正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選重樓皂苷提取工藝的研究

1、正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選重樓皂苷提取工藝的研究 【摘要】 目的優(yōu)選重樓皂苷的最佳提取工藝條件。方法以薯蕷皂苷元的含量為考察指標(biāo)，用高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定其含量，采用正交實(shí)驗(yàn)法對(duì)重樓皂苷的提取工藝進(jìn)行優(yōu)選。結(jié)果最佳提取工藝為重樓藥材粗粉加8倍量85%的乙醇回流2次，1.5 h/次。結(jié)論優(yōu)化得到的工藝簡便易行，穩(wěn)定性好。 【關(guān)鍵詞】 重樓；薯蕷皂苷元；提取工藝；正交實(shí)驗(yàn)Optimization of Extraction Process of Saponins of Paris Polyphylla with Orthogonal Design MethodAbstract：ObjectiveTo

2、optimize the extraction process saponins of Paris polyphylla.MethodsThe orthogonal design method was used to optimize extraction process for saponins of Paris polyphylla with the extraction amount of Diosgenin as observing index.ResultsThe optimum extracting procedure was as follows: the raw powder

3、of Paris polyphylla was extracted with 85% alcohol for two times, with 8 folds of the solvent volume and refluxing ninety minutes each time.ConclusionThe optimum extracting process is simple, stable and efficient.Key words：Paris Polyphylla; Diosgenin; Extraction process; Orthogonal design method 重樓為

4、百合科植物云南重樓Pairs polyphylla Smith var.yunnanensis (Franch.) Hand.-Mazz.或七葉一枝花Paris polyphylla Smith var.chinensis(Franch.)Hara的干燥根莖1。重樓中的化學(xué)成分主要以甾體皂苷類為主，是其主要活性成分。其苷元主要為異螺甾烷醇類的薯蕷皂苷元和偏諾皂苷元2，3?，F(xiàn)代藥理研究表明該藥具有抗腫瘤、抗菌消炎、止血、鎮(zhèn)靜鎮(zhèn)痛、抑制精子活性、免疫調(diào)節(jié)等廣泛的藥理活性4。為了更好地開發(fā)利用重樓藥材，為含重樓中成藥制劑開發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，本實(shí)驗(yàn)以薯蕷皂苷元轉(zhuǎn)移率為指標(biāo)，采用正交實(shí)驗(yàn)法對(duì)重樓皂苷的提取

5、工藝進(jìn)行優(yōu)化選擇獲得最佳提取工藝條件。1 材料與方法1.1 儀器及材料Agilent1100高效液相色譜儀(美國安捷倫科技公司)，VWD紫外檢測(cè)器，Agilent化學(xué)工作站；BP-211D分析天平(德國賽多利斯)；SB3200-T超聲波提取儀（上海能信超聲有限公司）；Millipore Simplicity-185超純水器(美國密里博公司)；薯蕷皂苷元對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所）；重樓藥材（購于廣西中醫(yī)學(xué)院一附院仁愛分院藥房）；HPLC用水為超純水，甲醇、乙腈為色譜純，其它試劑為分析純。1.2 色譜條件色譜柱：Agilent Zorbax Eclipse XDB-C8 (4.6 mm150

6、 mm,5 m)；流動(dòng)相：乙腈：水（80:20）；柱溫：30；流速：1.0 mlmin-1；檢測(cè)波長：203 nm；理論塔板數(shù)按薯蕷皂苷元峰計(jì)不應(yīng)低于8 000。1.3 對(duì)照品溶液的制備精密稱取薯蕷皂苷元對(duì)照品5.04 mg，用甲醇定容至10 ml，搖勻，即得。1.4 供試品溶液的制備及測(cè)定重樓藥材經(jīng)干燥并粉碎后，準(zhǔn)確稱取3 g，按正交設(shè)計(jì)進(jìn)行回流提取，趁熱濾過，合并二次提取液，回收乙醇至干。加2 mol/L的鹽酸30 ml，置于沸水浴中水解2 h，冷卻后用石油醚(6090)萃取5次，20ml/次，合并萃取液，水洗至中性，回收石油醚至干，殘?jiān)眉状既芙舛ㄈ萦?5 ml容量瓶中，作為供試品溶液。

7、在上述色譜條件下，分別精密量取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10 l，進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算供試品液中薯蕷皂苷元含量。 1.5 線性關(guān)系考察精密吸取薯蕷皂苷元對(duì)照品溶液5,10, 15, 20, 25 l，進(jìn)樣，測(cè)定，以薯蕷皂苷元的量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性回歸方程為 Y=616.313 5X+52.910 0，r=0.999 9，表明薯蕷皂苷元含量在2.5212.6g范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。1.6 正交實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)根據(jù)重樓活性成分的性質(zhì)及初步預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，采用L9(34)正交表安排重樓用乙醇提取工藝，以薯蕷皂苷元的轉(zhuǎn)移率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，選擇乙醇濃度、溶劑用量、提取時(shí)間3個(gè)因素，每個(gè)

8、因素設(shè)3個(gè)水平，因素水平見表1，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)結(jié)果見表2，方差分析見表3。表1 重樓皂苷提取工藝因素水平（略）表2 乙醇提取工藝正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果（略）表3 方差分析（略）2 結(jié)果2.1 直觀分析由直觀分析（表2）得各個(gè)因素的主次順序?yàn)镃AB，即回流時(shí)間乙醇濃度乙醇用量，最佳方案為C3A2B3。2.2 方差分析由方差分析（表3）得各個(gè)因素的主次順序?yàn)镃AB，乙醇濃度和回流時(shí)間對(duì)結(jié)果有顯著性影響，乙醇用量對(duì)結(jié)果的影響無顯著性，但是用8倍量提取對(duì)提取效果還是有明顯的增強(qiáng)，結(jié)合實(shí)際生產(chǎn)，將乙醇倍數(shù)選為8倍，即提取工藝為A2B3C3，即加85%乙醇8倍量，回流提取兩次，1.5 h/次。2.3 驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確

9、稱量重樓藥粉3份，每份3 g按照最佳方案A2B3C3進(jìn)行回流提取，并按供試品溶液制備和測(cè)定的方法進(jìn)行樣品處理。樣品用HPLC測(cè)定薯蕷皂苷元平均含量為6.082 1 mg/g。3 討論 中國藥典（2005版）有記載薯蕷皂苷元的HPLC測(cè)定條件為乙腈水（9010），柱溫：35，色譜柱：C18柱。通過比較C18柱沒有C8柱的分離效果好，同時(shí)用C8柱時(shí)流動(dòng)相為乙腈水（8020）比乙腈水（9010）好，所以本文HPLC測(cè)定條件較藥典有所改動(dòng)，可使薯蕷皂苷元與其它成分達(dá)到基線分離，并且峰形及保留時(shí)間均較適合。 在初試比較中發(fā)現(xiàn)藥材粉末粒度對(duì)薯蕷皂苷元的提取量有明顯影響，藥材粉末越細(xì)同樣條件下提取量越高，但同時(shí)過濾就越困難。建議藥材粉末過藥典2號(hào)篩即可，同時(shí)用抽濾加快過濾速度。 本文確定的重樓皂苷最佳提取工藝，可用于實(shí)際生產(chǎn)中作為參考?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】 1國家藥典委員會(huì)中國藥典，I部S北京：化學(xué)工