雙歧桿菌及靈芝孢子對胃腸菌群失調(diào)的預(yù)防

1、雙歧桿菌及靈芝孢子對胃腸菌群失調(diào)的預(yù)防                           作者：龍世棋，左麗，陳阿英，崔冬冰，鐘志強  【摘要】  目的： 探討雙歧桿菌、赤靈芝孢子及其聯(lián)合制劑對小鼠胃腸菌群失調(diào)的預(yù)防作用，為臨床用藥提供實驗依據(jù)。方法： 用不同劑量雙歧桿菌、靈芝孢子粉及其聯(lián)合制劑灌胃7 d，

2、然后林可霉素連續(xù)灌胃7 d，計數(shù)直腸成型糞便菌落。結(jié)果： （1）各預(yù)防組需氧及厭氧菌落數(shù)均明顯高于菌群失調(diào)組（P< 0.01）；（2）雙歧高劑量組需氧菌落數(shù)較正常對照組差異無顯著性（P0.05）；（3）靈芝孢子高劑量組厭氧菌落數(shù)較正常對照組差異無顯著性（P0.05）；中、低劑量組需氧菌落數(shù)較正常對照組差異無顯著性（P0.05）；（4）聯(lián)合制劑高劑量組厭氧菌落數(shù)較正常對照組差異無顯著性（P0.05）。結(jié)論： 雙歧桿菌、赤靈芝孢子、聯(lián)合制劑有一定預(yù)防菌群失調(diào)作用。 【關(guān)鍵詞】  胃腸疾病； 細(xì)菌，厭氧； 靈芝； 小鼠； 腸道菌群失調(diào)； 雙歧桿菌； 靈芝孢子Abstract Obje

3、ctive: To investigate the preventive effects of bifidobacterium, Ganoderma lucidium spore and their combination in alteration of intestinal flora of mouse. Methods: Mice were given orally with bifidobacterium, Ganoderma spore or combination of the both for 7 days. Then, intragastric administration w

4、as carried out with lincomycin to the mice for other 7 days. The microbe colonies obtained from the rectum shaped stool were counted. Result：1. Colony numbers of aerobian and anaerobian in experimental groups were bigger than those in intestinal flora disorder group （P<0.01）; 2. Aerobian colony n

5、umbers in high dosage bifidobacterium group did not differ from that of control group（P>0.05）; 3. Anaerobian colony number in high dosage of G.lucidium spore group did not differ from that of control group（P>0.05）; Aerobian colony numbers in middle and low dosage of G.lucidium spore groups did

6、 not differ from that of control group（P>0.05）; 4. Anaerobian colony number in high dosage of combination group did not differ from that of control group（P>0.05）.Conclusion: bifidobacterium,G. lucidium spore and their combination have preventive effects on alteration of intestinal flora in mou

7、se.Key words gastrointestinal diseases; bacteria,anaerobic; ganoderma lucidum; mice; alteration of intestinal flora; bifidobacterium; Ganoderma spore腸道菌群是由種類繁多的大量微生物組成的復(fù)雜的生態(tài)系統(tǒng)，與宿主的生長、發(fā)育、物質(zhì)代謝和衰老等有密切關(guān)系。目前，臨床上有許多因素可以導(dǎo)致菌群失調(diào)，抗生素的不合理使用就是其中之一。長期大量使用廣譜抗生素不僅能抑制或殺死致病菌，而且也能作用于對抗生素敏感的正常菌群1,2。目前，微生態(tài)制劑在預(yù)防急慢性感染性腹瀉

8、、抗生素相關(guān)性腹瀉、腸易激綜合征、根除幽門螺旋桿菌輔助治療等療效較為肯定3。2006年8月 2007年6月對雙歧桿菌、靈芝孢子及聯(lián)合制劑預(yù)防菌群失調(diào)作用效果進行了研究，報告如下。1  材料與方法1.1  主要試劑全破壁純赤靈芝孢子膠囊0.3 g/顆，雙歧桿菌膠囊0.3 g/顆，香港盈康科技控股國際有限公司生產(chǎn)。鹽酸林可霉素注射液0.6 g（2 ml），福建省福清藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。1.2  實驗動物昆明種清潔級小白鼠，體重（20±2）g，由貴州省實驗動物中心提供。1.3  實驗設(shè)備恒溫培養(yǎng)溫箱，厭氧箱，超凈工作臺,營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，MRS培養(yǎng)基。1

9、.  方法取昆明種清潔級小鼠110只，隨機分為靈芝預(yù)防高、中、低劑量組；雙歧預(yù)防高、中、低劑量組；聯(lián)合預(yù)防高、中、低劑量組及正常對照組、 菌群失調(diào)組。每組10只，雌雄各半。藥物處理及給藥：靈芝預(yù)防組給予靈芝孢子粉，用無菌蒸餾水溶解干粉后灌胃，高、中、低劑量組分別為2.5、1.25、0.625 g·-1·d-1。 雙歧預(yù)防組給予雙歧桿菌活菌制劑，用無菌蒸餾水溶解干粉后灌胃，高、中、低劑量組分別為7.5、3.75、1.875 g·-1·d-1。聯(lián)合預(yù)防組給予靈芝孢子粉及雙歧桿菌活菌制劑，用無菌蒸餾水溶解干粉后灌胃，高、中、低劑量組分別為5、2.5、

10、1.25 g·-1·d-1。連續(xù)給藥7 d。除正常對照組外，給予其余各組鹽酸林可霉素注射液500 mg·-1·d-1,連續(xù)灌胃7 d。于停藥第15天，分別進行檢測。頸椎脫臼處死小鼠，無菌試管提前稱重并編好序號。取直腸成型糞便3份,置無菌試管內(nèi)封口、稱重（總重量減空試管重量即糞便重量）后,每管按10 %稀釋度加入適量NS充分混勻,10-110-9連續(xù)10倍倍比稀釋,每稀釋度取0.01 ml,依次接種于MRS培養(yǎng)基及肉湯培養(yǎng)基表面，MRS培養(yǎng)基置于厭氧培養(yǎng)箱培養(yǎng)。按細(xì)菌活菌計數(shù)方法選擇10-5、10-6、10-7有氧培養(yǎng)平板,10-6、10-7、10-8厭氧

11、培養(yǎng)平板計數(shù)4。1.5  統(tǒng)計學(xué)處理菌落記數(shù)結(jié)果取lg對數(shù),以x ±s表示。數(shù)據(jù)分析采用SPSS11.1統(tǒng)計軟件包，配對t檢驗。2  結(jié)果2.1  菌群定量分析結(jié)果正常菌群組與菌群失調(diào)組菌群定量分析結(jié)果見表1。由表可以看出經(jīng)鹽酸林可霉素灌胃7 d后，菌群失調(diào)組需氧及厭氧培養(yǎng)菌落記數(shù)均明顯少于正常對照組（P0.01）。觀察發(fā)現(xiàn)菌群失調(diào)小鼠排稀便，多精神不振，毛發(fā)有不同程度黏濕，說明模型小鼠腸道內(nèi)微生物種群平衡遭到明顯破壞,出現(xiàn)菌群失調(diào)癥。表1  正常對照組與菌群失調(diào)組菌群數(shù)（略）2.2  靈芝預(yù)防組菌群定量檢測見表2。由表2 可以看出各

12、劑量預(yù)防組不同程度的預(yù)防了由林可霉素造成的菌群數(shù)量減少（P0.01）。但靈芝對需氧菌的預(yù)防效果隨劑量增大而減小,而對厭氧菌的預(yù)防效果隨劑量增大而增大，具體原因有待進一步研究。中、低劑量組需氧菌較正常對照組無統(tǒng)計學(xué)差異（P0.05），高劑量組厭氧菌較正常對照組無統(tǒng)計學(xué)差異（P0.05），說明服用靈芝孢子能預(yù)防菌群失調(diào)導(dǎo)致的細(xì)菌數(shù)量減少。2.3  雙歧桿菌預(yù)防組菌群定量檢測見表3。由表3 可以看出不同劑量的雙歧桿菌制劑不同程度的預(yù)防了由林可霉素造成的菌群數(shù)量減少（P 0.01）。對需氧菌的預(yù)防效果隨劑量增加而增大，高劑量組需氧菌較正常組無統(tǒng)計學(xué)差異（P0.05），說明服用雙歧桿菌制劑能預(yù)

13、防菌群失調(diào)導(dǎo)致的細(xì)菌數(shù)量減少。表2  靈芝預(yù)防組菌群定量檢測（略）2.4  聯(lián)合制劑預(yù)防組菌群定量檢測見表4。不同劑量的聯(lián)合制劑不同程度的預(yù)防了由林可霉素造成的菌群數(shù)量減少（P0.01），預(yù)防效果隨劑量增大而增大。聯(lián)合高劑量組厭氧菌落數(shù)與正常對照組比較差異無顯著性（P0.05）。表3  雙歧桿菌預(yù)防組菌群定量檢測（略）表4  聯(lián)合預(yù)防組菌群定量檢測（略）1         3  討論在正常人和動物腸道內(nèi)各菌群間按一定比例組合，互相制約，互相依存，在質(zhì)和量上形成一定的

14、生態(tài)平衡。若機體的內(nèi)外環(huán)境發(fā)生某些變化，導(dǎo)致細(xì)菌繁殖顯著超過正常值的40%以上，則引起腸道食物的分解紊亂，進而出現(xiàn)腸菌群失調(diào)癥狀，臨床上表現(xiàn)為急性或慢性腹瀉。保護正常菌群的生態(tài)環(huán)境，提高機體免疫力能有效的防治菌群失調(diào)1。靈芝孢子是靈芝生長成熟期從菌蓋彈射出來極其細(xì)小的孢子，為靈芝的生殖細(xì)胞，具有靈芝的全部遺傳活性物質(zhì)，可以提高小鼠細(xì)胞免疫和體液免疫水平，增強巨噬細(xì)胞吞噬功能以及體內(nèi)抗體的產(chǎn)生57。本實驗發(fā)現(xiàn)，靈芝孢子能預(yù)防由林可霉素造成的菌群數(shù)量減少（P0.01），但靈芝對需氧菌的預(yù)防效果隨劑量增大而減小,而對厭氧菌的預(yù)防效果隨劑量增大而增大。提示，靈芝孢子可能具有一定的預(yù)防菌群失調(diào)作用。腸道

15、微生態(tài)平衡的維持還依賴于腸道優(yōu)勢菌雙歧桿菌的作用。雙歧桿菌是非致病性的、能抵抗胃酸和腸道酶類消化、能附著于小腸上皮并能調(diào)節(jié)黏膜免疫反應(yīng)的微生物。雙歧桿菌的細(xì)胞壁可以粘附于腸黏膜上皮細(xì)胞阻止致病菌的入侵，同時通過多種方式抑制有害菌的生長8。目前認(rèn)為雙歧桿菌通過代謝產(chǎn)生大量的乳酸和乙酸,降低腸道的pH及Eh值, 改善局部微環(huán)境, 促進腸菌群失調(diào)的恢復(fù)9。某些雙歧桿菌合成的小分子量親脂分子具有明顯的抗菌活性，可以抑制細(xì)菌進入細(xì)胞內(nèi)，甚至殺滅細(xì)胞內(nèi)的細(xì)菌10。本實驗中，雙歧桿菌對需氧菌群失調(diào)的預(yù)防作用隨劑量增大而提高，且高劑量預(yù)防組需氧菌群數(shù)較正常對照組無明顯差異（P0.05）；對厭氧菌群失調(diào)的預(yù)防作

16、用未觀察到明顯劑量依賴關(guān)系，提示雙歧桿菌可能對腸道需氧菌群失調(diào)的預(yù)防作用強于對厭氧菌群失調(diào)的預(yù)防作用。將兩藥合用發(fā)現(xiàn)，無論對需氧菌群和厭氧菌群的菌落數(shù)都隨劑量增大而增大，聯(lián)合高劑量組厭氧菌落數(shù)與正常組差異無顯著性（P0.05）。綜上所述,本研究證實，赤靈芝孢子和雙歧桿菌是一種較為有效的預(yù)防菌群失調(diào)劑,聯(lián)合使用效果優(yōu)于單獨使用，但無統(tǒng)計學(xué)意義。其在糾正腸道菌群失調(diào)過程中的具體療效及功能成分,需要進一步研究。4 【】  1呂秀榮，李麗華，喬傳武.常見菌群失調(diào)誘因和分類及防治J.誤診學(xué)雜志，2004（3）：458-459.2Beaugerie L, Petit JC. Micro

17、bial-gut interactions in health and disease. Antibiotic-associated diarrhoea J. Best Pract Res Clin Gastroenterol, 2004, （2） : 337-352.3黃瑞珍,劉新月.微生態(tài)制劑在消化系統(tǒng)疾病中的應(yīng)用J.中國用藥評價與分析,2006（3）:156- 158.4張子康,何光澤.醫(yī)學(xué)微生物學(xué)與免疫學(xué)實驗教程M.四川：技術(shù)出版社,2000：112-113.5張偉，曾園山.靈芝孢子的研究進展J.中西醫(yī)結(jié)合學(xué)報，2004（6）：463-465.6張衛(wèi)明，孫曉明，吳素玲，等.靈芝孢子粉免疫調(diào)節(jié)作用研究J.中國野生植物資源，2000（1）：19-20，34. 7朱繼紅,李鐵民,陳穎,等.靈芝干膏和靈芝孢子粉對小鼠免疫功能的影響J.食用菌學(xué)報,