抗炎止痛口服液對佐劑誘導性關(guān)節(jié)炎治療作用的研究

1、抗炎止痛口服液對佐劑誘導性關(guān)節(jié)炎治療作用的研究                作者：馬玉琛，段斐，孟明，郭曉燕，寇素茹，馬幼敏【摘要】  目的研究抗炎止痛口服液對AIA的治療效果。方法采用弗氏完全佐劑造模，對6組采用不同藥物和劑量的大鼠進行治療觀察。結(jié)果抗炎止痛口服液中小劑量組在體重、脾指數(shù)、病理檢測方面與正常組無差別，同模型組有顯著性差別。結(jié)論抗炎止痛口服液對AIA有良好的治療效果。 【關(guān)鍵詞】  抗炎止痛口服液； 誘導性關(guān)節(jié)炎； 胸

2、腺指數(shù)； 脾指數(shù)； 關(guān)節(jié)腫近年來，應(yīng)用中醫(yī)中藥治療類風濕關(guān)節(jié)炎的研究越來越多， 以經(jīng)驗方為依據(jù)，制成便于服用的劑型，也是臨床上經(jīng)常采用的方法。通過廣泛的臨床觀察發(fā)現(xiàn)，中西醫(yī)結(jié)合療法不僅可以提高臨床療效，而且能夠減輕西藥的毒副反應(yīng)，因而也是應(yīng)用較普遍的方法。   本實驗應(yīng)用大鼠佐劑誘導性關(guān)節(jié)炎（adjuvant induce arthritis, AIA ）模型，研究中藥抗炎止痛口服液對AIA的治療效果。1  器材與方法1  動物健康SD大鼠，雄性，體重150180 g。（購自河北醫(yī)科大學實驗動物中心）動物級別：SPF；動物許可證號608139。購入本實驗

3、室的動物室適應(yīng)性飼料2 d，然后進行造模實驗。2  藥物與試劑抗炎止痛口服液，由252醫(yī)院藥劑科提供，批號20040922，常溫保存。雷公藤多苷片，100 mg/片，湖南省株州市制藥廠生產(chǎn)，研成粉末溶于水，4冰箱保存?？ń槊鐑龈煞?，衛(wèi)生部北京生物制品研究所，批號2006 05。 液體石蠟，中國上海寶山縣化工廠生產(chǎn)，批號050817。羊毛脂，北京市昌平石鷹化工廠生產(chǎn)，批號061127。3  儀器與設(shè)備自制的大鼠足容積測量儀1 。 電子秤及電子天平。石蠟切片機，日本萊卡。4  模型制作2將液體石蠟、羊毛脂按21的比例混合均勻，高壓滅菌后4°C保存，使用時加入

4、卡介苗（10 mg/ml）配制成弗氏完全佐劑（CFA），充分研磨混勻乳化后，取0.1 ml注射于大鼠左后足墊皮內(nèi)致敏，正常對照組注射0.1 ml生理鹽水。在造模后17，39 d分別測量大鼠的體重及足跖腫脹度，39 d斷頭處死大鼠，收集血清，取材脾臟、胸腺、致炎側(cè)踝關(guān)節(jié)、進行指標檢測。5  分組及給藥方法  SD大鼠60只。隨機分為正常對照組、AIA模型組、雷公藤陽性藥組及抗炎止痛口服液大、中、小劑量組，每組10只。造模后18 d開始每天上午8：0010：00灌胃給藥，正常組和AA模型組給予生理鹽水，每天每只大鼠2 ml；雷公藤組每天20 mg/kg；中藥抗炎止痛口服液組大劑

5、量每天60 g/kg，中劑量每天30 g/kg（相當于人臨床用藥量的10倍），小劑量每天15 g/kg；連續(xù)給藥21 d。6  觀察項目及檢測方法6.1  AA大鼠的體重、臟器指數(shù)、足跖腫脹度的測定在致炎后17 d和39 d分別測量AA大鼠的體重和致炎側(cè)足跖腫脹度（容積排水法）3，并用正常組對照，致炎39 d取脾臟和胸腺稱量，計算臟器指數(shù)（計算公式：脾指數(shù)=平均脾重量/平均體重）。6.2  足爪容積的測定 致炎前測量每只大鼠的后足體積，致炎后2，5，10，17，39 d測量大鼠致炎側(cè)后足爪腫脹度（容積排水法）。6.3  組織病理學檢測于致炎第3

6、9天斷頭處死大鼠，立即分離后肢致炎側(cè)病變關(guān)節(jié)，10%甲醛固定，EDTA脫鈣，乙醇逐級脫水，常規(guī)包埋，切片，蘇木素-伊紅（HE）染色，并進行組織學評價和拍照，同時以相同±s方法取正常大鼠相同關(guān)節(jié)部位作為對照。6.4  統(tǒng)計學處理  數(shù)據(jù)均用±s表示，采用SPSS進行統(tǒng)計學分析，組間比較行單因素方差分析( one-way ANOVA)，用最小顯著差法( least significant difference,LSD )作兩兩比較，以P0.05為差異有顯著性。         2

7、  結(jié)果2.1  各組大鼠體重變化比較 結(jié)果見表1。 AIA模型組大鼠從致炎后第2周起體重增長緩慢，第17天和第39天體重明顯低于同期飼養(yǎng)的正常組大鼠（P0.05），與雷公藤陽性藥組接近，而抗炎止痛口服液治療中、小劑量組大鼠體重與正常組比較，差異無顯著性（P0.05），大劑量組大鼠體重減輕。表1  各組大鼠體重變化比較（略）2.2 各組大鼠胸腺、脾臟指數(shù)變化比較見表2。AIA模型組大鼠39 d的胸腺、脾臟指數(shù)明顯高于正常組（P0.05），雷公藤治療組, 抗炎止痛口服液大劑量組大鼠的胸腺、脾臟指數(shù)明顯低于AIA組大鼠(P0.05)?？寡字雇纯诜褐袆┝恐委?/p>

8、組大鼠的胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)，與正常組比較，差異無顯著性（P0.05）。表2  各組大鼠致炎39 d胸腺及脾臟指數(shù)變化比較（略）2.3 各組大鼠致炎側(cè)踝關(guān)節(jié)腫脹度比較 結(jié)果見表3。AIA大鼠致炎后15h，致炎側(cè)足腫脹達高峰，表現(xiàn)為早期的炎癥反應(yīng)，持續(xù)23 d逐漸減輕，78 d后再度腫脹，繼發(fā)病變于致炎后10天左右出現(xiàn)，表現(xiàn)為對側(cè)和前足腫脹，且進行性加重，大鼠行動不便，體重下降，表現(xiàn)類似人類RA4。各實驗組大鼠于致敏后2，5，10，17，28，39 d，用容積排水法測量致炎側(cè)踝關(guān)節(jié)腫脹度（結(jié)果見表3）。AIA模型組足腫脹度明顯高于正常組（P0.01）。雷公藤治療組及抗炎止痛口服

9、液大、中劑量治療組大鼠足腫脹度明顯低于AIA模型組（P0.01）。表3  致炎前后各實驗組大鼠關(guān)節(jié)腫脹度比較（略）2.4   各組大鼠致炎側(cè)踝關(guān)節(jié)腫脹度比較 鏡檢結(jié)果顯示，在正常大鼠的關(guān)節(jié)滑膜組織，可見12層滑膜細胞，滑膜下有成熟滑膜組織。細胞排列整齊，關(guān)節(jié)面光滑無滲出物。 致炎39 d，AIA大鼠關(guān)節(jié)滑膜增生，呈絨毛狀排列紊亂，可向關(guān)節(jié)腔內(nèi)突出，部分滑膜剝脫缺失，并有大量炎性細胞浸潤，軟組織明顯水腫。 抗炎止痛口服液治療組和雷公藤治療組大鼠關(guān)節(jié)滑膜增生，只有少許剝脫，組織水腫較輕，并見少量炎細胞浸潤。3  討論   類風濕

10、性關(guān)節(jié)炎（RA）是一個以累及周圍關(guān)節(jié)為主的多系統(tǒng)炎癥性的自身免疫病，是造成我國人群喪失勞動力和致殘的主要病因之一3。因此對RA的研究一直是個熱點問題。類風濕性關(guān)節(jié)炎的基本病理改變是滑膜炎。急性期：初期滑膜表現(xiàn)為紅腫滲出（可引起關(guān)節(jié)積液）和細胞浸潤。慢性期：滑膜炎繼續(xù)進行，滑膜肥厚，形成許多絨毛樣突起。最后軟骨表面的肉芽組織纖維化，使上下關(guān)節(jié)面互相融合，形成纖維性關(guān)節(jié)強硬。關(guān)節(jié)附近的骨骼呈脫鈣和骨質(zhì)疏松，肌肉和皮膚都萎縮。關(guān)節(jié)本身畸形或脫位。   中醫(yī)認為RA屬于痹證，是由風、寒、濕、熱等外邪乘襲引起。經(jīng)絡(luò)痹阻，可致血淤痰積；內(nèi)外合邪則可耗損正氣，化毒壞血，蝕筋腐骨，治療當以

11、祛邪通痹、活血化痰、散結(jié)解毒為根本法則。   抗炎止痛口服液是國家衛(wèi)生部、人事部、中醫(yī)藥管理局第3批全國名老中醫(yī)師帶徒專家252醫(yī)院馬玉琛主任根據(jù)多年臨床經(jīng)驗，對傳統(tǒng)經(jīng)方加減而成，符合RA上述病機和治則，有肯定的臨床療效。動物實驗證明，抗炎止痛口服液能夠減輕AIA大鼠足踝關(guān)節(jié)腫脹度，下調(diào)胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)，減輕關(guān)節(jié)滑膜增生和炎性病變，具有明顯的治療作用。陽性藥物雷公藤有明顯的抗AIA功效，其抑制大鼠關(guān)節(jié)腫脹，抑制炎癥反應(yīng)的功效十分肯定。在本實驗中發(fā)現(xiàn)，雷公藤用藥大鼠局部關(guān)節(jié)病變減輕，足腫脹度明顯低于AIA模型組大鼠，關(guān)節(jié)病理學切片顯示滑膜增生明顯少于AIA模型組大鼠， 炎性

12、細胞浸潤及血管翼生成等也明顯少于AIA模型組大鼠。但動物全身狀態(tài)不良，大鼠體重明顯低于正常對照組大鼠，且一般生存狀態(tài)不佳，活動減少，精神萎靡，消瘦，脫毛，甚至腹瀉?？寡字雇纯诜簺]有雷公藤樣強烈的毒副反應(yīng)，不僅各劑量治療組大鼠有不同程度癥狀改善，而且還表現(xiàn)出補養(yǎng)功效。各用藥組大鼠體重沒有減輕，進食量及活動度均未見減少，且皮毛光滑，精神狀態(tài)良好，尤其是中劑量治療組大鼠。故在以后進一步的機理研究實驗中，抗炎止痛口服液的用藥劑量選定中、小劑量為好?！緟⒖嘉墨I】  1徐叔云，卞如濂，陳 修.藥理學實驗方法，第2版M.北京：人民衛(wèi)生出版社，1991：716.2Ma Dong-lai,Li Jun,Chen Min-zhu,et,al.Inducement of adjuvant arthritis rats and study of their disorder immune functionJ. Chin J of experimental clinical immunology. 1995，7（3）：13.3葉任高.內(nèi)科學M.北京：人民衛(wèi)生出版社，2001：897.4Kuniak T, Karen AH, Robert AR, at al. Induction of arthritis with monoclonal