動(dòng)物細(xì)胞工程2

1、2.2 動(dòng)物細(xì)胞工程動(dòng)物細(xì)胞工程教學(xué)目標(biāo)教學(xué)目標(biāo)n了解動(dòng)物細(xì)胞融合的原理、過(guò)程了解動(dòng)物細(xì)胞融合的原理、過(guò)程和意義。和意義。n理解單克隆抗體制備的過(guò)程和理解單克隆抗體制備的過(guò)程和 應(yīng)用應(yīng)用材料材料: 1970年，有兩位科學(xué)家做了一個(gè)人年，有兩位科學(xué)家做了一個(gè)人鼠細(xì)胞融鼠細(xì)胞融合的實(shí)驗(yàn)，以證明細(xì)胞膜的流動(dòng)性。那么，如何實(shí)現(xiàn)合的實(shí)驗(yàn)，以證明細(xì)胞膜的流動(dòng)性。那么，如何實(shí)現(xiàn)人人鼠細(xì)胞的融合，動(dòng)物細(xì)胞融合后還有什么用途呢？鼠細(xì)胞的融合，動(dòng)物細(xì)胞融合后還有什么用途呢？一、動(dòng)物細(xì)胞融合1.概念：概念： 動(dòng)物細(xì)胞融合（動(dòng)物細(xì)胞融合（cell fusion）也稱(chēng)）也稱(chēng)細(xì)胞雜細(xì)胞雜交，交，是指是指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞

2、兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成結(jié)合形成一個(gè)細(xì)一個(gè)細(xì)胞胞的過(guò)程。的過(guò)程。 融合形成的融合形成的具有原來(lái)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞遺傳物具有原來(lái)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞遺傳物質(zhì)質(zhì)的單核細(xì)胞，稱(chēng)為的單核細(xì)胞，稱(chēng)為雜交細(xì)胞雜交細(xì)胞。誘導(dǎo)方法：誘導(dǎo)方法：物理方法：物理方法：化學(xué)法：化學(xué)法：生物法：生物法： 滅活的病毒滅活的病毒電激等電激等聚乙二醇（聚乙二醇（PEG)3.融合過(guò)程：融合過(guò)程： 為什么滅活的為什么滅活的 病毒能作誘導(dǎo)劑病毒能作誘導(dǎo)劑？3.融合過(guò)程：融合過(guò)程：滅活喪滅活喪失感染性失感染性保留融合活性保留融合活性4.動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)的意義和應(yīng)用動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)的意義和應(yīng)用小結(jié)：植物體細(xì)胞雜交與動(dòng)物細(xì)胞融合的比較小結(jié)：植物

3、體細(xì)胞雜交與動(dòng)物細(xì)胞融合的比較比較項(xiàng)目比較項(xiàng)目植物體細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜交動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞融合原理原理融合前處理融合前處理使用的酶使用的酶誘導(dǎo)方法誘導(dǎo)方法主要用途主要用途細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞的全能性細(xì)胞的全能性細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性纖維素酶、果膠酶纖維素酶、果膠酶胰蛋白酶胰蛋白酶 物理方法物理方法（離心、振蕩、電激）離心、振蕩、電激） 化學(xué)方法（化學(xué)方法（PEG）物理、化學(xué)方法物理、化學(xué)方法滅活的病毒滅活的病毒獲得雜種植株獲得雜種植株獲得雜交細(xì)胞獲得雜交細(xì)胞、制備單克隆抗體制備單克隆抗體去除細(xì)胞壁后誘去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合導(dǎo)原生質(zhì)體融合使細(xì)胞分散后使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)

4、胞融合誘導(dǎo)細(xì)胞融合【例【例1】能使動(dòng)物細(xì)胞融合的特有的誘導(dǎo)因子是】能使動(dòng)物細(xì)胞融合的特有的誘導(dǎo)因子是 （ ）A.離心離心 B.滅活的病毒滅活的病毒 C.電刺激電刺激 D.振動(dòng)振動(dòng)【例【例2】融合后的雜交細(xì)胞的遺傳物質(zhì)有何特點(diǎn)（】融合后的雜交細(xì)胞的遺傳物質(zhì)有何特點(diǎn)（ ）A.具有原來(lái)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞的遺傳信息具有原來(lái)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞的遺傳信息 B.能無(wú)限增殖能無(wú)限增殖C.可形成新個(gè)體可形成新個(gè)體 D.培養(yǎng)過(guò)程會(huì)貼壁培養(yǎng)過(guò)程會(huì)貼壁【例【例3】動(dòng)物細(xì)胞融合的作用中最重要的是（】動(dòng)物細(xì)胞融合的作用中最重要的是（ ）A.克服遠(yuǎn)源雜交不親和克服遠(yuǎn)源雜交不親和 B.制備單克隆抗體制備單克隆抗體 C.培育新物種培育

5、新物種 D.生產(chǎn)雜種細(xì)胞生產(chǎn)雜種細(xì)胞 BBA抗體：能夠與抗原發(fā)生特抗體：能夠與抗原發(fā)生特異性結(jié)合的異性結(jié)合的免疫球蛋白免疫球蛋白。能產(chǎn)生抗體的細(xì)胞是能產(chǎn)生抗體的細(xì)胞是漿細(xì)漿細(xì)胞（即效應(yīng)胞（即效應(yīng)B細(xì)胞）。細(xì)胞）。二、單克隆抗體二、單克隆抗體抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法從從血血清清中中分分離離抗抗體體該法制備抗體的特點(diǎn)：該法制備抗體的特點(diǎn)： 產(chǎn)量低、純度低，且抗產(chǎn)量低、純度低，且抗體的特異性差、靈敏度低。體的特異性差、靈敏度低。多多種種效效應(yīng)應(yīng)B細(xì)細(xì)胞胞動(dòng)動(dòng)物物體體內(nèi)內(nèi)多多種種抗抗體體抗抗原原 讀下面一段資料，找出單克隆抗體的概念讀下面一段資料，找出單克隆抗體的概念 人人們發(fā)現(xiàn)，在動(dòng)物發(fā)

6、生免疫反應(yīng)的過(guò)程中，體內(nèi)的們發(fā)現(xiàn)，在動(dòng)物發(fā)生免疫反應(yīng)的過(guò)程中，體內(nèi)的B細(xì)胞細(xì)胞可以產(chǎn)生多達(dá)百萬(wàn)種以上的特異性抗體，但是每個(gè)可以產(chǎn)生多達(dá)百萬(wàn)種以上的特異性抗體，但是每個(gè)B細(xì)胞只細(xì)胞只分泌一種化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體。要想獲得大量的分泌一種化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體。要想獲得大量的單一抗體，必須用單個(gè)單一抗體，必須用單個(gè)B細(xì)胞進(jìn)行無(wú)性繁殖，即克隆。細(xì)胞進(jìn)行無(wú)性繁殖，即克隆。 1.單克隆抗體的概念單克隆抗體的概念 單克隆抗體：?jiǎn)慰寺】贵w：?jiǎn)蝹€(gè)單個(gè)B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的細(xì)胞克隆產(chǎn)生的化學(xué)化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體的抗體提示提示1：對(duì)：對(duì)B細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)可細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)可行嗎？行

7、嗎？提示提示2：我們所學(xué)的哪種細(xì)胞是可以無(wú)限增殖的？：我們所學(xué)的哪種細(xì)胞是可以無(wú)限增殖的？問(wèn)題：?jiǎn)栴}：如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？請(qǐng)嘗試設(shè)如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？請(qǐng)嘗試設(shè)計(jì)一個(gè)方案。計(jì)一個(gè)方案。 2.單克隆抗體的制備單克隆抗體的制備提示提示3 3：有什么方法能使：有什么方法能使B B細(xì)胞產(chǎn)生抗體細(xì)胞產(chǎn)生抗體 的能力和腫瘤細(xì)胞無(wú)限增殖能的能力和腫瘤細(xì)胞無(wú)限增殖能 力同時(shí)具備呢？力同時(shí)具備呢？一個(gè)一個(gè)B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體 骨髓瘤細(xì)胞能無(wú)限增殖骨髓瘤細(xì)胞能無(wú)限增殖雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)設(shè)計(jì)方案：設(shè)計(jì)方案：動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)

8、單克隆單克隆抗體抗體 既能產(chǎn)生特異性抗體，既能產(chǎn)生特異性抗體， 又能大量增殖的細(xì)胞又能大量增殖的細(xì)胞為什么給小鼠注射特定的為什么給小鼠注射特定的抗原蛋白？抗原蛋白？ 會(huì)有哪幾種融合方式？會(huì)有哪幾種融合方式？ 雜交瘤細(xì)胞是如何篩選出雜交瘤細(xì)胞是如何篩選出來(lái)的？有何特點(diǎn)？來(lái)的？有何特點(diǎn)？ 是否所有的雜交瘤細(xì)胞都是否所有的雜交瘤細(xì)胞都能產(chǎn)生專(zhuān)一性抗體？能產(chǎn)生專(zhuān)一性抗體？ 如何大規(guī)模進(jìn)行培養(yǎng)得到如何大規(guī)模進(jìn)行培養(yǎng)得到大量的單克隆抗體？大量的單克隆抗體？BB 、B瘤瘤 、瘤瘤瘤瘤 （B、瘤）、瘤）（一選）（一選）選選擇性培養(yǎng)基擇性培養(yǎng)基：只有只有雜交瘤雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞才能存才能存活活獲得產(chǎn)生相應(yīng)獲得產(chǎn)生相

9、應(yīng)抗體的抗體的B細(xì)胞細(xì)胞（二選）：選（二選）：選能產(chǎn)生所需能產(chǎn)生所需專(zhuān)專(zhuān)一抗體的雜交一抗體的雜交瘤細(xì)胞瘤細(xì)胞單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)特異性強(qiáng)、靈敏度高特異性強(qiáng)、靈敏度高，并能大量制備。并能大量制備。（1）作為診斷試劑）作為診斷試劑最廣泛應(yīng)用最廣泛應(yīng)用準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速單抗制備過(guò)程分哪幾步？單抗制備過(guò)程分哪幾步？請(qǐng)用箭頭把以下代表單克隆抗請(qǐng)用箭頭把以下代表單克隆抗體制備過(guò)程步驟的圖解的字母按正確順序連接起來(lái)。順體制備過(guò)程步驟的圖解的字母按正確順序連接起來(lái)。順序是？序是？ 兩個(gè)過(guò)程兩個(gè)過(guò)程動(dòng)物細(xì)胞融合過(guò)程動(dòng)物細(xì)胞融合過(guò)程單克隆抗體制備過(guò)程單克隆抗體制備過(guò)程三個(gè)三個(gè)

10、“一一”一個(gè)誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法一個(gè)誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法 滅活病毒滅活病毒一個(gè)新細(xì)胞一個(gè)新細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞一個(gè)優(yōu)勢(shì)一個(gè)優(yōu)勢(shì)單克隆抗體特異性強(qiáng)、單克隆抗體特異性強(qiáng)、 靈敏度高的優(yōu)勢(shì)靈敏度高的優(yōu)勢(shì)1 1、科學(xué)家用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與某種細(xì)胞融合，得到雜交細(xì)胞，、科學(xué)家用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與某種細(xì)胞融合，得到雜交細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨髓瘤細(xì)胞融合的是經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨髓瘤細(xì)胞融合的是（ ） A.A.經(jīng)過(guò)免疫的經(jīng)過(guò)免疫的B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 B.B.沒(méi)經(jīng)過(guò)免疫的沒(méi)經(jīng)過(guò)免疫的T T淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞C.C.經(jīng)過(guò)免疫的經(jīng)過(guò)免疫的T T淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 D.D.沒(méi)經(jīng)過(guò)免疫的

11、淋巴細(xì)胞沒(méi)經(jīng)過(guò)免疫的淋巴細(xì)胞A2.動(dòng)物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交的比較中，正確的是動(dòng)物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交的比較中，正確的是（ ）A. 誘導(dǎo)融合的方法完全相同誘導(dǎo)融合的方法完全相同 B.所用的技術(shù)手段基本相同所用的技術(shù)手段基本相同 C. 操作步驟基本相同操作步驟基本相同 D. 都能形成雜種細(xì)胞都能形成雜種細(xì)胞 D3. 3. 單克隆抗體制備過(guò)程中，骨髓瘤細(xì)胞和單克隆抗體制備過(guò)程中，骨髓瘤細(xì)胞和B B淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合后，要用淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細(xì)胞是特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細(xì)胞是 （ ）淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 小鼠骨髓瘤細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞 B B淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞 雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞A.A. B. B.C.C. D.D. C C4.“4.“生物導(dǎo)彈生物導(dǎo)彈”是指是指 （ ）A.A.單克隆抗體單克隆抗體 B.B.雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞C.C.產(chǎn)生特定抗體的產(chǎn)生特定抗體的B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 D.D.在單克隆抗體上連接抗癌藥物在單克隆抗體上連接抗癌藥物 D有夢(mèng)想，才會(huì)有創(chuàng)造！ 已成功的動(dòng)物細(xì)胞融合實(shí)例有很多，如人已成功的動(dòng)物細(xì)胞融合實(shí)例有很多，如人小鼠、人小鼠、人