



下載本文檔
版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡(jiǎn)介
1、牛乳中酪蛋白的制備與濃度測(cè)定一、試驗(yàn)?zāi)康?、學(xué)習(xí)從牛乳中分別酪蛋白的原理和方法2、把握等電點(diǎn)沉淀法提取蛋白質(zhì)的方法3、了解紫外吸取法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度的原理,生疏紫外分光光度計(jì)的使用4、學(xué)會(huì)用考馬斯亮藍(lán)結(jié)合法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度二、試驗(yàn)原理1、預(yù)備酪蛋白原理:牛乳中主要含有酪蛋白和乳清蛋白兩種蛋白質(zhì),其中酪蛋白占了牛乳蛋白質(zhì)的80%。牛乳在PH4.7時(shí)酪蛋白等電聚沉后剩余的蛋白質(zhì)統(tǒng)稱為乳清蛋白。酪蛋白是白色、無(wú)味的物質(zhì),不溶于水、乙醇等有機(jī)溶劑,但溶于堿溶液。乳清蛋白不同于酪蛋白,其粒子的水和力量很強(qiáng),分散性高,在乳中呈高分子狀態(tài)。本法利用等電點(diǎn)時(shí)溶解度最低的原理,將牛乳的PH調(diào)至4.7時(shí),酪蛋白就沉淀
2、出來(lái)。用乙醇洗滌沉淀物,除去脂類雜質(zhì)后便可得到純的酪蛋白。2、紫外吸取法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度的原理:大多數(shù)蛋白質(zhì)由于有酷氨酸和色氨酸的存在,在紫外光280nm有吸取高峰,可以進(jìn)行蛋白質(zhì)含量的測(cè)定。但是核酸在280nm也有吸取,干擾測(cè)定,不過(guò)核酸的最大吸取峰在260nm,通過(guò)測(cè)定在280nm和260nm時(shí)A的比值,然后通過(guò)計(jì)算消退核酸存在的影響,可以求得有核酸存在時(shí)蛋白質(zhì)的濃度。3、考馬斯亮藍(lán)結(jié)合法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度原理:考馬斯亮藍(lán)能與蛋白質(zhì)的疏水微區(qū)相結(jié)合,這種結(jié)合具有高敏感性??捡R斯亮藍(lán)G250的磷酸溶液呈棕紅色,最大吸取峰在465nm。當(dāng)它與蛋白質(zhì)結(jié)合形成復(fù)合物時(shí)呈藍(lán)色,其最大吸取峰轉(zhuǎn)變?yōu)?95nm
3、,考馬斯亮藍(lán)G250蛋白質(zhì)復(fù)合物的高消光效應(yīng)導(dǎo)致了蛋白質(zhì)定量測(cè)定的高敏感度。在肯定范圍內(nèi),考馬斯亮藍(lán)G250蛋白質(zhì)復(fù)合物呈色后,在595nm下,吸光度與蛋白質(zhì)含量呈線性關(guān)系,故可以用于蛋白質(zhì)濃度的測(cè)定。三、試驗(yàn)器材與試劑1、制備酪蛋白:燒杯、玻璃棒、量筒、精密PH試紙、離心機(jī)、布氏漏斗、表面皿、恒溫水浴鍋牛奶、醋酸緩沖液、冰醋酸、95%乙醇、無(wú)水乙醚2、紫外光吸取法:紫外可見(jiàn)光分光光度計(jì)、容量瓶50ml(1)、石英比色皿0.9%NaCl、1mol/LNaOH溶液、1mol/L乙酸溶液3、考馬斯亮藍(lán)法:紫外可見(jiàn)光分光光度計(jì)、試管1.5cm15cm(9)、玻璃比色皿牛血清白蛋白(0.1mg/ml)
4、、考馬斯亮藍(lán)、0.9%NaCl四、試驗(yàn)步驟制備酪蛋白1、將20mL pH4.7的醋酸-醋酸鈉緩沖液預(yù)熱至402、將20mL牛奶加熱至40,在攪拌下緩慢地加入20mL預(yù)熱的pH4.7的醋酸-醋酸鈉緩沖液3、用精密pH試紙調(diào)pH至4.7,可見(jiàn)溶液變?yōu)槿榘咨珣腋∫?、待懸浮液冷卻至室溫,4000rpm離心5min,棄上清,得酪蛋白粗制品5、用蒸餾水洗沉淀3次,3000rpm離心5min,棄上清6、在沉淀中加入20mL95乙醇,攪拌片刻,將全部懸濁液轉(zhuǎn)移至布氏漏斗中抽濾7、用乙醇-乙醚混合液洗滌沉淀2次(10ml/次),最終用乙醚洗滌沉淀2次(10ml/次),抽干8、將沉淀攤開在表面皿上,風(fēng)干,得酪蛋
5、白純品9、精確稱量,計(jì)算含量和得率紫外光吸取法1取待測(cè)樣品溶液置于的石英比色皿中,于分光光度計(jì)波長(zhǎng)280nm和260nm,分別讀取A280nm和A260nm,用生理鹽水為比色空白對(duì)比。2若A280nm/A260nm1.5,用公式:蛋白質(zhì)含量(mg/ml)=A280nm/6.3*10若A280nm/A260nm1.5,用公式:蛋白質(zhì)含量(mg/ml)=1.45A280nm0.74A260nm考馬斯亮藍(lán)法取9支潔凈試管,按表進(jìn)行編號(hào)并加入試劑?;靹?,室溫靜置3min,以第1管為空白,于波長(zhǎng)595nm處比色,讀取吸光度,以吸光度為縱坐標(biāo),各標(biāo)準(zhǔn)液濃度(g/ml)作為橫坐標(biāo)作圖得標(biāo)準(zhǔn)曲線。五、試驗(yàn)數(shù)據(jù)酪蛋白質(zhì)量:0.5421g酪蛋白含量:2.71g/100ml牛乳紫外光吸取法:A280nm 0.769A A260nm 0.959AA280nm/A260nm1.5,蛋白質(zhì)含量(mg/ml)=1.45A280nm0.74A260nm =0.405 mg/ml考馬斯亮藍(lán)法管號(hào)1(空白)23456789標(biāo)準(zhǔn)蛋白液/ml00.10.20.30.40.60.8樣品/ml110.9%NaCl/ml10.90.80.70.60.40.200考馬斯亮藍(lán)染液/ml4.04.04.04.04.04.0
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 人人文庫(kù)網(wǎng)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 公司晨會(huì)活動(dòng)策劃方案
- 公司日常團(tuán)建活動(dòng)方案
- 公司秋游團(tuán)建活動(dòng)方案
- 公司日行萬(wàn)步策劃方案
- 公司節(jié)日策劃活動(dòng)方案
- 2025年休閑體育管理師考試試卷及答案
- 2025年現(xiàn)代物流管理課程試題及答案
- 2025年手語(yǔ)翻譯人才能力考試試卷及答案
- 2025年技術(shù)經(jīng)濟(jì)與管理專業(yè)綜合考試試題及答案
- 幼兒園裝修合同
- 飛機(jī)艙門及撤離滑梯-空客320型飛機(jī)艙門結(jié)構(gòu)及操作方法
- 中建型鋼懸挑卸料平臺(tái)專項(xiàng)施工方案
- 心搏呼吸驟停課件
- 12D10 防雷與接地工程
- 北京長(zhǎng)峰醫(yī)院4.18火災(zāi)事故案例分析
- 國(guó)開《學(xué)前兒童心理學(xué)基礎(chǔ)》形考形成性考核1-4答案
- 乙酸安全周知卡、職業(yè)危害告知卡、理化特性表
- 工業(yè)廢水處理工初級(jí)測(cè)試題
- 投稿版權(quán)轉(zhuǎn)讓協(xié)議書
- 【部編版】三年級(jí)下冊(cè)道德與法治《期末測(cè)試卷》(含答案)
- 翎云教育試卷二年級(jí)下冊(cè)數(shù)學(xué)
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論