動物細胞工程實驗教學大綱

1、動物細胞工程實驗教學大綱課程名稱：動物細胞工程課程編號：0321012課程性質(zhì)：非獨立設(shè)課 課程屬性：專業(yè)課 學時學分：總學時40，總學分2，試驗學時10應(yīng)開實驗學期：三 年級 六 學期適應(yīng)專業(yè)：生物工程、生物技術(shù)專業(yè)先修課程：普通生物學;微生物學;細胞生物學；遺傳學大鋼主撰人： 王新衛(wèi) 大綱審核人：張玉龍 張書松 一、實驗課程簡介細胞工程學是應(yīng)用細胞生物學和分子生物學原理與方法，在細胞水平上研究改造生物遺傳特性，以獲得具有目標性狀的細胞系、生物體或次生物的有關(guān)理論和技術(shù)的學科。它是一門生物科學理論和工程技術(shù)相結(jié)合的綜合性學科。細胞工程是生物技術(shù)的重要組成部分，同時也是生物學研究的重要技術(shù)工具

2、。通過本課程實驗課的學習和操作了解生物組織、器官及其細胞離體培養(yǎng)的基本技術(shù)，重點掌握細胞培養(yǎng)和細胞融合技術(shù)，為從事生物學和生物工程領(lǐng)域的相關(guān)科研、教學及生產(chǎn)工作奠定良好技術(shù)基礎(chǔ)。二、本課程實驗教學目的與基本要求通過實驗教學，使學生重點掌握細胞工程的基本操作技術(shù):無菌操作、培養(yǎng)基制備、動物原代及傳代細胞培養(yǎng)、細胞融合及單克隆抗體制備等技術(shù)；了解細胞大批量培養(yǎng)方法、植物細胞培養(yǎng)、轉(zhuǎn)基因技術(shù)、細胞重組與克隆技術(shù)、動物克隆等知識。通過實驗課的教學最終達到掌握基本實驗技能并培養(yǎng)學生創(chuàng)新能力的目的。要求學生有強烈的事業(yè)心，熱愛生物技術(shù)專業(yè)、動物醫(yī)學專業(yè)，理論和實踐相結(jié)合，更深入的理解和掌握細胞工程原理與技

3、術(shù)。三、實驗項目與學時分配實驗序號實驗項目名稱學時要求類型每組人數(shù)0321012+01基礎(chǔ)試驗技術(shù)2必做基礎(chǔ)性30321012+02培養(yǎng)基的制備2必做基礎(chǔ)性30321012+03原代（雞胚成纖維）細胞培養(yǎng)技術(shù)2必做創(chuàng)新性30321012+04細胞傳代培養(yǎng)技術(shù)2必做創(chuàng)新性30321012+05細胞凍存與復(fù)蘇2必做創(chuàng)新性30321012+06細胞融合2必做創(chuàng)新性3合計12四、實驗方式與基本要求教學形式：實驗前要求學生預(yù)習實驗內(nèi)容。實驗課上指導(dǎo)教師講述實驗的基本原理、方法及儀器的使用，并指導(dǎo)學生獨立完成具體實驗步驟，解決實驗中出現(xiàn)問題，分析實驗結(jié)果。完成實驗報告。要求：嚴格遵守實驗室紀律。五、考核方

4、式與成績評定本課程實驗設(shè)置基本按照本學科研究的基本環(huán)節(jié)設(shè)計，因此，整個教學環(huán)節(jié)實行模擬研究型方式，每次實驗學生進行詳細觀察記載，實驗結(jié)束后形成完整實驗資料，在此基礎(chǔ)上撰寫實驗報告，作為實驗考核的主要依據(jù)；同時，每次實驗由指導(dǎo)老師對操作環(huán)節(jié)進行等級評定。最后的實驗成績按照操作成績和報告成績綜合評分。實驗成績占整個成績的20%。六、參考書目七、實驗內(nèi)容安排實驗一、器械的清洗與消毒一、實驗學時：2學時二、實驗?zāi)康模簩W習并掌握細胞培養(yǎng)使用的器皿、器械的洗滌和消毒。三、實驗內(nèi)容：1清洗：(1)玻璃器皿的清洗；(2) 塑料器皿的清洗；(3) 膠塞等橡膠類的清潔；(4) 金屬器械的清洗；(5) 除菌濾器的清

5、潔。2包裝：1) 瓶類；2) 小瓶皿、膠塞、刀剪等器械；3) 吸管、滴管；4) 濾器、濾瓶、橡皮管；5) 無菌衣、帽、口罩。3消毒滅菌：1）熱滅菌；2) 蒸氣滅菌；3) 濾過除菌；4)紫外線；5)熏蒸消毒；6)煮沸消毒；7)化學消毒。四、實驗要求：寫出實驗報告：記述玻璃器皿的清洗步驟和操作要領(lǐng)，分析不同的消毒除菌方式各適用于什么物品或場所的消毒除菌。五、實驗用品與儀器：1儀器和用品：超凈工作臺、干燥箱、高壓鍋、過濾器、紫外燈、0. 22m微孔濾膜。2試劑：75酒精、1%。新潔爾滅、高錳酸鉀、重鉻酸鉀、濃硫酸。實驗二、細胞培養(yǎng)液的配制一、實驗學時：2學時二、實驗?zāi)康模菏炀氄莆张囵B(yǎng)基（RPM116

6、40或DMEM）的配制，了解其他培養(yǎng)基的配制方法。2試劑：雙蒸水、小牛血清、合成培養(yǎng)基（RPMI1640), NaHCO3。三、實驗內(nèi)容：1過濾器的準備和安裝2合成培養(yǎng)基的配制3小牛血清的處理4生長培養(yǎng)基的配制四、實驗要求：寫出實驗報告：列出詳細實驗操作過程，并在每步操作之后標明該步驟常發(fā)生的問題，指出如何解決這些問題及該步驟應(yīng)注意的事項。五、實驗用品與儀器：1儀器和用品：超凈工作臺、蠕動泵1套、濾器1套、蒸餾器、高壓蒸汽滅菌鍋、磁力攪拌器、pH計、3 000 ml錐形瓶、250 ml或500 ml培養(yǎng)液瓶、0. 22 m的微孔濾膜、冰箱實驗三、原代細胞培養(yǎng)一、實驗學時：2學時二、實驗?zāi)康模赫?/p>

7、握原代細胞培養(yǎng)的一般方法和步驟及培養(yǎng)過程中的無菌操作技術(shù)，熟悉原代培養(yǎng)細胞的觀察方法。三、實驗內(nèi)容：1胰酶消化法2組織塊直接培養(yǎng)法四、實驗要求：寫出實驗報告：記錄實驗過程和細胞生長情況，分析防止污染的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。五、實驗用品與儀器：1儀器：培養(yǎng)箱（調(diào)整至37）、培養(yǎng)瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、紗布、手術(shù)器械、血細胞計數(shù)板、離心機、水浴箱（37 )2材料：胎鼠或新生鼠。3試劑：1640培養(yǎng)基（含10小牛血清）,0.25胰蛋白酶、Hank's液、碘酒、75酒精。實驗四、細胞的傳代培養(yǎng)一、實驗學時：2學時二、實驗?zāi)康模簩W習掌握細胞的傳代培養(yǎng)方法。三、實驗內(nèi)容：細胞傳代培養(yǎng)：四

8、、實驗要求：寫出實驗報告：簡述傳代培養(yǎng)的步驟和注意事項，并指出哪些是關(guān)鍵步驟，分析傳代成敗的原因。五、實驗用品與儀器：1儀器：倒置顯微鏡、培養(yǎng)箱、超凈工作臺、培養(yǎng)瓶、吸管、廢液缸等。2材料：貼壁細胞株。3試劑：0.25胰酶,1640培養(yǎng)基（含10小牛血清）。實驗五、細胞的凍存和復(fù)蘇一、實驗學時：2學時二、實驗?zāi)康模赫莆占毎麅龃娴姆椒ǎ炀氝M行細胞凍存與復(fù)蘇操作。三、實驗內(nèi)容：1凍存2復(fù)蘇四、實驗要求：寫出實驗報告，列出細胞凍存與復(fù)蘇的詳細過程，并注明各過程應(yīng)注意的事項。統(tǒng)計細胞復(fù)蘇后的生長情況，對結(jié)果進行分析。五、實驗用品與儀器：1儀器：4冰箱、-70冰箱、液氮罐、離心機、水浴鍋、微量加樣器、凍存管（塑料螺口專用凍存管或安瓶瓶）、離心管、吸管等。2材料：細胞懸液。3試劑：0.25胰酶、細胞培養(yǎng)基、凍存液。實驗六、動物細胞融合一、實驗學時：2學時二、實驗?zāi)康模?.了解PEG誘導(dǎo)細胞融合的基本原理。2.通過PEG誘導(dǎo)雞紅細胞之間的融合實驗，初步掌握細胞融合技術(shù)。四、實驗內(nèi)容：1.采取雞血2.制備細胞懸液。3.細胞計數(shù)。4.細胞融合5.計算細胞融合率五、實驗要求：寫出實驗報告，簡述動