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文檔簡介
1、 球菌球菌(cocci) 菌體形態(tài)為球形的一類細菌。臨床上通常引起化膿性感染,又稱化膿性球菌(pyogenic cocci)。 與醫(yī)學(xué)有關(guān)的革蘭陽性兼性厭氧球菌有9屬。本章主要介紹臨床最常見的兼性厭氧球菌,包括葡萄球菌屬、鏈球菌屬、腸球菌屬。 革蘭陰性球菌主要包括奈瑟菌屬(Neisseria)和莫拉菌屬(Moraxella)。第一節(jié) 葡萄球菌屬 葡萄球菌屬(Staphylococcus)在自然界廣泛分布。存在于人和動物的皮膚黏膜上的菌株可致多種化膿性感染,如癤、癰、膿腫、菌血癥等,還可引起燙傷樣皮膚綜合征和毒性休克綜合征等疾病。葡萄球菌屬 目前有35個種、17個亞種,引起人類疾病的重要菌有金黃
2、色葡萄球菌(S.aureus),表皮葡萄球菌(S.epidermidis),頭狀葡萄球菌(S.capitis),人葡萄球菌(S.hominis)等。 臨床常以是否產(chǎn)生凝固酶分為凝固酶陽性和凝固酶陰性葡萄球菌(Coagulase negative staphylococcus, CNS)。 根據(jù)噬菌體分型,可分成45群26型。 利用質(zhì)粒大小分型、血清學(xué)分型、抗生素分型和細菌DNA的RFLP或PFGE分型,用來研究細菌的致病性、耐藥性、流行病學(xué)特點和細菌鑒別的關(guān)系。 該屬細菌DNA G+C mol%為30%39%。 二、臨床意義 (一)致病因素 1.酶類 (1)凝固酶 (2)耐熱核酸酶 (3)透明
3、質(zhì)酸酶、磷脂酶 2.毒素 (1)葡萄球菌溶素 (2)腸毒素 (3)毒性休克綜合征毒素 (4)殺白細胞素 (5)表皮剝脫毒素 (1)凝固酶 葡萄球菌屬產(chǎn)生2種血漿凝固酶: 結(jié)合凝固酶或聚集因子,是結(jié)合在菌體表面的凝固酶,能與血漿中的纖維蛋白原交聯(lián)使菌體快速凝集; 游離凝固酶,是細菌分泌到菌體外的凝固酶,能被血漿中的協(xié)同因子(cofactor)激活形成復(fù)合物,再使纖維蛋白原轉(zhuǎn)變成纖維蛋白,而使血漿凝固;保護病原菌不被吞噬或免受抗體等的作用。(二)所致疾病 1.化膿性疾病 1)皮膚化膿性感染 2)各種器官的化膿性感染 3)全身感染 2.毒素性疾病 1)食物中毒 2)燙傷樣皮膚綜合征 3)毒素性休克綜
4、合征(TSS) 4)假膜性腸炎 3.醫(yī)院感染三、微生物學(xué)檢驗 (一)葡萄球菌的基本特性 1.形態(tài)結(jié)構(gòu) 2.抗原成分 1.葡萄球菌A蛋白(Staphylococcal protein A,SPA) 位于菌體表面,存在于菌細胞壁的一種表面蛋白??膳cIgG的Fc段結(jié)合,應(yīng)用于協(xié)同凝集試驗。 A蛋白有抗吞噬作用,還有激活補體替代途等活性。是完全抗原,具屬特異性。 2.多糖抗原 具有群特異性,細胞壁中的磷壁酸包含的N-乙酰葡胺核糖醇殘基為A群多糖抗原;N-乙酰區(qū)糖胺甘油殘基為B群多糖抗原。 3.莢膜抗原 幾乎所有金黃色葡萄球菌菌株的表面有莢膜多糖抗原的存在。表皮葡萄球菌僅個別菌株有此抗原。 3.變異性
5、(1)細菌細胞壁缺陷型 受抑制破壞細胞壁藥物或外界因素作用,可以形成細胞壁缺陷型細菌,在高滲環(huán)境中生存。 (2)耐藥性變異 部分菌株通過獲得外源性的mecA而產(chǎn)生青霉素結(jié)合蛋白2a(PBP2a),導(dǎo)致對所有內(nèi)酰胺類抗生素耐藥。2021/7/9119、 人的價值,在招收誘惑的一瞬間被決定。2022-3-62022-3-6Sunday, March 06, 202210、低頭要有勇氣,抬頭要有低氣。2022-3-62022-3-62022-3-63/6/2022 8:11:47 PM11、人總是珍惜為得到。2022-3-62022-3-62022-3-6Mar-226-Mar-2212、人亂于心,
6、不寬余請。2022-3-62022-3-62022-3-6Sunday, March 06, 202213、生氣是拿別人做錯的事來懲罰自己。2022-3-62022-3-62022-3-62022-3-63/6/202214、抱最大的希望,作最大的努力。2022年3月6日星期日2022-3-62022-3-62022-3-615、一個人炫耀什么,說明他內(nèi)心缺少什么。2022年3月2022-3-62022-3-62022-3-63/6/202216、業(yè)余生活要有意義,不要越軌。2022-3-62022-3-6March 6, 202217、一個人即使已登上頂峰,也仍要自強不息。2022-3-62
7、022-3-62022-3-62022-3-64.培養(yǎng)特性 兼性厭氧菌,有氧條件下生長較厭氧條件迅速和旺盛 對營養(yǎng)要求不高,最適生長溫度3537,最適pH7.47.6。 普通培養(yǎng)基上形成直徑23mm不透明的圓形凸起菌落。產(chǎn)生金黃色、白色、檸檬色等非水溶性色素附著在菌落上。 金黃色葡萄球菌 血瓊脂平板上菌落周圍有透明溶血環(huán) 能在含10%15% NaCl瓊脂中生長 甘露醇高鹽平板上為黃色菌落。 5.抵抗力 該菌的抵抗力比其他無芽胞細菌強,耐干燥;近年來耐藥性增強,對多種抗菌藥物不敏感。葡萄球菌內(nèi)攜帶誘導(dǎo)性的青霉素酶和乙?;D(zhuǎn)移酶質(zhì)粒,通過轉(zhuǎn)導(dǎo)進行質(zhì)粒的轉(zhuǎn)移。 (二)葡萄球菌的臨床檢驗程序 標本采集
8、:根據(jù)感染的部位,采集不同的標本。該屬細菌廣泛分布在人體皮膚和黏膜,采取時避免病灶周圍正常菌群污染。 標本直接檢查 顯微鏡檢查 無菌體液如腦脊液和關(guān)節(jié)穿刺液等可直接涂片、革蘭染色后,顯微鏡檢查見類似葡萄球菌的革蘭陽性球菌,則具有重要臨床價值;其他體液標本查見細菌的同時伴有炎性細胞則也具有參考價值??沙醪綀蟾妗安橐婎愃破咸亚蚓鷮俑锾m陽性球菌”,并進一步進行分離和鑒定。 抗原檢測 乳膠凝集試驗測定SPA及莢膜抗原。 核酸檢測 針對耐熱核酸酶nuc、16S rRNA可鑒定葡萄球菌,測定macA可以快速檢出MRSA。分離培養(yǎng)與鑒定 分離培養(yǎng) 膿液、分泌物等臨床標本可接種血瓊脂平板; 有污染的標本如糞便
9、等應(yīng)接種在選擇平板上,如甘露醇高鹽平板、哥倫比亞多粘菌素奈啶酸平板; 血液標本則用肉湯增菌培養(yǎng)基增菌后。初步鑒定 1)菌落性狀 平板培養(yǎng)基上孵育24h后,菌落外觀疑為葡萄球菌者應(yīng)進行革蘭染色證實。 2)鑒別試驗 觸酶試驗陽性、溶葡萄球菌素(200g/ml)和呋喃唑酮100g敏感,氧化酶試驗陰性可以與其他革蘭陽性球菌區(qū)別。 紅霉素(0.4g/ml)耐藥和甘油需氧產(chǎn)酸可以與微球菌區(qū)別。 (3)種的鑒定 1)凝固酶試驗 玻片法測定結(jié)合型凝固酶;試管法測定分泌型凝固酶。金黃色葡萄球菌、中間型葡萄球菌呈現(xiàn)陽性反應(yīng)。路鄧葡萄球菌產(chǎn)生結(jié)合型凝固酶而不分泌游離型凝固酶, 因而玻片凝固酶試驗陽性、試管凝固酶試驗
10、陰性。 2)耐熱核酸酶試驗 大多數(shù)金黃色葡萄球菌、施氏葡萄球菌、中間葡萄球菌、豬葡萄球菌能產(chǎn)生耐熱核酸酶。此外表皮葡萄球菌、模仿葡萄球菌、肉葡萄球菌含微弱耐熱核酸酶。3)其他鑒定試驗 磷酸酶試驗、吡咯烷酮芳基酰胺酶試驗、鳥氨酸脫羧酶試驗、脲酶試驗、-半乳糖苷酶、3-羥基丁酮酸試驗、新生霉素敏感試驗、多粘菌素B耐藥試驗、糖產(chǎn)酸試驗是常用的葡萄球菌屬種間細菌的鑒定生化試驗。(3)腸毒素檢測 1)生物學(xué)試驗 采用幼貓腹腔注射(肉湯培養(yǎng)物或嘔吐物),4h 內(nèi)發(fā)生嘔吐腹瀉和體溫升高或死亡等現(xiàn)象者,提示金黃色葡萄球菌腸毒素存在。 2)瓊脂擴散試驗或ELISA法測定 用瓊脂擴散試驗、ELISA法或放射免疫分
11、析法檢測樣本中的腸毒素。 3)腸毒素基因測定 針對腸毒素基因設(shè)計毒素的通用引物及特異性引物,應(yīng)用PCR技術(shù)可直接進行分型測定。第二節(jié) 鏈球菌屬 鏈球菌屬(Streptococcus)細菌種類多,分布廣,是人和某些動物的寄生菌。其中某些菌種為毒力強的致病菌,另一些則是作為正常菌群棲居于宿主的呼吸道、消化道、泌尿生殖道,還有一些是皮膚上的過路菌和黏膜上的定居菌 一、分類 (一)A、C、G群溶血性鏈球菌 菌落直徑大于0.5mm A群的化膿性鏈球菌(S. pyogenes)、C群、G群的馬鏈球菌(S.equi)和似馬鏈球菌(S.equismilis); 菌落直徑小于0.5mm 具A、C、G群抗原,統(tǒng)稱
12、米勒鏈球菌(S.milleri),主要分為3種:咽喉炎鏈球菌、中間型鏈球菌和星座鏈球菌。除此之外,米勒鏈球菌還有溶血和不溶血的細菌。 (二)B群溶血性鏈球菌又稱無乳鏈球菌(S.agalactiae)。 (三)溶血性鏈球菌 包括肺炎鏈球菌(S.pneumoniae)和草綠色鏈球菌群(Viridans streptococci)。 (四)不溶血D群鏈球菌 牛鏈球菌(S.bovis)二、臨床意義 (一)致病因素 1.菌體細胞壁成分 (1)脂磷壁酸 位于細胞壁中并伸展至菌體表面,與黏附宿主細胞有關(guān)。 (2)M蛋白 是鏈球菌細胞壁中的表面蛋白質(zhì),具有抗吞噬和抵抗細胞內(nèi)殺菌作用。M蛋白有抗原性,能刺激機體
13、產(chǎn)生型特異性抗體;與心肌、腎小球基底膜有共同抗原成分。2.侵襲性酶 (1)鏈道酶(SD) 也稱鏈球菌DNA酶,能分解黏稠膿液中具有高度黏性的DNA,使膿汁稀薄易于擴散。主要由A、C、G群鏈球菌產(chǎn)生。 (2)透明質(zhì)酸酶 能分解細胞間質(zhì)的透明質(zhì)酸,使病菌易于在組織中擴散,又稱擴散因子。 (3)鏈激酶(SK) 又稱鏈球菌溶纖維蛋白酶,能激活血液中溶纖維蛋白酶原轉(zhuǎn)化為溶纖維蛋白酶,使之溶解血塊或阻止血漿凝固,有利于細菌在組織中擴散。重組鏈激酶目前用于治療血栓性疾病。 (4)膠原酶 能水解肌肉和皮下組織中的膠原蛋白纖維,便于細菌在組織中擴散。3.外毒素 (1)鏈球菌溶素 (2)致熱外毒素(1)鏈球菌溶素
14、 有溶解紅細胞,破壞白細胞、血小板及毒害心臟作用 根據(jù)對O2穩(wěn)定性:鏈球菌溶素O和鏈球菌溶素S1.SLO 絕大多數(shù)A群鏈球菌株和許多C、G群菌株能產(chǎn)生SLO,SLO為含-SH基的蛋白質(zhì),遇氧時-SH基被氧化為-S-S-基,失去溶血能力。若加入亞硫酸鈉和半胱氨酸等還原劑,溶血作用可以逆轉(zhuǎn)。SLO對中性粒細胞有破壞作用;對哺乳動物的血小板、心肌細胞、巨噬細胞、神經(jīng)細胞等也有毒性作用??乖詮?,感染后患者機體產(chǎn)生抗SLO抗體,病愈后可持續(xù)數(shù)月甚至數(shù)年。風(fēng)濕熱患者血清SLO抗體顯著增高,活動性病例升高更顯著,可作為新近鏈球菌感染或風(fēng)濕活動的輔助診斷。 2.SLS 是一種小分子的糖肽,無抗原性。對氧穩(wěn)定
15、,對熱和酸敏感。多數(shù)A、C、G群及某些其他群鏈球菌產(chǎn)生。能破壞白細胞和血小板。血瓊脂平板上菌落周圍的溶血環(huán)是由SLS所致。(2)致熱外毒素 由A群鏈球菌溶原菌株產(chǎn)生的致熱外毒素(SPE),曾稱紅疹毒素或猩紅熱毒素。 為蛋白質(zhì),對熱穩(wěn)定,具有抗原性,是人類猩紅熱的主要致病物質(zhì),具有損害細胞或組織,使患者產(chǎn)生紅疹并具內(nèi)毒素樣致熱作用。 分為A、B、C三型,A型和C型分別由噬菌體攜帶的speA和speC編碼,B型由染色體基因speB編碼。均為超抗原,刺激T細胞誘發(fā)淋巴細胞合成和釋放TNF、IL-1和IL-6,進一步導(dǎo)致發(fā)熱、休克及組織損傷。 (二)所致疾病 1侵襲性疾病 皮膚和皮下組織急性化膿性炎癥
16、 感染部位界限不明顯,膿性分泌物稀薄,常引起蜂窩組織炎;沿淋巴管和血流擴散引起急性淋巴管炎、淋巴結(jié)炎及敗血癥。 其他感染 如扁桃體炎、咽炎、中耳炎、乳突炎、腎盂腎炎、產(chǎn)褥熱等。無乳鏈球菌引起新生兒菌血癥和腦膜炎。肺炎鏈球菌是大葉性肺炎、支氣管炎的病原菌,還可引起中耳炎、乳突炎、鼻竇炎、腦膜炎和菌血癥。 草綠色鏈球菌是人體口腔、消化道、女性生殖道的正常菌群;可引起心臟瓣膜異?;颊叩膩喖毙约毦孕膬?nèi)膜炎。2毒素性疾病 (1)猩紅熱 是由產(chǎn)生SPE的A群鏈球菌引起的全身中毒癥狀。常繼發(fā)于嚴重的咽炎或皮膚軟組織感染。少數(shù)還可見心肌炎、腎小球腎炎等病變。3變態(tài)反應(yīng)性疾病 (1)風(fēng)濕熱 由A群鏈球菌的多種
17、型別引起,常繼發(fā)于A群鏈球菌感染的咽炎,潛伏期為15周,易感人群為10歲以下兒童。臨床表現(xiàn)以風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性心臟病為主。致病機制鏈球菌細胞壁多糖抗原與心肌瓣膜、關(guān)節(jié)組織糖蛋白有共同抗原性;胞壁蛋白抗原與心肌有共同抗原性;屬第型變態(tài)反應(yīng)??赡苁荕蛋白的免疫復(fù)合物沉積于心瓣膜和關(guān)節(jié)滑液膜上造成。屬第III型變態(tài)反應(yīng)。3變態(tài)反應(yīng)性疾病 (2)急性腎小球腎炎 大多數(shù)由A群12型鏈球菌引起,多見于兒童和少年。臨床表現(xiàn)為蛋白尿、浮腫和高血壓。其致病機制:鏈球菌的某些抗原與腎小球基底膜有共同抗原,機體針對鏈球菌所產(chǎn)生的抗體與腎小球基底膜發(fā)生反應(yīng),屬第II型變態(tài)反應(yīng);由鏈球菌的M蛋白所產(chǎn)生的相應(yīng)抗體形成的
18、免疫復(fù)合物沉積于腎小球基底膜,造成基底膜損傷,屬于第III型變態(tài)反應(yīng)。豬鏈球菌病 豬鏈球菌病主要是由幾種C、D、E及L群鏈球菌引起,現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)其莢膜抗原血清型有35種以上。大多數(shù)致病性血清型在19血清型。血清型2為最常見和毒力最強的血清型。人主要通過接觸病死豬感染。 三、微生物學(xué)檢驗 鏈球菌的基本特性 1. 形態(tài)結(jié)構(gòu) 鏈球菌是直徑小于2m的球形或卵圓形革蘭陽性球菌,呈鏈狀排列,鏈的長短和細菌的種類及生長環(huán)境有關(guān)。 肺炎鏈球菌呈矛尖狀,寬端相對尖端向外,成雙排列,無芽胞、無動力,但能形成莢膜和黏液層。2.抗原結(jié)構(gòu) 抗原結(jié)構(gòu)復(fù)雜,主要有多糖抗原和蛋白抗原,前者位于細胞壁以此可將鏈球菌分類為A、B、C
19、、D、F、G等20群,后者主要有M蛋白、F蛋白和G蛋白等。3.變異性 肺炎淋球菌的pbp 1a、pbp 2x和pbp 2b的單個突變或多個同時突變,導(dǎo)致對青霉素或頭孢菌素的耐藥。4.培養(yǎng)特性 兼性厭氧菌,肺炎鏈球菌和草綠色鏈球菌某些種需要CO2促進其生長 營養(yǎng)要求高,須在培養(yǎng)基中加入血液、血清。最適生長溫度3537,pH7.47.6 血平板上形成灰白色,透明或半透明,表面光滑的小菌落;不同菌種的菌落可分別形成、三種溶血現(xiàn)象;4.培養(yǎng)特性 B群鏈球菌菌落較大,溶血環(huán)較A、C、G群模糊,某些B群鏈球菌無溶血環(huán)。 牛型鏈球菌則為無溶血環(huán)呈灰色菌落 液體培養(yǎng)基中表現(xiàn)為絮狀和顆粒沉淀 肺炎鏈球菌因莢膜多
20、糖使菌落呈黏液狀,因產(chǎn)生自溶酶,在平板上培養(yǎng)48小時后出現(xiàn)中心凹陷的“臍窩狀”菌落。5.抵抗力 本菌屬大多數(shù)細菌對干燥和消毒劑敏感,除肺炎鏈球菌外,本菌屬細菌較少引起細菌耐藥性,但近年對青霉素耐藥甚至多重耐藥的肺炎鏈球菌的出現(xiàn)并在全球播散,引起高度關(guān)注。(二)鏈球菌的臨床檢驗程序 標本采集 咽拭子、痰液、膿汁和血液等標本采集后在2h內(nèi)運送到實驗室,立即進行檢查和接種。對B群溶血鏈球菌的檢查,用無菌棉簽采集第35周37周妊娠婦女的陰道分泌物,置于含多粘菌素(10g/ml)和萘啶酸(15g/ml)選擇性培養(yǎng)肉湯中孵育1824h,再作分離培養(yǎng)。2.標本直接檢查 顯微鏡檢查 標本涂片、革蘭染色、顯微鏡
21、檢查見鏈狀排列革蘭陽性球菌有助于無正常菌群污染標本的診斷。 抗原檢測 咽拭標本的A群鏈球菌和女性生殖道標本的B群鏈球菌可用抗原檢測 莢膜腫脹試驗用于檢查肺炎鏈球菌。 3.分離培養(yǎng)與鑒定 分離培養(yǎng)采用羊血瓊脂平板培養(yǎng)有助于識別溶血特性和進一步鑒定。 初代分離需用5%CO2環(huán)境,3537孵育24h,觀察菌落性狀 菌落周圍呈現(xiàn)透明溶血環(huán)的為溶血性鏈球菌,菌落直徑大于0.5mm或小于0.5mm。 草綠色溶血環(huán)的為溶血性鏈球菌 有些菌落灰白色不出現(xiàn)溶血環(huán)。(2)初步鑒定 取分離平板上生長的菌落周圍呈現(xiàn)溶血或不溶血的單個菌落作涂片,革蘭染色鏡檢 革蘭陽性球菌,鏈狀或短鏈狀排列 觸酶試驗陰性,6.5%NaC
22、l不生長者 可確定為鏈球菌屬細菌 (3)溶血性鏈球菌鑒定 Lancefield群特異性抗原鑒定 根據(jù)Lancefield分群的要求提取各菌落的抗原,與相應(yīng)的分群血清進行凝集試驗。 與B群抗血清凝集的菌株可直接確認為無乳鏈菌 與F群抗血清凝集并且菌落直徑0.5mm可確定為米勒鏈球菌 與A、C、G群抗血清凝集的菌株不能確定種類,還需根據(jù)菌落大小和生化反應(yīng)進一步鑒定。 Lancefield抗原群菌落大?。╩m)菌種名PYRVPCAMPBGURA0.5化膿性鏈球菌 A0.5米勒鏈球菌 B 無乳鏈球菌 C0.5馬鏈球菌C0.5米勒鏈球菌F0.5米勒鏈球菌 G0.5似馬鏈球菌G0.5米勒鏈球菌未分群0.5
23、米勒鏈球菌 桿菌肽敏感試驗 A群鏈球菌對0.04U桿菌肽幾乎全部敏感。 從臨床分離的菌株中有5%15%非A群鏈球菌如B、C和G群鏈球菌等也敏感。 而其他群鏈球菌絕大多數(shù)對其耐藥。 可作為A群鏈球菌的篩選試驗。有別于其他PYR陽性的溶血性細菌(豬鏈球菌、海豚鏈球菌)和A群小菌落溶血性鏈球菌(米勒鏈球菌)。 CAMP試驗 無乳鏈球菌能產(chǎn)生CAMP因子,它可促進金黃色葡萄球菌溶血能力,使其產(chǎn)生顯著的協(xié)同溶血作用。本法可作為無乳鏈球菌的初步鑒定試驗非溶血鏈球菌鑒定菌 種optochin敏感試驗?zāi)懼芫囼災(zāi)懼呷~苷試驗肺炎鏈球菌S+草綠色鏈球菌R牛鏈球菌R+草綠色鏈球菌鑒定 菌 群VP脲酶精氨酸七葉苷
24、甘露醇山梨醇溫和鏈球菌群變異鏈球菌群唾液鏈球菌群/米勒鏈球菌群/ 第三節(jié) 腸球菌屬 一、概述 腸球菌屬(Enterococus) 廣泛分布在自然界,常棲居在人、動物的腸道和女性生殖道 為醫(yī)院感染的重要病原菌二、臨床意義 腸球菌廣泛分布于自然環(huán)境及人和動物消化道內(nèi)。近年來,研究者在腸球菌內(nèi)發(fā)現(xiàn)了一個約包含150個基因的致病DNA片段,稱為“致病島”。包括多種致病因子,可增強腸球菌離開人類腸道后的侵襲力,引起腸道外感染。二、臨床意義 致病因素 表面黏附素、炎癥調(diào)節(jié)因子 、毒性分泌物。 所致疾病 泌尿系感染。 心內(nèi)膜炎 腹膜炎 牙髓疾病 腹腔和盆腔創(chuàng)傷時腸球菌感染較常見。 腸球菌引起的菌血癥常發(fā)生于
25、有嚴重基礎(chǔ)疾患的老年人、長期住院接受抗菌藥物治療的免疫功能低下患者。 臨床標本中分離最常見的是糞腸球菌,約占80%90%,屎腸球菌約占5%10%,很少分離到腸球菌屬的其他種。 三、微生物學(xué)檢驗 腸球菌的基本特性 形態(tài)結(jié)構(gòu) 為革蘭陽性球菌、呈單個,成對或短鏈狀排列,呈球桿狀;液體培養(yǎng)基中呈卵圓形、鏈狀排列。無芽胞和莢膜,個別菌種有稀疏鞭毛。 抗原成分 含鏈球菌D群抗原。培養(yǎng)特性 兼性厭氧,最適生長溫度35,多數(shù)菌株在10和45均能生長。 營養(yǎng)要求不高。 部分糞腸球菌菌株在含有兔血、馬血或人血的平板上出現(xiàn)溶血,而在羊血平板上不出現(xiàn)。其他菌種出現(xiàn)溶血或不溶血。 所有菌株在含6.5%NaCl肉湯中能生
26、長,在40%膽汁培養(yǎng)基中能分解七葉苷。抵抗力 腸球菌屬細菌 對頭孢菌素類、林可霉素類和磺胺類抗菌藥物耐藥。 近年來主要表現(xiàn)為對氨基糖苷類耐藥和對萬古霉素耐藥。 對萬古霉素的耐藥是由van A、van B和van C等基因介導(dǎo)。(二)腸球菌的臨床檢驗程序 標本采集 常規(guī)方法采集血、尿、創(chuàng)傷標本和其他拭子。 標本直接檢查 顯微鏡檢查 涂片染色顯微鏡檢查可見單個、成雙或短鏈排列卵圓形革蘭陽性球菌。 核酸檢測 16s rRNA基因、efaA、ace是常用的檢測腸球菌的靶基因。 萬古霉素耐藥基因van的檢測可直接指示對萬古霉素的耐藥性。 分離培養(yǎng)與鑒定 標本接種于含血瓊脂平板,若送檢標本中含革蘭陰性桿菌
27、,可選用選擇鑒別培養(yǎng)基,常用的有: 疊氮膽汁七葉苷瓊脂,可抑制革蘭陰性菌生長,而腸球菌分解七葉苷產(chǎn)生黑色菌落; 哥倫比亞多粘菌素-萘啶酸瓊脂(CAN) 苯乙基乙醇瓊脂(PEA) 接種標本平板置于3537,孵育24h后形成灰白、不透明、表面光滑、直徑0.51mm大小的圓形菌落,血平板上為溶血或不溶血,糞腸球菌的某些菌株在馬血、兔血平板上出現(xiàn)溶血。初步鑒定 腸球菌屬細菌革蘭染色陽性,卵圓形,單個、成雙或短鏈排列。 觸酶陰性、膽汁七葉苷和PYR陽性、6.5% NaCl肉湯中能生長。 但糞腸球菌培養(yǎng)于含血的培養(yǎng)基中,可合成細胞色素或觸酶或兩者皆有,因而某些菌株可表現(xiàn)為觸酶弱陽性。與其他觸酶陰性、兼性厭
28、氧革蘭陽性球菌鑒別 菌屬萬古霉素分解葡萄糖產(chǎn)氣PYR膽汁七葉苷6.5%NaCl生長溫度1045腸球菌屬敏感乳球菌屬敏感VV鏈球菌屬敏感aV明串珠菌屬耐藥VbVV腸球菌屬間的菌種鑒定 有賴于糖代謝試驗。根據(jù)對甘露醇,山梨醇和精氨酸的代謝分成五群。 第一群 分解甘露醇、山梨糖產(chǎn)酸,不水解精氨酸; 第二群 分解甘露醇和水解精氨酸; 第三群 水解精氨酸,不分解甘露醇、山梨醇和山梨糖, 第四群為 不分解甘露醇,山梨糖,不水解精氨酸, 第五群為 分解甘露醇,不分解山梨糖,不水解精氨酸, 第四節(jié) 其他需氧革蘭陽性球菌 一、觸酶陽性的革蘭陽性球菌 微球菌屬(Micrococcus)、巨球菌屬(Macrococ
29、cus)、動球菌屬(Planococcus)、考氏考克氏菌(Kocuria kristinae)以及觸酶微弱陽性的差異球菌屬(Alloiococcus)和粘性羅氏菌(Rothia mucilaginosa) 二、觸酶陰性的革蘭陽性球菌 乳球菌屬(Lactococcus)、氣球菌屬(Aerococcus)、片球菌屬(Pediococcus)、孿生球菌屬(Gemella)、白聯(lián)球菌屬(Leuconostoc)和生活力缺損菌屬(Abiotrophia)第五節(jié) 奈瑟菌屬 奈瑟菌屬包括 淋病奈瑟菌(N.gonorrhoeae) 腦膜炎奈瑟菌(N.meningitidis) 解乳糖奈瑟菌、干燥奈瑟菌、微黃
30、奈瑟菌、粘液奈瑟菌、淺黃奈瑟菌、灰色奈瑟菌、延長奈瑟菌、去氮奈瑟菌和多糖奈瑟菌等 僅淋病奈瑟菌和腦膜炎奈瑟菌對人致病 二、臨床意義 腦膜炎奈瑟菌 致病因素 莢膜 菌毛 內(nèi)毒素 所致疾病 流行性腦脊髓膜炎 可導(dǎo)致機體免疫缺陷患者的非腦脊髓膜炎、急性或慢性菌血癥 引起老年人肺炎、結(jié)膜炎等 可以在鼻咽部形成帶菌狀態(tài) 二、臨床意義 淋病奈瑟菌 致病因素 菌毛 脂多糖 IgA1蛋白酶 外膜蛋白P 所致疾病 單純性淋病 盆腔炎 口咽部和肛門直腸淋??; 淋菌性結(jié)膜炎 播散性淋病微生物學(xué)檢驗 奈瑟菌屬的基本特性 形態(tài)結(jié)構(gòu) 革蘭陰性雙球菌,菌體直徑0.61.5m,形似雙腎或咖啡豆樣,凹面相對 抗原成分 腦膜炎奈
31、瑟菌 莢膜多糖抗原 具有群特異性。分為至少13個血清群,與人類疾病關(guān)系密切的主要是A、B、C、Y及W-135群。A群及C群是引起流行性腦脊髓膜炎的主要血清群。 外膜蛋白 淋病奈瑟菌 菌毛蛋白抗原、外膜蛋白抗原、脂寡糖抗原培養(yǎng)特性 大多數(shù)奈瑟菌屬細菌需要在培養(yǎng)基中添加羊血、兔血或血清,對脂肪酸敏感,在培養(yǎng)基中需加入可溶性淀粉。需氧生長,初次分離需要5%7%CO2和高濕度刺激生長。最適生長溫度3537,低于30不生長。 血瓊脂平板或巧克力(色)瓊脂平板上呈光滑、濕潤、透明或半透明、直徑12mm的不溶血、圓形、灰藍色菌落; 卵黃瓊脂平板上為無色、光滑、濕潤奶油狀的菌落。在液體培養(yǎng)基中呈輕度或中度混濁
32、生長,無菌膜。 腦膜炎奈瑟菌于孵育24小時后在培養(yǎng)基上發(fā)生自溶。抵抗力 奈瑟菌屬細菌對寒冷、干燥和熱的抵抗力弱,對化學(xué)消毒劑敏感。對青霉素敏感,但近年來由質(zhì)粒介導(dǎo)的內(nèi)酰胺酶所致的耐藥在淋病奈瑟菌中產(chǎn)生較多。 生化特性菌 種在巧克力平板上的菌落形態(tài)MTMMLNYC生長試驗氧化分解產(chǎn)酸硝酸鹽還原多糖合成DNA酶巧克力平板或血平板(22)營養(yǎng)瓊脂(35)葡萄糖麥芽糖乳糖蔗糖果糖腦膜炎奈瑟菌灰褐色、半透明 、 光 滑 1 2mm+-V+-淋病奈瑟菌灰褐色,半透明,光滑0.51mm+-+-卡他莫拉菌淺紅棕色,不透明,干燥13mmV+-+-+奈瑟菌屬的臨床檢驗程序 1.標本采集 腦膜炎奈瑟菌 無菌方法抽取
33、腦脊液、關(guān)節(jié)液、血液、瘀點穿刺液等標本,采集后立即送往實驗室,或用血平板進行床邊接種后置35孵育。血液標本接種在血液培養(yǎng)瓶中置35孵育。標本運送時需要35保溫。 淋病奈瑟菌 用無菌塑料棒滌綸拭子,伸入陰道后穹隆或?qū)m頸內(nèi)1cm處停留1015秒時間,蘸取陰道和宮頸分泌物; 采集尿道分泌物時應(yīng)棄去前段膿性分泌物,留取后段作為標本; 尿液可作為檢查標本; 直腸肛拭標本應(yīng)廢棄第一根污染棉簽,用第二根棉簽醮取的分泌物; 新生兒結(jié)膜炎時應(yīng)采取眼結(jié)膜表面分泌物。標本直接檢查 顯微鏡檢查 腦脊液 直接或經(jīng)離心后取沉淀涂片 皮膚瘀點滲出液涂片 革蘭染色后顯微鏡下見白細胞內(nèi)外的革蘭陰性雙球菌,可報告“檢出革蘭陰性雙
34、球菌,疑似腦膜炎奈瑟菌”。有助于流行性腦脊髓膜炎早期診斷。標本直接檢查 顯微鏡檢查 疑為淋病的標本采集后應(yīng)立即涂片、革蘭染色、顯微鏡檢查。 男性尿道分泌物和新生兒眼結(jié)膜分泌物標本中見到中性多形核細胞內(nèi)、外較多的革蘭陰性雙球菌,可報告“檢出革蘭陰性雙球菌,疑似淋病奈瑟菌”。 由于女性陰道和直腸有許多正常菌群寄居,當女性宮頸或直腸拭子標本涂片中見到胞內(nèi)、胞外大量革蘭陰性雙球菌時,必須由培養(yǎng)結(jié)果加以證實??乖瓩z測 膠乳凝集試驗 包括腦膜炎奈瑟菌A、C、Y、W125血清型的多價抗體和血清型B抗體核酸檢測 腦膜炎奈瑟菌 檢測靶片段的基因有16S rRNA 基因、轉(zhuǎn)錄調(diào)控基因crgA、莢膜轉(zhuǎn)移基因ctrA
35、和插入序列IS1106等 淋病奈瑟菌 隱蔽性質(zhì)粒、染色體基因探針、抗淋病奈瑟菌胞嘧啶DNA 甲基轉(zhuǎn)移酶基因、透明蛋白(opa)基因、菌毛DNA 探針、rRNA 基因探針和porA 基因。分離培養(yǎng)與鑒定 分離培養(yǎng) 腦脊液 接種在巧克力瓊脂或羊血瓊脂平板 咽拭子或鼻咽拭子 接種在選擇性培養(yǎng)基上如改良的Thayer-Martin(MTM)、GC-Lect、New York City(NCY)等培養(yǎng)基。 血液標本 經(jīng)增菌培養(yǎng)基增菌培養(yǎng)后,移種至巧克力(色)瓊脂或羊血瓊脂平板上。置5%7%CO2 35孵育培養(yǎng),每隔24小時觀察平板。 疑為淋病奈瑟菌感染的標本接種于 選擇培養(yǎng)基如MTM、Martin-Lewis(ML)或NYC。立即置于5%CO2氣體條件下3537孵育。每隔24小時觀察平板。鑒定 初步鑒定 直徑12mm,灰褐色、光滑、半透明、稍扁的菌落,涂片革蘭染色見陰性雙球菌,氧化酶和觸酶試驗陽性可初步確定為奈瑟菌屬。 最終鑒定 葡萄糖和麥芽糖
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