手把手教你做出仿制藥四條溶出曲線

1、手把手教你做出仿制藥四條溶出曲線原創(chuàng) 2016-03-09 書立 Insight數(shù)據(jù)庫讀完本文大約需要 8 分鐘2016 年 3 月 5 日，國務院辦公廳印發(fā)了關于開展仿制藥質(zhì)量和療效全都性評價的意見，仿制藥全都性評價工作正式開放。仿制藥全都性評價工作中，首先需要評價的是仿制制劑與參比制劑在體外溶出曲線要全都。然而，將仿制制劑與參比制劑做到體外四條溶出曲線全都，并不是一件簡潔的工作。作者將平日的工作閱歷總結(jié)出來，欲與大家溝通共享。 開頭前的預備將 BCS  再次分類生物藥劑學分類系統(tǒng)（BCS，biopharmaceutics

2、 classification system）是 1995 年由 Amidon 提出的基于藥物溶解性質(zhì)和滲透性差異的分類系統(tǒng)，分為四類。對于體外四條溶出曲線而言，溶解性性質(zhì)比滲透性更有用，因此依據(jù)溶解性質(zhì)的差異將 BCS 再次分類，分為 A 類（ 和 ）和 B 類（ 和 ）。之所以這樣二次分類，是由于  和 、 和 分別在體外呈現(xiàn)出相同的溶解度性質(zhì)。將化合物依據(jù) pH-溶解度差異來分類仿制藥質(zhì)量全都性評價·口服固體制劑溶出曲線測定與比較指導原則中提出，在進行溶出度試驗之前，建議繪制化合物 pH-溶解度圖。 那么依據(jù) pH-溶

3、解度的差異性，也可以將化合物分為兩類：一類是溶解度不存在 pH 依靠性或差異性。暫且將飽和溶解度無 pH 依靠性的原料藥分為 a 類。另一類是溶解度存在 pH 依靠性或差異性，其飽和溶解度隨 pH 值增加而增加，或隨 pH 值增加而降低。將這類化合物分為 b 類，比如 NAISD 類的布洛芬、雙氯芬酸鈉等。 這樣分類如何應用呢？舉個例子。如表 1 所示，雙氯芬酸鈉在不同介質(zhì)中的飽和溶解度差異性較大，再結(jié)合依據(jù)上述 BCS 的二次分類，那么可將雙氯芬酸鈉可定義為 Bb 類化合物。之所以這樣區(qū)分，是為了建立自我工作模型，以后在工作遇到相同的化合物，直接進行套用，從而降低工作量。 

4、;如何快速有效地做出四條溶出曲線？依據(jù)化合物性質(zhì)不同，其溶出曲線難易程度也是各有差別。 Aa 類 首先，最簡潔的化合物模型屬于 Aa 類，即高溶解性無 pH 依靠性藥物。假如 Aa 類藥物的參比制劑（RLD）呈現(xiàn)出四條溶出曲線如圖 1，那么在處方篩選工作中可選擇任意一種介質(zhì)作為區(qū)分介質(zhì)。當然，假如是速釋制劑，建議選擇低 pH 介質(zhì)，如 pH1.0 或 pH1.2，由于其更好的能更好的模擬體內(nèi)溶出環(huán)境。假如參比制劑的四條溶出曲線不全都，即呈現(xiàn)出 pH 依靠性（如圖 2），這說明參比制劑中存在一種或幾種 pH 依靠性輔料，而自制處方和參比處方的輔料用量不全都。如圖 2 和圖 3 示例中，

5、在 pH1.0 介質(zhì)中，仿制制劑與參比制劑的 f2 值為 80；然而在 pH6.8 和水中，f2 值為 35 和 23。之所以差異較大，緣由在于參比制劑中 pH 依靠型輔料的用量，遠大于參比制劑的用量。這種狀況需要將這些輔料用量調(diào)至跟參比全都或接近。常見存在 pH 依靠性的輔料有海藻酸鈉、卡波姆、尤特奇 EPO等等。 Ab 類 對于 Ab 類化合物，其參比制劑的溶出或釋放曲線呈現(xiàn)出 pH 依靠性一般是由于化合物的 pH-溶解度性質(zhì)。假如參比制劑的四條曲線呈現(xiàn)出全都，那可能是由于輔料抵消了原料藥的 pH-溶解度性質(zhì)。 對于 A 類化合物，尤其是 BCS 3 類化合物，除了在較高轉(zhuǎn)速下考

6、察溶出度或釋放度，建議也要對比不同轉(zhuǎn)速的溶出度差異，由于原料藥的高溶解度可能掩蓋制劑工藝過程中參數(shù)的不全都或者崩解劑用量的差異?？傮w而言，A 類化合物相對比較簡潔調(diào)整至四條曲線與參比制劑全都。  B 類 依據(jù) BCS 定義，BCS 和 類原料藥在 pH1.07.4 中，最高劑量不能溶于 250 ml 的介質(zhì)中。由于溶解度較低這一特質(zhì)，溶出度釋放也會偏慢，會造成處方或制備工藝細節(jié)在溶出曲線中被放大，因而增加了體外四條溶出曲線全都性的難度。除了共性的問題，對于 B 類原料藥，做溶出曲線時還可能存在共性問題： 每一條溶出曲線都比 RLD 快通過處方篩選，優(yōu)化崩解劑用量（0%常規(guī)用量）、親水

7、性/疏水性輔料比例、原料藥粒徑（增大粒徑）后，每一種介質(zhì)中仿制制劑的溶出仍舊比參比制劑快。這種現(xiàn)象說明影響參比制劑的溶出行為的關鍵因素不是處方因素，而是制備工藝參數(shù)。假如制粒時間過短，那么制得的顆粒就會比較疏松、孔隙率比較大。對于易溶解的 A 類化合物來說，溶解后可以形成新的孔道，有利于整體藥物的溶出。但對于 B 類化合物來說，由于低溶解性，其對工藝參數(shù)會更為敏感。假如制粒時間過長，也會存在問題。我在之前工作中，就遇到過兩個 BCS 類化合物過度制粒的例子。一個例子是，先在處方篩選時接受手工制粒，此后在放大處方時接受 625 所的濕法制粒機進行制粒。結(jié)果是，小試處方跟參比制劑全都，但放大時仿制

8、制劑在四種介質(zhì)中均比參比制劑溶出度慢（如圖 4）。另一個例子是這樣的：處方篩選時，無論如何仿制制劑的溶出度均比參比制劑快，而接受濕法制粒機制粒后，只有在固定參數(shù)、固定時間（1525 min）下，溶出曲線才全都（如圖 4）。以上兩個例子中的溶出曲線不全都，均是由于存在制粒參數(shù)引起的，也就是說，制粒是關鍵參數(shù)。遇到類似狀況，建議接受 DOE 的試驗方案，設計出合理的參數(shù)空間。但是，基于目前的審批現(xiàn)狀，找出關鍵參數(shù)是不夠的，還需要保障工藝是受控的。  三條溶出曲線對上，一條快于或慢于 RLD這是制劑工作者最糾結(jié)的狀況之一，經(jīng)常消滅在 Bb 類化合物上。例如，在 pH1.0、pH4.0、pH

9、6.8 中 f2 值50 或者甚至是 80，但在 pH5.0 中的 f2 值慘得可憐。緣由是：·pH1.0 和 pH4.0 條件下，溶解度較低，累計溶出度會受到本身溶解度的影響··pH6.8 中屬于易溶，15 min85%··pH5.0 條件剛好是最有區(qū)分的時候·這種狀況下，應當按仿制藥質(zhì)量全都性評價口服固體制劑溶出度曲線測定與比較指導原則的建議進行操作：對于溶出度受 pH 值影響較大的藥物，需要在多種 pH 介質(zhì)中進行考察，必要時可細分至 0.5。 如何選擇表面活性劑的最佳用量？對于 B 類化合物，pH 水平、膽鹽或其他表

10、面活性劑的共存等因素，都能很大程度上影響藥物的溶解性，從而影響吸取的速度和程度。在體外試驗中，經(jīng)常需要添加肯定量的表面活性劑來增加溶解度，以達到漏槽條件。但如何選擇表面活性劑的最佳用量卻是一個難題：假如用量太高，則溶出太快，不存在區(qū)分性；假如用量太低，則溶出太慢。中國、美國、日本的規(guī)定是這樣的：CFDA發(fā)布的仿制藥質(zhì)量全都性評價口服固體制劑溶出度曲線測定與比較指導原則建議，表面活性劑的濃度在 0.01%1.0（w/v）依次增加；FDA的（1092）溶出度試驗的開發(fā)和驗證中提到，表面活性劑的用量，首先應滿足表面活性劑的 CMC，其次是能夠滿足漏槽條件；日本規(guī)定的用量也是一個用量篩選過程，與 CF

11、DA 全都。鑒于仿制藥全都性評價工作的初衷是通過體外溶出試驗減低體內(nèi)生物等效的風險這一點，建議使用體內(nèi)相關的生物介質(zhì)來測定原料藥的飽和溶解度，然后測定化合物在不同濃度表面活性劑中的飽和溶解度，選擇兩者相接近。生物相關介質(zhì)如下：這里接受一個 FDA 的 QbD 案例作為說明。案例中，測定了原料藥在生物相關介質(zhì)和不同濃度 SLS 中的濃度，結(jié)果如表3：表 3. 原料藥在生物相關介質(zhì)和不同濃度 SLS 中的濃度如表 3，化合物在 1.0%  SLS 介質(zhì)中與生物相關介質(zhì)中的飽和溶解度比較接近，所以選取 1.0%  SLS 介質(zhì)以及藥典中的規(guī)定的 2.0% SLS 作為溶

12、出介質(zhì)。如圖 5 所示，化合物在 2.0%  SLS 中仿制制劑與參比制劑的溶出度全都，但是在體內(nèi)并不等效。如圖 6 所示，化合物在 1.0% 的介質(zhì)中，能夠檢測到有意變更的工藝參數(shù)（原料藥粒徑），并且得到的結(jié)果，能夠推斷是否生物等效。圖 6. 不同粒徑樣品在1%中的溶出SDS體外全都，體內(nèi)未必全都需觀看現(xiàn)象結(jié)果有時候，體外四條曲線全都，但在體內(nèi)卻未必全都，可能是由于選擇的溶出方法沒有區(qū)分力，或者說溶出度的結(jié)果沒有區(qū)分力。對于 A 類化合物來說，其體外溶消滅象與參比制劑并不全都。可能存在這樣的狀況，雖然仿制制劑和參比制劑在四條溶出曲線全都，但屬于兩種不同的機理，參比制劑為崩解溶出，而

13、仿制制劑為溶蝕溶出，這樣可能會增加體內(nèi)生物不等效的風險。由于不同的溶出機理，所以處方篩選時溶出后的可能現(xiàn)象結(jié)果比數(shù)據(jù)結(jié)果還要重要。例如：o一般片崩解時，需要留意觀看：oRLD 崩解為顆粒還是粉末，是崩解還是溶蝕？仿制制劑的崩解時間與參比制劑的崩解時間是否會有差異？仿制制劑衣膜溶解的時間與參比制劑溶解的時間是否有差異？o腸溶微丸溶出時，需要觀看：o耐酸過程中 RLD 是否變色（拉唑類耐酸過程中經(jīng)常變色）？腸溶層是被溶解還是被撐破？o對于膜控系統(tǒng)的緩釋微丸，需要觀看：oRLD 釋放后微丸是否變大？不溶物殘留狀況如何？仿制藥膠囊殼與參比制劑膠囊殼溶解的時間是否有差異？基于溶出過程中觀看到的現(xiàn)象，有助

14、于推斷參比制劑與自制制粒釋藥機制是否全都，也有助于為處方調(diào)整供應方向。 四條溶出曲線并不難四條溶出曲線并不難，通過理解原料藥性質(zhì)、pH-溶解度關系、輔料是否有依靠性，然后再通過 DOE 試驗設計，細致的觀看試驗過程中的現(xiàn)象，對存在不符合規(guī)律的現(xiàn)象、結(jié)果進行探究和驗證，你就可以輕松搞定仿制藥全都性評價中的溶出曲線。你學會了嗎？ 參考文獻【1】Gordon L. Amidon, Vinod P. Shah, John R. Crison ；ATheoretical Basis for a Biopharmaceutic Drug Classification: The Correlation ofin Vitro Drug Product Dissolution and in Vivo Bioavailability，PharmRes,1995,12(3):413-420.【2】仿制藥質(zhì)量全都性評價·口服固體制劑溶出曲線測定與比較指導原則【3】（1092）溶出度試驗的開發(fā)和驗證【4】Dressma