過氧化氫酶活力的測定

1、試驗(yàn)三 過氧化氫酶活性的測定一、試驗(yàn)?zāi)康模毫私膺^氧化氫酶的作用，把握碘量法測定過氧化氫酶活性的原理和方法；二、試驗(yàn)原理:過氧化氫酶是一類色素蛋白，含有鐵，它能催化過氧化氫分解為水和分子氧，在此過程中起傳遞電子的作用，過氧化氫既是氧化劑又是還原劑。R（Fe2）2H2O2-R(Fe+3OH)2 R(Fe+3OH)2+ H2O2 - R（Fe2）2+2H2O+O2并合上式：H2O2 -2H2O+O2據(jù)此，可依據(jù)消耗H2O2的消耗量或O2的生成量測定該酶活力大小。在反應(yīng)系統(tǒng)中加入肯定量的過氧化氫溶液，經(jīng)酶促反應(yīng)后，加入過量的KI溶液生成的I2用標(biāo)準(zhǔn)的Na2S2O3滴定，依據(jù)Na2SO3消耗的體積計(jì)算H

2、2O2的消耗量。三、試驗(yàn)材料、儀器和試劑：1、試驗(yàn)材料：小白菜2、儀器：恒溫水浴鍋、研缽、容量瓶、刻度吸管、100mL三角瓶3、試劑：（1）0.05mol/L H2O2 （2） 2mol/LH2SO4（3）0.1mol/L Na2S2O3 （4）1%淀粉溶液 （5）10%(NH4)6Mo7O24 （6）pH7.8的磷酸緩沖液 （7）20% KI（8）CaCO3四、試驗(yàn)步驟：（1）酶液提取：稱取2.5g白菜葉，加少量CaCO3，2mLpH7.8的緩沖液少量，研成勻漿，移入100ml容量瓶，用上述緩沖液沖洗研缽數(shù)次轉(zhuǎn)入容量瓶中定容，靜置10分鐘，過濾。取濾液10mL于另一100mL的容量瓶中稀釋定

3、容待測（依據(jù)酶活凹凸而定）。（2）酶促反應(yīng)：取錐形瓶4個(gè)，編好號各加入10ml酶液之后，馬上向兩個(gè)瓶中加入2mol/L H2SO45mL，終止酶活性，作空白對比。向另外兩瓶各加H2O2 5mL，搖勻，在加入H2O2的那一刻起，記錄時(shí)間，5分鐘后快速向試驗(yàn)瓶中加入2mol/LH2SO45mL，終止酶活性。向三角瓶中加1mL 20% KI和3滴(NH4)6Mo7O24，搖勻后快速用標(biāo)準(zhǔn)Na2S2O3溶液進(jìn)行滴定至淡黃色，加入1mL1%淀粉指試劑，藍(lán)色恰好消逝，記錄消耗的Na2S2O3的體積V0，V；五、結(jié)果記錄與數(shù)據(jù)處理：被分解的H2O2量（mg）=（空白滴定值-樣品滴定值）Na2S2O3摩爾濃度

4、17過氧化氫酶活性（mg.g-1.min-1）= 六、 結(jié)果分析與問題爭辯：試驗(yàn)十 還原型VC含量測定一、試驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)會從生物樣品中提取維生素C方法,了解蔬菜中維生素C的含量。學(xué)會測定維生素C含量的原理和方法,進(jìn)一步把握滴定法的基本操作技術(shù).二、試驗(yàn)原理Vc由于其結(jié)構(gòu)中具有烯二醇的結(jié)構(gòu)，所以它是一種強(qiáng)還原劑，易被弱氧化劑氧化脫氫而成氧化型抗壞血酸。Vc在酸性溶液中比中性溶液及堿性溶液中穩(wěn)定，但易被熱、光及某些金屬離子破壞。本試驗(yàn)是用碘液作氧化劑，淀粉為指示劑，當(dāng)Vc全部被氧化后，過量一滴碘液與淀粉指示劑反應(yīng)生成淡蘭色絡(luò)合物，即為終點(diǎn)。三、試驗(yàn)材料、試劑及儀器材料：西紅柿。試劑：2草酸溶液：稱取2

5、0g草酸溶于蒸餾水中，溶解后稀釋到1000mL，混勻；1可溶性淀粉溶液：稱取1g可溶性淀粉用少量蒸餾水調(diào)成勻漿，傾入80 mL的沸水中連續(xù)煮沸至透亮，冷卻后稀釋至100 mL；01mol/L碘液（隨用隨配）：稱取6.5克碘和20克碘化鉀于研缽中，加少量的蒸餾水研磨至完全溶解后稀釋至500毫升混勻。貯存于棕色試劑瓶中；1草酸溶液：稱取10g草酸溶于蒸餾水中，溶解后稀釋到1000mL，混勻；0.1mg/mLVc標(biāo)準(zhǔn)溶液：精確稱取抗壞血酸10mg，溶于1草酸溶液中稀釋至100mL貯存于棕色試劑瓶中冷藏（現(xiàn)用現(xiàn)配）。儀器：萬分之一電子天平；棕色酸式滴定管；三角瓶等。四、試驗(yàn)操作步驟：1、碘液的標(biāo)定：吸

6、取0.1mg/mLVc標(biāo)準(zhǔn)溶液10mL于100mL的錐形瓶中，加5滴可溶性淀粉，搖勻后用稀碘液滴定至淺藍(lán)色，且30秒內(nèi)不退色，即為終點(diǎn)。滴二個(gè)平行樣。2、樣品的提?。壕_稱取10g左右的樣品1份，用少許2%草酸溶液研磨成勻漿，轉(zhuǎn)入100mL容量瓶中，用2%的草酸溶液洗研缽3-4次，一并轉(zhuǎn)入容量瓶中，最終用2%草酸溶液定容至100mL搖勻，放置10分鐘后過濾，濾液備用。3、滴定：空白滴定： 精確吸取10mL2%草酸溶液于100mL的錐形瓶中，加5滴1%淀粉指示劑，搖勻后用稀碘液滴定至淺藍(lán)色，且30秒內(nèi)不退色，即為終點(diǎn),滴二個(gè)平行樣。樣品滴定： 精確吸取10mL樣品于100mL的錐形瓶中，加5滴1%淀粉指示劑，搖勻后用稀碘液滴定至淺藍(lán)色，且30秒內(nèi)不退色，即為終點(diǎn),滴二個(gè)平行樣。六、數(shù)據(jù)記錄及計(jì)算1、樣品的重量（g）：樣品1：W1 = 樣品2：W2 =2、碘液的標(biāo)定（mL）： V1