基因擴(kuò)增(PCR)實(shí)驗(yàn)室

1、基因擴(kuò)增（PCR）實(shí)驗(yàn)室 遼陽(yáng)鑫宇實(shí)驗(yàn)室設(shè)備安裝工程有限公司技術(shù)部前 言基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室一文，是根據(jù)國(guó)家有關(guān)法律、法規(guī)和技術(shù)規(guī)范，進(jìn)行選編、擇錄和收集有關(guān)資料、文章而編寫(xiě)的。選編和擇錄有關(guān)技術(shù)規(guī)范等，如有錯(cuò)誤是編著人理解有誤，編者表示歉意。本文的平面圖由黃海江、效果圖趙玉、錄入周悅同志完成。柏松楓、何興福、張璐、張偉卓、趙馨、趙儼、熊潔萌等編寫(xiě)。陳洪柱參與校對(duì)。總經(jīng)理郎憲明（高級(jí)工程師）編導(dǎo)。本文為內(nèi)部參閱資料，僅供參考。 2015年2月基因擴(kuò)增（PCR）實(shí)驗(yàn)室 基因擴(kuò)增檢驗(yàn)方法（簡(jiǎn)稱PCR）靈敏度高、特異性強(qiáng)、精確快捷、適用范圍廣等特點(diǎn)。在生物學(xué)、醫(yī)學(xué)科學(xué)研究、轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品、臨床檢測(cè)、疾病與

2、動(dòng)物疫病預(yù)防和控制、公安偵查等相關(guān)專業(yè)和學(xué)科廣為應(yīng)用。但是，PCR檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用時(shí)需保證實(shí)驗(yàn)安全、設(shè)置合理的實(shí)驗(yàn)室、規(guī)范的操作程序和嚴(yán)格的管理制度。 近幾年，對(duì)PCR實(shí)驗(yàn)室建設(shè)越來(lái)越得到重視，因?yàn)閷?duì)檢測(cè)結(jié)果的可靠性、準(zhǔn)確性和安全性起到至關(guān)重要作用，PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)核心問(wèn)題是如何避免污染。實(shí)驗(yàn)室的平面布局、空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)運(yùn)行、氣流控制等都是圍繞防止污染這個(gè)核心進(jìn)行設(shè)計(jì)和建設(shè)。 1. PCR實(shí)驗(yàn)室組合形式 PCR實(shí)驗(yàn)室可以是分散形式，也可以是組合形式，現(xiàn)在主要是以組合形式為主。1.1 分散形式PCR實(shí)驗(yàn)室各功能區(qū)間分散，又有一定的間距，不會(huì)造成區(qū)間干擾，因此沒(méi)有特定要求。由于工作流程的不便利，在新組

3、建的PCR實(shí)驗(yàn)室時(shí)往往不被采用。1.2 組合形式PCR實(shí)驗(yàn)室在較大空間實(shí)驗(yàn)用房相鄰布置依次劃分各功能區(qū)域，形成一個(gè)組合形式完成基因擴(kuò)增分析的PCR實(shí)驗(yàn)室，各區(qū)間在物理空間上完全相互獨(dú)立，各區(qū)間無(wú)論是在空間還是在使用中，始終處于完全的分隔狀態(tài)。但是，各實(shí)驗(yàn)區(qū)間集中布置，容易造成相互干擾，因此對(duì)總體布局以及屏障系統(tǒng)具有一定要求。對(duì)實(shí)驗(yàn)室的空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)、氣流流向、大氣壓力、人物流程等方面，在實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)和裝修上需進(jìn)行合理考慮。 2. PCR實(shí)驗(yàn)室的區(qū)域設(shè)計(jì) 2.1 PCR實(shí)驗(yàn)室分區(qū) PCR實(shí)驗(yàn)室可分兩個(gè)工作區(qū)域：核酸擴(kuò)增前區(qū)和核酸擴(kuò)增后區(qū)。核酸擴(kuò)增前區(qū)包括試劑準(zhǔn)備區(qū)和樣品處理區(qū)，設(shè)在不同房間或區(qū)域；核

4、酸擴(kuò)增后區(qū)包括擴(kuò)增區(qū)和產(chǎn)物分析區(qū)，設(shè)在不同房間或區(qū)域。2.1.1 PCR實(shí)驗(yàn)室根據(jù)使用儀器的功能合理設(shè)置各個(gè)區(qū)域，如采用聚合酶聯(lián)反應(yīng)：則設(shè)置試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)四個(gè)單獨(dú)的工作區(qū)域。樣品需要粉碎處理的，還需增設(shè)樣品粉碎區(qū)；若使用實(shí)時(shí)熒光PCR法：基因擴(kuò)增區(qū)、基因產(chǎn)物分析區(qū)可以合并；采用標(biāo)本處理、核酸提取及擴(kuò)增檢測(cè)為一體的全自動(dòng)化PCR分析儀，則標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)可合并為一個(gè)區(qū)域，因此PCR實(shí)驗(yàn)室原則上設(shè)置五個(gè)區(qū)或四個(gè)區(qū)或三個(gè)區(qū)或二個(gè)單獨(dú)的工作區(qū)。2.1.2 核酸擴(kuò)增前區(qū)和核酸擴(kuò)增后區(qū)可設(shè)在一個(gè)房間內(nèi)，但必須在滿足下列要求的前提下：2.1.2.1 核

5、酸擴(kuò)增前區(qū)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)設(shè)置兩個(gè)不同位置的實(shí)驗(yàn)區(qū)，試劑配置在超凈工作臺(tái)中操作，樣品處理在生物安全柜內(nèi)操作。2.1.2.2 在核酸擴(kuò)增后區(qū)使用全封閉的擴(kuò)增和檢測(cè)系統(tǒng)時(shí)，如實(shí)時(shí)熒光PCR儀等。2.1.2.3 每個(gè)實(shí)驗(yàn)人員使用各自的試劑、耗材、移液器和盛放污染物的盛器。2.1.2.4 在實(shí)驗(yàn)前后對(duì)操作區(qū)域和共享器具進(jìn)行清潔及消毒。2.1.2.5 各區(qū)域的試劑、器具、儀器和設(shè)備為該區(qū)專用，不得交叉使用。2.2 PCR實(shí)驗(yàn)室各區(qū)域功能：2.2.1 試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)：擴(kuò)增試劑的制備、試劑的分裝和擴(kuò)增反應(yīng)混合液的制備以及離心管、吸頭等消耗品的儲(chǔ)存和準(zhǔn)備。2.2.2 標(biāo)本制備區(qū)：樣品登記、處理和分裝；核酸（RNA/

6、DNA）提取、保存和使用；PCR擴(kuò)增的第一輪加樣。對(duì)于涉及樣本的操作應(yīng)符合生物安全二級(jí)實(shí)驗(yàn)室防護(hù)標(biāo)準(zhǔn)或更高。2.2.3 基因擴(kuò)增區(qū)：cDNA合成和DNA擴(kuò)增。如果在此區(qū)進(jìn)行套式PCR的第二輪加樣，應(yīng)在PCR防護(hù)罩內(nèi)進(jìn)行。 2.2.4 擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)：擴(kuò)增產(chǎn)物的電泳、雜交、成像、序列測(cè)定、變性高效液相分析、結(jié)果分析、登記及報(bào)告。 2.3 工作區(qū)域設(shè)備和儀器的配置。2.3.1 試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)2-8和-20以下的冰箱、普通離心機(jī)、超凈工作臺(tái)、混勻器、微量加樣器（覆蓋0.2-1000L），消耗品（一次性手套、耐高壓處理的離心管和加樣吸頭）、專用工作服工作鞋（套）、專用辦公用品和廢棄物容器、可移動(dòng)紫外

7、線燈。2.3.2 標(biāo)本制備區(qū)2-8冰箱、-20（或-80）冰箱，生物安全柜、高速制冷離心機(jī)（臺(tái)式）、混勻器、恒溫水浴箱或加熱模塊、制冰器或制冷模塊、微量加樣器、消耗品（一次性手套、耐高壓處理的離心管和加樣吸頭）、專用工作服工作鞋（套）、上下水設(shè)備、專用辦公用品和廢棄物容器、紫外線殺菌燈。如需處理大分子的DNA 應(yīng)具有超聲波水浴儀。2.3.3 擴(kuò)增區(qū) 核酸擴(kuò)增儀、微量加樣器、消耗品（一次性手套、耐高壓處理的離心管和加樣吸頭）、專用工作服工作鞋（套）、專用辦公用品和廢棄物容器、紫外線殺菌燈。2.3.4 擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)視檢驗(yàn)方法不同而定，基本配置如下：電泳儀、電泳槽、攝影/像設(shè)備、變性高效液相分析儀

8、、測(cè)序儀、紫外透射儀、普通冰箱、離心機(jī)、恒溫水浴、微波爐、上下水設(shè)備、紫外線燈、微量加樣器、消耗品（一次性手套、耐高壓處理的離心管和加樣吸頭）、專用工作服工作鞋（套）、專用辦公用品和廢棄物容器。各區(qū)域設(shè)備和儀器的配備，應(yīng)根據(jù)使用的擴(kuò)增檢測(cè)技術(shù)或試劑特點(diǎn)，對(duì)設(shè)備和儀器進(jìn)行必要的增減。2.4 PCR實(shí)驗(yàn)室單向流流向制度2.4.1 實(shí)驗(yàn)室的空氣單向流流向應(yīng)該為：試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)樣品制備區(qū)擴(kuò)增區(qū)擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)，不得逆向流動(dòng)。擴(kuò)增前區(qū)保持微（弱）正壓狀態(tài)，擴(kuò)增后區(qū)保持微（弱）負(fù)壓狀態(tài)。 2.4.2 實(shí)驗(yàn)用品單向流工作流向應(yīng)該為：試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)樣品制備區(qū)擴(kuò)增區(qū)擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)，不得逆向進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)用品包括實(shí)

9、驗(yàn)材料（試劑、樣品和擴(kuò)增產(chǎn)物）、實(shí)驗(yàn)器材（容器、板架、實(shí)驗(yàn)服裝、帽子、口罩、手套、鞋套）、辦公用品（記錄紙、筆）、以及清潔工具等。物品的傳送是通過(guò)互鎖式傳遞窗傳遞。 2.4.3 實(shí)驗(yàn)人員單向工作流流向應(yīng)該為：進(jìn)入各工作區(qū)域嚴(yán)格按照試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)樣品制備區(qū)擴(kuò)增區(qū)擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)單一方向進(jìn)行，不得逆向走動(dòng)。原則上實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)在擴(kuò)增后區(qū)工作后當(dāng)天不得再返回?cái)U(kuò)增前區(qū)工作。在標(biāo)本制備區(qū)由于加樣的操作中可能會(huì)發(fā)生氣溶膠污染，所以應(yīng)避免或減少在本區(qū)內(nèi)不必要的走動(dòng)。2.4.4 實(shí)驗(yàn)室的單向清潔流流向應(yīng)當(dāng)為：試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)樣品制備區(qū)擴(kuò)增區(qū)擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)的方向進(jìn)行。不同的實(shí)驗(yàn)區(qū)域應(yīng)當(dāng)有各自的清潔用具，以防止交叉污

10、染。 2.5 PCR實(shí)驗(yàn)室工作基本原則和實(shí)驗(yàn)室各區(qū)域工作注意事項(xiàng)2.5.1 嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)室分區(qū)制度；各區(qū)域必須有明確的標(biāo)記，只用于特定的操作，不得從事其他工作；不同區(qū)域的設(shè)備物品（儀器、設(shè)備、材料、清潔工具），不得交叉使用。2.5.2 不同工作區(qū)域使用不同工作服（例如不同顏色），工作人員離開(kāi)工作區(qū)域時(shí)，不得將工作服帶出。2.5.3 實(shí)驗(yàn)前移入所需試劑、耗材、樣品以及盛放污染物的容器。 2.5.4 試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)：儲(chǔ)存試劑和用于標(biāo)本制備的消耗品等材料須直接運(yùn)送至本區(qū)，不能經(jīng)過(guò)擴(kuò)增檢測(cè)區(qū)。試劑盒中的陽(yáng)性對(duì)照品及質(zhì)控品不能保存在本區(qū)，應(yīng)當(dāng)保存在標(biāo)本制備區(qū)。2.5.5 標(biāo)本制備區(qū)：由于在樣品混合、核酸

11、純化過(guò)程中可能會(huì)發(fā)生氣溶膠所致污染，可通過(guò)在本區(qū)內(nèi)設(shè)正壓條件，避免從鄰近區(qū)域進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染。為避免標(biāo)本間的交叉污染，加入待測(cè)核酸后，必須蓋好含反應(yīng)混合液的反應(yīng)管。對(duì)具有潛在傳染危險(xiǎn)性的材料，必須在生物安全柜內(nèi)操做，并有明確的標(biāo)本處理和滅活程序。 2.5.6 擴(kuò)增區(qū)：為避免氣溶膠所致的污染，應(yīng)當(dāng)盡量避免或減少本區(qū)內(nèi)的人員不必要的走動(dòng)。必須注意所有經(jīng)過(guò)檢測(cè)的反應(yīng)管不得在本區(qū)內(nèi)打開(kāi)。2.5.7 擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)：核酸擴(kuò)增后產(chǎn)物的分析方法較多，如膜上或微孔板或芯片上探針雜交方法（放射性核素標(biāo)記或非放射性核素標(biāo)記）直接或酶切后瓊脂糖凝膠電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳southern轉(zhuǎn)移、核酸測(cè)序方法、質(zhì)譜

12、分析等。本區(qū)是最主要的擴(kuò)增產(chǎn)物污染來(lái)源，因此，必須注意避免通過(guò)本區(qū)物品及工作服將擴(kuò)增物帶出。在使用PCR-ELISA方法檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物時(shí)，必須使用洗板機(jī)洗板，廢液必須收集在1moL /L HCL中，不能在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)傾倒，應(yīng)當(dāng)遠(yuǎn)離PCR實(shí)驗(yàn)室的地方棄掉。用過(guò)的吸頭也必須放在1moL/L HCL中侵泡后再放到廢棄物容器或垃圾袋中按程序處理。2.5.8 工作結(jié)束過(guò)后，須對(duì)工作區(qū)進(jìn)行清潔處理：對(duì)工作區(qū)域的實(shí)驗(yàn)臺(tái)面進(jìn)行清潔消毒（如使用次氯酸鈉），實(shí)驗(yàn)臺(tái)面采用紫外線照射更為方便、效果更佳。由于紫外線照射的距離和能量對(duì)于去污的效果非常關(guān)鍵，可使用移動(dòng)紫外線燈（254nm波長(zhǎng)），在工作完成后調(diào)至實(shí)驗(yàn)臺(tái)面上60-9

13、0cm范圍內(nèi)照射。由于擴(kuò)增產(chǎn)物僅幾百和幾十堿基對(duì)(bp),對(duì)紫外線損傷不敏感，因此紫外線照射擴(kuò)增片段必須延長(zhǎng)照射時(shí)間，最好是照射過(guò)夜。由于本區(qū)有可能會(huì)用到某些可致基因突變和有毒物質(zhì)，如溴化乙錠、丙烯酰胺、甲醛或放射性核素等，故應(yīng)當(dāng)注意實(shí)驗(yàn)人員的安全防護(hù)。3. PCR實(shí)驗(yàn)室建設(shè)與裝修3.1根據(jù)使用采用儀器的不同確定五個(gè)或四個(gè)或三個(gè)或二個(gè)區(qū)域，各區(qū)域必須設(shè)置緩沖間，緩沖間宜設(shè)正壓，使室內(nèi)空氣不流向室外，室外空氣不流向室內(nèi)，以減少室內(nèi)外空氣交換。也可設(shè)專用走廊，但緩沖間比專用走廊更為重要。 3.2 PCR實(shí)驗(yàn)室空氣流向，可按照試劑儲(chǔ)備和準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)擴(kuò)增區(qū)擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)方向進(jìn)行空氣壓力遞減方式控制

14、氣流流向，防止擴(kuò)增產(chǎn)物順空氣氣流逆向進(jìn)入擴(kuò)增前的區(qū)域。也可通過(guò)負(fù)壓排風(fēng)裝置、排風(fēng)扇或其它可行的方式進(jìn)行。3.3壓差與凈化級(jí)別3.3.1 試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)、樣品處理區(qū)應(yīng)設(shè)微正壓，以防止外界核酸氣溶膠的進(jìn)入，造成污染，可以通過(guò)空氣進(jìn)風(fēng)風(fēng)量的大于排風(fēng)量達(dá)到正壓效果。3.3.2 核酸擴(kuò)增區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū)應(yīng)設(shè)微負(fù)壓，防止含核酸的氣溶膠擴(kuò)散出去而污染試劑與樣品，造成假陽(yáng)性結(jié)果，可以通過(guò)控制排風(fēng)風(fēng)量大于進(jìn)風(fēng)風(fēng)量達(dá)到負(fù)壓效果。3.3.3 PCR實(shí)驗(yàn)室并沒(méi)有嚴(yán)格的凈化要求，若需要一般采用凈化級(jí)別8或9級(jí)（即萬(wàn)級(jí)或十萬(wàn)級(jí)）。3.4 PCR實(shí)驗(yàn)室空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)及壓力控制為避免各個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)域間交叉感染的可能性，宜采用全送全

15、排的氣流組織形式。同時(shí)要嚴(yán)格控制送排風(fēng)的比例，以保證各實(shí)驗(yàn)區(qū)的壓力要求。3.4.1 試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)：因?yàn)樵搮^(qū)主要進(jìn)行的操作為儲(chǔ)存試劑的制備、試劑的分裝和主反應(yīng)混合液的制備，對(duì)于氣流壓力的控制，本區(qū)沒(méi)有嚴(yán)格要求，但宜采用微正壓。3.4.2 標(biāo)本制備區(qū)：該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為標(biāo)本的保存、核酸（RNA、DNA）提取、儲(chǔ)存即加入至擴(kuò)增反應(yīng)管和測(cè)定RNA和DNA的合成體。本區(qū)的壓力梯度要求與相對(duì)相鄰近區(qū)域?yàn)檎龎?，是為避免從鄰近區(qū)進(jìn)入本區(qū)氣溶膠污染。3.4.3 擴(kuò)增區(qū)：擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增反應(yīng)，該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為DNA和CDNA擴(kuò)增。此外，已制備的DNA模板和合成的CDNA（來(lái)自標(biāo)本制備區(qū)）的加

16、入和主反應(yīng)混合液（來(lái)自試劑儲(chǔ)存和制備區(qū)）制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。在巢式PCR測(cè)試中，通常在第一輪擴(kuò)增后必須打開(kāi)反應(yīng)管，因?yàn)槌彩綌U(kuò)增有較高的危險(xiǎn)性，第二次加樣必須在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。因此，本區(qū)壓力梯度要求為相對(duì)鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓，以避免氣溶膠從本區(qū)瀉出。3.4.4 擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)：該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為擴(kuò)增片段的測(cè)定（根據(jù)所使用的分析儀器的不同此區(qū)域與擴(kuò)增區(qū)可以合并為一個(gè)區(qū)），本區(qū)是主要擴(kuò)增產(chǎn)物污染來(lái)源，因此對(duì)本區(qū)域的壓力梯度要求相對(duì)于鄰近區(qū)域應(yīng)為負(fù)壓，以避免擴(kuò)增產(chǎn)物從本區(qū)域擴(kuò)散至其他區(qū)域。4. PCR實(shí)驗(yàn)室污染的預(yù)防與控制PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的核心問(wèn)題是如何避免實(shí)驗(yàn)室污染。常見(jiàn)的污染有以下幾種：

17、天然基因組DNA的污染、試劑的污染以及標(biāo)本間（樣品）的污染。由于一旦發(fā)生污染，實(shí)驗(yàn)就必須停止，直至查到污染源為止，而且實(shí)驗(yàn)結(jié)果必須作廢，需重新進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，不僅浪費(fèi)人力、物力，而且也延長(zhǎng)了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的報(bào)告時(shí)間。實(shí)驗(yàn)室一旦發(fā)生污染，尋查污染源是一件很繁瑣的事情，因此要避免污染，首先是預(yù)防污染的發(fā)生，而不是發(fā)生了再研究如何排除。避免污染的發(fā)生，應(yīng)注意：4.1工作區(qū)域的嚴(yán)格劃分4.1.1 各個(gè)區(qū)域的合理設(shè)置4.1.2 各個(gè)試驗(yàn)區(qū)域須有明顯的標(biāo)記（如醒目的門(mén)牌或不同的地面顏色），以避免各個(gè)不同的實(shí)驗(yàn)區(qū)域設(shè)備、物品、試劑等發(fā)生混淆。4.2 合理的系統(tǒng)設(shè)置4.2.1 合理的空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)置，應(yīng)盡量采用全送全排的

18、空調(diào)系統(tǒng)（擴(kuò)增區(qū)和產(chǎn)物分析區(qū)更為重要）。4.2.2 嚴(yán)格的氣流壓力控制，保證不同的實(shí)驗(yàn)區(qū)域內(nèi)不同的壓力梯度。 4.2.3 嚴(yán)格保證合理的氣流流程工藝，保證核酸擴(kuò)增后區(qū)的氣流不逆向流入核酸擴(kuò)增前區(qū)。4.3 嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)室配套設(shè)施完備的實(shí)驗(yàn)室配套實(shí)施是保證實(shí)驗(yàn)工作的必備條件，應(yīng)根據(jù)各個(gè)區(qū)域功能配備相應(yīng)的設(shè)備和儀器，如生物安全柜、超凈工作臺(tái)、離心機(jī)等。避免PCR實(shí)驗(yàn)室的污染除了實(shí)驗(yàn)室在設(shè)計(jì)上應(yīng)注意工作區(qū)域的嚴(yán)格劃分、合理的系統(tǒng)設(shè)置、完備的配套設(shè)施外，規(guī)范的操作和嚴(yán)格的管理也同樣重要。5. 裝飾材料5.1 吊頂與隔墻：采用彩鋼夾心板等材料要符合國(guó)家關(guān)于實(shí)驗(yàn)室的消防規(guī)范。應(yīng)結(jié)構(gòu)牢固、氣密性好；所有陰角應(yīng)采

19、用弧形線條過(guò)渡，墻體內(nèi)壁光潔不吸附、易清潔消毒、耐腐蝕。功能相近的實(shí)驗(yàn)室隔墻設(shè)置比例適宜的透視窗，透視窗以雙面玻璃為好，這樣能保持與墻體齊平，隔墻距走廊隔墻不低于1.5米為宜，吊頂棚高以2.42.6m為宜。5.2 地面：實(shí)驗(yàn)室建議采用PVC卷材或環(huán)氧樹(shù)脂整體地面，地面與墻交界處應(yīng)圓弧過(guò)渡上墻120mm-150mm（需用水沖刷房間），使用進(jìn)口橡膠卷材（片）更佳。地面材料與其他圍護(hù)結(jié)構(gòu)交界處應(yīng)安全平齊過(guò)渡，無(wú)縫隙和裂紋，地面鋪設(shè)前采用自流平處理，地面平整性好、易清潔、耐腐蝕。5.3 門(mén)：彩鋼板門(mén)框?yàn)槔滠埐垆?，外加鋁型材，配專用密封條，優(yōu)質(zhì)閉門(mén)器，設(shè)可視窗，門(mén)單向鎖定。緩沖間的門(mén)與主實(shí)驗(yàn)室的門(mén)有互鎖

20、功能。5.4傳遞窗：各實(shí)驗(yàn)室區(qū)間設(shè)不銹鋼互鎖功能傳遞窗并具有消毒功能，試劑和標(biāo)本通過(guò)傳遞窗傳遞，保證試劑和標(biāo)本在傳遞過(guò)程中不受污染（人物分流）。5.5 給排水系統(tǒng)：給排水管宜設(shè)在緩沖區(qū)。給水管路最好采用薄壁不銹鋼鋼管，管上安裝逆止閥。緩沖區(qū)設(shè)洗手盆，手動(dòng)水龍頭；標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)設(shè)洗手盆，水龍頭（感應(yīng)、腳踏、手動(dòng)）和洗眼器。如果設(shè)置地漏，地漏采用不銹鋼密閉地漏。5.6照明：燈具要選用凈化燈具，便于清洗不積塵。 6 安全與自動(dòng)系統(tǒng) 6.1 疏散出口（專用走廊）設(shè)置專用疏散指示燈（標(biāo)識(shí)）及應(yīng)急照明。 6.2 送排風(fēng)系統(tǒng)采用變頻控制，并聯(lián)動(dòng)互鎖，即工作時(shí)先啟動(dòng)排風(fēng)機(jī)后啟動(dòng)送風(fēng)機(jī)。停機(jī)時(shí)相反，

21、并設(shè)事故自動(dòng)報(bào)警裝置。6.3自動(dòng)系統(tǒng)發(fā)生故障時(shí)由手動(dòng)控制裝置控制，自動(dòng)控制系統(tǒng)設(shè)備及主件采用進(jìn)口產(chǎn)品為宜。6.4 網(wǎng)絡(luò)與通信：各區(qū)域?qū)嶒?yàn)室、緩沖室設(shè)網(wǎng)絡(luò)終端，在專用走廊設(shè)電話分機(jī)。6.5 強(qiáng)電系統(tǒng)：實(shí)驗(yàn)室用電負(fù)荷為一級(jí)負(fù)荷，采用雙路電源供電，設(shè)自動(dòng)切換裝置，配電箱單獨(dú)設(shè)置。根據(jù)實(shí)驗(yàn)室各區(qū)域功能合理配置三相和單相電源，穿管暗線埋設(shè)，大型儀器接地線布局到位。實(shí)驗(yàn)室照度滿足規(guī)范要求（最低照度為200lx），裝有紫外線燈，照射無(wú)死角。7. PCR實(shí)驗(yàn)室建設(shè)與裝修注意事項(xiàng)7.1在設(shè)計(jì)的過(guò)程中應(yīng)注意事項(xiàng)：規(guī)范的安裝流程和全面的服務(wù)流程；嚴(yán)格按照規(guī)范科學(xué)設(shè)計(jì)的安裝流程。安裝前需要確定以下安裝條件，如：電源電

22、壓、電源進(jìn)線位置、電話網(wǎng)絡(luò)線位置、進(jìn)水水壓、最小安裝空間、地面平整度、通風(fēng)孔、給水管和下水管的位置等，理想狀態(tài)的尺寸。 7.2 PCR實(shí)驗(yàn)室可以按二級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室建設(shè)標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)是底線不能違背，行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)高于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)按行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。7.3 實(shí)驗(yàn)室各區(qū)域功能不同，為滿足設(shè)備、儀器、用品等的擺放需求，各區(qū)域須有充分的空間。建筑面積（m2）分配，以聚合酶聯(lián)反應(yīng)法為例：試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)2535、樣品處理區(qū)2030、核酸擴(kuò)增區(qū)2030、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)2030為宜。各區(qū)域的緩沖間也須留有足夠的使用面積，以便于洗手盆、更衣柜、衛(wèi)生用具等的擺放、存儲(chǔ)和出入門(mén)的設(shè)置與開(kāi)啟。如果平面布局允許宜設(shè)專用走廊

23、，專用走廊寬度不得低于1.2m，設(shè)置進(jìn)出口。7.4 實(shí)驗(yàn)室樣品處理區(qū)的面積應(yīng)大于其他區(qū)域，以便于生物安全柜的擺放，如采用實(shí)時(shí)熒光法，擴(kuò)增區(qū)和擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)合并一個(gè)區(qū)域，房間尺寸可適當(dāng)縮小，因全封閉熒光分析儀尺寸不大。7.5 緩沖間、試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)、樣品處理區(qū)設(shè)置正壓間；擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)設(shè)置負(fù)壓間。7.6 PCR實(shí)驗(yàn)室各區(qū)域間沒(méi)有潔凈度的要求，但是為了保護(hù)和延長(zhǎng)生物安全柜的使用壽命和實(shí)驗(yàn)環(huán)境，經(jīng)濟(jì)條件允許情況下，各區(qū)域均可采用空調(diào)通風(fēng)凈化系統(tǒng)，潔凈度宜為89級(jí)。7.7 PCR實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)的氣流不能逆流向擴(kuò)增前的區(qū)域，以免污染造成假陽(yáng)性結(jié)果。擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)排風(fēng)不得排

24、向技術(shù)夾層，應(yīng)排向室外。7.8 凡是有壓差要求的房間，在顯著位置須設(shè)有壓差顯示裝置，并預(yù)留測(cè)試孔，測(cè)試孔要密封。7.9 洗手盆不宜過(guò)大，試驗(yàn)臺(tái)面兩端棱角須圓弧處理，實(shí)驗(yàn)臺(tái)底層離地面距離在150mm以上或考慮加裝移動(dòng)輪便于移動(dòng)。7.10 基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室應(yīng)選用B2級(jí)生物安全柜，不宜選用A1/2級(jí)生物安全柜，因A1/2級(jí)生物安全柜循環(huán)風(fēng)易造成標(biāo)本交叉污染。7.11 實(shí)驗(yàn)室微正壓是指相對(duì)于大氣壓的最小壓差不得低于10Pa，因在多風(fēng)季節(jié)大氣的最小正壓差往往能達(dá)到5Pa或5Pa以上。7.12 技術(shù)夾層寬度應(yīng)不低于600mm，800mm為宜。7.13 各房間進(jìn)出的門(mén)，依據(jù)室內(nèi)壓差，設(shè)置門(mén)的開(kāi)啟方向。8. 基

25、因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室（PCR）參考文件即文件擇錄9. 平面布局見(jiàn)圖1/210. 工程案例8. 基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室（PCR實(shí)驗(yàn)室）設(shè)計(jì)參考文件 文件1、關(guān)于批準(zhǔn)發(fā)布疾病預(yù)防控制中心建設(shè)標(biāo)準(zhǔn)建標(biāo)1272009 號(hào)。 文件擇錄第13頁(yè)：附表一 疾病預(yù)防控制中心特殊用途實(shí)驗(yàn)室用房建筑面積指標(biāo)。項(xiàng)目名稱建筑面積（）備注項(xiàng)目功能室內(nèi)環(huán)境要求其他PCR實(shí)驗(yàn)室試劑配備室2535聚合酶鏈反應(yīng)實(shí)驗(yàn)宜為正壓1、 適用于有一定生物安全隱患的實(shí)驗(yàn)；2、 實(shí)驗(yàn)流向、氣流、人流、物流均為單向流。樣品處理室2030宜為BSL-2或以上等級(jí)實(shí)驗(yàn)室核酸擴(kuò)增室2030壓強(qiáng)不高于樣品處理室，局部5級(jí)凈化產(chǎn)物分析室2030壓強(qiáng)低于核酸擴(kuò)增室文件擇

26、錄第37頁(yè)：如組合形式PCR實(shí)驗(yàn)室（基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室），根據(jù)特定專業(yè)要求，應(yīng)設(shè)五個(gè)（或四個(gè)/三個(gè)）相互隔離的工作區(qū)域，即試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)、樣品粉碎區(qū)（根據(jù)需要設(shè)置）、樣品制備區(qū)、擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)以及產(chǎn)物分析區(qū)；當(dāng)采用熒光PCR時(shí)，擴(kuò)增區(qū)和產(chǎn)物分析區(qū)可合并為一個(gè)區(qū)域。為了減少不同工作區(qū)之間的空氣交換量，各個(gè)工作區(qū)的出入口應(yīng)設(shè)置緩沖間，并且建筑條件許可時(shí)，可設(shè)置專用走廊，形成定向的人流、物流與實(shí)驗(yàn)流程。同時(shí)對(duì)室內(nèi)環(huán)境也有特定要求，需設(shè)置通風(fēng)系統(tǒng)，形成定向的氣流保護(hù)區(qū)，避免各個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)之間的相互干擾。文件2、醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理辦法衛(wèi)辦醫(yī)政發(fā)【2010】194號(hào)：附件醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床

27、基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室工作導(dǎo)則。文件擇錄：一、臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計(jì)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室區(qū)域設(shè)計(jì)原則。原則上臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)設(shè)置以下區(qū)域：試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。這4個(gè)區(qū)域在物理空間上還是在使用中，應(yīng)當(dāng)始終處于完全的分隔狀態(tài)，不能有空氣直接相通。根據(jù)使用儀器的功能，區(qū)域可適當(dāng)合并。例如使用實(shí)時(shí)熒光PCR儀，擴(kuò)增區(qū)和擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)可合并；采用樣本處理、核酸提取及擴(kuò)增檢測(cè)為一體的自動(dòng)化分析儀，則標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)可合并。臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的空氣流向。臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的空氣流向可按照試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)擴(kuò)增區(qū)擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)進(jìn)行，

28、防止擴(kuò)增產(chǎn)物順空氣氣流進(jìn)入擴(kuò)增前的區(qū)域?？砂凑赵噭﹥?chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)擴(kuò)增區(qū)擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)方向空氣壓力遞減的方式進(jìn)行?？赏ㄟ^(guò)安裝排風(fēng)扇、負(fù)壓排風(fēng)裝置或其他可行方式實(shí)現(xiàn)。 二、臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室工作基本原則。（一）進(jìn)入各個(gè)工作區(qū)域應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格按照單一方向進(jìn)行，即試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)擴(kuò)增區(qū)擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。（四）實(shí)驗(yàn)室的清潔應(yīng)當(dāng)按試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)擴(kuò)增區(qū)擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)方向進(jìn)行。不同的實(shí)驗(yàn)區(qū)應(yīng)當(dāng)有各自的清潔用具以防止交叉污染。三、臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室各區(qū)域工作注意事項(xiàng) （二）標(biāo)本制備區(qū)。由于在樣本混合、核酸純化過(guò)程中可能會(huì)發(fā)生氣溶膠所致的污染，可通過(guò)在本區(qū)內(nèi)設(shè)立正壓條件，避免從鄰近區(qū)

29、進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染。為避免樣本間的交叉污染，加入待測(cè)核酸后，必須蓋好反應(yīng)混合液的反應(yīng)管。對(duì)具有潛在傳染危險(xiǎn)性的材料，必須在生物安全柜內(nèi)開(kāi)蓋，并有明確的樣本處理和滅活程序。 文件3、全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范（2009年修訂版） 第22頁(yè) 4.HIV核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室要求 4.1實(shí)驗(yàn)室分區(qū)和功能 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)設(shè)置兩個(gè)獨(dú)立的工作區(qū)域：核酸擴(kuò)增前區(qū)和核酸擴(kuò)增后區(qū)。核酸擴(kuò)增前區(qū)包括試劑準(zhǔn)備區(qū)和樣品處理區(qū)，設(shè)在不同房間或區(qū)域；核酸擴(kuò)增后區(qū)包括擴(kuò)增區(qū)和擴(kuò)增產(chǎn)區(qū)分析區(qū)，設(shè)在不同房間或區(qū)域。4.1.4在滿足下列要求的前提下，核酸擴(kuò)增前區(qū)或核酸擴(kuò)增后區(qū)可設(shè)在一個(gè)房間內(nèi)。 4.1.4.1核酸擴(kuò)增前區(qū)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)設(shè)置兩個(gè)不同的位置的實(shí)驗(yàn)區(qū)，試劑配制在超凈工作臺(tái)中操作，樣品處理在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行。4.1.4.2在核酸擴(kuò)增后區(qū)使用全封閉的擴(kuò)增和檢測(cè)系統(tǒng)時(shí)，如實(shí)時(shí)熒光PCR儀等。 4.5.4單向工作流制度4.5.4.1實(shí)驗(yàn)室的氣流應(yīng)從擴(kuò)增前區(qū)流向擴(kuò)增后區(qū)，不得逆向流動(dòng)。建議擴(kuò)增前區(qū)弱正壓狀態(tài)，擴(kuò)增后區(qū)保持弱負(fù)壓狀態(tài)。4.5.4.2實(shí)驗(yàn)室