貓傳染性鼻-結(jié)膜炎疫苗研究進(jìn)展.docx

1、貓傳染性鼻-結(jié)膜炎疫苗研究進(jìn)展趙艷麗'，董宏偉微，陳小慶I,劉秋艷1,胡桂學(xué)'(1.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，吉林長(zhǎng)春130118；2.言林省農(nóng)業(yè)廣播電視學(xué)校，吉林K春130021)中圖分類號(hào)：S852.6596文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：0529-60<)5(2。14)09-0()56-()3貓杯狀病毒(felinecalicivirus,FCV)能引起貓的多發(fā)性門腔和呼吸道傳染病，還可引起結(jié)膜炎，故又稱為貓傳染性鼻-結(jié)膜炎病毒。FCV是杯狀病毒科皰疹病毒屬(Vesivirus)的成員之一，其基因組為單股正鏈RNA，無囊膜，核衣殼呈二十面體對(duì)稱。目前FCV感染已呈世界性分布

2、。幾乎所有的貓科動(dòng)物均易感，一歲以下的貓最易感，也有感染狗的報(bào)道。FCV感染貓通常僅局限于口腔和上呼吸道，有些毒株還可以引發(fā)機(jī)體產(chǎn)生慢性胃腸炎和急性關(guān)節(jié)炎癥狀。FCV在貓群中高度流行，主要是因?yàn)樵S多臨床康復(fù)的貓仍然是病毒攜帶者。該病雖發(fā)病率較高，但死亡率較低。然而病毒變異產(chǎn)生的強(qiáng)毒株可以引起嚴(yán)重的急性致死全身性疾病(virulentsystemicdisease,VSD)及出血熱樣疾病的暴發(fā)，致使貓死亡率增加。目前貓傳染性鼻-結(jié)膜炎尚沒有特效的治療方法，疫苗免疫接種是防制該病的主要措施。傳統(tǒng)疫苗在病毒防制過程中起到重要的作用，但是這些疫苗只能減少臨床發(fā)病率和病毒的排出，可能無法防止感染。隨著分

3、子生物學(xué)、基因工程技術(shù)的發(fā)展，新型疫苗的研究也不斷被嘗試。本文對(duì)國(guó)內(nèi)外有關(guān)該病疫苗的研究進(jìn)展綜述如下。1傳統(tǒng)疫苗1.1滅活疫苗該類疫苗優(yōu)點(diǎn)是安全性好，能夠減少由FCV引起的臨床癥狀，缺點(diǎn)是不能誘導(dǎo)有效的黏膜免疫和細(xì)胞免疫應(yīng)答，因而無法有效抑制呼吸道中FCV的復(fù)制。此外，接種部位有時(shí)會(huì)形成纖維肉瘤，以氫氧化鋁佐劑疫苗較為嚴(yán)重。Demanmarc等首次報(bào)道注射貓細(xì)小病毒儂panleiikopeniavirus,FPLV)、皰疹病毒(felineherpes-vinis,FHV)和FCV滅活疫苗后在貓雙側(cè)胸部產(chǎn)生纖收稿日期：2013-09-08基金項(xiàng)目：公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(xiàng)(201303042

4、)作者簡(jiǎn)介：趙艷函(1982-),女，講師，博士生.研究方向?yàn)閯?dòng)物病毒學(xué)E-mail:jnzyl1982通訊作者:胡桂學(xué)，E-mail:huguixue901103維肉瘤的案例叫Jas等將由改性的FPLV、FHV,火活的FCV制備成的非佐劑重組疫苗RCPCh-FeLV接種89周SPF貓，結(jié)果顯示，接種疫苗一周后，經(jīng)FHV和FCV攻毒，免疫貓的臨床表現(xiàn)顯著低于對(duì)照組，F(xiàn)PV、FHV和FCV排出量顯著減少，證實(shí)接種疫苗的第7天開始產(chǎn)生免疫應(yīng)答氣由于中和性表位大部分位于衣殼蛋白高變區(qū)，用單價(jià)FCV疫苗不能完全預(yù)防FCV感染。因此，為提高交又中和反應(yīng)，多價(jià)疫苗成為FCV疫苗新的研究方向。Poulet研

5、究證實(shí)了不同毒株具有交叉保護(hù)作用，隨后以具有交叉保護(hù)作用的FCV株(FCV431和FCVG1)制成了非佐劑滅活二價(jià)疫苗(PUREVAXKCPCh-FeLV),疫苗對(duì)異源株產(chǎn)生的免疫保護(hù)作用與體外交叉中和反應(yīng)有關(guān)，同時(shí)也說明交叉中和試驗(yàn)町以用于選擇FCV疫苗株，同樣適用于引起VSD的高致病毒株Ma-subuchi等研發(fā)了一種三價(jià)火活疫苗KyotoBikenFeline-CPR，其中包含的3個(gè)FCV株的免疫和基因特性差異較大，經(jīng)攻毒試驗(yàn)顯示，該疫苗更有潛力應(yīng)對(duì)蔓延整個(gè)日本的FCV的抗原多樣性同。1.2減毒活疫苗該類疫苗能較好地刺激機(jī)體產(chǎn)生保護(hù)性免疫，但存在毒力返祖問題。有證據(jù)表明，活疫苗病毒在某些

6、情況可能引起臨床癥狀，甚至引起流行感染。Radford等將疫苗失敗獲得的分離株的序列歸為兩類：大多數(shù)疫苗失敗獲得的分離株與疫苗株序列存在21.33%38.00%的差異,而在某些情況下僅產(chǎn)生0%5.33%的變異，說明分離株可能來源于疫苗。此外.與來自同一個(gè)疾病暴發(fā)的分離株密切相關(guān)，僅產(chǎn)生0%1.33%的變異，而與流行病學(xué)無關(guān)的分離株存在20.67%38.00%的差異氣Hohdatsu等認(rèn)為商業(yè)的FCV疫苗A、B、C和D產(chǎn)生的免疫血清相對(duì)能較好地中和FCV試驗(yàn)株：F4,F9,FCV-255。而對(duì)野毒株的中和效果不理想。說明疫苗株和日本流行的FCV株之間中和抗原差異顯著，需要改進(jìn)FCV疫苗氣Port

7、er研究表明，兩個(gè)FCV疫苗株(FCV-F9和FCV-255)仍然存在廣泛的交叉反應(yīng)，F(xiàn)9抗血清中和87.5%,FCV-255抗血清中和75%氣Kanellos等將貓抗FHV、FCV和FPLV的凍干三價(jià)改性減毒活疫苗溶解在液體重組的亞單位貓白血.病病毒儂九2leukemiavirus,FeLV)(p45包膜蛋白)中，結(jié)果顯示，混合兩個(gè)疫苗對(duì)安全和效果都沒有產(chǎn)生不利的影響oHuang研究發(fā)現(xiàn)，雙株FCV疫苗(FCV和VS-FCV)比單一毒株疫苗能刺激產(chǎn)生更廣泛的交叉中和抗體，并且能夠使免疫貓當(dāng)面臨一個(gè)伴隨致死性系統(tǒng)疾病的同源FCV株感染時(shí)臨床癥狀減輕氣Lappin將SPF貓接種滅活或減毒活FVR

8、CP(2個(gè)改性的活的FVK、FCV、FeLV)疫苗后，兩個(gè)FVRCP疫苗對(duì)FCV血清反應(yīng)率間沒有數(shù)據(jù)上的差別性還有學(xué)者對(duì)該類疫苗接種部位、接種時(shí)間及非特異保護(hù)作用進(jìn)行研究。Ippin等將SPF貓接種FVRCP疫苗，鼻內(nèi)接種與注射接種FVRCP疫苗的貓比較，F(xiàn)CV攻毒后，更有可能在1d和14d對(duì)血清轉(zhuǎn)化(疫苗產(chǎn)生抗體),oWilson等研究發(fā)現(xiàn)，同時(shí)在貓不同部位注射佐劑疫苗FeLV和貓多價(jià)疫苗或單次注射二者的混合疫苗后，能對(duì)FeLV,FCV,FHV,FPV強(qiáng)毒攻擊產(chǎn)生相同的保護(hù)效果。兩種注射方式在臨床評(píng)分或低水平持續(xù)抗原血癥上與對(duì)照組相比差異顯著，Schultz等研究發(fā)現(xiàn)，在16周或以上接種單劑

9、帶的改性活病毒貓核心疫苗(抗FPLV,FCV和FHV)可以提供高比例動(dòng)物的長(zhǎng)期免疫力，同時(shí)也能增加群體免疫何。Bradley等研究發(fā)現(xiàn)，鼻內(nèi)接種減毒活FHV-1疫苗和FCV疫苗的貓能減少由實(shí)驗(yàn)室感染的支氣管敗血波氏桿蔭引起的臨床癥狀，這個(gè)非特異性免疫有利于抵抗疫苗不可用的感染并在疫苗引起體液免疫之前起到保護(hù)作用叫。2新型疫苗2.1亞單位疫苗此類疫苗以生物化學(xué)和物理方法從病毒培養(yǎng)物中提取、純化有特異性的抗原而制成。FCV的結(jié)構(gòu)蛋白主要由VP1、VP2組成，其中衣殼蛋勺VP1是誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫反應(yīng)的主要結(jié)構(gòu)蛋白，由于它只含有病原體的一部分，不會(huì)導(dǎo)致動(dòng)物發(fā)病。Komolafe等報(bào)道了FCV亞單位疫苗

10、，該疫苗來自于與整個(gè)FCV抗原相似的亞單位組成。當(dāng)致命毒株攻毒時(shí)疫苗對(duì)貓有保護(hù)作用，而對(duì)照組則出現(xiàn)了FCV引起的典型臨床和病理癥狀網(wǎng)。2.2活病毒載體疫苗此類疫苗是將外源基因插入到某些病毒載體基因組內(nèi)，使之高效表達(dá)但不影響該疫苗株的正常生存與繁殖。Yokoyama等將編碼FCV-F4株衣殼蛋白整個(gè)開放閱讀框的基因插入到FHV-1的胸仟激酶缺陷突變株(c7301dltk)的缺失位點(diǎn)(Smaisitc)o重組病毒設(shè)計(jì)成C7301dlTK-CaPo通過眼內(nèi)、鼻腔和口腔途徑接種貓開展體內(nèi)試驗(yàn)，免疫貓?jiān)诤艽蟪潭壬夏艿挚褂H本FCVF4株和FHV1C7301株的致命感染°隨后又構(gòu)造了進(jìn)一步改進(jìn)的重

11、組FHV-1(dlTK(gCp)-Cap),它在C7301dlTK-CapFCV前體衣殼蛋白基因上游帶有一個(gè)假定的FHV-lgC啟動(dòng)子序列。通過試騎證實(shí)dlTK(gCp)-Cap的FCV免疫原性抗原高表達(dá),經(jīng)致死性的FCV攻毒，顯示含有dITK(gCp)-Cap的疫苗比含有C7301dITK-Cap的疫苗更有效啊。Mccabe等在構(gòu)建了表達(dá)FCVF9株衣殼基因的減毒重組黏液瘤病毒之后，將FCVF9、【頂)15的衣殼蛋白基因分別插入到黏液瘤生長(zhǎng)因子(MGF)位點(diǎn)、絲氨酸蛋白前抑制劑(SERP2)基因位點(diǎn),生產(chǎn)了一個(gè)表達(dá)FCVF9和LS015衣殼蛋白基因的二價(jià)黏液瘤重組體。免疫貓能夠?qū)9株和LS

12、015株產(chǎn)生高水平的血清中和抗體。目前還沒有證據(jù)證明黏液瘤-FCV重組病毒從免疫的貓到未免疫的貓之間傳播.這種嵌合疫茁可能對(duì)廣泛的FCV株產(chǎn)生有效的保護(hù)作用叫。2.3核酸疫苗此類疫苗是把外源基因克隆到其核質(zhì)粒表達(dá)載體上，然后將重組質(zhì)粒DNA直接注射到動(dòng)物體內(nèi)，通過外源基因在體內(nèi)表達(dá)產(chǎn)生的抗原激活機(jī)體的免疫系統(tǒng)，進(jìn)而引發(fā)免疫反應(yīng)。D、A疫苗不包含活病毒或人工佐劑，具有潛在的廣泛用途。Sonunerville等將貓接種包含ECV-F9株成熟衣殼蛋白的質(zhì)粒(pF9VAC),利用異源FCVLS027株進(jìn)行攻毒試驗(yàn)，雖然全部貓都出現(xiàn)臨床癥狀，但是疫苗組的直腸溫度和一般的臨床癥狀評(píng)分都顯著低于對(duì)照組，并且

13、在潰瘍分布上也存在顯著的差異。雖然兩組在感染初期都沒有檢測(cè)到血清學(xué)反應(yīng)，但是在感染后期疫苗組滴度普遍高于對(duì)照組。結(jié)果顯示，DNA疫苗對(duì)FCV感染起到部分保護(hù)作用(國(guó)。2.4病毒樣顆粒疫苗FCV成熟的衣殼蛋白能夠自我組裝成空衣殼即病毒樣粒子(VLPs),形態(tài)和抗原與天然毒株相似，包含一個(gè)分子量約為60kDa的衣殼蛋白，它不具有感染性。新的基于VLPs免疫原性的免疫策略能夠提供改進(jìn)抗FCV感染的安全性。Martino等發(fā)現(xiàn)，利用桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)生成的FCV衣殼蛋白產(chǎn)生的VLPs能夠與FCV抗血清反應(yīng)。VLPs免疫家兔，能引起對(duì)臨床樣本中分離到的一些FCV株的中和抗體。說明利用桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)生成的

14、FCV衣殼蛋白可能作為一個(gè)安全有效的抗FCV的重組疫苗，該垂組疫苗有助描述VLPs在抗原不同F(xiàn)CV感染的效果，F(xiàn)CV-VLP被看作是抗FCV感染的候選疫苗唯3結(jié)語(yǔ)由于FCV的變異和相關(guān)致死性疾病的發(fā)生，現(xiàn)在的疫苗很多都失去了效力，免疫失敗的案例時(shí)有發(fā)生，迫切地需要制備新型有效的疫苗。隨著反向遺傳操作技術(shù)的發(fā)展，應(yīng)用RNA病毒反向遺傳系統(tǒng)可以重現(xiàn)病毒的生活周期和感染模式，對(duì)闡明病毒的起源、致病機(jī)制和免疫交又保護(hù)提供一種切實(shí)可行的方法。我們課題蛆正致力于利用反向遺傳操作技術(shù)，制備一種新型疫苗，進(jìn)而減少由FCV引起的致死性疾病的發(fā)生。參考文獻(xiàn)：(IDemanmarcMGDucatelleRV.Bil

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