生化分析儀試劑存在的問題及解決方法

1、全自動生化分析儀試劑存在的問題及解決方法1 優(yōu)質(zhì)的儀器用水優(yōu)質(zhì)的儀器用水是使用好檢驗試劑的一個十分重要環(huán)節(jié)之一。因為測定離子類的項目：比如銅、鐵、鋅、鈣、 Mg磷。這些項目在使用過程中，儀器用水的質(zhì)量相當重要，雖然現(xiàn)在一般醫(yī)院的生化儀都帶有制水系統(tǒng)，但制水系統(tǒng)基本都是制備去離子水，離子交換樹脂在使用一段時間后交換能力明顯下降，需要定期進行更換，否則制備的水離子含量多，電導(dǎo)率偏高。使用含離子超標的水沖洗儀器，直接影響檢驗結(jié)果。再如血氨、二氧化碳項目，如果水質(zhì)不好， 儀器用水中本身含氨和二氧化碳就很高，則檢測該項目的結(jié)果也會受到嚴重的影響。還有如果血清中含有GLDH而儀器用水存在氨時，可消耗NAD

2、H使利用NADH勺酶聯(lián)連續(xù)監(jiān)測法結(jié)果偏高。解決辦 法：定期監(jiān)測水質(zhì)，當儀器用水的電阻小于 1. 0MQ寸要更換離子交 換樹脂或活性炭。2 標本的及時分離及測定標本的及時分離及測定是用好檢驗試劑的首要環(huán)節(jié)因為凡是利用NADH?；癁镹AD變化率來檢測其物質(zhì)含量的試驗都或多或少受到血液存放時間的影響。原因是全血存放時間越長，紅細胞利用血清中的糖進行無氧酵解產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸使 NADH專化為NAD,這樣使測 定結(jié)果假性升高。解決辦法：作好與臨床的溝通，對抽血人員和標本運送人員(傳遞人員)進行培訓(xùn)； 及時分離血清并及時檢測；也可將全自動生化分析儀上的延遲時間設(shè)置大于60 秒，這樣試劑在延遲期內(nèi)消除丙酮

3、酸的干擾，可完全避免假陽性結(jié)果的出現(xiàn)。3 交叉污染4 1 生化分析儀本身的清洗問題造成的交叉污染在使用全自動生化分析儀時，儀器的交叉污染現(xiàn)象是引起實驗結(jié)果偏離的一個原因。 由于全自動生化分析儀試劑針需要接觸各種試劑，一般難以徹底清洗干凈，所以容易造成分析項目的攜帶污染而生化項目的測定往往僅需要幾微升樣本，試劑往往需要幾百微升，尤其在沒有自動沖洗程序的流動池式生化分析儀上，由于前帶現(xiàn)象的存在，如果前一個樣本為高值樣本，則接后的第一個低值標本結(jié)果應(yīng)慎重報告。不僅沒有沖洗程序的生化分析儀器上有這種現(xiàn)象，就是具有自動沖洗程序的全自動生化分析儀也有交叉污染，例如Beckman自動生化分析儀CX4， 它的

4、試劑吸針(Probe) 、 樣品吸針及反應(yīng)攪拌棒是利用高壓沖洗液沖洗， 然后用高壓壓縮空氣吹于，有時由于洗液壓力和壓縮空氣的壓力偏低，使試劑吸針、樣品吸針及反應(yīng)混勻棒沖不干凈、吹不干，從而導(dǎo)致反應(yīng)池之問相互污染、試劑問交又污染，使檢驗結(jié)果偏離。另一個值得注意的問題是許多生化儀器由于長期頻繁的利用，使加樣針和試劑針的注射器磨損加重或注射器的“特氟龍”吸頭不及時更換， 使吸樣針或試劑針密封層增大，產(chǎn)生泄漏現(xiàn)象也是造成樣本間及試劑間相互污染的一個重要原因。試劑吸樣或樣品吸樣不準確，通常導(dǎo)致利用速率法測試的標本系統(tǒng)偏低或偏高。眾所周知，速率法計算因子是由加樣體積和試劑體積參與確定的，如果加樣體積或加試

5、劑體積不準， 導(dǎo)致真正速率計算因子和理論計算因子偏離，從而使檢測結(jié)果不準確。解決辦法：定期進行儀器維護保養(yǎng)；按要求及時更換零部件； 定期對儀器進行校準；全自動生化分析標本和試劑用量少， 殘存少量即會影響測試結(jié)果，每天應(yīng)用無水乙醇擦洗并定期更換干燥棒，保證比色杯清洗后不留殘液，避免比色杯的交叉污染。3 2 檢驗項目間的交叉污染在全自動生化分析儀的使用中，我們發(fā)現(xiàn)一個項目會影響緊隨其后項目的測試結(jié)果，造成這種影響的原因之一是一種試劑中含有另一試驗的測定物質(zhì)而直接干擾其測試結(jié)果。原因之二是一種試劑中含有改變另一試驗反應(yīng)條件或影響其反應(yīng)進程的物質(zhì)而間接干擾其測試結(jié)果。比如：在TP試劑中含有大量的CuS

6、O4 如果將Cu放在TP項目的后面檢測，會使檢測結(jié)果偏高或重復(fù)性差。 再如P放在含有磷酸鹽的項目后面，TBA放在含有膽酸鹽的項目后面 都會使檢測結(jié)果偏高或重復(fù)性差。GLUB在CK和CK-MB勺項目后面 可能會使檢測結(jié)果偏高或重復(fù)性差。LDH放在AIJT和AST的項目后 面可能會使檢測結(jié)果偏高或重復(fù)性差。Mg放在ALP等含有鎂離子項目后面可能會使檢測結(jié)果偏高或重復(fù)性差。ca放在aAmy項目后面 可能會使檢測結(jié)果偏高或重復(fù)性差。Mg試齊【J (CALMAGITE法)中含有EGTA會干擾Ca的測定結(jié)果。另外我們發(fā)現(xiàn)相鄰兩個項目的 PH值相 差太大或反應(yīng)對PH要求嚴格的項目，也會對測定的結(jié)果產(chǎn)生影響，

7、 比如TP和Alb之間PH相差較大，會互相干擾，TBA放在Alb后面測定，會使測定結(jié)果偏低等等。解決辦法：調(diào)整實驗的前后順序來消除這種影響；在造成污染的項目和受污染的項目之間設(shè)置清洗劑并設(shè)定進行清洗的次數(shù)。4 正確的參數(shù)設(shè)置也是用好檢驗試劑的一個關(guān)鍵因素現(xiàn)代化分析儀上通常有分析程序供用戶設(shè)定，包括樣品量、試劑量、波長、分析方式和延遲時間、測試時間的設(shè)定等。下面我們就延遲時間和加樣程序的設(shè)定來說明正確使用分析參數(shù)對于正確運用試劑的作用。 比如肌酐苦味酸測定法，我們在設(shè)定延遲時間時應(yīng)注意到苦味酸在堿性條件下50 秒前首先快速與如乙酰乙酸等快反應(yīng)物質(zhì)產(chǎn)生紅色化合物，而在120 秒后堿性苦味酸又能與慢

8、反應(yīng)物質(zhì)產(chǎn)生陽性干擾，解決辦法：最好設(shè)定延遲時間為 506O秒之間，測定時間小于6O 秒，這樣就充分消除了快反應(yīng)和慢反應(yīng)干擾，從而檢測到真正肌酐含量。5 校準液的正確使用由于目前生產(chǎn)廠家提供的校準液并非通用的，只適用于某一特定的分析系統(tǒng)。 同一項目不同方法學(xué)之間有很大差異，同一項目不同方法學(xué)的校準液更不能混用，但是在臨床檢驗中經(jīng)常會發(fā)生膽紅素釩酸鹽法用重氮法的校準液校準，乳酸脫氫酶L P 法用P L 法校準液校準。TBA循環(huán)酶法用比色法校準液校準等都會造成測定結(jié)果不準確。另外同一方法學(xué)，不同廠家的校準品和試劑都會有所差異。解決辦法：建議結(jié)合各實驗室條件選擇適合自已實驗室的校準品，如有條件可進行

9、系統(tǒng)溯源；建立滿足在同一方法學(xué)、同一測定條件、與理論計算 的 factor 值差異不大，沒有發(fā)現(xiàn)有明顯影響因素，方可進行校正測定； 建立一個可靠的參考系統(tǒng)作為準確性基礎(chǔ)，然后將準確性轉(zhuǎn)移到“使用方法”測定中去， 使“使用方法”測定結(jié)果可溯源到參考系統(tǒng)所提供的準確性基礎(chǔ)上來。在實現(xiàn)溯源性目標過程中，永遠以患者新鮮標本為實驗對象，以方法學(xué)對比試驗方法為驗證手段。采用回歸方程進行統(tǒng)計分析，斜率接近1，截距較小，說明“使用方法”對標本測定結(jié)果和溯源目標參考系統(tǒng)對標本檢測結(jié)果非常接近，檢測結(jié)果可靠。6 抗凝劑的使用目前臨床上常用的抗凝劑有 EDTA-2K肝素、草氨酸鈉等，TB所口 AFU 不能用肝素抗凝

10、劑，因為肝素會使TBA和AFU式劑發(fā)生混濁，導(dǎo)致吸 光度假性偏高，從而使檢測結(jié)果偏高。解決辦法：認真參閱試劑說 明書； 作好與抽血人員之間的溝通和培訓(xùn)，使抽血人員知道什么項目用何種標本。7 混成單一試劑的問題比如酶法肌酊試劑，第一步 R.中的酶要消除樣品中內(nèi)源性肌酸的干 擾，如果混成單一試劑，則會使檢測結(jié)果偏高，消除法 HDL LDL也 不能混成單一試劑，因為它們都要分別清除HD你口 LDL以外的脂蛋白，從而達到檢測的目的，如果混成單一試劑，則會使測定的HDL和LDL不準確。另外，有的試劑混成單一試劑后，穩(wěn)定性和抗干擾能力也會明顯下降。解決辦法：在儀器通道或試劑位允許的情況下盡量使用雙試劑；

11、如一定要使用單一試劑，最好選擇試劑廠家針對部份項目專門生產(chǎn)好的單一試劑。8 試劑開瓶的問題隨著全自動生化分析儀的普及， “開瓶穩(wěn)定性”也隨之受到了大家的重視， 但是就目前有的試劑方法學(xué)來講，還達不到人們所要求的試劑開瓶后在儀器內(nèi)放很長時間不需要定標，比如 ALP TR GS有PH為堿性的試劑，開瓶后試劑會吸收空氣中的二氧化碳，使試劑本身的PH值下降，如果長時間開瓶不定標或校準，會使檢測結(jié)果發(fā)生偏離，在國外有的項目有明文規(guī)定，必須 72小時之內(nèi)定標，比如 BUN但是在國內(nèi)的某些實驗室為了方便，很長時間都不作校準，導(dǎo)致測定結(jié)果的不準確。解決辦法：了解試劑的特性，及時對部份項目進行校準，2.對于每天

12、標本量不多的醫(yī)院，可按12天的用量取用試劑放入儀器。9 不同批號試劑相混的問題目前將不同批號的試劑混合在一起使用的現(xiàn)象在檢驗中經(jīng)常發(fā)生，當然這一方面是為了節(jié)省成本，另一方面為了方便。但是不管是什么品牌、什么試劑，由于不同批號的試劑生產(chǎn)時間不同，試劑中工具酶的活性會有差異，會發(fā)生水解的底物濃度隨時間長短也會不同。 因此混 在一起使用而又不定標，可能會導(dǎo)致檢測結(jié)果的不準確。還有如果有 的試劑開瓶時間太長，空氣中的灰塵或細菌會進入瓶中，由于有的試 劑含有大量的蛋白質(zhì)和鹽，是細菌生長的最好條件，雖然有的試劑添 加了防腐劑，但防腐劑的防腐也是有一定限度的， 而且絕大多數(shù)廠家 的試劑中是沒有加防霉劑的。解

13、決辦法：不同批號試劑建議不要混用，如果混用最好重新定標；試劑瓶在儀器內(nèi)使用時間不要過長， 及時更換。一般每個試劑瓶內(nèi)由于試劑針不能吸完，或多或少都會 留有幾毫升的試劑，如果是同一批號可以將未開瓶的同一批號試劑往 里倒。但如果不是同一批號的試劑時倒人后最好定標， 最好的做法是 將每個批號的剩余試劑留起來待一定數(shù)量后混在一起，然后重新定標 后檢測。通過我們這幾年使用伊得利康試劑， 參加衛(wèi)生部的室間質(zhì)評 都取得很好的成績，確實認為該公司試劑質(zhì)量好。純水質(zhì)量對全自動生化分析儀檢測的影響水是實驗室內(nèi)一個常常被忽視但又至關(guān)重要的試劑。在全自動生化分析儀檢測過程中，純水作為生化反應(yīng)的載體或介質(zhì)、 樣品或試劑

14、 的稀釋液和溶劑、儀器的清洗液甚至反應(yīng)的參與者等貫穿檢測的全過 程，其純度的高低直接關(guān)系水是實驗室內(nèi)一個常常被忽視但又至關(guān)重要的試劑。在全自動生化分析儀檢測過程中，純水作為生化反應(yīng)的載體或介質(zhì)、 樣品或試劑的稀釋液和溶劑、儀器的清洗液甚至反應(yīng)的參與者等貫穿檢測的全過程， 其純度的高低直接關(guān)系到檢測結(jié)果的可信度。目前全國大部分實驗室都使用反滲透的中央純水系統(tǒng)，通過對該系統(tǒng)工作流程的分析以及遇到的實際情況，發(fā)現(xiàn)并總結(jié)了導(dǎo)致水純度不夠的幾種因素及其對全自動生化分析儀檢測的影響。1? 純水系統(tǒng)工作流程及影響因素1 1? 原水預(yù)處理原水是指進入實驗室的自來水，預(yù)處理就是除去自來水中絕大部分的雜質(zhì)。1.1

15、.1 方法：預(yù)處理一般使用機械過濾法，分三步進行：精密濾芯（又稱過濾濾芯、分線繞濾芯和熔噴濾芯）過濾原水中的泥沙等大的顆粒物；活性炭濾芯通過吸附作用去除水中的絕大部分有機物和重金屬離子等（特別是自來水中的余氯，其對反滲透膜有很大的氧化作用，所以必須經(jīng)由活性炭去除）；反滲透膜（RO）進一步去除水中的微觀粒子和鹽分。影響因素：自來水水質(zhì)：自來水中雜質(zhì)含量高時會導(dǎo)致預(yù)處理部件使用壽命縮短和處理后水質(zhì)不達標，甚至?xí)氯艿溃瑢?dǎo)致需要更高的進水壓才能工作，一般要求自來水中固體溶解物含量 （TDS）小于200 mg/L。 預(yù)處理部件使用壽命：精密濾芯、活性炭濾芯、反滲透膜等都是具有相對壽命的材料，其中精密

16、濾芯和活性炭濾芯又對反滲透膜具有保護作用，如果它們失效，RO膜負荷就會加重，壽命就會縮短。由 于各廠家產(chǎn)品質(zhì)量各異，RO膜又價格昂貴，因此在實際使用中應(yīng)根 據(jù)各地自來水水質(zhì)合理搭配使用。進水壓：一般純水系統(tǒng)預(yù)處理都需要用高壓泵維持一定的進水壓力（A0. IMpa）才能維持正常工作，當高壓泵壓力不足時會導(dǎo)致產(chǎn)水量下降。純水系統(tǒng)的維護：純水系統(tǒng)一般都具有自動反沖洗功能，當其設(shè)置不合理或故障以及人工維護不當時也會影響純水機的正常工作，導(dǎo)致純化效率及水質(zhì)下降。去離子水的制備一般的純水系統(tǒng)由于受到成本限制，RO膜質(zhì)量一般，經(jīng)其處理過的水只能達到三級純水（ 電阻率>0. 的標準。三級純水雖然經(jīng)過預(yù)處

17、理已經(jīng)去除了大部分離子，但其中的離子濃度還較高，還會影響生化分析儀的微量檢測，因此必須將三級純水進一步去離子以達到一級純水（電阻率n lOMQ .cm）的標準才能用于生化檢測。方法： 離子交換樹脂法是去離子水制備的常用方法，所用的部件就是離子交換柱即純化柱（罐），包括陰離子交換柱、陽離子交換柱和混合柱等， 試劑為陰陽離子交換樹脂。陰陽離子交換樹脂一般是由苯乙烯聚合成后再通過二乙烯苯交聯(lián)得到多孔網(wǎng)狀骨架結(jié)構(gòu)，然后在骨架上連接活性基團而形成的高分子聚合物。離子交換樹脂所連接的活性基團可分為酸性基團和堿性基團兩大類型。連接酸性基團的離子交換樹脂稱為陽離子交換樹脂，連接堿性基團的樹脂稱為陰離子交換樹脂

18、。原理：陽離子交換柱原理即硬水軟化原理：陽離子交換樹脂中的酸性基團有磺酸基(-S03H)、竣基(一 COOH苯酚基(-C6H40H)等酸性基團，其中的氫離子能與溶液中的金屬離子或其他陽離子進行交換。例如苯乙烯和二乙烯苯的高聚物經(jīng)磺化處理得到強酸性陽離子交換樹脂，其結(jié)構(gòu)式可表示為R-SO3H式中R代表樹脂母體，以Ca2叨例其表達式為 2R-S03H+ Ca2+- (R-SO3 )2Ca+ 2H+。 陰離子交換柱的原理：陰離子交換樹脂中的堿性基團有季胺基-N(CH3)30H、胺基(-NHz)和亞胺基(-NHz)等。它們在水中能生成 OH-離子，可與各種陰離子起交換作用，以Cl- 為例其表達式為R-

19、N(CH3)30H+Cl-RN(CH3)3Cl+OH。-混合柱：當兩者串聯(lián)使用或混合使用時，產(chǎn)物就只有水，總表達式為 ：2R-S03H+Ca2+2(CH3)30H+2Cl- -(R-S03)2Ca+2 RN(CH3)3C1+2H20.影響因素：離子交換樹脂的質(zhì)與量：離子交換樹脂是有壽命限制的，當離子交換達到一定量時就達到飽和，需要進行再生處理，因此質(zhì)量越好總量越大其使用期限越長。陰陽離子交換樹脂的連接方式：復(fù)床式：若干個陽離子交換柱和若干個陰離子交換柱串聯(lián)而成，陽在前陰在后，其優(yōu)點是再生方便，缺點是出水質(zhì)量不高（ 單級復(fù)床式出水電阻率只有MQ .cm,雙級復(fù)床式出水電阻率為2 MO- cm）。

20、混床式：將陽離子樹脂和陰離子樹脂以1:2 容積比均勻混合裝入同一個交換柱內(nèi)而成，優(yōu)點是出水純度高（電阻率n 1OIM .cm）,缺點是再生困難。聯(lián)合式：將復(fù)床式和混床式串聯(lián)起來即成，多采用三柱式，出水質(zhì)量高（電阻率最高可達18. 3MQ.cm,即超純水），使用壽命長。三級純水的純度：當三級純水質(zhì)量不合格，其中一些非離子雜質(zhì)通過離子交換柱時就會影響離子交換柱的使用壽命并造成出水水質(zhì)的降低。 該情況主要受預(yù)處理過程的影響，同時有些開放性的純水系統(tǒng)將生成的三級純水儲存于水箱中以備其它用途使用時儲存時間過長或其它原因?qū)е碌亩挝廴疽矔顾兌认陆怠? 純水質(zhì)量對生化分析儀及檢測結(jié)果的影響? 不合格純水

21、中的雜質(zhì)成分純水質(zhì)量不合格也就意味著純水系統(tǒng)水純化的失敗，可能出現(xiàn)在原水預(yù)處理過程、三級純水的儲存和離子交換過程中的任何一步。無論哪一步失敗，其雜質(zhì)來源無外乎自來水和純水機水通道的污染物，主要有： 電解質(zhì)， 常見的有H+， Na+， K+， NH4+， Mg2+， Ca2+， Fe3+， Cu2+，Mn2+ ， Zn2+ ， Al3+ 等 陽 離 子 和 F- ，CI-,N03-,HC03-,S042-,P043-,H2P04-,HSi03-等陰離子；有機物 質(zhì)，如有機酸、農(nóng)藥、烴類、醇類和酯類等；顆粒物；微生物；溶解氣體（Nz, 02, C1z, HzG CQ COz CH4等）；其它。不同

22、雜質(zhì)成分對生化分析儀及檢測結(jié)果的影響? 電解質(zhì)含量高的影響：最直接的影響就是對血清（漿）中同種離子測定結(jié)果的升高，如對Mg2+ Ca2+ Fe3+ Cu2+ Zn2痔的測定，同時也對這些項目的定標 產(chǎn)生影響。由于很多金屬離子都是酶的輔因子，因此當金屬離子含量高時往往影響酶活性的檢測（如 Mg2是多種磷酸化激酶的激活劑，水中含量超標時會導(dǎo)致這些酶活性測定值的升高；而許多重金屬離子則對酶有抑制作用，導(dǎo)致酶活性下降）。很多陰離子也作為酶的輔因子存在，對酶活性測定產(chǎn)生影響（如CI-對a-淀粉酶就有激活作用）。電解質(zhì)含量高的水更容易形成結(jié)晶和導(dǎo)致蛋白等有機物變性附著于管道系統(tǒng)，從而使得生化分析儀管道系統(tǒng)

23、更易堵塞，最終造成測定失真或失敗；同時，在使用其對反應(yīng)杯進行清洗時也很難清洗干凈，會加速反應(yīng)杯的老化和損壞，使杯空白升高。有機物質(zhì)的影響：有機物質(zhì)的影響主要在于對類似物質(zhì)測定時導(dǎo)致類似物質(zhì)測定結(jié)果的升高。同時， 有機物含量升高也會加速管道系統(tǒng)和反應(yīng)杯的清洗困難及老化。顆粒物的影響：顆粒物一般很難通過純水系統(tǒng)進入生化分析儀管道和反應(yīng)系統(tǒng)，其來源一般都是三級純水或一級純水的儲水箱發(fā)生二次污染， 但是一旦進入除了會導(dǎo)致吸光度升高外，還很容易堵塞管道和損壞反應(yīng)杯。微生物的影響：微生物的去除主要依賴原水的預(yù)處理，有些純水系統(tǒng)還在一級純水或超純水處加裝紫外殺菌或者微濾、超濾等裝置，進一步除去水中殘余的細菌

24、、微粒、熱源等。但一旦預(yù)處理失敗或純水儲存箱被二次污染，微生物及其產(chǎn)物就能進入生化分析儀管道系統(tǒng)和反應(yīng)系統(tǒng)， 可能出現(xiàn)的情況有兩種： 微生物在管道及反應(yīng)系統(tǒng)孳生，導(dǎo)致管道堵塞，同時令吸光度和杯空白升高；微生物產(chǎn)生特定的酶對生化分析儀酶測定產(chǎn)生影響，具體產(chǎn)生什么影響取決于污染菌的類型。溶解氣體：溶解氣體增多產(chǎn)生的影響有：對同種氣體的測定的影響；對水的pH值也產(chǎn)生影響，如C02, Cl2, H2弗溶解增多導(dǎo)致水pH值的下降，也對pH值依賴性較強的生化項目測定產(chǎn)生影響；某些氣體如C12增多，因其自身氧化性較強，會對與氧化還原反應(yīng) 相關(guān)的生化測定項目產(chǎn)生影響，如對基于 340 nm處NAD周口 NADPK 吸收峰而建立的ALT, AST BUN?的測定方法，會導(dǎo)致測定值的升高。其它雜質(zhì)的影響：有些純水系統(tǒng)也將最終生成的超純水或一級純水儲存于水箱中，當水箱有生銹情況時導(dǎo)致鐵