兔瘟疫苗的研究應(yīng)用現(xiàn)狀.docx

1、兔瘟痿苗的研究應(yīng)用現(xiàn)狀劉付敏.彭遠義(西南大學(xué)動物科技學(xué)院.重慶北暗400715)兔病毒性出血癥(RHD)俗稱“兔瘟”，或稱兔出血癥，是由兔病扇性出血癥病毒(RHDV)引起的兔的一種急性、高度接觸性傳染病，特征為呼吸系統(tǒng)出血、肝壞死、實質(zhì)臟器水腫、瘀血及出血性變化。本病于1984年在我國江蘇省的江陰縣首次被發(fā)現(xiàn)，隨后迅速蔓延至全國25個省、市、自治區(qū)。迄今亞洲的朝鮮、印度和黎巴嫩、美洲的墨西If、非洲的喀麥隆和歐洲的奧地利、比利時、捷克、丹麥、法國、德國、希臘、盧森堡、荷蘭、波蘭、西班牙，瑞典、瑞士及南斯拉夫等國也都有發(fā)生。本病常呈暴發(fā)性流行，發(fā)病率及病死率極高，對易感兔致病率達90%,病死率

2、高達100%,是危害養(yǎng)兔業(yè)的最嚴重的疾病之一。對RHDV感染至今尚無4效治療藥物，所能應(yīng)用的治療措施僅限于對癥治療和支持治療。目前，各國都加大了RHDV疫苗的研究力度，以便能夠?qū)HDV感染進行有效的預(yù)防和治療。一、病原特性RHDV屬杯狀病毒科(CaUcivi-ride)兔病毒屬(thegenuslagovius),RHDV為圓形邊緣不很整齊，正二十面體立體對稱，裸露無囊膜，外徑為2550nm,-般為3234nm,芯幅在徑約20nm。該病毒侵入細胞后先在細胞核內(nèi)復(fù)制裝配，然后再向胞質(zhì)及胞外擴散。衣殼內(nèi)為約7.5kb單鏈正RNA,具有兩個基因組片段。含毒病料在-5C條件下可較長時間不失其毒力，將

3、“免瘟”肝病料保存于保存液中，置一5C冰箱內(nèi)，經(jīng)413d,人工感染家兔仍然發(fā)病死亡，說明“兔瘟”病毒保存413d尚存活。兔瘟病毒具有很強的血球凝集活性，并能被免疫血清的特異性所抑制，因此，這種特性可用于診斷的口的。RHDV是侵害多種組織細胞的泛嗜性病毒，它主要存在于病兔的肝、腎、血細胞的細胞質(zhì)中，不見于細胞核內(nèi)。以病兔的含毒肝臟組織,經(jīng)肯霉素和鏈容素處理后，于厭氣肉湯、血瓊脂和沙氏培養(yǎng)基中培芥，皆無萌生長。培養(yǎng)物注射于健康的成年兔,13d內(nèi)死亡。剖檢所見病理變化與自然病例相同。病毒顆粒對乙酰、氯仿及低pH值有抗性，1%的機氧化鈉、2%的甲輕和2%的漂白粉對本病毒有很好的消毒作用。二、RHDV疫

4、苗由于RHDV較難在家兔以外的實驗動物、雞胚、鴨胚以及多種原代細胞和傳代細胞系上適應(yīng)培養(yǎng)。而旦目前還未研究清楚兔瘟病毒存在兒個血清型，毒株間抗原性的差異也直接影響免疫效果oRHDV病毒核酸經(jīng)滅活后失去傳染力，但其核衣光作為主要抗原成分具有良好的抗原性，能使家免在72h開始建立免疫力。因此，用該類苗對兔進行預(yù)防注射和緊急接種，可有效地防治免瘟。(-)兔瘟組織滅活苗1984年5月?lián)P州大學(xué)農(nóng)學(xué)院王永坤等成功研制兔瘟組織天活苗，該疫苗效果可靠、安全，能有效地預(yù)防免瘟的發(fā)生。注射疫苗后，有極少數(shù)兔可出現(xiàn)哲時性停食或疼痛反應(yīng)，但經(jīng)l2d后即可恢復(fù)。自從王永坤等首先研制成功了兔瘟組織滅活疫苗以后，不少地方相

5、繼就地采集死兔肝臟病料制作疫苗，作為撲滅兔瘟的應(yīng)急措施。(-)兔瘟油乳劑滅活疫苗雖然兔瘟組織滅活疫苗對該病的預(yù)防發(fā)揮了一定作用，但組織滅活疫苗存在諸如在保存過程中易結(jié)塊、病料組織懸液顆粒較大，易堵塞注射針頭等問題。為此，1997年場州大學(xué)農(nóng)學(xué)院又研制成功r兔瘟油乳削天活疫苗，經(jīng)血凝抑制和攻毒試驗結(jié)果表明，在含有相同抗原定制備的疫苗，兔瘟油乳劑滅活疫苗比兔瘟組織滅活苗免疫后血清HI抗體效價高，而且油乳劑滅活苗在體內(nèi)免疫時間K。(三)兔瘟蜂膠組織滅活苗根據(jù)芥兔人員的普遍反映，普通組織滅活疫苗免疫時間短，需要多次注射免疫。兔瘟油乳劑滅活疫苗效果雖然比較理想，在機體內(nèi)吸收慢，維持時間於，但可能會影響肉

6、質(zhì)。蜂膠站一種廣譜生物活性物質(zhì)，對活細胞和機體無毒副作用，具有增強免疫，提高抗體效價的功能。2003年，寧康健、王慈等用病毒致死兔的肝組織，制成10%的兔瘟組織滅活苗和10%的兔瘟蜂膠組織滅活苗，用常規(guī)血凝抑制試驗檢測比較了注射兔瘟組織滅活苗和兔疽蜂膠組織滅活苗后兔體內(nèi)抗體水平的消長情況，結(jié)果表明兔瘋蜂膠組織滅活疫苗吸收快、產(chǎn)生效價高而持久，明顯優(yōu)于普通組織滅活苗。2002年，針對兔痕組織滅活苗的缺陷，張冰和孫德明等對兔痕組織滅活疫苗、白油佐劑滅活疫苗和蜂膠佐劑滅活疫苗進行了免疫效果比較，結(jié)果表明組織天活苗中的抗原成分在短時間內(nèi)即能大髭地被組織吸收，刺激動物機體，因而產(chǎn)生較高抗體水平所需的時間

7、短，而佐劑滅活疫苗由于佐劑的作用，抗原成分釋放緩慢，產(chǎn)生高水平抗體所需的時間要長，所以佐劑疫苗產(chǎn)生抗體持續(xù)的時間長。此外佐劑疫苗不需要特殊的保存條件，室溫卜,存放半年一般不失效、旦免疫注射過程中不會發(fā)生針頭堵塞而組織滅活疫苗須在4C8C條件下保存，R易疝結(jié)成塊，使注射困難。2002年，侯艷紅、錢碟6等采用超濾濃縮技術(shù)制備純化的雞法氏囊活性肽（分子量IkDa以F,主要成分為法氏囊活性肽），以不同的劑址肌肉注射45日於母兔，同時頸部皮F接種兔瘟滅活疫苗，觀察法氏囊活性肽對免瘟疫苗免疫效果的影響。結(jié)果表明：純化的法氏囊活性肽能夠加快兔瘟抗體產(chǎn)生的速度，縮短誘生抗體時間，提高抗體水平，延長抗體維持時間

8、。（四）兔瘟H9組織滅活疫苗由于制苗用的易感兔，其來源日益困難，價格昂貴，使人工發(fā)病家兔制造兔瘟組織滅活疫苗困難重重。由于兔瘟病毒的不同毒株對家兔致病力的強弱，及凝集人“O”型紅細胞的作用，有明顯的差異。為提高疫苗的免疫效果和降低生產(chǎn)成本，周學(xué)利、朱傳民等重新篩選毒株研制兔瘟疫苗，發(fā)現(xiàn)兔瘟病毒H9毒株對家兔有強大的致病力及較高的血凝價，并獲得了免疫譜廣、致病性強、抗原性好的RHDV-H9毒株，使制苗用易感兔的死亡率由58%提高85%以上，加入佐劑制成了高效、價廉的兔瘟疫苗。（五）兔瘟聯(lián)苗1. 兔瘟、巴氏桿菌二聯(lián)苗。兔瘟、兔巴氏桿菌病是傳染快、流行廣、發(fā)病急、死亡高、危害性大的家兔毀滅性傳染病。

9、為了控制該病的發(fā)生和流行，降低家兔發(fā)病死亡，保護養(yǎng)兔業(yè)的健康發(fā)展。四川省井研縣自】991年以來，應(yīng)用自己研制的兔瘟、巴氏桿菌二聯(lián)苗對該縣家兔進行了免疫試駛，在全縣開展田間試驗，取得了顯著的經(jīng)濟、社會效益。實踐證明該疫苗不論是預(yù)防免疫，還是緊急免疫，都對兔瘟和巴氏桿菌病有較好的免疫效果。二聯(lián)苗緊急接種對健康兔或初發(fā)病的兔免疫效果較好，能獲得堅強免疫力，而對發(fā)病已出現(xiàn)癥狀或典型癥狀的家兔免疫效果較差，而時還有加速家兔死亡的情況發(fā)生。二聯(lián)苗安全性好,預(yù)防免疫懷孕兔無流產(chǎn)征兆和流產(chǎn),奶兔也未發(fā)現(xiàn)不良反應(yīng)和死亡.商品幼兔在斷奶后重新加免一次，可獲得終身免疫。2. 免瘟、巴氏桿菌病、鮑氏校茵病三聯(lián)滅活苗。

10、免瘟、巴氏桿菌病、魏氏梭函病是由不同的病原微生物引起的兔的三種傳染病。由于這三種病發(fā)病率和致死率較高，對養(yǎng)兔業(yè)威脅極大。許蘭菊、張書松等用人工感染兔瘟病兔的肝、脾、腎及從患急性巴氏桿萌病和魏氏梭菌性腸炎病兔分離的細菌制成氮氧化鋁甲醛滅活苗（兔三聯(lián)苗）。在流行兔瘟、巴氏桿菌病、魏氏梭菌病的兔場試用該疫苗免疫家兔，在免疫后7d至8個月內(nèi)能有效地預(yù)防這幾種傳染病。在兔場每隔4-6個月用兔三聯(lián)苗進行一次免疫接種，井結(jié)合嚴格消毒等綜合措施，即可有效地防止免瘟、兔巴氏桿菌病及兔魏氏梭菌病的發(fā)生。兔三聯(lián)苗價格低廉，便于貯存、運輸及使用。吳強、劉洪斌等研制了兔瘟、巴氏桿菌病、魏氏梭菌病三聯(lián)濃縮疫苗，該疫苗濃縮

11、后每只家兔每次只需接種1ml,不僅免疫效果未受影響，而且還具有使用方便、副作用小等優(yōu)點。3. 兔盤、巴氏桿菌、魄氏枚菌、波氏桿菌四聯(lián)苗。丁勇于1999年成功研制了兔疽、巴氏桿埔、魏氏梭菌、波氏桿菌四聯(lián)苗，該聯(lián)苗克服了聯(lián)苗混合時各基礎(chǔ)苗的含敢不足及生產(chǎn)髭低等缺點。同時安全叮察，免疫性能好，免疫持技期達半年以上。四聯(lián)苗具有簡化免疫程序，一次性完成商品肉免應(yīng)免疫苗，既省力、省財，又減少應(yīng)激次數(shù)等優(yōu)點，利于推廣應(yīng)用。三、兔瘟疫苗的使用本病尚無特效藥物治療，預(yù)防接種是防止兔瘟的最佳途徑，但是在家兔生產(chǎn)過程中，盡管家兔已接種了免瘟疫苗，但在規(guī)定的免疫期內(nèi)仍發(fā)生兔瘟或抗體監(jiān)測時達不到應(yīng)有的抗體水平，共至右發(fā)

12、生整個兔群暴:發(fā)兔瘟的情況。（-）導(dǎo)致兔瘟疫苗免疫失敗的主要原因1. 過早或過晚免疫導(dǎo)致兔瘦丸疫失畋。忽視家免個體的差異，采用同一個免疫程序來進行免疫容易導(dǎo)致免疫失敗。如仔兔出生后體內(nèi)有較高水平的母源抗體，對有母源抗體保護的仔兔實施接種免疫，常被母源抗體所中和，免疫效果不佳。同樣，如果首免時間過晚，在母源抗體消失后再接種疫苗，則會出現(xiàn)免疫空白期，造成未免疫時已感染，錯過r免疫的最佳時間。2. 兔瘟保護期短.按說明書劑量首免后25d才能產(chǎn)生保護力，保護時間僅為20d,仔兔75日齡后，抗體水平迅速下降，如不及時二免，抗體效價很快低于正常值。這就是免疫后仍然發(fā)生兔瘟的-個重要因素。3. 疫苗保存和使

13、用不當(dāng)。日前市售的多為兔瘟組織滅活苗，是一種均勻的混懸液，應(yīng)當(dāng)?shù)蜏乇４?，保存溫度?5C以上或冷凍都易造成疫苗效價降低。必須進行皮下接種，不可飲水或飼料免疫。多種疫苗同時接種時要根據(jù)當(dāng)?shù)匾卟“l(fā)生和流行情況，確定重要和次要，不能在7d內(nèi)將幾種疫苗一起免疫接種，否則會降低免疫效果，更不能將幾種疫苗混合使用.因為免疫接種后，會產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)，機體發(fā)生一定的機能變化，有的甚至體溫稍微升高。由于不同的疫苗類型或免疫途徑不科學(xué)、免疫技術(shù)不規(guī)范等因素造成注射部位形成腫塊導(dǎo)致注射的疫苗吸收不良，導(dǎo)致產(chǎn)生的免疫強度不足，遇強毒攻擊則會發(fā)病.4. 養(yǎng)殖戶防疫衛(wèi)生意識不強。平時不注重消毒，免場內(nèi)外環(huán)境衛(wèi)生差，類、尿等

14、排泄物沒有及時清理，環(huán)境當(dāng)中已經(jīng)存在大缺的強毒株，導(dǎo)致病原菌滋生。如果兔群中感染其他病菌引起組織器官不同程度的病變，也會降低機體抵抗力，影響免疫效果。注射器具消毒不徹底，對疫苗町能造成直接污染，注射過程中沒有做到1兔1針頭，造成疾病傳播。5. 飼左蓉理不如兔瘟免疫接種產(chǎn)生抗體需要足夠的營芥，骨養(yǎng)缺乏和不足會影響抗體生成的速度和數(shù)量。因此，應(yīng)飼喂全價飼料，適當(dāng)增加生物學(xué)價值高的蛋白質(zhì)含景，進行科學(xué)飼養(yǎng)管理。在鼠害嚴煎、應(yīng)激、兔舍內(nèi)氨氣濃度過高時也同樣會降低免疫效果。6. 藥物因素。注射疫苗前后-周內(nèi)大削E：使用各種抗生素等都會影響到疫苗免疫作用的發(fā)揮。某些抗生素、抗球蟲藥、腎上腺皮質(zhì)激素、消奏劑

15、和抗病茬藥物能夠破壞滅活疫苗的抗原性，干擾免疫應(yīng)答,因此,在免疫的前后3d不能使用消毒藥、抗生素、抗球蟲藥和抗病毒藥。免疫接種時，在飼料中添加雙倍呈的多種維生素，同時喂給左旋咪唆可有效提高兔群的免疫應(yīng)答。（二）防止免疫失敗的措施I. 制訂合理的允痕程序。要根據(jù)各兔場實際，制訂合理的免疫程序以及按程序準時免疫接種是取得良好免疫效果的基礎(chǔ)。當(dāng)有疾病發(fā)生或體質(zhì)下降時不能免疫接種。，資料表明.用兔瘟疫苗免疫過的母兔，其所產(chǎn)仔兔的伴源抗體在50日齡內(nèi)的保護率為100%,5560日齡有75%不能抵御強毒攻擊,70日齡有100%不能抵御病毒攻擊，沒有作兔瘟疫苗免疫的母兔，其仔兔45日齡時則完全不能抵御強毒攻

16、擊；無論母兔免疫與否其仔免在30日齡內(nèi)均對兔瘟病誰不敏感。因此，確定兔瘟的免疫程序為：未經(jīng)免疫過的兔群仔免在30日齡應(yīng)用兔瘟疫苗旺行首免，免疫兔群的仔兔在4245齡應(yīng)用兔瘟疫苗進行改免。符只兔皮F注射疫苗1ml,180日齡復(fù)免一次，成年兔每4個月免疫一次，每次注射疫苗2ml。2. 加強科學(xué)何養(yǎng)管理和防疫消毒工作。做到封閉式飼養(yǎng)、定期消毒,注意防K害，杜絕飲水接種免疫，禁止使用過期、夾效或劣質(zhì)疫苗。另外兔瘟疫苗在運輸過程中必須保溫（2C8C）,使用過程中應(yīng)注意現(xiàn)配現(xiàn)用，沒有用完的應(yīng)放在冰箱冷藏室或保溫杯內(nèi)。注射器具應(yīng)該嚴格消毒，盡段做到1兔1針頭.四、展望迄今為止，RHDV滅活疫苗的研究雖然已有

17、一定的進展，但該病毒的體外培養(yǎng)仍是難題還沒有找到合適的體外培養(yǎng)細胞?，F(xiàn)仍用該病死兔的肝臟制滅活苗，因滅活不徹底有導(dǎo)致放毒可能，故有必要在病卷結(jié)構(gòu)和體外易感細胞上突破，研制基因疫苗。相信，隨若對該病毒疫苗研究、認識的不斷深入，將給我們預(yù)防RHDV感染帶來福昔。參考文獻（略）農(nóng)業(yè)部新批準11家獸藥GMP企業(yè)近H,農(nóng)業(yè)部發(fā)布第H71號公告，批準北京天牧清源生物技術(shù)有限公司等）1家獸藥生產(chǎn)企業(yè)為獸藥GMP企業(yè)（見表1）,核發(fā)獸藥GMP證書。贛州百靈動物藥業(yè)有限公司等5家魯藥生產(chǎn)企業(yè)通過魯藥GMP夏驗（見表1）,核發(fā)洋藥GMP證1弓。表1獸藥GMP合格企業(yè)目錄企業(yè)名稱北京天牧清源生物技術(shù)有限公司北京帕爾

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