劉姝潁梅毒實驗室檢測工作概況和要求

1、梅毒實驗室檢測梅毒實驗室檢測 工作概況和要求工作概況和要求 安徽省皮膚病防治所安徽省皮膚病防治所 劉姝穎劉姝穎 20152015年年1111月月主要內容主要內容梅毒實驗室檢測概述梅毒實驗室檢測概述l重要性重要性l常用檢測方法常用檢測方法l工作要求工作要求現場督導發(fā)現的問題現場督導發(fā)現的問題梅毒實驗室室間質評活動梅毒實驗室室間質評活動監(jiān)測性病病種監(jiān)測性病病種梅毒梅毒淋病淋病生殖道沙眼衣原體感染生殖道沙眼衣原體感染尖銳濕疣尖銳濕疣生殖器皰疹生殖器皰疹性病實驗室在性病防治中的作用性病實驗室在性病防治中的作用效果評價效果評價臨床服務臨床服務疫情監(jiān)測疫情監(jiān)測科學研究科學研究實驗室診斷實驗室診斷第十一條第

2、十一條 省、市和縣級疾病預省、市和縣級疾病預防控制機構職責防控制機構職責l組織開展本行政區(qū)域性病組織開展本行政區(qū)域性病實驗室質量管理實驗室質量管理第十三條第十三條 開展性病診療業(yè)務的開展性病診療業(yè)務的醫(yī)療機構職責醫(yī)療機構職責l開展實驗室檢測質量控制開展實驗室檢測質量控制5性病防治管理辦法性病防治管理辦法梅毒控制相關政策梅毒控制相關政策l衛(wèi)生部于2010年6月3日下發(fā)了關于中國預防與控制梅毒規(guī)劃（2010-2020年）l衛(wèi)生部2011年2月12日下發(fā)預防艾滋病、梅毒和乙肝母嬰傳播工作實施方案l國務院2012年1月13日中國預防控制艾滋病五年行動計劃（21011-2015年）梅毒控制主要措施：梅毒

3、控制主要措施：提高梅毒實驗室檢測質量提高梅毒實驗室檢測質量加強梅毒篩查力度加強梅毒篩查力度主要內容主要內容梅毒實驗室檢測概述梅毒實驗室檢測概述l重要性重要性l常用檢測方法常用檢測方法l工作要求工作要求現場督導發(fā)現的問題現場督導發(fā)現的問題梅毒實驗室室間質評活動梅毒實驗室室間質評活動常用梅毒實驗室檢測方法常用梅毒實驗室檢測方法病原學檢測病原學檢測血清學檢測血清學檢測病原學檢測病原學檢測原理：一期、二期梅毒時，取硬下疳、扁平濕疣、黏膜斑等皮損部原理：一期、二期梅毒時，取硬下疳、扁平濕疣、黏膜斑等皮損部位組織液或淋巴結穿刺術得到的組織液，在暗視野顯微鏡下，光線位組織液或淋巴結穿刺術得到的組織液，在暗視

4、野顯微鏡下，光線從聚光器的邊緣斜射到涂片上的梅毒螺旋體而發(fā)出亮光，從而可根從聚光器的邊緣斜射到涂片上的梅毒螺旋體而發(fā)出亮光，從而可根據其特殊形態(tài)和運動方式進行檢測。據其特殊形態(tài)和運動方式進行檢測。方法：（方法：（1 1）暗視顯微鏡檢查）暗視顯微鏡檢查 （2 2）鍍銀染色法）鍍銀染色法 （3 3）核酸檢測）核酸檢測意義：螺旋體檢查是診斷早期現癥梅毒的最佳方法，對于患者的早意義：螺旋體檢查是診斷早期現癥梅毒的最佳方法，對于患者的早期診斷、及時治療、預后和盡早切斷傳染源都有十分重要的意義。期診斷、及時治療、預后和盡早切斷傳染源都有十分重要的意義。如未見到梅毒螺旋體，并不能排除患梅毒的可能性。如未見到

5、梅毒螺旋體，并不能排除患梅毒的可能性。 梅毒血清學檢測方法梅毒血清學檢測方法(1) (1) 非梅毒螺旋體抗原血清學試驗非梅毒螺旋體抗原血清學試驗 （非特異性梅毒抗體）（非特異性梅毒抗體）(2) (2) 梅毒螺旋體抗原血清學試驗梅毒螺旋體抗原血清學試驗 （特異性梅毒抗體）兩類方法。（特異性梅毒抗體）兩類方法。非梅毒螺旋體抗原血清學試驗原理非梅毒螺旋體抗原血清學試驗原理梅毒螺旋體一旦感染人體，宿主可對螺旋體表面梅毒螺旋體一旦感染人體，宿主可對螺旋體表面的脂質作出免疫應答，產生抗類脂抗原的抗體的脂質作出免疫應答，產生抗類脂抗原的抗體（非特異性抗體）（非特異性抗體）未經治療的病人，其血清內的非特異性抗

6、體可長未經治療的病人，其血清內的非特異性抗體可長期存在。經正規(guī)治療后，非特異性抗體可以逐漸期存在。經正規(guī)治療后，非特異性抗體可以逐漸減少滴度至轉為陰性。減少滴度至轉為陰性。方法包括：方法包括： （1 1）快速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗）快速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗 (RPR)(RPR) （2 2）甲苯胺紅不加熱血清試驗（）甲苯胺紅不加熱血清試驗（TRUSTTRUST）等）等 非梅毒螺旋體抗原血清學試驗臨床意義非梅毒螺旋體抗原血清學試驗臨床意義早期梅毒（一期、二期）經足量規(guī)則抗梅毒治早期梅毒（一期、二期）經足量規(guī)則抗梅毒治療后療后3 3個月，個月， RPR/TRUST RPR/TRUST試驗抗體滴度下

7、降試驗抗體滴度下降2 2個個稀釋度，稀釋度，6 6個月下降個月下降4 4個稀釋度。個稀釋度。 一期梅毒一期梅毒1 1年后轉為陰性年后轉為陰性 二期梅毒二期梅毒2 2年后轉為陰性。年后轉為陰性。 晚期梅毒晚期梅毒 治療后血清滴度下降緩慢，治療后血清滴度下降緩慢，2 2年后年后約約50%50%病人血清反應仍為陽性。病人血清反應仍為陽性。非梅毒螺旋體抗原血清試驗臨床意義非梅毒螺旋體抗原血清試驗臨床意義非梅毒螺旋體抗原血清試驗方法簡單、快速、敏感性和特異性較好?？勺鳛槊范竞Y查試驗。因治療后血清滴度可下降并陰性，故（1）可作為療效觀察、判愈、復發(fā)或再感染的指征；（2）結合梅毒螺旋體抗原血清學試驗鑒別梅毒

8、現癥感染和既往感染VDRL試驗用于神經梅毒腦脊液檢測特異性高，檢測陽性可以作為神經梅毒確診依據，但敏感性較低，即檢測陰性不能排除神經梅毒。梅毒病期敏感性(%)(%)特異性(%)(%)一期86（77-99）-二期100隱性98(95-100)（一般滴度1:8，但不排除1:8）晚期73非梅毒-98(93-99)梅毒螺旋體抗原血清學試驗原理梅毒螺旋體抗原血清學試驗原理抗原為梅毒螺旋體特異蛋白（包抗原為梅毒螺旋體特異蛋白（包括螺旋體重組特異抗原），檢測括螺旋體重組特異抗原），檢測梅毒患者血中特異性抗梅毒螺旋梅毒患者血中特異性抗梅毒螺旋體抗原的抗體。體抗原的抗體。感染梅毒螺旋體后，一旦梅毒螺感染梅毒螺旋

9、體后，一旦梅毒螺旋體抗體試驗呈陽性，則患者終旋體抗體試驗呈陽性，則患者終身陽性。身陽性。梅毒螺旋體抗原血清學試驗方法梅毒螺旋體抗原血清學試驗方法梅毒螺旋體顆粒凝集試驗梅毒螺旋體顆粒凝集試驗 (TPPA) (TPPA) 梅毒螺旋體血球凝集試驗梅毒螺旋體血球凝集試驗 (TPHA)(TPHA) 梅毒酶聯(lián)免疫吸附試驗（梅毒酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISAELISA） 化學發(fā)光免疫分析法（化學發(fā)光免疫分析法（CLIACLIA） 梅毒免疫層析法梅毒免疫層析法- -梅毒快速檢測梅毒快速檢測 (RT) (RT) 熒光螺旋體抗體吸收試驗（熒光螺旋體抗體吸收試驗（FTA-ABSFTA-ABS）梅毒螺旋體蛋白印跡試驗（

10、梅毒螺旋體蛋白印跡試驗（WBWB）梅毒螺旋體抗原血清試驗臨床意義梅毒螺旋體抗原血清試驗臨床意義作為非梅毒螺旋體抗原血清試驗作為非梅毒螺旋體抗原血清試驗( (如如RPRRPR等等) )初篩陽性標本的初篩陽性標本的確證試驗，排除確證試驗，排除RPR RPR 假陽性。假陽性。不能區(qū)分既往感染和現癥感染，應結合非梅毒螺旋體抗原血不能區(qū)分既往感染和現癥感染，應結合非梅毒螺旋體抗原血清試驗結果進行診斷。清試驗結果進行診斷。不能作為療效觀察的指標。不能作為療效觀察的指標。梅毒血清學試驗結果解釋梅毒血清學試驗結果解釋（梅毒臨床診斷參考依據（梅毒臨床診斷參考依據）17試驗結果參考結果解釋*梅毒螺旋體抗原血清試驗

11、非梅毒螺旋體抗原血清試驗陽性陽性可能為現癥梅毒陰性陽性非梅毒螺旋體血清試驗假陽性陽性陰性臨床治愈的早期梅毒（既往感染者）或極早期梅毒陰性陰性排除梅毒感染或極早期梅毒*該結果解釋不適用于胎傳梅毒、神經梅毒梅毒梅毒IgMIgM抗體（抗體（TP-IgMTP-IgM） IgM抗體的產生是感染后的早期體液免疫應答反應。IgM分子比較大，所以不能通過胎盤屏障。因此若在新生兒血中檢測到IgM抗體是先天梅毒的診斷依據。目前已有商品化的TP-IgM檢測試劑盒，檢查到IgM抗體可作為對先天梅毒臨床診斷的依據，其特異性較高，但敏感性較低。因此，IgM陰性，不能排除先天梅毒感染。18梅毒實驗室檢測基本策略梅毒實驗室檢

12、測基本策略-血清學檢測血清學檢測19非梅毒螺旋體抗原血清學試驗非梅毒螺旋體抗原血清學試驗梅毒螺旋體抗原血清學試驗梅毒螺旋體抗原血清學試驗n排除試驗假陽性排除試驗假陽性n確證梅毒螺旋體現癥感染確證梅毒螺旋體現癥感染n排除治愈的既往感染者排除治愈的既往感染者n確證梅毒螺旋體現癥感染確證梅毒螺旋體現癥感染？RPR：初篩試驗：初篩試驗 TPPA：確證試驗：確證試驗2021陽性主要內容主要內容梅毒實驗室檢測概述梅毒實驗室檢測概述l重要性重要性l常用檢測方法常用檢測方法l工作要求工作要求現場督導發(fā)現的問題現場督導發(fā)現的問題梅毒實驗室室間質評活動梅毒實驗室室間質評活動梅毒實驗室檢測基本要求梅毒實驗室檢測基本

13、要求一、人員 檢測技術人員需經過上崗培訓。接受上崗培訓內容應包括：梅毒檢測相關基礎知識、梅毒實驗室檢測技術基本實驗操作要求、結果解讀及臨床意義、質量保證與生物安全等。二、試劑 常規(guī)血清學檢測應采用經國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準的試劑。因不同廠家生產的同一種試劑的敏感性和特異性存在一定的差異，建議選擇臨床質量評估敏感性和特異性高的試劑。所有試劑須嚴格按要求妥善保存，并控制在有效期內使用。23梅毒實驗室檢測基本要求梅毒實驗室檢測基本要求三、設備及環(huán)境 實驗室應根據開展的方法配備基本的儀器設備24檢 測 方 法儀器設備暗視野梅毒螺旋體檢測鍍銀染色梅毒螺旋體檢測快速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗(RPR)

14、暗視野顯微鏡普通光學顯微鏡水平旋轉儀甲苯胺紅不加熱血清試驗（TRUST）水平旋轉儀梅毒螺旋體顆粒凝集試驗 (TPPA)震蕩儀酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）酶標儀、洗板機梅毒快速檢測 (RT)無需特殊儀器不同方法所需主要儀器設備 20142014年全國梅毒診斷試劑臨床質量評估結果年全國梅毒診斷試劑臨床質量評估結果( (非梅毒螺旋體抗原血清學試驗非梅毒螺旋體抗原血清學試驗) ) 試劑簡稱試劑簡稱 敏感性敏感性(%) 特異性特異性(%) 上?？迫A 97.78 99.55 北京金豪 97.78 99.55 上海榮盛 96.67 100.00 廈門英科 95.56 98.18 北京萬泰 91.11 98

15、.64 20142014年全國梅毒診斷試劑臨床質量評估結果年全國梅毒診斷試劑臨床質量評估結果( (梅毒螺旋體抗原血清學試驗梅毒螺旋體抗原血清學試驗-ELISA)-ELISA) 試劑簡稱試劑簡稱 敏感性敏感性(%) 特異性特異性(%) 北京華大 100.00 100.00 北京萬泰 100.00 100.00 北京現代 100.00 100.00 北京金豪 100.00 99.48 珠海麗珠 100.00 98.95 濰坊三維 100.00 83.25 上?？迫A 99.1 100.00 北京科衛(wèi) 99.1 100.00 廈門英科 98.29 100.00 北京科美(化學發(fā)光) 100.00 10

16、0.00 20142014年全國梅毒診斷試劑臨床質量評估結果年全國梅毒診斷試劑臨床質量評估結果( (梅毒螺旋體抗原血清學試驗梅毒螺旋體抗原血清學試驗- -免疫層析法免疫層析法) ) 試劑簡稱試劑簡稱 敏感性敏感性(%) 特異性特異性(%) 杭州艾博 99.15 100.00 北京藍十字 99.74 92.15 Determin 99.15 98.95 廣州萬孚 98.29 100.00 廈門英科 98.29 98.43 北京萬泰 97.74 90.58 主要內容主要內容梅毒實驗室檢測概述梅毒實驗室檢測概述l重要性重要性l常用檢測方法常用檢測方法l工作要求工作要求現場督導發(fā)現的問題現場督導發(fā)現的

17、問題梅毒實驗室室間質評活動梅毒實驗室室間質評活動現場核查發(fā)現的不足與問題現場核查發(fā)現的不足與問題使用不符合要求的實驗室檢測方法進行診斷使用不符合要求的實驗室檢測方法進行診斷實驗室開展項目不全，未掌握各種試驗的適應實驗室開展項目不全，未掌握各種試驗的適應癥，不具備診斷條件癥，不具備診斷條件部分醫(yī)院無開展部分醫(yī)院無開展TRUSTTRUST試驗的梅毒水平旋轉儀，試驗的梅毒水平旋轉儀，或無開展或無開展TPPATPPA的微量振蕩器的微量振蕩器實驗室檢測方法標注有誤或不規(guī)范實驗室檢測方法標注有誤或不規(guī)范現場核查發(fā)現的不足與問題現場核查發(fā)現的不足與問題部分實驗室缺乏原始記錄或登記不規(guī)范而無法查部分實驗室缺乏

18、原始記錄或登記不規(guī)范而無法查找核實報告病例的相關數據找核實報告病例的相關數據試劑來源多，質量難以保障試劑來源多，質量難以保障多數醫(yī)療機構對儀器未定期校準和記錄多數醫(yī)療機構對儀器未定期校準和記錄部分檢驗人員培訓不足，操作臺無標準作業(yè)指導部分檢驗人員培訓不足，操作臺無標準作業(yè)指導書書實驗室檢驗人員與臨床醫(yī)生、疫情管理人員溝通實驗室檢驗人員與臨床醫(yī)生、疫情管理人員溝通不夠不夠主要建議主要建議制定性病實驗室檢測的作業(yè)指導書，放置在操作制定性病實驗室檢測的作業(yè)指導書，放置在操作臺臺加強儀器設備的校準與維護，確保正確的運轉加強儀器設備的校準與維護，確保正確的運轉對檢驗人員開展培訓對檢驗人員開展培訓, ,加

19、強對性病檢測方法和臨床加強對性病檢測方法和臨床結果解釋的培訓結果解釋的培訓規(guī)范實驗室檢測方法規(guī)范實驗室檢測方法規(guī)范完善檢測結果信息登記規(guī)范完善檢測結果信息登記檢測結果登記示例主要內容主要內容梅毒實驗室檢測概述梅毒實驗室檢測概述現場督導發(fā)現的問題現場督導發(fā)現的問題梅毒實驗室室間質評活動梅毒實驗室室間質評活動l開展現況開展現況l申請流程申請流程梅毒實驗室室間質評活動梅毒實驗室室間質評活動關于開展梅毒血清學實驗室室間質量評關于開展梅毒血清學實驗室室間質量評價工作的通知價工作的通知( (衛(wèi)辦疾控衛(wèi)辦疾控20112011186186號號) )要求：自要求：自20112011年始在全省范圍內開展梅毒年始在

20、全省范圍內開展梅毒血清學實驗室室間質量評價血清學實驗室室間質量評價 ，各地認真，各地認真組織轄區(qū)內縣（區(qū)）級以上醫(yī)療機構參加組織轄區(qū)內縣（區(qū)）級以上醫(yī)療機構參加全省統(tǒng)一組織的每年兩次的室間質評全省統(tǒng)一組織的每年兩次的室間質評, ,督督促室間質評不合格的醫(yī)療保健機構實驗室促室間質評不合格的醫(yī)療保健機構實驗室進行限期整改進行限期整改 梅毒實驗室室間質評活動梅毒實驗室室間質評活動具體參評項目具體參評項目TPTP（非）、（非）、TPTP（特（特TPPATPPA）、）、TPTP（特（特ELISAELISA）、）、TP(ELISA-S/COTP(ELISA-S/CO值）、值）、TP(TP(特除特除ELIS

21、AELISA、TPPATPPA）。）。省臨床檢驗中心（省臨床檢驗中心（）負責統(tǒng)）負責統(tǒng)一發(fā)放全省質控標本（上下半年各一次）一發(fā)放全省質控標本（上下半年各一次）省皮膚病防治所負責結果的收集、分析、省皮膚病防治所負責結果的收集、分析、匯總、上報及反饋工作。匯總、上報及反饋工作。 首次室間質評活動首次室間質評活動20112011年年1111月首次梅毒血清學室間質評，月首次梅毒血清學室間質評，全省共全省共129129家二級以上醫(yī)療機構參加梅家二級以上醫(yī)療機構參加梅毒血清學室間質評活動，毒血清學室間質評活動，8181家合格，合家合格，合格率格率62.7

22、9%62.79%20112011年我省五個國家級性病監(jiān)測點的年我省五個國家級性病監(jiān)測點的1111家醫(yī)療機構參加全國性病實驗室室間質家醫(yī)療機構參加全國性病實驗室室間質量評價活動，量評價活動，7 7家合格，合格率家合格，合格率63.63%63.63%20142014年室間質評年室間質評全省梅毒實驗室室間質評全省梅毒實驗室室間質評,219,219家二級家二級以上醫(yī)療機構參加，以上醫(yī)療機構參加，191191家醫(yī)療機構合家醫(yī)療機構合格格, ,合格率合格率 87.21%87.21%。國家級性病監(jiān)測點的十二家醫(yī)療機構國家級性病監(jiān)測點的十二家醫(yī)療機構參加全國性病實驗室室間質量評價，參加全國性病實驗室室間質量評

23、價，參與率為參與率為100%100%，梅毒合格率，梅毒合格率91.67%91.67%、衣原體合格率衣原體合格率100%100%，淋球菌，淋球菌83.33%83.33%2014年我省梅毒室間質評參加率年我省梅毒室間質評參加率市市機構數機構數參加數參加數參加率（參加率（% %）市市機構數機構數參加數參加數參加率參加率（% %）合肥合肥3636333391.6791.67六安六安1818131372.2272.22蕪湖蕪湖1717161694.1294.12黃山黃山1717121270.5070.50亳州亳州1111101090.9090.90淮南淮南13139 969.2369.23安慶安慶181

24、8161688.8988.89滁州滁州1616111168.7568.75銅陵銅陵7 76 685.7185.71蚌埠蚌埠1919131368.4268.42宿州宿州1515121280.0080.00淮北淮北8 85 562.5062.50宣城宣城1414111178.5778.57馬鞍馬鞍山山10106 660.0060.00池州池州9 97 777.7877.78阜陽阜陽2020111155.0055.002014年參加率指標：年參加率指標：85 %85 %2014年我省梅毒室間質評合格率年我省梅毒室間質評合格率市市參加機構參加機構數數合格機構數合格機構數（兩項）（兩項）合格率（合格率（% %）市市參加機構參加機構數數合格機構數合格機構數（兩項）（兩項）合格率（合格率（% %）蕪湖蕪湖16161616100100亳州亳州10109 990.0090.00宣城宣城11111111100100淮南淮南9 98 888.8988.89滁州滁州11111111100100池州池州7 76 685.7185.71馬鞍山馬鞍山6 66 6100100淮北淮北5 54 480.0080.00銅陵銅陵6 66 6100100蚌埠蚌埠1313101076.9276.92宿州宿州1212111191.6791.67安慶安慶1616121