牛痘疫苗接種家兔炎癥皮膚提取物不同穴位注射對(duì)神經(jīng)病理性疼痛大鼠的療效比較.docx

1、doi:10.3969/j.issn,1006-9852.2014.08.006牛痘疫苗接種家兔炎癥皮膚提取物不同穴位注射對(duì)神經(jīng)病理性疼痛大鼠的療效比較薛純純I李夏I謝磊I蔡劍峰2谷楨I王開(kāi)強(qiáng)心（,上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬市中醫(yī)醫(yī)院疼痛科，上海200071；2嘉善縣中醫(yī)醫(yī)院骨傷科，嘉善314100）摘要目的：比較不同穴位注射牛痘疫苗接種家兔炎癥皮膚提取物(神經(jīng)妥樂(lè)平)治療大鼠神經(jīng)病理性疼痛的療效.方法：構(gòu)建L脊神經(jīng)結(jié)扎(spinalnerveligation,SNL)模型大鼠，將成功模型隨機(jī)分為5組(=10),分別為SNL組、神經(jīng)妥樂(lè)平+Ls“夾眷”穴組、神經(jīng)妥樂(lè)平+匚“環(huán)跳”穴組、神經(jīng)妥樂(lè)平+L,

2、“委中”穴組及神經(jīng)妥樂(lè)平+匚“足三里”穴組，于穴位注射0d、Id、3d、5d、7d、10d、14d測(cè)定大鼠雙足50%機(jī)械編足反應(yīng)閾值.結(jié)果：神經(jīng)妥樂(lè)平注射四個(gè)不同的穴位均有較好的鎮(zhèn)痛作用，四個(gè)穴位鎮(zhèn)痛強(qiáng)度之間無(wú)顯著差異.結(jié)論：在本實(shí)驗(yàn)條件下，“委中”、“環(huán)跳”、“足三里”、L/夾脊”穴注射神經(jīng)妥樂(lè)平治療神經(jīng)病理性疼痛均有較好的鎮(zhèn)痛療效.關(guān)鍵詞牛痘疫苗接種家兔炎癥皮膚提取物；穴位；脊神經(jīng)結(jié)扎；神經(jīng)病理性疼痛COMPARISONOFTHEANALGESICEFFECTSOFNEUROTROPINATDIFFERENTACUPOINTSINNEUROPATHICPAINRATSXUEChun-Chu

3、n*,LIXia1,XIELei1,CAIJian-Feng2,GUZhen',WANGKai-Qiang,A(PainManagementCenter,ShanghaiHospitalofTCM,ShanghaiUniversityofTCM,Shanghai200071;勺iashanHospitalofTCM,Zhejiang314100)AbstractObjective：Tocomparetheanalgesiceffectsofneurotropinatdifferentacupointsinneuropathicpainrats.Methods:ToestablishL5

4、spinalnerveligationmodelrats,fiftySDratswererandomlyassignedtofivegroupsn=10):SNLgroup,NTP+Ls"Jiaji”pointgroup,NTP+Ls"Huantiao"pointgroup,NTP+Ls"Weizhong”pointgroup,NTP+L5"Zusanli”pointgroup.Mechanicalallodyniawasrepresentedby50%pawwithdrawalthresholdfollowingacupoint-inject

5、ion(0,1,3,5,7,10,14d).Results:Afteracupoint-injcctiontreatment,allthe4acupointshadanalgesiceffectonneuropathicpainratmodel.Therewasnosignificantdifferenceamongthe4acupointgroupsconcerningthelong-lastinganalgesiceffect.Conclusions:Resultsofthepresentstudydemonstratethatneurotropinacupoint-injectiontr

6、eatmenthasasignificantanalgesiceffect,with“Weizhong”，"Huantiao",“Zusanli”，L5"Jiaji”acupoints.KeywordsNeurotropin;Acupoint;SNL;Neuropathicpain神經(jīng)病理性疼痛是由外周或中樞軀體感覺(jué)系統(tǒng)的損傷或疾病而引起的一種頑固性疼痛綜合征，以自發(fā)性痛、痛覺(jué)過(guò)敏和痛覺(jué)超敏為特征，其患病率高達(dá)6.0%7.0%，臨床常見(jiàn)的神經(jīng)病理性疼痛有三叉神經(jīng)痛、帶狀皰疹后、脊髓外傷或腦中風(fēng)后疼痛等。目前對(duì)該類(lèi)疼痛雖有藥物、神經(jīng)阻滯、神經(jīng)毀損、手術(shù)減壓、骨髓電刺

7、激等多種治療方法,但都無(wú)確切療效，旦操作復(fù)雜，并發(fā)癥多，費(fèi)用昂貴,所以，尋找一種安全、有效的治療神經(jīng)病理性疼痛方法具有十分重要的意義。通訊作者kqw67牛痘疫苗接種家兔炎癥皮膚提取物（神經(jīng)妥樂(lè)平）由于具有鎮(zhèn)痛、營(yíng)芥神經(jīng)、參與神經(jīng)修復(fù)、免疫調(diào)節(jié)等藥理作用，旦非麻醉性、非消炎鎮(zhèn)痛性、無(wú)成癮性，已廣泛應(yīng)用于臨床°%但其臨床應(yīng)用多以肌肉注射或靜脈滴注為主，本研究通過(guò)構(gòu)建L,脊神經(jīng)結(jié)扎模型，不同穴位注射神經(jīng)妥樂(lè)平，觀察其對(duì)神經(jīng)病理性疼痛大鼠的作用及比較不同穴位的療效，為臨床應(yīng)用提供-定的理論依據(jù)。方法1. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物清潔級(jí)成年雄性SpragueDawley大鼠，重量220250g,由上海斯萊克動(dòng)

8、物中心提供，動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK(滬)20120002。飼養(yǎng)于上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬市中醫(yī)醫(yī)院動(dòng)物房，動(dòng)物分籠飼養(yǎng)，室溫保持在23±2C和50%60%的濕度，1212h白天-黑夜循環(huán)照明。所有實(shí)驗(yàn)步驟都盡量減輕動(dòng)物的痛苦并按照有關(guān)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的使用原則操作。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在以上環(huán)境中適應(yīng)一周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。2. 肯神經(jīng)結(jié)扎模型的制備及動(dòng)物分組動(dòng)物在10%水合氯醛(300mg/kg)麻醉滿意后，剃毛、固定、消毒、鋪巾，以項(xiàng)兢突間隙為中心,取后背正中切口，長(zhǎng)約4cm。切開(kāi)皮膚、皮下組織，鈍性分離椎旁肌，以拉鉤牽開(kāi)，咬除左側(cè)L,椎板和關(guān)節(jié)突，暴戟左側(cè)L,神經(jīng)根和背根神經(jīng)節(jié)，用50號(hào)mersilk絲線緊結(jié)扎

9、J神經(jīng)用生理鹽水沖洗傷口，充分止血，用40vicryl可吸收縫線逐層、間斷縫合肌肉筋膜、皮下組織和皮膚，縫合后慶大客素肌肉注射以預(yù)防感染，術(shù)后所有動(dòng)物均采用單籠飼養(yǎng)，室溫維持在23±2.C,自然照明，自由飲水和攝食。術(shù)后第1天開(kāi)始行為學(xué)檢測(cè)，至造模后第7天,篩選造模成功大鼠，后將成功模型按隨機(jī)數(shù)字表法分成五組，SNL組、神經(jīng)妥樂(lè)平+J“央育”穴組、神經(jīng)妥樂(lè)平+“環(huán)跳”穴組、神經(jīng)妥樂(lè)平+“委中"穴組、神經(jīng)妥樂(lè)平+“足三里”穴組。于神經(jīng)妥樂(lè)平穴位注射后0d、Id、3d、5d、7d、10d、14d測(cè)定大鼠雙足50%機(jī)械縮足反應(yīng)閾值。3. 測(cè)定雙足50%縮足反應(yīng)閾值(pawwith

10、drawalthreshold.PWT)行為學(xué)測(cè)試時(shí)間固定在8:0012:00,測(cè)試人員不知道手術(shù)分組情況。第-階段篩選成功模型行為學(xué)測(cè)試時(shí)間為術(shù)前Id、術(shù)后Id、3d、5d、7d；第二階段為成功模型進(jìn)行神經(jīng)妥樂(lè)平干預(yù)，分別于注射0d、3d、5d、7d、10d、14d測(cè)定大鼠雙足痛闌。將大鼠置于底為5mmX5mm的金屬絲網(wǎng)眼墊的透明有機(jī)玻璃箱中，適應(yīng)15min左右，用一系列標(biāo)準(zhǔn)化vonFrey纖維(美國(guó)Stoeling公司)刺激大鼠后肢足底中部，使之稍成S形，持續(xù)68s,待其安靜后按照Dixon介紹的UpandDown方法測(cè)定機(jī)械痛閾。經(jīng)典的von-Frey纖毛，折力分別為0.4、1.4、2.

11、0、4.0、6.0、8.0、15.0g。從2.0g開(kāi)始，將von-Frey纖毛垂直刺向大鼠后爪足底皮膚，稍用力，直至其彎曲成S形，避開(kāi)足墊，依據(jù)大鼠有無(wú)縮足反射，再更換下一折力或上一折力纖毛，每次持續(xù)時(shí)間最長(zhǎng)不超過(guò)8s,測(cè)試相鄰間隔時(shí)間為10s。記錄大鼠對(duì)不同折力纖毛的-系列反應(yīng)。若大鼠出現(xiàn)快速的縮足反射或舔足反應(yīng)，則記為陽(yáng)性反應(yīng)，以“x”表示，若無(wú)反應(yīng)，則視為陰性反應(yīng)，以“?！北硎?，可得到一串以“。”或“x”組合的序列，以出現(xiàn)“x"的前一次“o"作為起點(diǎn)，選擇包括該起點(diǎn)的6次連續(xù)刺激反應(yīng)，如“oxoxoo”，作為推算50%縮足反應(yīng)闞值(pawwithdrawalthres

12、hold>PWT)的關(guān)鍵序列，推算公式50%PWT(g)=(10Xf+K6)/10000,其中，Xf為序列中紋后一根von-Frey纖毛的對(duì)數(shù)值；k為根據(jù)測(cè)量所得“x”、“?！毙蛄胁楸砗蟮玫降闹?，8為各個(gè)纖毛力度取對(duì)數(shù)后的均差，在此約等于0.244o由公式推算50%PWT會(huì)出現(xiàn)大于15.0g或小于0.4g的值，但仍以15.0g或0.4g作為最大或最小的機(jī)械痛閾值。若在2.00.4g力度范圍的刺激均為陽(yáng)性反應(yīng)，50%PWT記為0.4g;若在2.015.0g范圍力度的刺激均為陰性反應(yīng)，50%PWT記為15.0g。健側(cè)機(jī)械痛闋的測(cè)定時(shí)間均在術(shù)側(cè)機(jī)械痛閾測(cè)定完后的15min進(jìn)行，術(shù)前若大鼠右足5

13、0%PWTW4.0g,該只大鼠亦排除在實(shí)驗(yàn)之外。實(shí)驗(yàn)前一周每日將大鼠置于實(shí)驗(yàn)觀察箱30min使之適應(yīng)。4. 藥物干預(yù)造模7d后，將大鼠固定在自制的塑料桶內(nèi)，背部、雙后肢和尾部暴露在外，用神經(jīng)妥樂(lè)平(neurotropin,H本臟器制藥株式會(huì)社生產(chǎn)，進(jìn)口注冊(cè)證號(hào)：針劑X20010023,規(guī)格：每支3ml中含有3.6個(gè)ncurotropin單位(NU)療程)分別于大鼠雙側(cè)"央脊"穴(匚，平嘲醺關(guān)節(jié),脊正中線旁開(kāi)0.5cm)、“委中”穴(膝關(guān)節(jié)背面正中)、“環(huán)跳”穴(股骨大轉(zhuǎn)子與最后愀椎棘突連線中外1/3處)和“足三里”穴(脛骨前結(jié)節(jié)旁開(kāi)5mm)注射0.1ml,每門(mén)1次，7天1療

14、程，共2療程。5. 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差(x±SZ?)表示，各組重復(fù)測(cè)量的痛闕之間的差異采用至夏測(cè)底資料的方差分析，同一時(shí)間點(diǎn)的蛆間比較采用單因素方差分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果1. SNL模型的成功建立術(shù)前兩組大鼠雙足50%PWT均無(wú)明顯差異，術(shù)后SNL組大鼠健側(cè)與正常大鼠健側(cè)相比在統(tǒng)計(jì)學(xué)上無(wú)顯著差異，術(shù)后SNL組大鼠術(shù)側(cè)與正常大鼠術(shù)側(cè)相比，其50%PWT于術(shù)后Id顯著下降（PV0.01）,低于術(shù)前基礎(chǔ)值的50%以上，并在觀察期內(nèi)均維持在較低水平（PV0.01,見(jiàn)圖1）,證明已成功建立神經(jīng)病理性疼痛模型。2

15、. 神經(jīng)妥樂(lè)平注射不同穴位的鎮(zhèn)痛作用神經(jīng)妥樂(lè)平不同穴位注射后，各組與SNL組相比，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，痛閾逐漸增加，并于注射后第7d、10d、14d有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（Pvo.05）,不同的穴位組痛閾無(wú)明顯差異（見(jiàn)圖2）:SNL紐大鼠健側(cè)后足痛閾與術(shù)前基礎(chǔ)值比，7d14d（相當(dāng)于術(shù)后14d21d）有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）,其余穴位組各組大鼠健側(cè)后足痛闋之間無(wú)顯著性差異（見(jiàn)圖3）。 SNLZusanliJiajiWeizhong-Huantiao6)iMd%og圖2神經(jīng)妥樂(lè)平注射不同穴位對(duì)大就術(shù)側(cè)機(jī)械性痛故的鎮(zhèn)痛效應(yīng)與SNL組術(shù)倒相比，P<0.05Fig.2Comparisonofanal

16、gesicefleetsofncurotropinatdificrcntacupointsinneuropathicpain.*P<0.05indicatesasignificantdiflerencccomparedwithSNLgroupipsilateral.IMd%og6)！Mn_%oln神經(jīng)妥樂(lè)平是用牛痘病毒疫苗接種于家兔皮膚使其產(chǎn)生免疫和炎癥反應(yīng)的皮膚組織經(jīng)過(guò)提取和純controlgroupipsilateralcontrolgroupcontralateralSNLgroupipsilateralSNLgroupcontralateralTime(d)-SNLWeizhon

17、gZusanliHuantiao* Jiaji圖3神經(jīng)妥樂(lè)平注射不同穴位對(duì)大鼠健側(cè)機(jī)械性痛敏的作用與SNL組健側(cè)相比.P<0.05Fig.3Analgesiceffectsofneurotropinoncontralateralsideafteripsilateral(SNLside)injection.*P<0.05indicatesasignificantdiflerencccomparedwithSNLgroup.圖1成功模型篩選，術(shù)后7天內(nèi)正常大版和SNL模型大鼠雙側(cè)足底50%縮足闋值的變化°與正'常組相比，叩<0.01.Fig.1Compariso

18、nofpawmechanicalwithdrawalthreshold7daysafterLsspinalnerveligation.*P<0.01indicatesasignificantdiflerencecomparedwithcontrolgrouprats.化得到的一種非蛋白生物活性物質(zhì)。以往的實(shí)驗(yàn)已證實(shí)神經(jīng)妥樂(lè)平鎮(zhèn)痛作用不僅有中樞鎮(zhèn)痛機(jī)制的參與還有外周機(jī)制發(fā)揮獨(dú)特的鎮(zhèn)痛作用，5,o中樞鎮(zhèn)痛機(jī)制主要為中樞通過(guò)調(diào)節(jié)5一羥色胺能（5-HT）系統(tǒng)及去甲腎上腺素能系統(tǒng)a?受體的功能，激活下行性疼痛抑制系統(tǒng)；其外周鎮(zhèn)痛機(jī)制為抑制緩激肽釋放緩解化學(xué)性刺激，減輕局部組織及神經(jīng)根的水腫達(dá)到鎮(zhèn)痛

19、作用閩。目前穴位注射主要應(yīng)用于消化系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)等，研究發(fā)現(xiàn)應(yīng)用華佗夾脊穴穴位注射治療外傷性脊髓損傷獲得較好的臨床療效；另外，足三里及牌俞穴位注射復(fù)方當(dāng)歸注射液可以改善功能性消化不良患者的癥狀同。穴位注射是將穴位、針刺、藥物的多至作用結(jié)合起來(lái)的特殊針灸療法本實(shí)驗(yàn)用神經(jīng)妥樂(lè)平作用于不同的穴位，結(jié)果表明4個(gè)穴位均有較好的鎮(zhèn)痛作用。從解剖學(xué)的角度來(lái)看，夾脊穴對(duì)應(yīng)的是相應(yīng)骨神經(jīng)的后根(L5),環(huán)跳穴深部為坐骨神經(jīng)干，委中穴下為脛神經(jīng)，足三里穴下為腓腸外側(cè)皮神經(jīng)，穴位卜-的感受器以肌梭為主。研究表明四穴位特異性的產(chǎn)生機(jī)制主要是與神經(jīng)支配的節(jié)段有關(guān)。以上四穴中，委中和環(huán)跳主要作用于坐骨神經(jīng)的神經(jīng)

20、干及其分支，直接刺激神經(jīng)干，夾脊穴作用的是相應(yīng)節(jié)段的脊神經(jīng)后支，而足三里主要作用的感受器以肌梭為主，主治偏重于胃腸道消化系統(tǒng)，這可能是足三里穴鎮(zhèn)痛效果相對(duì)較弱的原因。此外，研究中還發(fā)現(xiàn)SNL組在第】0d及14d大鼠健側(cè)痛閾有所下降，即所謂的“鏡像痛”現(xiàn)象，當(dāng)周?chē)窠?jīng)損傷后，疼痛不僅從受傷區(qū)域被感知，而且在損傷部位外一定距離的區(qū)域也被感知最新研究認(rèn)為與衛(wèi)星膠質(zhì)細(xì)胞有關(guān)但是神經(jīng)妥樂(lè)平治療后健側(cè)痛閾均未出現(xiàn)下降，反過(guò)來(lái)也證明神經(jīng)妥樂(lè)平穴位注射可有效的預(yù)防“鏡像痛”的出現(xiàn),至于其機(jī)制仍不明晰，還有待進(jìn)一步研究。本實(shí)驗(yàn)中僅僅觀察了神經(jīng)妥樂(lè)平對(duì)SNL模型行為學(xué)的改變，并未進(jìn)一步探討其鎮(zhèn)痛機(jī)制是本實(shí)驗(yàn)的缺點(diǎn)

21、，我們將進(jìn)一步完善此方面的研究。參考文獻(xiàn)1 TsudaM,MatsushitaK,InoueK.Neuropathicpain.NihonYakurigakuZasshi,2014,143:215216.2 CostiganM,ScholzJ,WoolfCJ.Neuropathicpain:amaladaptiveresponseofthenervoussystemtodamage.AnnuRevNeurosci,2009,32:132.3 DannoD,KawabataK,TachibanaH.Threecasesofnummularheadacheeffectivelytreatedwit

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