植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)(修改格式)_65069

1、植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)內(nèi)蒙古大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院植物生理實(shí)驗(yàn)室目 錄實(shí)驗(yàn)一 植物組織水勢(shì)的測(cè)定（小液流法）實(shí)驗(yàn)二 植物組織滲透勢(shì)的測(cè)定（質(zhì)壁分離法）實(shí)驗(yàn)三 小孔的擴(kuò)散（示范）實(shí)驗(yàn)四 植物灰分常量元素分析實(shí)驗(yàn)五 植物的溶液培養(yǎng)與礦質(zhì)元素缺乏癥實(shí)驗(yàn)六 葉綠體色素的提取與分離實(shí)驗(yàn)七 光合色素的的性質(zhì)實(shí)驗(yàn)八 葉綠素a和b含量的測(cè)定（分光光度法）實(shí)驗(yàn)九 環(huán)境因素對(duì)光合作用的影響實(shí)驗(yàn)十 改良半葉法測(cè)大田光合作用強(qiáng)度 實(shí)驗(yàn)十一 植物呼吸強(qiáng)度的測(cè)定（小籃子法） 實(shí)驗(yàn)十二 種子生命力的快速測(cè)定（TTC法）實(shí)驗(yàn)十三 種子生命力的快速測(cè)定（紅墨水法）實(shí)驗(yàn)十四 脯氨酸含量的測(cè)定實(shí)驗(yàn)十五氮藍(lán)四唑（NBT）法測(cè)定 超氧物歧化酶（

2、SOD）活力實(shí)驗(yàn)十六 植物組織中丙二醛含量的測(cè)定實(shí)驗(yàn)十七過氧化物酶活性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)十八植物抗逆性的測(cè)定（電導(dǎo)儀法）實(shí)驗(yàn)一 植物組織水勢(shì)的測(cè)定（小液流法）【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?了解小液流法測(cè)定植物組織水勢(shì)的原理，掌握其測(cè)定方法?！緦?shí)驗(yàn)原理】水勢(shì)（w）表示水的化學(xué)勢(shì)，像電流由高電位處流向低電位處一樣，水從水勢(shì)高處流向水勢(shì)低處（代表水的能量水平）。植物組織的水分狀況可用水勢(shì)表示。植物體組織之間、細(xì)胞之間以及植物體與環(huán)境間的水分移動(dòng)方向都由水勢(shì)差決定。當(dāng)植物細(xì)胞或組織放在已知水勢(shì)的一系列溶液中時(shí)，如果植物的水勢(shì)（w）小于某一溶液的滲透勢(shì)（），則組織吸水而使溶液濃度變大；反之，則植物細(xì)胞失水而使溶液濃度變??；若植

3、物組織的水勢(shì)與溶液的滲透勢(shì)相等，則二者水分保持動(dòng)態(tài)平衡，外部溶液濃度不變，此溶液的滲透勢(shì)即等于所測(cè)植物組織的水勢(shì)。根據(jù)溶液的濃度不同其比重亦不同的原理確定與植物組織等水勢(shì)的溶液濃度。然后按公式計(jì)算其水勢(shì)。【實(shí)驗(yàn)用品】1儀器： 剪刀 鑷子 解剖刀打孔器 試管 移液管毛細(xì)吸管（尖端彎成900）2試劑： 1mol/L蔗糖溶液；次甲基藍(lán)粉末，3材料： 胡蘿卜塊根 （或小麥幼苗、燕麥幼苗、菠菜葉片） 【實(shí)驗(yàn)方法】1. 取8支試管并編號(hào)，按編號(hào)順序放在試管架上，用1mol/L蔗糖溶液配制0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6，0.7，0.8mol/L蔗糖溶液各10mL,各管都加上橡膠或軟木塞子。2

4、另取8支試管并編號(hào)，按編號(hào)順序放在試管架上，作為試驗(yàn)組。然后由對(duì)照組之各試管中分別取蔗糖溶液4mL移入相同編號(hào)的試驗(yàn)組試管中，再將各試管都加上塞子。3將胡蘿卜塊根刷洗干凈，用打孔器鉆取柱狀條，然后再將柱狀條切成mm的薄片（菠菜葉片需要用剪刀將葉片避開主脈剪成大小相等的小塊）。向試驗(yàn)組每一試管中各加數(shù)目相等的片胡蘿卜薄片（或片葉小圓片），塞好塞子，放置30 min（每min 輕輕搖動(dòng)1次）。到時(shí)間后，向每一試管中各加入次甲基藍(lán)粉末少許，充分振蕩使溶液著色均勻。4用毛細(xì)吸管從試驗(yàn)組的各試管中依次吸取著色的液體少許，然后伸入對(duì)照組的相同編號(hào)試管的溶液的中部，緩慢放出一滴藍(lán)色試驗(yàn)溶液，觀察小液流（藍(lán)色

5、溶液）移動(dòng)的方向，并依次記錄。小液流移動(dòng)的方向蔗糖濃度（mol/L)0.10.20.30.40.50.60.70.8液滴流動(dòng)方向（、）【結(jié)果與計(jì)算】根據(jù)小液流不動(dòng)時(shí)蔗糖溶液的濃度，按公式：w=RTiC計(jì)算水勢(shì)值。R ： 氣體常數(shù)0.008314（L·MPa/mol·K）；T ： 絕對(duì)溫度（273+t）K；C ： 蔗糖溶液的濃度（mol/L）；I ： 解離常數(shù)（蔗糖1.0）；【思考題】1測(cè)定水勢(shì)時(shí)，同一植株上部葉片與下部葉片的水勢(shì)有何差別？2 用小液流法測(cè)定植物組織水勢(shì)與用質(zhì)壁分離法測(cè)定植物細(xì)胞滲透勢(shì)都是以蔗糖溶液的濃度計(jì)算出溶質(zhì)勢(shì)為根據(jù)，兩種方法之間的區(qū)別何在？實(shí)驗(yàn)二 植物

6、組織滲透勢(shì)的測(cè)定（質(zhì)壁分離法）【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?觀察植物細(xì)胞質(zhì)壁分離的形式； 2觀察植物細(xì)胞的質(zhì)壁分離復(fù)原；3掌握質(zhì)壁分離法測(cè)定植物組織滲透勢(shì)的方法【實(shí)驗(yàn)原理】成長(zhǎng)的植物細(xì)胞是一個(gè)滲透系統(tǒng)，當(dāng)把細(xì)胞置于一定濃度溶液中時(shí)，植物組織內(nèi)的汁液與其周圍的某種溶液處于滲透平衡狀態(tài)，且此時(shí)植物細(xì)胞內(nèi)的壓力勢(shì)為零，那么細(xì)胞汁液的滲透勢(shì)就等于該溶液滲透勢(shì)。該溶液的濃度為等滲濃度。當(dāng)用一系列梯度濃度溶液觀察細(xì)胞質(zhì)壁分離現(xiàn)象時(shí)，細(xì)胞的等滲濃度將介于剛剛引起初始質(zhì)壁分離的濃度和與其相鄰的尚不能引起質(zhì)壁分離的濃度梯級(jí)之間的溶液濃度。代入公式即可計(jì)算滲透勢(shì)?！緦?shí)驗(yàn)用品】1儀器：顯微鏡 載玻片 蓋玻片鑷子 刀片 培養(yǎng)皿(或具

7、塞試管)記號(hào)筆 滴管 2試劑：1M蔗糖溶液3材料：紫鴨跖草、洋蔥鱗莖、小麥等作物的葉片【實(shí)驗(yàn)方法】1梯度濃度溶液的配制：用1M蔗糖溶液為母液，分別吸取8，7，6，5，4，3，2mL溶液于試管中，各加入蒸餾水至10mL，即成0.8，0.7，0.6，0.5，0.4，0.3，0.2，M的梯度溶液。用移液管從0.2M依次取一定量的溶液（3mL），盛于培養(yǎng)皿內(nèi)，蓋上蓋，貼上標(biāo)簽待用。2 將帶有色素的植物葉片(可選用有色素的洋蔥鱗片的外表皮，紫鴨跖草，蠶豆，小麥，玉米等葉的表皮)，用鑷子撕取下表皮，迅速分別加入各種濃度的蔗糖溶液中，使其完全浸入。 3將帶有色素的植物組織或葉片(可選用有色素的洋蔥鱗片的外表

8、皮，紫鴨跖草，蠶豆，小麥，玉米等葉的表皮)撕取表皮迅速分別投入各種濃度的蔗糖溶液中，每個(gè)培養(yǎng)皿中放材料3個(gè)左右，使其完全浸沒，浸泡20-40分鐘。4510分鐘后，從0.5M開始依次取出表皮薄片放在滴有同樣溶液的載波片上，蓋上蓋玻片，于顯微鏡下觀察是否所有細(xì)胞都產(chǎn)生質(zhì)壁分離現(xiàn)象，實(shí)驗(yàn)中必須確定一個(gè)引起半數(shù)以上細(xì)胞原生質(zhì)剛剛從細(xì)胞壁的角偶上分離的濃度，和引起質(zhì)壁分離的最高濃度，取二者的平均值為等滲濃度。5按照公式把等滲濃度換算成滲透勢(shì)，以MPa表示。 =-RTiC：預(yù)測(cè)細(xì)胞滲透勢(shì)(bar)； T：為絕對(duì)溫度(273+t)；R：氣體常數(shù)(0.083bar L/M·K)；C：等滲溶液的濃度；

9、I：解離系數(shù)，蔗糖為1。 實(shí)驗(yàn)三 小孔的擴(kuò)散（示范）【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?展示小孔比相同面積的大孔擴(kuò)散能力要大，即所謂小孔擴(kuò)散的周邊效率，孔的周邊愈長(zhǎng)，其擴(kuò)散效率也愈大，用以說明植物通過氣孔蒸騰水分的強(qiáng)大效率?！緦?shí)驗(yàn)原理】氣孔蒸騰是植物散失水分的主要途徑，氣孔開度很小，其總面積一般不超過葉面積的1%，可是葉片通過氣孔蒸騰所散失的水分卻達(dá)到與葉面積相等的自由表面的50%-80%，如此驚人的蒸騰失水量，可以用小孔擴(kuò)散原理加以證明。水分通過多孔表面（小孔）擴(kuò)散的速度與小孔的周緣長(zhǎng)度成正比，而不與小孔的面積成正比。【實(shí)驗(yàn)用品】1儀器： 燒杯（50mL） 培養(yǎng)皿（12cm） 量筒天平 滴管 剪刀鑷子 直尺 解剖

10、針 卡片紙2試劑：95%乙醇 （或80%丙酮） 紅墨水（或藍(lán)墨水） 石蠟 【實(shí)驗(yàn)方法】1物質(zhì)通過小孔擴(kuò)散的途徑稱取0.5g瓊脂放入小燒杯中，加50mL水后加熱溶解，配制成1%瓊脂溶液，倒入三個(gè)培養(yǎng)皿中，室溫下冷卻。熔化少量石蠟（溫度不能太高），均勻倒在瓊脂表面上，形成一層薄膜，待其完全凝固后，取一解剖針在酒精燈上燒熱，小心地將石蠟薄膜熔成一小孔（注意不要把凝膠穿透成孔），然后，在其上傾注有色溶液少許。45小時(shí)后即可看到有色溶液通過小孔向瓊脂凝膠的擴(kuò)散，形成一個(gè)具有顏色的半球形，由此證明了顏料通過小孔的擴(kuò)散途徑。2小孔擴(kuò)散定律取兩張卡片紙剪成與培養(yǎng)皿大小一致的圓形，然后在一張的中部剪成一正方形大

11、孔（邊長(zhǎng)3cm，面積9cm2），在另一張上剪成 9個(gè)均勻分布的正方形小孔（邊長(zhǎng)1cm，總面積9cm2）。將這兩張卡片紙浸于熔化的石蠟中，取出后分別蓋在培養(yǎng)皿上，并用石蠟將邊緣密封。于兩皿中各加入等量的95%乙醇（或丙酮），再將兩個(gè)培養(yǎng)皿分別置天平的托盤中，用95% 乙醇（或丙酮）調(diào)節(jié)使之平衡。隔1530分鐘后，觀察天平是否還平衡?！舅伎碱}】1天平指針向哪個(gè)方向傾斜？為什么？2為什么氣孔面積只占葉面積的1%，而通過氣孔蒸騰所散失的水分卻達(dá)到與葉面積相等自由表面的50%80%？實(shí)驗(yàn)四 植物灰分常量元素分析【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?. 了解組成植物體常量礦質(zhì)元素的種類；2. 熟悉植物材料灰化過程與灰分溶液的制備

12、；3. 掌握灰分元素的鑒定方法?！緦?shí)驗(yàn)原理】灰分元素是植物組織的組成成分。通常利用灰分元素與特殊試劑進(jìn)行的專一性反應(yīng)，產(chǎn)生一定形狀的結(jié)晶和顏色，可以在顯微鏡下作定性鑒定。所需灰分?jǐn)?shù)量極少是此方法的優(yōu)點(diǎn)?！緦?shí)驗(yàn)用品】1儀器：茂福爐 天平 蓋玻片 顯微鏡 烘箱 白瓷比色板載玻片 坩堝 2試劑：5%磷酸二氫鉀 5%磷酸二氫鈉 10%硫酸 1%硫酸鎂 5%氯化鈣 15%次氯酸 5%硫氰化鉀 5% 三氯化鐵 10%鹽酸 5%氯化鋇 鉬酸銨試劑：7g鉬酸銨溶于50mL蒸餾水中，加入50mL 6mol/L HNO3，放置過夜，取上清液備用。3材料：菠菜 小麥 玉米【實(shí)驗(yàn)方法】1材料灰化 取50g新鮮菠菜（或

13、小麥、玉米），用水洗凈后再用蒸餾水沖洗一次，放于大坩堝內(nèi)，置于100105烘箱中烘30min，之后在85中烘3h，然后放茂福爐中550灰化2 h，使材料變?yōu)榘咨珵橹埂?灰分元素的鑒定將1g灰分溶解于4mL 10% HCl溶液中作如下鑒定：磷：放1滴5%的KH2PO4于干凈的載玻片上，并加1滴鉬酸銨試劑，然后在顯微鏡下觀察結(jié)晶的顏色和形狀；用1滴灰分溶液作同樣試驗(yàn)，觀察其結(jié)果。鉀：將1滴KH2PO4溶液于載玻片上，然后在其旁邊滴上1滴15%次氯酸 ，小心將它們逐漸混合，顯微鏡下觀察結(jié)晶顏色與形狀；用1滴灰分溶液作同樣試驗(yàn)，并觀察其結(jié)果。鎂：按上述方法，將1滴1%MgSO4和1滴5%磷酸二氫鈉混合

14、，顯微鏡子下觀察顏色與結(jié)晶形狀；再用灰分溶液試驗(yàn)，觀察其結(jié)果。硫：將1滴5%H2SO4和1滴10%氯化鋇在載玻片上混合，觀察結(jié)晶顏色與形狀；用灰分溶液試驗(yàn)，觀察其結(jié)果。 鈣：將1 滴5%CaCl2和1滴10%H2SO4在載玻片上混合，觀察結(jié)晶顏色與形狀；用灰分溶液試驗(yàn)，觀察其結(jié)果。鐵：將5滴灰分溶液和3滴三氯化鐵分別滴于白瓷比色板上，各加入一滴5%硫氰化鉀，觀察是否有紅色形成。3實(shí)驗(yàn)結(jié)果植物灰分常量元素分析反應(yīng)方程式產(chǎn)物顏色結(jié)晶形狀作用磷鉀鎂硫鈣鐵實(shí)驗(yàn)五 植物的溶液培養(yǎng)與礦質(zhì)元素缺乏癥【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?. 了解礦質(zhì)元素缺乏對(duì)植物的影響及表現(xiàn)癥狀；2. 熟悉植物營(yíng)養(yǎng)液的制備；3. 掌握溶液培養(yǎng)方法。

15、【實(shí)驗(yàn)原理】植物的生長(zhǎng)發(fā)育除了需要充足的陽光和水分外，還需要礦質(zhì)營(yíng)養(yǎng)，否則植物就不能很好地發(fā)育甚至死亡。用植物必需的礦質(zhì)元素按一定比例配成培養(yǎng)液來培養(yǎng)植物，可使植物正常生長(zhǎng)發(fā)育，如缺少某一必需元素，則會(huì)表現(xiàn)出缺素癥；將所缺元素加入培養(yǎng)液中，缺素癥狀又可逐漸消失。應(yīng)用溶液培養(yǎng)技術(shù)，可以觀察礦質(zhì)元素對(duì)植物生長(zhǎng)的必需性?！緦?shí)驗(yàn)用品】1 儀器： 酸度計(jì) 1,000ml的培養(yǎng)缸 量筒 移液管 棉花2 試劑：各礦質(zhì)鹽（C. P.）（見表1、2）3 材料：番茄幼苗（三個(gè)以上真葉）【實(shí)驗(yàn)方法】1幼苗的準(zhǔn)備：將西紅柿、小麥等種子浸泡12小時(shí)，播入蛭石中，溫室中培養(yǎng)，待苗長(zhǎng)出三個(gè)以上真葉后，選擇生長(zhǎng)勢(shì)相同的植株進(jìn)

16、行實(shí)驗(yàn)。2配制培養(yǎng)液： A按表1配制大量元素、微量元素及鐵鹽儲(chǔ)備液。 B按表2分別配制完全或缺乏某元素的培養(yǎng)液，用酸堿調(diào)整pH 5.55.8之間3培養(yǎng)和管理 將已培養(yǎng)好的幼苗，選取大小一致的植株，用棉花包裹莖部，插入培養(yǎng)缸蓋的孔中，每孔一株。 培養(yǎng)期注意：（1）pH的調(diào)整：pH的激劇改變往往造成實(shí)驗(yàn)的失敗，因此，從實(shí)驗(yàn)開始就必須注意保持pH在5.56.0之間，若變動(dòng)較大可用稀酸堿進(jìn)行調(diào)整。（2）經(jīng)常補(bǔ)充盆內(nèi)由于蒸發(fā)或植物蒸騰造成水分的損失，每隔13天加蒸餾水一次，每隔一周更換一次培養(yǎng)液。為了使根系氧氣充足，每天定時(shí)向培養(yǎng)液中充氣，或在蓋與溶液間保留一定空隙，以利通氣。（3）實(shí)驗(yàn)前記錄幼苗發(fā)育狀

17、態(tài)（莖、根、長(zhǎng)、葉片大小、顏色等），實(shí)驗(yàn)期間隨時(shí)記錄生長(zhǎng)發(fā)育的情況和最先出現(xiàn)癥狀的部位及病變等。待各缺素培養(yǎng)液中的幼苗表現(xiàn)出明顯癥狀后，可把缺素培養(yǎng)液一律更換為完全培養(yǎng)液，觀察癥狀逐漸消失的情況，并記錄結(jié)果。表1大量元素 用量（g/1） 微量元素 用量（g/1）Ca(NO3)2 82.07 H3BO3 2.860 KNO3 50.56 MnSO4 1.015MgSO4·7H2O 61.62 CuSO4·5H2O 0.079KH2PO4 27.22 ZnSO4·7H2O 0.220NaNO3 42.45 H2MoO4 0.090Na H2PO4 24.81 Na2S

18、O4 35.51 CaCl2 55.50 KCl 37.28* Fe-EDTA: Na2-EDTA 7.45 FeSO4·7H2O 5.57* 溶解2,680mg EDTA在1,000ml蒸餾水中，加熱，趁熱加入2g FeSO4·7H2O 并強(qiáng)烈攪拌。表2 儲(chǔ)備液名稱完全缺N缺P缺K缺Ca缺 Mg缺Fe缺微Ca(NO3)2K NO3MgSO4·7H2OKH2PO4Fe-EDTANaNO3Na H2PO4Na2SO4CaCl2KCl微量元素101010101 1101011010 110101012.5 1 10 10 1 10 10 11010101101 10

19、10 10 1 10 1101010101101010101實(shí)驗(yàn)六 葉綠體色素的提取與分離【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹苛私馊~綠體色素提取與分離的原理及方法?！緦?shí)驗(yàn)原理】1植物葉綠體色素是吸收太陽光能進(jìn)行光合作用的重要物質(zhì)，主要由葉綠素a、葉綠素b、胡蘿卜素和葉黃素組成。從植物葉片中提取和分離色素是認(rèn)識(shí)葉綠體色素的前提，利用葉綠體色素不溶于水而溶于有機(jī)溶劑的特性，故可用乙醇、丙酮等有機(jī)溶劑提取。2色素分離的方法有多種，紙層析是最簡(jiǎn)便的一種。當(dāng)溶劑不斷地從紙上流過，由于混合物中各成分在兩相（即流動(dòng)相和固定相）間具有不同的分配系數(shù)，所以它們的移動(dòng)速度也不同，因而使樣品混合物得以分離。【實(shí)驗(yàn)用品】1儀器：大試管 軟木

20、塞 新華濾紙大頭針 漏斗 量筒天平 燒杯 毛細(xì)管研缽 2試劑：無水硫酸鈉 碳酸鈣 四氯化碳 乙醇 石英砂3材料：新鮮植物葉片（小麥、大麥、菠菜等）【實(shí)驗(yàn)方法】1稱取新鮮葉片2g放入研缽中，加95%乙醇5mL，少許碳酸鈣及石英砂，研磨成勻漿，再加95%乙醇5mL，然后用漏斗過濾至試管中，濾液即為葉綠體色素提取液。2 取準(zhǔn)備好的2×22cm濾紙條，將其一端剪去兩側(cè)，中間留一長(zhǎng)約1.5cm，寬約0.5cm窄條，如圖。 紙層析示意圖3用毛細(xì)管吸取葉綠素溶液點(diǎn)于窄條上端，注意一次所點(diǎn)溶液不可過多（色點(diǎn)直徑不超過0.5cm）。如色素過淡，用電吹風(fēng)機(jī)吹干后再重復(fù)點(diǎn)34次。4在大試管中加入四氯化碳3

21、5mL及少許無水硫酸納。然后將濾紙條固定于軟木塞上，插入試管內(nèi)，如圖所示浸入溶劑中（色素點(diǎn)要略高于液面，濾紙條邊緣不可碰到試管壁），蓋緊軟木塞，插入試管架于陰暗處進(jìn)行層析。5 0.51h后（溶劑前沿達(dá)濾紙條1.52.0 cm），取出濾紙條，立即用鉛筆在溶劑前沿劃線做記號(hào)，并觀察色素帶分布。最上端橙黃色為胡蘿卜素，其次鮮黃色為葉黃素，再次藍(lán)綠色為葉綠素a，最后的黃綠色為葉綠素b。 【思考題】 1 研磨提取葉綠素時(shí)加入CaCO3有何作用？ 2 簡(jiǎn)述葉綠體色素的吸收光譜特點(diǎn)及生理意義。3用不含水的有機(jī)溶劑無水乙醇、丙酮等提取植物材料，特別是干材料的葉綠體色素往往效果不佳，原因何在？ 實(shí)驗(yàn)七 葉綠體色

22、素理化性質(zhì)的鑒定【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?了解葉綠體色素的理化性質(zhì)及其在光合作用中的意義；2掌握黃色素和綠色素的分離方法及原理。【實(shí)驗(yàn)原理】植物色素包括脂溶性的葉綠體色素和水溶性的細(xì)胞液色素，前者（如葉綠素）與光合作用有關(guān)，后者屬黃酮類物質(zhì)，特別與花朵的顏色有關(guān)。了解它們的性質(zhì)有助于對(duì)其生理功能的理解?！緦?shí)驗(yàn)用品】1儀器：分光計(jì) 研缽 天平吸耳球 漏斗 試管分液漏斗 量筒 石英砂2試劑：乙醚 甲醇 95%乙醇乙酸 鹽酸 醋酸銅 氫氧化銨 氫氧化鉀 碳酸鈣 3材料：新鮮植物葉片（小麥、大麥、菠菜等）【實(shí)驗(yàn)方法】1光對(duì)葉綠素的破壞作用 取4支試管，其中2支各加入4mL用無離子水研磨后的葉片勻漿，另外2支各加入

23、2mL葉綠體色素乙醇提取液，并用95%乙醇稀釋一倍。 取上述兩支試管（水研磨的葉片勻漿、色素乙醇提取液各一支），置于強(qiáng)光下，另外兩支放到暗處，經(jīng)23小時(shí)后，對(duì)比觀察溶液的顏色有何變化，解釋其原因。2葉綠素的螢光現(xiàn)象 取上述色素乙醇提取液少許于試管中，在直射光下觀察反射光與透射光溶液的顏色有何不同？解釋原因。3H+和Cu2+在葉綠素分子中的替代作用 取上述色素乙醇提取液2mL于試管中，一滴一滴加入濃鹽酸，搖勻，觀察溶液的顏色變化。 當(dāng)溶液出現(xiàn)褐色，此時(shí)葉綠素分子已遭破壞，加醋酸銅晶體一小塊后，漸漸加熱溶液，觀察記載溶液顏色變化情況，并與提取液顏色相比較。解釋其變化原因。4 黃色素和綠色素的分離取

24、上述色素乙醇提取液5mL，加到盛有10mL乙醚的分液漏斗中，搖動(dòng)分液漏斗，并沿漏斗邊緣加入20mL無離子水，輕輕搖動(dòng)分液漏斗，靜置片刻，溶液即分成兩層，色素已全部轉(zhuǎn)入上層乙醚中，棄去下層乙醇和水，再用無離子水沖洗乙醚溶液12次。然后在色素乙醚溶液中加入5mL 30%KOH甲醇溶液，充分搖動(dòng)分液漏斗，靜置約10min，再加無離子水約10mL，搖動(dòng)后靜置分離，則得黃色素層和綠色素層，分別置于試管中保存。5觀察色素溶液的吸收光譜 調(diào)節(jié)分光計(jì)，觀察太陽光的光譜；觀察色素乙醇提取液，用95%乙醇稀釋一倍比較之；觀察黃色素乙醚溶液，用乙醚將溶液稀釋一倍比較之；觀察皂化葉綠素甲醇溶液，用甲醇將溶液稀釋一倍比

25、較之；觀察被光破壞的色素乙醇溶液；觀察銅取代了鎂的色素溶液。實(shí)驗(yàn)八 葉綠素a和b含量的測(cè)定（分光光度法）【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹空莆杖~綠體色素提取液中葉綠素a和b含量的測(cè)定方法?！緦?shí)驗(yàn)原理】葉綠素a、b在紅光區(qū)最大吸收峰分別位于663nm和645nm，同時(shí)在該波長(zhǎng)時(shí)葉綠素a、b的比吸收系數(shù)k為已知，我們即可根據(jù)Lambert-Beer定律，列出濃度C與吸光度A之間的關(guān)系式：A663 = 82.04Ca + 9.27Cb（1）A645 = 16.75Ca + 45.60Cb（2）（1）（2）式中的A663、D645為葉綠素溶液在波長(zhǎng)663nm和645nm時(shí)的吸光度。Ca、Cb為葉綠素a、b的濃度，單位為mg

26、/l。82.04、9.27為葉綠素a、b在波長(zhǎng)663nm時(shí)的比吸收系數(shù)。16.75、45.6為葉綠素a、b在波長(zhǎng)645nm時(shí)的比吸收系數(shù)。解方程式（1）（2），則得：Ca = 12.7A6632.69A645（3）Cb = 22.9A6454.68A663（4）CT = Ca+ Cb = 20.21A645 + 8.02A663（5）CT為總?cè)~綠素濃度，單位為mg/l。利用上面（3）（4）（5）式，即可以計(jì)算葉綠素a、b及總?cè)~綠素的濃度。Lichtenthaler等對(duì)Amon法進(jìn)行了修正，提出了80%丙酮中三種色素提取液含量的計(jì)算公式：Ca=12.21A663-2.81A646 （6）Cb=2

27、0.13A646-5.03A663 （7）Cx·c=1000A470-3.27Ca-104Cb/229（8）則95%乙醇色素提取液中：Ca=13.95A665-6.88A649 （9）Cb=24.96A649-7.32A665 （10）Cx·c=（1000A470-2.05Ca-114.8Cb）/245（11）式中：Ca、Cb分別為葉綠素a和b的濃度；Cx·c為類胡蘿卜素的總濃度；A663、A646、A470分別為葉綠體色素提取液在波長(zhǎng)663nm、646nm、470nm下的吸光度。【實(shí)驗(yàn)用品】1儀器：臺(tái)天平 剪刀 移液管研缽 容量瓶 漏斗分光光度計(jì)（723G型）

28、2試劑：碳酸鈣 95%乙醇 石英砂3材料：小麥 菠菜 【實(shí)驗(yàn)方法】1提取葉綠素取新鮮植物葉片數(shù)張，去掉較大的葉脈并剪成碎塊、混勻后于天平上稱取0.2g（共三份），置于研缽中，加少許碳酸鈣和石英砂及2mL 95%乙醇，仔細(xì)研磨成勻漿后，再加95%乙醇5mL。2過濾取濾紙一張，置漏斗中，用95%乙醇潤(rùn)濕，沿玻棒把提取液倒入漏斗中，過濾到25mL容量瓶中，用少量95%乙醇沖洗研缽、玻棒、及殘?jiān)鼣?shù)次，直至濾紙和殘?jiān)袩o綠色為止。最后用95%乙醇定容至25mL，充分搖勻。3測(cè)量吸光度 取一光徑為1cm的比色杯，注入上述葉綠素乙醇溶液，另以95%乙醇注入同樣的比色杯中，作為空白對(duì)照，于665nm、649

29、nm和470m波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度。4計(jì)算按公式分別計(jì)算最后計(jì)算葉綠素a、b和類胡蘿卜素的濃度（mg/L）式相加即得到葉綠素總濃度。樣品中葉綠素含量，需要考慮稀釋因子，則得到：葉綠素含量（mg/g）= 【思考題】 葉綠素a、b在紅光和藍(lán)光區(qū)都有一最大吸收峰，能否用藍(lán)光區(qū)的最大吸收峰波長(zhǎng)進(jìn)行葉綠素、a、b的定量分析，為什么？實(shí)驗(yàn)九 環(huán)境因素對(duì)光合作用的影響（葉圓片上浮法）【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹苛私夤?、二氧化碳、溫度?duì)植物光合作用的影響?！緦?shí)驗(yàn)原理】植物光合作用強(qiáng)度的大小受光強(qiáng)、CO2濃度、溫度等環(huán)境條件的影響。利用真空滲入法排除葉肉細(xì)胞間隙的空氣，充以水分，使葉片沉于水中。在光合作用過程中，植物吸收CO2放出

30、O2，由于O2在水中的溶解度很小，而在細(xì)胞間積累，結(jié)果使得原來下沉的葉片上浮，根據(jù)上浮所需時(shí)間長(zhǎng)短，即能比較光合作用的強(qiáng)弱?！緦?shí)驗(yàn)用品】1儀器：照度計(jì) 溫度計(jì)（酒精） 玻璃注射器（25mL）鉆孔器 冰塊 碘鎢燈（500w）燒杯（100mL）2試劑：碳酸氫鈉3材料：蠶豆、油菜或丁香等植物葉片【實(shí)驗(yàn)方法】1 從供試植物（蠶豆、油菜或丁香等）上選取健壯、葉齡相似的成熟葉片，用直徑1 cm左右的鉆孔器，在葉片上打下60個(gè)小圓片（避開葉脈），放入大注射器中，注入15 m無離子水，排除空氣后，用手指堵住注射器前端小孔，把活塞用力向后拉，即可造成減壓而逐出葉肉組織中的空氣，放開手指，水即進(jìn)入組織中，如此重復(fù)

31、數(shù)次，待整個(gè)葉圓片全部充滿水而下沉后，把下沉葉圓片連同水倒入小燒杯中，放在黑暗處備用。2取小燒杯6只，其中2只各加入20mL煮沸并冷卻的無離子水，另外4只各加20mL為CO2飽和的煮沸并冷卻的無離子水（加入NaHCO3）。為方便起見，也可用一玻管向煮沸并冷卻的無離子水中吹氣數(shù)分鐘，使水中CO2達(dá)到飽和。然后于6只小燒杯中各放入葉圓片10片，分別置于不同光強(qiáng)和不同溫度條件下，作如下表：杯 號(hào)光溫 度CO21強(qiáng)高CO22強(qiáng)高+ CO23強(qiáng)低+ CO24弱高CO25弱高+ CO26弱低+ CO23 記錄各燒杯中每一葉圓片上浮所需的時(shí)間，以一定時(shí)間內(nèi)上浮的圓片數(shù)或上浮所需平均時(shí)間，比較不同條件下光合作

32、用的強(qiáng)弱。4 根據(jù)結(jié)果，比較光強(qiáng)、溫度、CO2對(duì)光合作用的影響。實(shí)驗(yàn)十 植物光合強(qiáng)度的測(cè)定（ 改良半葉法）【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?了解并掌握改良半葉法測(cè)定植物光合強(qiáng)度的方法。【實(shí)驗(yàn)原理】 改良半葉法是將植物對(duì)稱葉片中的一部分遮光或取下置于暗處，另一部分則留在光下進(jìn)行光合作用，過一定時(shí)間后，在這兩部分葉片的對(duì)應(yīng)部位取同等面積，分別烘干稱重。因?yàn)閷?duì)稱葉片的兩對(duì)應(yīng)部位的等面積的干重，開始時(shí)被視為相等，照光后葉片重量超過暗中的葉重，超過部分即為光合作用產(chǎn)物的產(chǎn)量，并通過一定的計(jì)算可得到光合作用強(qiáng)度?！緦?shí)驗(yàn)用品】1儀器：分析天平 剪刀 打孔器 烘箱 紗布 錫箔紙稱量瓶 刀片 脫脂棉 2試劑：三氯乙酸 3材料：丁香

33、葉片 【實(shí)驗(yàn)方法】1 選擇測(cè)定樣品在田間選定有代表性植株葉片（如葉片在植株上的部位、葉齡、受光條件等）20張，掛小紙牌（順序編號(hào)）。2 葉子基部處理 為了不使選定葉片中光合作用產(chǎn)物往外運(yùn)輸，而影響測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性，可采用下列方法進(jìn)行處理：（1）可將葉子輸導(dǎo)系統(tǒng)的韌皮部破壞。如丁香等雙子葉植物的葉片，可用刀片將葉柄的外皮環(huán)割約0.5厘米左右寬。（2）如果是小麥、大麥或燕麥等單子葉植物，由于韌皮部和木質(zhì)部難以分開處理，可用剛在開水中浸過的紗布，將葉子基部燙傷一小段即可（一般用90以上的開水燙20秒）。（3）由于某些植物的葉柄木質(zhì)化程度低，葉柄易被折斷。用開水燙，又難以掌握燙傷的程度，往往不是燙得不

34、夠便是燙得過重而使葉片下垂，改變了葉片的角度。因此可改用化學(xué)方法來“環(huán)割”，選用適當(dāng)濃度的三氯乙酸，點(diǎn)涂葉柄以阻止光合產(chǎn)物的輸出。三氯乙酸是一種強(qiáng)烈的蛋白質(zhì)沉淀劑，滲入葉柄后可將篩管生活細(xì)胞殺死，而起到阻止有機(jī)養(yǎng)料運(yùn)輸?shù)淖饔?。三氯乙酸的濃度，視葉柄的幼嫩程度而異。以能明顯灼傷葉柄，而又不影響水分供應(yīng)，不改變?nèi)~片角度為宜。一般使用5%三氯乙酸。為了使環(huán)割或燙傷等處理后的葉片不致下垂，影響葉片的自然生長(zhǎng)角度，可用錫箔紙或塑料管包圍之，使葉片保持原來著生角度。3剪取樣品葉基部處理完畢后，即可剪取樣品，記錄時(shí)間，開始進(jìn)行光合作用測(cè)定。一般按編號(hào)次序分別剪下對(duì)稱葉片的一半（主脈不剪下），按編號(hào)順序夾于濕

35、潤(rùn)的紗布中，放置于暗處。過45 h后，再依次剪下另外半葉，同樣按編號(hào)夾于濕潤(rùn)紗布中，兩次剪葉的速度應(yīng)盡量保持一致，使各葉片經(jīng)歷相等的光照時(shí)數(shù)。4稱重比較 將各同號(hào)葉片之兩半按對(duì)應(yīng)部位疊在一起，在無粗葉脈處，用打孔器取數(shù)個(gè)葉圓片，分別置于照光及暗中的兩個(gè)稱量瓶中。然后將稱量瓶放入烘箱（105），烘30min后轉(zhuǎn)85下烘至恒重（約3h），冷卻后在分析天平上稱量。5計(jì)算結(jié)果 葉片照光及暗中干重之差（mg）除以葉面積（dm2）及照光時(shí)數(shù)，即得光合作用強(qiáng)度，以干物質(zhì)計(jì)，mg·dm-2·h-1表示之。計(jì)算公式： 計(jì)算公式：光合作用強(qiáng)度= 由于葉內(nèi)貯存的光合產(chǎn)物一般為蔗糖和淀粉等，可將干

36、物質(zhì)重量乘以系數(shù)1.5，得二氧化碳同化量，單位為CO2, mg/dm2·h。實(shí)驗(yàn)十一 植物呼吸強(qiáng)度的測(cè)定（小籃子法）【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?理解小籃子法測(cè)定呼吸強(qiáng)度的原理，掌握測(cè)定方法?！緦?shí)驗(yàn)原理】利用Ba(OH)2溶液吸收呼吸過程中釋放的CO2，形成BaCO3沉淀。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，用已知濃度草酸溶液滴定剩余的Ba(OH)2溶液，從空白和樣品二者消耗草酸溶液之差，可計(jì)算出呼吸過程中釋放的CO2量?！緦?shí)驗(yàn)用品】1儀器：廣口瓶 （500mL） 溫度計(jì)（100） 干燥管酸式滴定管（50 mL） 尼龍窗紗制作的小籃2試劑：飽和Ba (OH)2溶液酚酞指示劑：1g酚酞溶于100mL95%乙醇中，儲(chǔ)于滴瓶中，

37、備用。1/44mol/L草酸溶液：準(zhǔn)確稱取重結(jié)晶的草酸H2C2O4·2H2O 2.865g溶于無離子水中定容至1000mL。每mL溶液相當(dāng)于1mLg的CO2。3材料：小麥種子（發(fā)芽）；小麥種子（煮死）【實(shí)驗(yàn)方法】1安裝測(cè)試裝置 取500mL廣口瓶一個(gè)，裝配一只三孔橡膠塞，一孔插入盛堿石灰的干燥管吸收空氣中的CO2，保證進(jìn)入呼吸瓶的空氣無CO2；一孔插溫度計(jì)，另一孔直徑約1cm左右供滴定用，滴定前用小橡膠塞塞緊。瓶塞下面掛一尼龍窗紗制作的小籃子，用以盛實(shí)驗(yàn)材料，整個(gè)裝置如右圖所示。2稱取萌發(fā)的小麥、燕麥或玉米種子2030g，裝入尼龍窗紗小籃內(nèi)，將小籃子掛在廣口瓶橡膠塞上，同時(shí)加Ba (

38、OH)2溶液20mL于廣口瓶?jī)?nèi)，立即塞緊瓶塞。每10min左右，輕輕地?fù)u動(dòng)廣口瓶，破壞溶液表面的BaCO3薄膜，以利對(duì)CO2的吸收。31h后，小心打開瓶塞，迅速取出小籃子，加入12滴酚酞指示劑，立即塞緊瓶塞。然后拔出小橡皮塞，把滴定管插入小孔中，用1/44mol/L的草酸滴定，直到紅色剛剛消失為止，記錄滴定堿液所耗用的草酸溶液的體積（mL）數(shù)。4另取500mL廣口瓶一只，用沸水煮死的種子（至少煮10min）為材料，按上述步驟作同樣測(cè)定，以此作為對(duì)照。5計(jì)算結(jié)果呼吸強(qiáng)度（mgCO2/g·小時(shí)）= V0：煮死種子滴定時(shí)所耗用的草酸溶液的體積(mL）V1：發(fā)芽種子滴定時(shí)所耗用的草酸溶液的體

39、積(mL）【思考題】1測(cè)定呼吸速率有何意義？ 2哪些因子能影響呼吸速率？ 實(shí)驗(yàn)十二 種子活力的快速測(cè)定 氯化三苯四氮唑法【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?了解測(cè)定種子活力在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的重要性，掌握TTC法測(cè)定種子活力的原理及方法?！緦?shí)驗(yàn)原理】發(fā)芽率是指種子在適宜條件下，規(guī)定天數(shù)內(nèi)發(fā)芽種子占供試種子的百分?jǐn)?shù)。發(fā)芽率是決定種子品質(zhì)優(yōu)劣和實(shí)用價(jià)值大小的主要依據(jù)，還與播種時(shí)的用種量直接有關(guān)。常規(guī)方法，即直接發(fā)芽測(cè)定發(fā)芽率所需時(shí)間較長(zhǎng)，特別是為了應(yīng)急需要，有時(shí)沒有足夠的時(shí)間來測(cè)定發(fā)芽率，或遇到休眠種子也無法知道的情況下，種子活力快速測(cè)定法則能在較短時(shí)間內(nèi)獲得結(jié)果。凡有生命活力的種子胚部，在進(jìn)行呼吸作用過程中都有氧化還原反應(yīng)

40、，而無生命活力的種胚則無此反應(yīng)。當(dāng)TTC滲入種胚的活細(xì)胞內(nèi)，作為氫受體被脫氫輔酶（NADH2或NADPH2）上的氫還原時(shí)，便由無色的氯化三苯四氮唑（TTC）變?yōu)榧t色的三苯基甲臢（TTF）。H |NNC6H5 N = NC6H5TTF（紅色） NNC6H5 | ·N = NC6H5Cl+2HTTC（無色） C6H5C C6H5C+HCl 【實(shí)驗(yàn)用品】1儀器：恒溫箱 燒杯 鑷子培養(yǎng)皿 刀片2試劑：0.5%TTC溶液：稱取TTC 0.5g，置放燒杯中，然后加入少許95%乙醇使其溶解，再用無離子水稀釋至100mL。溶液避光保存，若發(fā)紅時(shí)，不得使用。3材料：小麥、燕麥、玉米等谷類種子【實(shí)驗(yàn)方法

41、】1 浸種隨機(jī)取待測(cè)種子50g左右，在3035溫水中浸泡一定時(shí)間（小麥、大麥、燕麥需68h，玉米5h左右；），使種子充分吸脹，以增強(qiáng)種胚的呼吸強(qiáng)度，促使顯色迅速。2顯色 取吸脹的種子100粒，用刀片沿種胚的中心線準(zhǔn)確縱向切開，將其中的一半（100個(gè)半粒）分別置于二只培養(yǎng)皿中，加入適量的0.5%TTC(以覆蓋種子為度)溶液，然后置30恒溫箱中保溫0.51h，將另一半（100個(gè)半粒）在沸水中煮5min以殺死種胚，作同樣染色處理，以此作為對(duì)照。3觀察結(jié)果并計(jì)算種子活力染色結(jié)束后，倒出TTC溶液，再用無離子水將種子沖洗12次，立即進(jìn)行鑒定，以免放久種胚會(huì)褪色。凡種胚全部或大部分被染成紅色的即為具有生命

42、力的種子，種胚不被染色的為死種子。4 計(jì)算 種子活力（%）=%實(shí)驗(yàn)十三 種子活力的快速測(cè)定 紅墨水法【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?了解測(cè)定種子活力在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的重要性，掌握紅墨水法測(cè)定種子活力的方法?！緦?shí)驗(yàn)原理】凡有生命活力種子的種胚細(xì)胞的原生質(zhì)膜具有選擇透性，都具有選擇吸收外界物質(zhì)的能力，一般情況下染料不能進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，因此有生命活力種子的種胚不被染色。而喪失生命力的種子，其種胚細(xì)胞原生質(zhì)膜喪失了選擇吸收物質(zhì)的能力，于是染料便進(jìn)入細(xì)胞使種胚染色。所以根據(jù)種子的種胚是否被染色可以判斷種子是否具有生命力?！緦?shí)驗(yàn)用品】1儀器：培養(yǎng)皿 鑷子 刀片2 試劑：5%紅墨水 3材料：小麥、燕麥、玉米等谷類種子【實(shí)驗(yàn)方法】1浸

43、種，同TTC法。2染色取已吸脹的種子100粒，沿種胚的中線縱向切為兩半，將一半置于培養(yǎng)皿中，加入5%紅墨水（以淹沒種子為度），染色510min （溫度高時(shí)染色時(shí)間可稍縮短）。染色后，倒去紅墨水，用無離子水沖洗23次，直至沖洗液無色為止。檢查種子的死活，結(jié)果凡種胚不著色或著色很淺的為生活種子，凡種胚與胚乳著色程度相同的為死種子。同樣可用沸水殺死的種子作對(duì)照觀察。3.計(jì)數(shù)種胚不著色或著色淺的種子數(shù)，算出種子活力。 小麥種子 （活種子） （死種子） （活種子） （死種子）TTC染色法 紅墨水染色【思考題】種子生命力和種子發(fā)芽率有區(qū)別嗎？為什么？實(shí)驗(yàn)十四 脯氨酸含量的測(cè)定【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹? 了解植物組織中

44、脯氨酸含量對(duì)其抗逆性的影響；2理解測(cè)定原理并掌握測(cè)定方法。【實(shí)驗(yàn)原理】在逆境條件下（旱、鹽堿、熱、冷、凍），植物體內(nèi)脯氨酸（proline, Pro）的含量顯著增加。植物體內(nèi)脯氨酸含量在一定程度上反映了植物的抗逆性，抗旱性強(qiáng)的品種往往積累較多的脯氨酸，因此測(cè)定脯氨酸含量可以作為抗旱育種的生理指標(biāo)之一。另外，由于脯氨酸親水性極強(qiáng)，能穩(wěn)定原生質(zhì)膠體及組織內(nèi)的代謝過程，因而能降低冰點(diǎn)，有防止細(xì)胞脫水的作用。在低溫條件下，植物組織中脯氨酸含量增加，可提高植物的抗寒性。因此，亦可作為抗寒育種的生理指標(biāo)。當(dāng)用磺基水楊酸提取植物樣品時(shí)，脯氨酸便游離于磺基水楊酸的溶液中，然后用酸性茚三酮加熱處理后，溶液即成紅

45、色，再用甲苯處理，則色素全部轉(zhuǎn)移至甲苯中。色素的深淺即表示脯氨酸含量的高低。在520nm波長(zhǎng)下比色測(cè)定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出（或用回歸方程計(jì)算）脯氨酸的含量?！緦?shí)驗(yàn)用品】1儀器：722型分光光度計(jì) 研缽 小燒杯 容量瓶 大試管 普通試管 移液管 注射器 水浴鍋 漏斗 漏斗架 濾紙 剪刀 2實(shí)驗(yàn)試劑：酸性茚三酮溶液：將1.25 g 茚三酮溶于30 mL 冰醋酸和20mL 6 mol/L磷酸中，攪拌加熱（70）溶解，貯于冰箱中。 3%磺基水楊酸：3g 磺基水楊酸加無離子水溶解后定容至100 mL。 冰醋酸 甲苯 3實(shí)驗(yàn)材料：待測(cè)植物（小麥、玉米、高粱、大豆 、牧草等）葉片。 【實(shí)驗(yàn)方法】1. 標(biāo)

46、準(zhǔn)曲線的繪制1.1在分析天平上精確稱取25 mg 脯氨酸，倒入小燒杯內(nèi)，用少量無離子水溶解，然后倒入250 mL 容量瓶中，加無離子水定容至刻度，此標(biāo)準(zhǔn)液中每毫升含脯氨酸100g。1.2 系列脯氨酸濃度容液的配制。取6個(gè)50 mL容量瓶，分別盛入脯氨酸原液0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL、2.5 mL 及3.0mL，用無離子水定容至刻度，搖勻，各瓶的脯氨酸濃度分別為1g/mL、2g/mL、3g/mL、4g/mL、5g/mL及6g/mL。1.3 取6支試管，分別吸取2 mL系列標(biāo)準(zhǔn)濃度的脯氨酸溶液及2mL冰醋酸和2 mL酸性茚三酮溶液，每管在沸水浴中加熱30 min。1.4

47、 冷卻后各試管準(zhǔn)確加入4 mL 甲苯，振蕩30 s，靜置片刻，使色素全部轉(zhuǎn)至甲苯溶液。1.5 用注射器輕輕吸取各管上層脯氨酸甲苯溶液至比色杯中，以甲苯溶液為空白對(duì)照，于520nm波長(zhǎng)處進(jìn)行比色。1.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：先求出吸光度值（y）以脯氨酸濃度（x）而變的回歸方程式，再按回歸方程式繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算2mL測(cè)定液中脯氨酸的含量（g/mL）。2. 樣品的測(cè)定2.1 脯氨酸的提取：準(zhǔn)確稱取不同處理的待測(cè)植物葉片各0.5 g，分別置入大試管中，然后向各管分別加入5mL 3%的磺基水楊酸溶液，在沸水浴中提取10min（提取過程中要經(jīng)常搖動(dòng)），冷卻后過濾于干凈的試管中，濾液即為脯氨酸的提取液。2.2 吸取2 mL 提取液于另一干凈的帶玻塞試管中，加入2 mL 冰醋酸及2 mL酸性茚三酮試劑，在沸水浴中加熱30min，溶液即呈紅色。2.3 冷卻后加入4 mL甲苯，搖蕩 30 s，靜置片刻，取上層液至10 mL離心管中，在3 000 r/min 下離心5 min。2.4 用吸管輕輕吸取上層脯氨酸紅色甲苯溶液于比色杯中，以甲苯為空白對(duì)照，在分光光度計(jì)上520 nm波長(zhǎng)處比色，求得吸光度值?！?/p>