南京工業(yè)大學(xué)碩士論文答辯-兼容模式

1、孟魯司特鈉顆粒的質(zhì)量研究孟魯司特鈉顆粒的質(zhì)量研究答辯人：專業(yè)：指導(dǎo)老師：日期：畢業(yè)論文答辯畢業(yè)論文答辯文獻(xiàn)綜述文獻(xiàn)綜述有關(guān)物質(zhì)研究有關(guān)物質(zhì)研究溶出度方法研究溶出度方法研究含量測定方法研究含量測定方法研究總結(jié)與展望總結(jié)與展望致謝致謝目目錄錄孟魯司特鈉顆粒的質(zhì)量研究孟魯司特鈉顆粒的質(zhì)量研究123456一、文獻(xiàn)綜述一、文獻(xiàn)綜述研究背景哮喘治療藥物立體依據(jù)一、文獻(xiàn)綜述一、文獻(xiàn)綜述研究背景研究背景0203全球哮喘患者約3億人，中國患者約3000萬，約一半是兒童。 04我國空氣污染越發(fā)嚴(yán)重，哮喘患者經(jīng)受更大的身體和精神折磨。哮喘是一種以可逆性氣流受限為特征的氣道疾病。發(fā)作原因有遺傳和環(huán)境兩方面；如果治療不

2、及時、不規(guī)范，很可能致命。孟魯司特鈉是一種對兒童哮喘有很好療效的藥物，由美國 Merck 公司開發(fā)生產(chǎn)，目前劑型為片劑、咀嚼片和顆粒劑。01孟魯司特鈉作為較強(qiáng)效的特異性半胱氨酰白三烯受體拮抗劑，通過阻斷白三烯的致炎作用，控制哮喘發(fā)作。 對各種類型的哮喘均有療效，不良反應(yīng)少，耐受性和依從性強(qiáng)。每種藥物都有其獨(dú)特的臨床治療優(yōu)勢，同時也伴有不同的臨床不良反應(yīng)。哮喘 受體激動劑（急性首選藥）抗膽堿能藥物白三烯受體拮抗藥（孟魯司特鈉）茶堿類藥物抗生素類（通用藥）抗組胺藥物色甘酸鹽類糖皮質(zhì)激素（最快最有效）一、文獻(xiàn)綜述一、文獻(xiàn)綜述哮喘治療藥物哮喘治療藥物目前國內(nèi)批準(zhǔn)3家藥企生產(chǎn)原料、片劑和咀嚼片，顆粒劑還

3、未被批準(zhǔn)生產(chǎn)顆粒劑能提高兒童患者的用藥依從性，市場需求大。本課題目的基于企業(yè)委托，針對孟魯司特鈉顆粒 6 類仿制藥的制劑研發(fā)，進(jìn)行質(zhì)量研究。一、文獻(xiàn)綜述一、文獻(xiàn)綜述立體依據(jù)立體依據(jù)二、有關(guān)物質(zhì)研究二、有關(guān)物質(zhì)研究 方法來源和優(yōu)化 方法確認(rèn) 方法學(xué)驗(yàn)證 樣品檢測二、有關(guān)物質(zhì)研究二、有關(guān)物質(zhì)研究- -方法來源方法來源方法來源方法來源方法比較方法比較結(jié)果結(jié)果BP 標(biāo)準(zhǔn)(原料)3個方法一致，雜質(zhì)譜廣在BP 標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上，結(jié)合進(jìn)口注冊標(biāo)準(zhǔn)的優(yōu)點(diǎn)進(jìn)行優(yōu)化，控制4個降解雜質(zhì) USP 標(biāo)準(zhǔn)(原料)EP 標(biāo)準(zhǔn)(原料)進(jìn)口注冊標(biāo)準(zhǔn)(顆粒劑)針對顆粒劑色譜條件色譜條件進(jìn)口注冊標(biāo)準(zhǔn)（顆粒劑）進(jìn)口注冊標(biāo)準(zhǔn)（顆粒劑）BP

4、標(biāo)準(zhǔn)（原料）標(biāo)準(zhǔn)（原料）色譜柱苯基己基鍵合硅膠柱苯基硅烷基色譜柱(4.6 mm 50 mm,1.8 m)流動相流動相A為0.20% (v/v) 三氟乙酸水溶液，流動相B為甲醇：乙腈（3:2）混合溶液，梯度洗脫。流動相A為0.15% (v/v) 三氟乙酸水溶液，流動相B為0.15% (v/v) 三氟乙酸乙腈溶液，梯度洗脫。檢測波長/nm255238柱溫5030流速mL/min1.51.2進(jìn)樣量/L2010供試液濃度/mg/mL0.241.0自身對照液溶度0.1%0.05%溶媒甲醇：水（3：1）甲醇：水（9：1）二、有關(guān)物質(zhì)研究二、有關(guān)物質(zhì)研究- -方法優(yōu)化方法優(yōu)化優(yōu)化項目優(yōu)化項目優(yōu)化過程優(yōu)化過程

5、結(jié)果結(jié)果色譜柱苯基柱苯基己基柱苯基柱 檢測波長/nm255238238進(jìn)樣濃度mg/mL1.2、1.0 、0.80 、0.48 和0.240.80 溶媒甲醇：水（3：1） 甲醇：水（9：1）甲醇：水（3：1）梯度洗脫程序流動相為 乙腈-水-三氟乙酸系統(tǒng)進(jìn)行以下優(yōu)化如下表梯度梯度狀況狀況結(jié)果結(jié)果1雜質(zhì)B與HPC-LF分離度不符合要求X2雜質(zhì)B與HPC-LF分離度不符合要求X3雜質(zhì)G與孟魯司特鈉及相鄰雜質(zhì)分離度也不符合要求X4雜質(zhì)G與孟魯司特鈉及相鄰雜質(zhì)分離度也不符合要求X5雜質(zhì)G與孟魯司特鈉及相鄰雜質(zhì)分離度也不符合要求X6雜質(zhì)B與HPC-LF分離度不符合要求X7主峰理論板數(shù)不符合要求X8分兩個梯

6、度，一個用來檢測除雜質(zhì)B以外的雜質(zhì)，以用來檢測雜質(zhì)B測定其他雜質(zhì)梯度測定其他雜質(zhì)梯度測定雜質(zhì)測定雜質(zhì)B梯度梯度時間/min流動相A/%流動相B/%時間/min流動相A/%流動相B/%0653506040365353604016544616495160544635495160.01208035.01208070208045208070.01653545.016040806535556040 色譜條件：Agilent ZORX SB-pheny (4.6 mm150 mm,5m)色譜柱，流動相為乙腈-水-三氟乙酸系統(tǒng)，檢測波長238 nm；柱溫30；進(jìn)樣量20L。其他雜質(zhì)檢測系統(tǒng)流速1.2 mL/

7、min；雜質(zhì)B檢測系統(tǒng)流速1.0 mL/min。二、有關(guān)物質(zhì)研究二、有關(guān)物質(zhì)研究- -方法確認(rèn)方法確認(rèn) 測定法 避光操作，取本品，加溶媒稀釋，超聲并振搖30 min，放冷稀釋至刻度，離心取上清液既得供試液溶液。雜質(zhì)對照品加溶媒溶解配制成相應(yīng)限度的溶液。按外標(biāo)法以峰面積計算4種雜質(zhì)的含量；其他雜質(zhì)按自身對照法計算含量。限度應(yīng)符合預(yù)先設(shè)計的要求。 依下方法配制系統(tǒng)適用性溶液，進(jìn)行系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，結(jié)果應(yīng)滿足依下方法配制系統(tǒng)適用性溶液，進(jìn)行系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，結(jié)果應(yīng)滿足下述要求。下述要求。 稱取孟魯司特鈉原料適量，加入過氧化氫4 L（氧化降解），紫外光燈下15 min（光照降解），再加入雜質(zhì)F儲備液和雜質(zhì)

8、B儲備液，最后配制成約含孟魯司特鈉0.8mg/ml的溶液。 雜質(zhì)C、雜質(zhì)G、雜質(zhì)F和雜質(zhì)B的相對于主峰的相對保留時間約為0.5、0.9、1.1和1.8，雜質(zhì)G與孟魯司特峰的分離度不低于2.5，孟魯司特峰和雜質(zhì)F峰之間的分離度不低于1.5，主峰的理論板數(shù)不低于5000。二、有關(guān)物質(zhì)研究二、有關(guān)物質(zhì)研究- -方法確認(rèn)方法確認(rèn)- -系統(tǒng)適用性試驗(yàn)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)檢測其他雜質(zhì)系統(tǒng)檢測其他雜質(zhì)系統(tǒng)空白溶媒空白輔料系統(tǒng)溶液供試品溶液空白溶媒和空白輔料對測定雜質(zhì)C、雜質(zhì)G、雜質(zhì)F無干擾，結(jié)果符合系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求。二、有關(guān)物質(zhì)研究二、有關(guān)物質(zhì)研究- -方法確認(rèn)方法確認(rèn)- -系統(tǒng)適用性試驗(yàn)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)檢測雜質(zhì)

9、檢測雜質(zhì)B系統(tǒng)系統(tǒng)空白溶媒空白輔料系統(tǒng)溶液供試品溶液空白溶媒對測定雜質(zhì)B無干擾，空白輔料峰與雜質(zhì)B良好分離，結(jié)果符合系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求。二、有關(guān)物質(zhì)研究二、有關(guān)物質(zhì)研究- -方法確認(rèn)方法確認(rèn)- -系統(tǒng)適用性試驗(yàn)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)專屬性專屬性破壞項目雜質(zhì)C/% 雜質(zhì)G/% 雜質(zhì)F/%未知雜質(zhì)1/%未知雜質(zhì)2/%雜質(zhì)B/% 總雜/%未破壞原料0.052 -0.012 0.061 制劑0.33 0.053 -0.031 0.40 酸破壞原料0.079 -0.61 0.24 0.087 1.0 制劑0.27 0.042 -1.07 0.53 0.11 2.0 堿破壞原料0.088 0.039 -3.15

10、3.97 0.048 7.3 制劑0.25 0.032 -0.02 0.07 0.071 0.45 氧化破壞原料7.2 -0.014 7.2 制劑3.1 -0.021 3.1 高溫破壞原料0.059 0.071 -0.13 制劑0.59 -0.034 0.059 0.054 0.74 光照破壞原料0.33 5.5 -0.032 -0.014 5.9 制劑0.49 4.4 -0.039 -0.030 5.0 -代表未檢測到在下列各破壞條件下，各雜質(zhì)峰均能得到很好地分離。二、有關(guān)物質(zhì)研究二、有關(guān)物質(zhì)研究- -方法學(xué)驗(yàn)證方法學(xué)驗(yàn)證線性和范圍試驗(yàn)線性和范圍試驗(yàn)雜質(zhì)C在定量限限度120%（0.13-10

11、 g/mL）范圍內(nèi)，r=0.9991；雜質(zhì)F在定量限限度200%（0.16-1.7 g/mL）范圍內(nèi)，r=0.9995；雜質(zhì)G在定量限限度200%（0.028-1.6 g/mL）范圍內(nèi)，r=0.9993。雜質(zhì)B在定量限限度150%（0.091-4.0 g/mL）范圍內(nèi)，r=0.9995。各雜質(zhì)限度均在所測定線性范圍內(nèi)且線性系數(shù)均大于0.999，線性良好。二、有關(guān)物質(zhì)研究二、有關(guān)物質(zhì)研究- -方法學(xué)驗(yàn)證方法學(xué)驗(yàn)證檢測限檢測限雜質(zhì)雜質(zhì)B為為0.62 ng，雜質(zhì)雜質(zhì)C為為0.84 ng，雜質(zhì)，雜質(zhì)F 為為0.22 ng，雜質(zhì)，雜質(zhì)G為為0.19 ng雜質(zhì)B雜質(zhì)C雜質(zhì)F雜質(zhì)G二、有關(guān)物質(zhì)研究二、有關(guān)物

12、質(zhì)研究- -方法學(xué)驗(yàn)證方法學(xué)驗(yàn)證雜質(zhì)G定量限定量限雜質(zhì)雜質(zhì)B 為為 1.9 ng，雜質(zhì)雜質(zhì)C為為 2.5 ng，雜質(zhì)，雜質(zhì)F 為為 0.65 ng，雜質(zhì)，雜質(zhì)G為為 0.60 ng。雜質(zhì)B雜質(zhì)C雜質(zhì)F雜質(zhì)G二、有關(guān)物質(zhì)研究二、有關(guān)物質(zhì)研究- -方法學(xué)驗(yàn)證方法學(xué)驗(yàn)證精密度精密度重復(fù)性試驗(yàn)重復(fù)性試驗(yàn)(n=6)檢查項目含量平均值/%RSD/%結(jié)果雜質(zhì)C0.324.0雜質(zhì)F0.142.3雜質(zhì)G 0.104.6雜質(zhì)B0.152.1中間精密度試驗(yàn)中間精密度試驗(yàn)(n=12)檢查項目含量平均值/%RSD/%結(jié)果雜質(zhì)C0.3510.0雜質(zhì)F0.145.2雜質(zhì)G 0.105.7雜質(zhì)B0.144.4重復(fù)性各雜質(zhì)RS

13、D均小于4.0%，中間精密度各雜質(zhì)RSD均小于10.%，結(jié)果符合要求。二、有關(guān)物質(zhì)研究二、有關(guān)物質(zhì)研究- -方法學(xué)驗(yàn)證方法學(xué)驗(yàn)證回收率回收率雜質(zhì)雜質(zhì)C回收率回收率樣品原含量/g 加入量/g測得量/g回收率/ %平均值/%RSD/ %18.2039.34 55.54 94.9 98.32.918.2039.3454.84 93.1 18.2039.3456.41 97.1 18.2078.6896.46 99.5 18.2078.68 95.69 98.5 18.2078.6895.86 98.7 18.20118.0 136.8 101 18.20118.0136.3100 18.20118.

14、0138.9 102 雜質(zhì)雜質(zhì)F回收率回收率樣品原含量/g 加入量/g 測得量/g回收率/ %平均值/%RSD/ %0.003.91 3.62 92.7 98.34.00.003.914.42 95.8 0.003.913.66 93.7 0.007.82 7.80 99.7 0.007.82 7.58 96.9 0.007.82 7.65 97.9 0.0011.7 12.1 103 0.0011.7 11.9 102 0.0011.7 12.1 103 雜質(zhì)雜質(zhì)G回收率回收率樣品原含量/g 加入量/g 測得量/g回收率/ %平均值/%RSD/ %3.95 4.96 8.4095.0 99.

15、74.03.954.969.07109 3.954.968.5798.4 3.959.92 13.7101 3.95 9.92 13.599.0 3.959.92 13.7101 3.9514.9 17.895.1 3.9514.918.499.1 3.9514.918.6100 雜質(zhì)雜質(zhì)B回收率回收率樣品原含量/g 加入量/g 測得量/g回收率/ %平均值/%RSD/ %3.07 12.3614.9796.3 100.74.03.07 12.3616.60110 3.0712.3615.0596.9 3.0724.72 28.47103 3.0724.7228.04101 3.07 24.7

16、2 28.20102 3.0737.08 39.4298.1 3.0737.0839.4598.1 3.0737.08 40.79102 各雜質(zhì)回收率平均值均在98%-102%范圍內(nèi)，RSD均小于4.0%，符合要求。二、有關(guān)物質(zhì)研究二、有關(guān)物質(zhì)研究- -方法學(xué)驗(yàn)證方法學(xué)驗(yàn)證溶液穩(wěn)定性溶液穩(wěn)定性各雜質(zhì)RSD均小于3.0%，在18h內(nèi)溶液穩(wěn)定。溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)(n=6) 18h檢查項目RSD/%結(jié)果雜質(zhì)C2.7雜質(zhì)F1.7雜質(zhì)G1.1雜質(zhì)B1.5二、有關(guān)物質(zhì)研究二、有關(guān)物質(zhì)研究- -方法學(xué)驗(yàn)證方法學(xué)驗(yàn)證二、有關(guān)物質(zhì)研究二、有關(guān)物質(zhì)研究- -方法學(xué)驗(yàn)證方法學(xué)驗(yàn)證耐用性耐用性考察項目和結(jié)果

17、如下表，主峰理論塔板數(shù)均不小于5000，拖尾因子，各色譜峰的分離度，均符合要求，耐用性良好。 研究項目主峰保留時間主峰對稱因子主峰理論板數(shù)柱溫25 26.4340.231326930 (原條件)26.0120.231333435 25.4730.2413045流速1.0 ml/min28.5270.2130991.2 ml/min(原條件)26.0120.23133341.4 ml/min23.9530.2211873波長233nm26.0120.2313168238nm（原條件）26.0120.2313334243nm26.0120.2313334三氟乙酸濃度0.12%26.0340.161

18、52540.15%(原條件)26.0120.23133340.18%25.1040.1714354色譜柱安捷倫（原條件）26.0120.2313334安捷倫25.9750.1615518安捷倫25.6790.1912600結(jié)論結(jié)論 如表所示，方法學(xué)驗(yàn)證結(jié)果均符合要求，本法可以用于測定孟魯司特鈉顆粒中有關(guān)物質(zhì)。二、有關(guān)物質(zhì)研究二、有關(guān)物質(zhì)研究- -方法學(xué)驗(yàn)證方法學(xué)驗(yàn)證驗(yàn)證項目驗(yàn)證項目結(jié)果結(jié)果專屬性線性和范圍檢測限定量限精密度溶液穩(wěn)定性準(zhǔn)確度耐用性 取1批參比制劑和3批中試樣品進(jìn)行檢測，結(jié)果符合要求且自制樣品和對照樣品無明顯差異。批號批號雜質(zhì)雜質(zhì)C/%雜質(zhì)雜質(zhì)F/% 雜質(zhì)雜質(zhì)G/%雜質(zhì)雜質(zhì)B/%

19、未知雜質(zhì)未知雜質(zhì)/% 總雜總雜/%15070010.23-0.0380.026-0.3015070020.24-0.0360.027-0.3015070030.22-0.0360.025-0.2800004181480.31-0.0180.085-0.41二、有關(guān)物質(zhì)研究二、有關(guān)物質(zhì)研究- -樣品檢測樣品檢測三、溶出度方法研究三、溶出度方法研究方法建立方法學(xué)驗(yàn)證溶出曲線樣品檢測三、溶出度方法研究三、溶出度方法研究- -方法建立方法建立方法來源方法來源優(yōu)化項目優(yōu)化項目結(jié)果結(jié)果進(jìn)口注冊標(biāo)準(zhǔn)檢測波長的選擇最大吸收波長389nm原料在四種溶出介質(zhì)中的溶解狀態(tài)pH4.5、pH6.8和溶解無差異，pH1.

20、2中降解為雜質(zhì)B，合并計算濾膜吸附試驗(yàn)有吸附，取樣10mL,過濾棄去5mL即可 經(jīng)過上表方法優(yōu)化，最后確定的溶出度檢測方法為： 苯基柱，流動相為乙腈-水-三氟乙酸系統(tǒng)（50:50:0.2），流速為1.0 mL/min，柱溫為50 ，檢測波長為389 nm，理論板數(shù)按孟魯司特峰計算應(yīng)不低于2000。 測定法，避光操作，以900 mL 0.5%十二烷基硫酸鈉溶液為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為50 r/min，經(jīng)15 min 取樣10 mL濾過，棄去初濾液5 mL，續(xù)濾液作為供試品溶液。取對照品溶液溶解配制為濃度約為 4g/mL的溶液。按外標(biāo)法以峰面積計算，計算出每袋的溶出量。限度應(yīng)為標(biāo)示量的80%，應(yīng)符合規(guī)定

21、。三、溶出度方法研究三、溶出度方法研究- -方法學(xué)驗(yàn)證方法學(xué)驗(yàn)證驗(yàn)證項目驗(yàn)證項目結(jié)果結(jié)果專屬性空白溶媒和空白輔料對測定無干擾線性和范圍溶出度限量在測定的線性范圍內(nèi)，（0.096g/mL6.7g/mL）,線性系數(shù)大于0.9999，線性良好?；厥章势骄厥章蕿?00%， RSD為1.4%小于2.0%溶液穩(wěn)定性36 h內(nèi)RSD為小于2.0%，穩(wěn)定性良好耐用性在設(shè)定的色譜條件條件下，主峰理論板數(shù)均符合要求。結(jié)論結(jié)論 如表所示，方法學(xué)驗(yàn)證結(jié)果均符合要求，本法可以用于檢測孟魯司特鈉顆粒的溶出度。參比制劑與自制樣品體外溶出曲線參比制劑與自制樣品體外溶出曲線參比制劑平均溶出度時間/min51015203045

22、60水介質(zhì)平均值/%99.5101102102102-pH6.8（n=（n=12）平均值/%101103103103104-pH4.5（n=（n=12）平均值/%67.772.274.777.582.086.390.1pH1.2（n=（n=12）平均值/%62.574.081.786.793.298.7101自制樣品平均溶出度時間/min5101520304560水介質(zhì)平均值/%92.892.993.193.192.9-pH6.8（n=（n=12）平均值/%91.692.392.792.592.9-pH4.5（n=（n=12）平均值/%58.866.371.375.079.583.889.8p

23、H1.2（n=（n=12）平均值/%53.475.382.187.291.393.897.1三、溶出度方法研究三、溶出度方法研究- -溶出曲線溶出曲線參比制劑與自制樣品體外溶出曲線比較參比制劑與自制樣品體外溶出曲線比較用f2法比較參比制劑與自制樣品在pH4.5和pH1.2溶出介質(zhì)中的溶出度，比較結(jié)果f2均不小于50，可判斷為相似。取樣點(diǎn)溶出介質(zhì)f210min、20min、30min、45min、60minpH=4.57110min、15min、30minpH=1.291 在水介質(zhì)和pH6.8介質(zhì)中參比制劑和自制樣品的溶出度在15min內(nèi)均達(dá)到85%以上，故不進(jìn)行相似性比較。而在pH1.2和pH

24、4.5介質(zhì)中，溶出度在15min內(nèi)均未達(dá)到85%以上（50 r/min時）故比較相似性。三、溶出度方法研究三、溶出度方法研究- -溶出曲線溶出曲線批號批號溶出度溶出度/%123456平均值150700193.688.691.792.895.797.993.4150700292.689.193.197.895.891.293.3150700393.095.392.994.093.794.093.8000041814899.599.198.894.399.410198.7三、溶出度方法研究三、溶出度方法研究- -樣品檢測樣品檢測 取1批參比制劑和3批中試樣品進(jìn)行檢測，結(jié)果符合要求且自制樣品和對照樣

25、品無明顯差異。四、含量測定方法研究四、含量測定方法研究方法建立方法學(xué)驗(yàn)證樣品檢測四、含量測定方法研究四、含量測定方法研究- -方法建立方法建立方法來源方法來源優(yōu)化項目優(yōu)化項目結(jié)果結(jié)果進(jìn)口注冊標(biāo)準(zhǔn)中含量測定方法和含量均勻度方法進(jìn)樣濃度的考察24g/mL溶媒的選擇甲醇：水（3;1）濾膜吸附試驗(yàn)有吸附，取樣10mL,過濾棄去5mL即可樣品提取方法的比較振搖5min 經(jīng)過上表方法優(yōu)化，最后確定的溶出度檢測方法為： 色譜條件同溶出度。 測定法，避光操作，取本品15袋的量加溶媒適量，振搖5 min，再加溶媒稀釋至刻度，搖勻，再稀釋10倍，取10mL棄去初濾液5 mL，續(xù)濾液即為供試品溶液。對照品溶液為加溶媒溶解配制24 g/mL的溶液。按外標(biāo)法以峰面積計算含量。四、含量測定方法研究四、含量測定方法研究