體外診斷試劑生產(chǎn)及質(zhì)量控制技術指導原則-金標類

1、體外診斷試劑生產(chǎn)及質(zhì)量控制技術指導原則金標類診斷試劑生產(chǎn)及質(zhì)量控制技術指導原則（報批稿）2009-05-15 09:00    金標類試劑是指應用膠體金免疫技術，采用膠體金標記的抗體或抗原包被于玻璃纖維膜、聚脂膜或其他載體，將相關抗原或抗體固相連接在硝酸纖維膜，應用層析法的原理檢測樣品中的抗原或抗體的快速檢測試劑。    本技術指導原則僅適用于第三類體外診斷試劑中金標類試劑的生產(chǎn)及質(zhì)量控制，其他類金標試劑可作參考。國家藥品監(jiān)督管理部門將根據(jù)科學技術發(fā)展的需要對本技術指導原則適時組織修訂。    一、基本原

2、則    （一）診斷試劑的研制、生產(chǎn)用的各種原料、輔料應當制定相應的質(zhì)量指標，并應符合有關法規(guī)的要求。    （二）診斷試劑的生產(chǎn)企業(yè)應具備相應的專業(yè)技術人員、儀器設備以及適宜的生產(chǎn)環(huán)境，獲得醫(yī)療器械生產(chǎn)許可證；同時，生產(chǎn)企業(yè)應按照體外診斷試劑生產(chǎn)實施細則（試行）的要求建立相應的質(zhì)量管理體系，形成文件和記錄，加以實施并保持有效運行；生產(chǎn)企業(yè)還應該通過體外診斷試劑生產(chǎn)企業(yè)質(zhì)量管理體系考核評定標準（試行）的考核。    （三）診斷試劑的研制應當按照科學、規(guī)范的原則組織研發(fā)，各反應條件的選擇和確定應符合基本的科

3、學原理。    （四）研制生產(chǎn)過程中所用的材料及工藝，應充分考慮可能涉及的安全性方面的事宜。    （五）生產(chǎn)和質(zhì)量控制的總體目標：保證試劑使用安全、質(zhì)量穩(wěn)定、工藝可控、檢測有效。    二、原材料質(zhì)量控制    （一）主要生物原料    與生產(chǎn)的產(chǎn)品質(zhì)量最密切相關的生物原料包括各種天然抗原、重組抗原、單克隆杭體、多克隆抗體以及多肽類生物原科。這類原料可用于膠體金標記、包被硝酸纖維膜及用于制備質(zhì)控線的抗原或抗體等。使用前應按照工藝要求對這類生物原

4、料進行質(zhì)量檢驗，以保證其達到規(guī)定的質(zhì)量標準。主要生物原料若為企業(yè)自己生產(chǎn)，其工藝必須相對穩(wěn)定；若購買，其供應商要求相對固定，不能隨意變更供應商，如果主要原料（包括工藝）或其供應商有變更，應依據(jù)國家相關法規(guī)的要求進行變更申請。    主要生物原料的常規(guī)檢驗項目一般包括：    1外觀    肉眼觀察，大部分生物原料為澄清均一的液體，不含異物、渾濁或搖不散的沉淀或顆粒；或者為白色粉末，不含其他顏色的雜質(zhì)；特殊生物原料應具備相應外觀標準。    2純度和分子量  

5、;  主要經(jīng)SDS-PAGE 電泳后，利用電泳掃描儀進行分析，也可用其他適宜的方法，如高效液相法等。根據(jù)所檢測生物原料的分子量選擇適宜的聚丙烯酰胺凝膠濃度進行電泳。一般每個電泳道加樣量為5g；電泳后的凝膠可用考馬斯亮藍染色或銀染法染色。染色后的凝膠用電泳掃描儀分析原料的純度和分子量，純度應達到相應的質(zhì)量標準，分子量大小應在正確的條帶位置。    3蛋白濃度    蛋白濃度可通過Lowry法、280nm 光吸收法、雙縮脲方法等進行檢測。    4效價    效價的測定

6、一般根據(jù)蛋白含量測定結果，通過倍比稀釋法進行。效價應達到規(guī)定的要求。    5功能性實驗    功能性實驗是指生物原料用于試劑盒實際生產(chǎn)中的情況，一般考查使用該原料的試劑的靈敏度、特異性和穩(wěn)定性等，并比較其與上批次原料的相關性。用于制備質(zhì)控線的抗原或抗體可采用其他適宜方法進行功能性實驗。    （二）生物輔料    生物輔料一般指在生產(chǎn)過程中作為蛋白保護劑用途的一類生物原料，主要包括牛血清白蛋白等。這些生物原料的質(zhì)量標準應符合中國生物制品主要原輔材料質(zhì)控標準（2000年版）規(guī)

7、定的質(zhì)量標準要求并檢驗合格，達到相應的質(zhì)量標準后方可用于生產(chǎn)。    建議對牛血清白蛋白作以下檢驗：    外觀：應為淺黃色、黃色或乳白色凍干粉末，無吸潮，無結塊，無肉眼可見的其它雜質(zhì)顆粒。    溶解性：將牛血清白蛋白配成10%溶液，溶解時間在18-26時應不大于15分鐘，pH值應為6.5?7.1。    總蛋白含量：用雙縮脲方法來測定，其標準為大于等于95%。    總蛋白中的BSA含量：采用硝酸纖維素膜電泳法，其標準為95%。 &

8、#160;  BSA的凈含量：總蛋白含量乘以總蛋白中的BSA含量，其標準為90%。    生物輔料的供應商同樣要求相對固定，不得隨意變更供應商。    （三）化學原材料    化學原材料的質(zhì)量標準參照中國生物制品主要原輔材料質(zhì)控標準（2000年版）分析純級別進行檢驗。主要的檢測指標包括：外觀、一般鹽類檢測、溶液pH值、溶解情況、干燥失重、熾灼殘渣等。    主要化學原材料的供應商要求相對固定，不得隨意發(fā)生變更?；瘜W原材料在購入時，原材料的生產(chǎn)商必須提供該批次化學原材

9、料的質(zhì)量保證材料和質(zhì)量檢驗報告，其質(zhì)量標準應達到生產(chǎn)所需的質(zhì)量標準。    （四）其他物料    硝酸纖維素膜、玻璃纖維或聚酯纖維膜及濾紙、玻璃纖維膜等在購入時，其生產(chǎn)商必須提供該批次材料的質(zhì)量保證材料和質(zhì)量檢驗報告，其質(zhì)量標準應達到生產(chǎn)所需的質(zhì)量標準。    1硝酸纖維素膜    硝酸纖維素膜應具有厚度、孔徑大小等要求，毛細遷移速度，韌性（切割時膜破損引起的廢品率）、均一性（厚度偏差范圍、毛細遷移速度偏差范圍）應達到規(guī)定的要求。    2玻璃纖

10、維或聚酯纖維膜及濾紙    玻璃纖維或聚酯纖維膜及濾紙應具有厚度、毛細遷移速度、重量等要求，均一性（厚度偏差范圍，毛細遷移速度偏差范圍，重量偏差范圍）應達到規(guī)定的要求。    3玻璃纖維膜    適用于全血檢測的金標試劑，過濾紅細胞所用玻璃纖維膜或其他材料具有不吸附蛋白質(zhì)的特點，應具有厚度、孔徑大小等要求。    4塑料襯片    塑料襯片應具有厚度、硬度（切割時一次未能整條切下的百分率）、尺寸（與標識吻合）、粘性（切割時造成玻璃纖維與塑料襯片分

11、離的百分率）等要求。    5其他    粘膠紙、鋁箔袋、說明書、包裝外盒、瓶子和干燥劑等，應參照國家食品藥品監(jiān)督管理局頒布的體外診斷試劑說明書編寫指導原則和醫(yī)療器械說明書、標簽和包裝標識管理規(guī)定建立相應質(zhì)量控制標準。    三、試劑盒的制備    本類試劑的生產(chǎn)包括膠體金及膠體金標記抗原或抗體的制備，膠體金標記的包被，檢測線及質(zhì)控線的制備，膠體金標記物、包被抗原或抗體等濃度確定，各種工作溶液的配置等步驟，并通過產(chǎn)品的半成品檢驗和成品檢驗兩個質(zhì)控過程來保證其質(zhì)量符合規(guī)定。&#

12、160;   （一）膠體金標記物的制備    采用枸櫞酸三鈉還原法或其他方法制備膠體金，膠體金顆粒大小應符合規(guī)定，膠體金標記物在510?560nm波長處應有最大吸收值，置2?8保存，應在規(guī)定的保存期內(nèi)使用。采用合適的方法確定膠體金標記物、包被抗原或抗體工作濃度，將工作濃度的膠體金標記物吸附于玻璃纖維或聚酯纖維膜上。    （二）檢測線及質(zhì)控線的制備    取已確定使用濃度的相關抗原或抗體，在硝酸纖維素膜上制備檢測線，應用同樣方法制備質(zhì)控線，根據(jù)生產(chǎn)工藝在規(guī)定的溫度、濕度條件下干燥，置規(guī)

13、定的濕度（通過驗證方法確定相對濕度要求）條件下存放。檢測線與質(zhì)控線應具有間隔距離要求，應對所用的金標用玻璃纖維及硝酸纖維素膜等進行質(zhì)量檢測，如尺寸、外觀、包裝及吸附性能等，并記錄批號、數(shù)目、標識，不同批號的玻璃纖維及硝酸纖維素膜不能混用。    （三）貼膜、切割、裝袋    貼膜、切割及裝袋應在具有相應濕度（通過驗證方法確定相對濕度要求）條件下操作，切割的膜條應有寬度要求。    四、質(zhì)量控制    用于半成品及成品質(zhì)量控制的質(zhì)控品包括靈敏度、特異性、精密度等指標，如具有國家

14、標準品（參考品）的產(chǎn)品應使用國家標準品（參考品）或經(jīng)國家標準品（參考品）標化的企業(yè)參考品進行檢驗。若某類試劑沒有國家標準品（參考品），則使用企業(yè)參考品，企業(yè)參考品的制備應有規(guī)范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應不低于國家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準的同類產(chǎn)品的質(zhì)量。    （一）半成品質(zhì)量控制    1半成品抽樣    檢驗人員按批號抽取規(guī)定數(shù)量的半成品，作號標記，待檢。    2半成品檢驗    對所抽樣的半成品做陰/

15、陽性參考品符合率、靈敏度、特異性、精密度等試劑盒性能方面的檢測，應符合質(zhì)量標準。    企業(yè)應該對每一批試劑的半成品進行穩(wěn)定性研究，并制定相應的質(zhì)量標準。穩(wěn)定性試驗可在在特定溫度或特定條件下完成。    （二）成品質(zhì)量控制    每一批金標試劑報批批量應至少為3000人份。    一般使用國家標準品（參考品）對成品進行檢驗，并達到相應質(zhì)量要求。若該診斷試劑沒有國家標準品（參考品），則使用企業(yè)參考品，企業(yè)參考品的制備應有規(guī)范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應不低于國家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準的同類產(chǎn)品的質(zhì)量。