ml乙醇預(yù)洗）上，