球菌（76頁）教學(xué)課件

1、 球菌球菌（cocci） 菌體形態(tài)為球形的一類細(xì)菌。臨床上通常引起化膿性感染，又稱化膿性球菌（pyogenic cocci）。 與醫(yī)學(xué)有關(guān)的革蘭陽性兼性厭氧球菌有9屬。本章主要介紹臨床最常見的兼性厭氧球菌，包括葡萄球菌屬、鏈球菌屬、腸球菌屬。 革蘭陰性球菌主要包括奈瑟菌屬（Neisseria）和莫拉菌屬（Moraxella）。第一節(jié) 葡萄球菌屬 葡萄球菌屬（Staphylococcus）在自然界廣泛分布。存在于人和動(dòng)物的皮膚黏膜上的菌株可致多種化膿性感染，如癤、癰、膿腫、菌血癥等，還可引起燙傷樣皮膚綜合征和毒性休克綜合征等疾病。葡萄球菌屬 目前有35個(gè)種、17個(gè)亞種，引起人類疾病的重要菌有金黃

2、色葡萄球菌（S.aureus），表皮葡萄球菌（S.epidermidis），頭狀葡萄球菌（S.capitis），人葡萄球菌（S.hominis）等。 臨床常以是否產(chǎn)生凝固酶分為凝固酶陽性和凝固酶陰性葡萄球菌（Coagulase negative staphylococcus, CNS）。 根據(jù)噬菌體分型，可分成45群26型。 利用質(zhì)粒大小分型、血清學(xué)分型、抗生素分型和細(xì)菌DNA的RFLP或PFGE分型，用來研究細(xì)菌的致病性、耐藥性、流行病學(xué)特點(diǎn)和細(xì)菌鑒別的關(guān)系。 該屬細(xì)菌DNA G+C mol%為30%39%。 二、臨床意義 （一）致病因素 1.酶類 （1）凝固酶 （2）耐熱核酸酶 （3）透明

3、質(zhì)酸酶、磷脂酶 2.毒素 （1）葡萄球菌溶素 （2）腸毒素 （3）毒性休克綜合征毒素 （4）殺白細(xì)胞素 （5）表皮剝脫毒素 （1）凝固酶 葡萄球菌屬產(chǎn)生2種血漿凝固酶： 結(jié)合凝固酶或聚集因子，是結(jié)合在菌體表面的凝固酶，能與血漿中的纖維蛋白原交聯(lián)使菌體快速凝集； 游離凝固酶，是細(xì)菌分泌到菌體外的凝固酶，能被血漿中的協(xié)同因子（cofactor）激活形成復(fù)合物，再使纖維蛋白原轉(zhuǎn)變成纖維蛋白，而使血漿凝固；保護(hù)病原菌不被吞噬或免受抗體等的作用。（二）所致疾病 1.化膿性疾病 1）皮膚化膿性感染 2）各種器官的化膿性感染 3）全身感染 2.毒素性疾病 1）食物中毒 2）燙傷樣皮膚綜合征 3）毒素性休克綜

4、合征（TSS） 4）假膜性腸炎 3.醫(yī)院感染三、微生物學(xué)檢驗(yàn) （一）葡萄球菌的基本特性 1.形態(tài)結(jié)構(gòu) 2.抗原成分 1.葡萄球菌A蛋白（Staphylococcal protein A,SPA） 位于菌體表面，存在于菌細(xì)胞壁的一種表面蛋白?？膳cIgG的Fc段結(jié)合，應(yīng)用于協(xié)同凝集試驗(yàn)。 A蛋白有抗吞噬作用，還有激活補(bǔ)體替代途等活性。是完全抗原，具屬特異性。 2.多糖抗原 具有群特異性，細(xì)胞壁中的磷壁酸包含的N-乙酰葡胺核糖醇?xì)埢鶠锳群多糖抗原；N-乙酰區(qū)糖胺甘油殘基為B群多糖抗原。 3.莢膜抗原 幾乎所有金黃色葡萄球菌菌株的表面有莢膜多糖抗原的存在。表皮葡萄球菌僅個(gè)別菌株有此抗原。 3.變異性

5、（1）細(xì)菌細(xì)胞壁缺陷型 受抑制破壞細(xì)胞壁藥物或外界因素作用，可以形成細(xì)胞壁缺陷型細(xì)菌，在高滲環(huán)境中生存。 （2）耐藥性變異 部分菌株通過獲得外源性的mecA而產(chǎn)生青霉素結(jié)合蛋白2a（PBP2a），導(dǎo)致對(duì)所有內(nèi)酰胺類抗生素耐藥。2021/7/9119、 人的價(jià)值，在招收誘惑的一瞬間被決定。2022-3-62022-3-6Sunday, March 06, 202210、低頭要有勇氣，抬頭要有低氣。2022-3-62022-3-62022-3-63/6/2022 8:11:47 PM11、人總是珍惜為得到。2022-3-62022-3-62022-3-6Mar-226-Mar-2212、人亂于心，

6、不寬余請(qǐng)。2022-3-62022-3-62022-3-6Sunday, March 06, 202213、生氣是拿別人做錯(cuò)的事來懲罰自己。2022-3-62022-3-62022-3-62022-3-63/6/202214、抱最大的希望，作最大的努力。2022年3月6日星期日2022-3-62022-3-62022-3-615、一個(gè)人炫耀什么，說明他內(nèi)心缺少什么。2022年3月2022-3-62022-3-62022-3-63/6/202216、業(yè)余生活要有意義，不要越軌。2022-3-62022-3-6March 6, 202217、一個(gè)人即使已登上頂峰，也仍要自強(qiáng)不息。2022-3-62

7、022-3-62022-3-62022-3-64.培養(yǎng)特性 兼性厭氧菌，有氧條件下生長較厭氧條件迅速和旺盛 對(duì)營養(yǎng)要求不高，最適生長溫度3537，最適pH7.47.6。 普通培養(yǎng)基上形成直徑23mm不透明的圓形凸起菌落。產(chǎn)生金黃色、白色、檸檬色等非水溶性色素附著在菌落上。 金黃色葡萄球菌 血瓊脂平板上菌落周圍有透明溶血環(huán) 能在含10%15% NaCl瓊脂中生長 甘露醇高鹽平板上為黃色菌落。 5.抵抗力 該菌的抵抗力比其他無芽胞細(xì)菌強(qiáng)，耐干燥；近年來耐藥性增強(qiáng)，對(duì)多種抗菌藥物不敏感。葡萄球菌內(nèi)攜帶誘導(dǎo)性的青霉素酶和乙?；D(zhuǎn)移酶質(zhì)粒，通過轉(zhuǎn)導(dǎo)進(jìn)行質(zhì)粒的轉(zhuǎn)移。 （二）葡萄球菌的臨床檢驗(yàn)程序 標(biāo)本采集

8、：根據(jù)感染的部位，采集不同的標(biāo)本。該屬細(xì)菌廣泛分布在人體皮膚和黏膜，采取時(shí)避免病灶周圍正常菌群污染。 標(biāo)本直接檢查 顯微鏡檢查 無菌體液如腦脊液和關(guān)節(jié)穿刺液等可直接涂片、革蘭染色后，顯微鏡檢查見類似葡萄球菌的革蘭陽性球菌，則具有重要臨床價(jià)值；其他體液標(biāo)本查見細(xì)菌的同時(shí)伴有炎性細(xì)胞則也具有參考價(jià)值。可初步報(bào)告“查見類似葡萄球菌屬革蘭陽性球菌”，并進(jìn)一步進(jìn)行分離和鑒定。 抗原檢測 乳膠凝集試驗(yàn)測定SPA及莢膜抗原。 核酸檢測 針對(duì)耐熱核酸酶nuc、16S rRNA可鑒定葡萄球菌，測定macA可以快速檢出MRSA。分離培養(yǎng)與鑒定 分離培養(yǎng) 膿液、分泌物等臨床標(biāo)本可接種血瓊脂平板； 有污染的標(biāo)本如糞便

9、等應(yīng)接種在選擇平板上，如甘露醇高鹽平板、哥倫比亞多粘菌素奈啶酸平板； 血液標(biāo)本則用肉湯增菌培養(yǎng)基增菌后。初步鑒定 1）菌落性狀 平板培養(yǎng)基上孵育24h后，菌落外觀疑為葡萄球菌者應(yīng)進(jìn)行革蘭染色證實(shí)。 2）鑒別試驗(yàn) 觸酶試驗(yàn)陽性、溶葡萄球菌素（200g/ml）和呋喃唑酮100g敏感，氧化酶試驗(yàn)陰性可以與其他革蘭陽性球菌區(qū)別。 紅霉素（0.4g/ml）耐藥和甘油需氧產(chǎn)酸可以與微球菌區(qū)別。 （3）種的鑒定 1）凝固酶試驗(yàn) 玻片法測定結(jié)合型凝固酶；試管法測定分泌型凝固酶。金黃色葡萄球菌、中間型葡萄球菌呈現(xiàn)陽性反應(yīng)。路鄧葡萄球菌產(chǎn)生結(jié)合型凝固酶而不分泌游離型凝固酶, 因而玻片凝固酶試驗(yàn)陽性、試管凝固酶試驗(yàn)

10、陰性。 2）耐熱核酸酶試驗(yàn) 大多數(shù)金黃色葡萄球菌、施氏葡萄球菌、中間葡萄球菌、豬葡萄球菌能產(chǎn)生耐熱核酸酶。此外表皮葡萄球菌、模仿葡萄球菌、肉葡萄球菌含微弱耐熱核酸酶。3）其他鑒定試驗(yàn) 磷酸酶試驗(yàn)、吡咯烷酮芳基酰胺酶試驗(yàn)、鳥氨酸脫羧酶試驗(yàn)、脲酶試驗(yàn)、-半乳糖苷酶、3-羥基丁酮酸試驗(yàn)、新生霉素敏感試驗(yàn)、多粘菌素B耐藥試驗(yàn)、糖產(chǎn)酸試驗(yàn)是常用的葡萄球菌屬種間細(xì)菌的鑒定生化試驗(yàn)。（3）腸毒素檢測 1）生物學(xué)試驗(yàn) 采用幼貓腹腔注射(肉湯培養(yǎng)物或嘔吐物)，4h 內(nèi)發(fā)生嘔吐腹瀉和體溫升高或死亡等現(xiàn)象者，提示金黃色葡萄球菌腸毒素存在。 2）瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)或ELISA法測定 用瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)、ELISA法或放射免疫分

11、析法檢測樣本中的腸毒素。 3）腸毒素基因測定 針對(duì)腸毒素基因設(shè)計(jì)毒素的通用引物及特異性引物，應(yīng)用PCR技術(shù)可直接進(jìn)行分型測定。第二節(jié) 鏈球菌屬 鏈球菌屬（Streptococcus）細(xì)菌種類多，分布廣，是人和某些動(dòng)物的寄生菌。其中某些菌種為毒力強(qiáng)的致病菌，另一些則是作為正常菌群棲居于宿主的呼吸道、消化道、泌尿生殖道，還有一些是皮膚上的過路菌和黏膜上的定居菌 一、分類 （一）A、C、G群溶血性鏈球菌 菌落直徑大于0.5mm A群的化膿性鏈球菌（S. pyogenes）、C群、G群的馬鏈球菌（S.equi）和似馬鏈球菌（S.equismilis）； 菌落直徑小于0.5mm 具A、C、G群抗原，統(tǒng)稱

12、米勒鏈球菌（S.milleri），主要分為3種：咽喉炎鏈球菌、中間型鏈球菌和星座鏈球菌。除此之外，米勒鏈球菌還有溶血和不溶血的細(xì)菌。 （二）B群溶血性鏈球菌又稱無乳鏈球菌（S.agalactiae）。 （三）溶血性鏈球菌 包括肺炎鏈球菌（S.pneumoniae）和草綠色鏈球菌群（Viridans streptococci）。 （四）不溶血D群鏈球菌 牛鏈球菌（S.bovis）二、臨床意義 （一）致病因素 1.菌體細(xì)胞壁成分 （1）脂磷壁酸 位于細(xì)胞壁中并伸展至菌體表面，與黏附宿主細(xì)胞有關(guān)。 （2）M蛋白 是鏈球菌細(xì)胞壁中的表面蛋白質(zhì)，具有抗吞噬和抵抗細(xì)胞內(nèi)殺菌作用。M蛋白有抗原性，能刺激機(jī)體

13、產(chǎn)生型特異性抗體；與心肌、腎小球基底膜有共同抗原成分。2.侵襲性酶 （1）鏈道酶（SD） 也稱鏈球菌DNA酶，能分解黏稠膿液中具有高度黏性的DNA，使膿汁稀薄易于擴(kuò)散。主要由A、C、G群鏈球菌產(chǎn)生。 （2）透明質(zhì)酸酶 能分解細(xì)胞間質(zhì)的透明質(zhì)酸，使病菌易于在組織中擴(kuò)散，又稱擴(kuò)散因子。 （3）鏈激酶（SK） 又稱鏈球菌溶纖維蛋白酶，能激活血液中溶纖維蛋白酶原轉(zhuǎn)化為溶纖維蛋白酶，使之溶解血塊或阻止血漿凝固，有利于細(xì)菌在組織中擴(kuò)散。重組鏈激酶目前用于治療血栓性疾病。 （4）膠原酶 能水解肌肉和皮下組織中的膠原蛋白纖維，便于細(xì)菌在組織中擴(kuò)散。3.外毒素 （1）鏈球菌溶素 （2）致熱外毒素（1）鏈球菌溶素

14、 有溶解紅細(xì)胞，破壞白細(xì)胞、血小板及毒害心臟作用 根據(jù)對(duì)O2穩(wěn)定性：鏈球菌溶素O和鏈球菌溶素S1.SLO 絕大多數(shù)A群鏈球菌株和許多C、G群菌株能產(chǎn)生SLO，SLO為含-SH基的蛋白質(zhì)，遇氧時(shí)-SH基被氧化為-S-S-基，失去溶血能力。若加入亞硫酸鈉和半胱氨酸等還原劑，溶血作用可以逆轉(zhuǎn)。SLO對(duì)中性粒細(xì)胞有破壞作用；對(duì)哺乳動(dòng)物的血小板、心肌細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞等也有毒性作用?？乖詮?qiáng)，感染后患者機(jī)體產(chǎn)生抗SLO抗體，病愈后可持續(xù)數(shù)月甚至數(shù)年。風(fēng)濕熱患者血清SLO抗體顯著增高，活動(dòng)性病例升高更顯著，可作為新近鏈球菌感染或風(fēng)濕活動(dòng)的輔助診斷。 2.SLS 是一種小分子的糖肽，無抗原性。對(duì)氧穩(wěn)定

15、，對(duì)熱和酸敏感。多數(shù)A、C、G群及某些其他群鏈球菌產(chǎn)生。能破壞白細(xì)胞和血小板。血瓊脂平板上菌落周圍的溶血環(huán)是由SLS所致。（2）致熱外毒素 由A群鏈球菌溶原菌株產(chǎn)生的致熱外毒素（SPE），曾稱紅疹毒素或猩紅熱毒素。 為蛋白質(zhì)，對(duì)熱穩(wěn)定，具有抗原性，是人類猩紅熱的主要致病物質(zhì)，具有損害細(xì)胞或組織，使患者產(chǎn)生紅疹并具內(nèi)毒素樣致熱作用。 分為A、B、C三型，A型和C型分別由噬菌體攜帶的speA和speC編碼，B型由染色體基因speB編碼。均為超抗原，刺激T細(xì)胞誘發(fā)淋巴細(xì)胞合成和釋放TNF、IL-1和IL-6，進(jìn)一步導(dǎo)致發(fā)熱、休克及組織損傷。 （二）所致疾病 1侵襲性疾病 皮膚和皮下組織急性化膿性炎癥

16、 感染部位界限不明顯，膿性分泌物稀薄，常引起蜂窩組織炎；沿淋巴管和血流擴(kuò)散引起急性淋巴管炎、淋巴結(jié)炎及敗血癥。 其他感染 如扁桃體炎、咽炎、中耳炎、乳突炎、腎盂腎炎、產(chǎn)褥熱等。無乳鏈球菌引起新生兒菌血癥和腦膜炎。肺炎鏈球菌是大葉性肺炎、支氣管炎的病原菌，還可引起中耳炎、乳突炎、鼻竇炎、腦膜炎和菌血癥。 草綠色鏈球菌是人體口腔、消化道、女性生殖道的正常菌群；可引起心臟瓣膜異?；颊叩膩喖毙约?xì)菌性心內(nèi)膜炎。2毒素性疾病 （1）猩紅熱 是由產(chǎn)生SPE的A群鏈球菌引起的全身中毒癥狀。常繼發(fā)于嚴(yán)重的咽炎或皮膚軟組織感染。少數(shù)還可見心肌炎、腎小球腎炎等病變。3變態(tài)反應(yīng)性疾病 （1）風(fēng)濕熱 由A群鏈球菌的多種

17、型別引起，常繼發(fā)于A群鏈球菌感染的咽炎，潛伏期為15周，易感人群為10歲以下兒童。臨床表現(xiàn)以風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性心臟病為主。致病機(jī)制鏈球菌細(xì)胞壁多糖抗原與心肌瓣膜、關(guān)節(jié)組織糖蛋白有共同抗原性；胞壁蛋白抗原與心肌有共同抗原性；屬第型變態(tài)反應(yīng)?？赡苁荕蛋白的免疫復(fù)合物沉積于心瓣膜和關(guān)節(jié)滑液膜上造成。屬第III型變態(tài)反應(yīng)。3變態(tài)反應(yīng)性疾病 （2）急性腎小球腎炎 大多數(shù)由A群12型鏈球菌引起，多見于兒童和少年。臨床表現(xiàn)為蛋白尿、浮腫和高血壓。其致病機(jī)制：鏈球菌的某些抗原與腎小球基底膜有共同抗原，機(jī)體針對(duì)鏈球菌所產(chǎn)生的抗體與腎小球基底膜發(fā)生反應(yīng)，屬第II型變態(tài)反應(yīng)；由鏈球菌的M蛋白所產(chǎn)生的相應(yīng)抗體形成的

18、免疫復(fù)合物沉積于腎小球基底膜，造成基底膜損傷，屬于第III型變態(tài)反應(yīng)。豬鏈球菌病 豬鏈球菌病主要是由幾種C、D、E及L群鏈球菌引起，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)其莢膜抗原血清型有35種以上。大多數(shù)致病性血清型在19血清型。血清型2為最常見和毒力最強(qiáng)的血清型。人主要通過接觸病死豬感染。 三、微生物學(xué)檢驗(yàn) 鏈球菌的基本特性 1. 形態(tài)結(jié)構(gòu) 鏈球菌是直徑小于2m的球形或卵圓形革蘭陽性球菌，呈鏈狀排列，鏈的長短和細(xì)菌的種類及生長環(huán)境有關(guān)。 肺炎鏈球菌呈矛尖狀，寬端相對(duì)尖端向外，成雙排列，無芽胞、無動(dòng)力，但能形成莢膜和黏液層。2.抗原結(jié)構(gòu) 抗原結(jié)構(gòu)復(fù)雜，主要有多糖抗原和蛋白抗原，前者位于細(xì)胞壁以此可將鏈球菌分類為A、B、C

19、、D、F、G等20群，后者主要有M蛋白、F蛋白和G蛋白等。3.變異性 肺炎淋球菌的pbp 1a、pbp 2x和pbp 2b的單個(gè)突變或多個(gè)同時(shí)突變，導(dǎo)致對(duì)青霉素或頭孢菌素的耐藥。4.培養(yǎng)特性 兼性厭氧菌，肺炎鏈球菌和草綠色鏈球菌某些種需要CO2促進(jìn)其生長 營養(yǎng)要求高，須在培養(yǎng)基中加入血液、血清。最適生長溫度3537，pH7.47.6 血平板上形成灰白色，透明或半透明，表面光滑的小菌落；不同菌種的菌落可分別形成、三種溶血現(xiàn)象；4.培養(yǎng)特性 B群鏈球菌菌落較大，溶血環(huán)較A、C、G群模糊，某些B群鏈球菌無溶血環(huán)。 牛型鏈球菌則為無溶血環(huán)呈灰色菌落 液體培養(yǎng)基中表現(xiàn)為絮狀和顆粒沉淀 肺炎鏈球菌因莢膜多

20、糖使菌落呈黏液狀，因產(chǎn)生自溶酶，在平板上培養(yǎng)48小時(shí)后出現(xiàn)中心凹陷的“臍窩狀”菌落。5.抵抗力 本菌屬大多數(shù)細(xì)菌對(duì)干燥和消毒劑敏感，除肺炎鏈球菌外，本菌屬細(xì)菌較少引起細(xì)菌耐藥性，但近年對(duì)青霉素耐藥甚至多重耐藥的肺炎鏈球菌的出現(xiàn)并在全球播散，引起高度關(guān)注。（二）鏈球菌的臨床檢驗(yàn)程序 標(biāo)本采集 咽拭子、痰液、膿汁和血液等標(biāo)本采集后在2h內(nèi)運(yùn)送到實(shí)驗(yàn)室，立即進(jìn)行檢查和接種。對(duì)B群溶血鏈球菌的檢查，用無菌棉簽采集第35周37周妊娠婦女的陰道分泌物，置于含多粘菌素（10g/ml）和萘啶酸（15g/ml）選擇性培養(yǎng)肉湯中孵育1824h，再作分離培養(yǎng)。2.標(biāo)本直接檢查 顯微鏡檢查 標(biāo)本涂片、革蘭染色、顯微鏡

21、檢查見鏈狀排列革蘭陽性球菌有助于無正常菌群污染標(biāo)本的診斷。 抗原檢測 咽拭標(biāo)本的A群鏈球菌和女性生殖道標(biāo)本的B群鏈球菌可用抗原檢測 莢膜腫脹試驗(yàn)用于檢查肺炎鏈球菌。 3.分離培養(yǎng)與鑒定 分離培養(yǎng)采用羊血瓊脂平板培養(yǎng)有助于識(shí)別溶血特性和進(jìn)一步鑒定。 初代分離需用5%CO2環(huán)境，3537孵育24h，觀察菌落性狀 菌落周圍呈現(xiàn)透明溶血環(huán)的為溶血性鏈球菌，菌落直徑大于0.5mm或小于0.5mm。 草綠色溶血環(huán)的為溶血性鏈球菌 有些菌落灰白色不出現(xiàn)溶血環(huán)。（2）初步鑒定 取分離平板上生長的菌落周圍呈現(xiàn)溶血或不溶血的單個(gè)菌落作涂片，革蘭染色鏡檢 革蘭陽性球菌，鏈狀或短鏈狀排列 觸酶試驗(yàn)陰性，6.5%NaC

22、l不生長者 可確定為鏈球菌屬細(xì)菌 （3）溶血性鏈球菌鑒定 Lancefield群特異性抗原鑒定 根據(jù)Lancefield分群的要求提取各菌落的抗原，與相應(yīng)的分群血清進(jìn)行凝集試驗(yàn)。 與B群抗血清凝集的菌株可直接確認(rèn)為無乳鏈菌 與F群抗血清凝集并且菌落直徑0.5mm可確定為米勒鏈球菌 與A、C、G群抗血清凝集的菌株不能確定種類，還需根據(jù)菌落大小和生化反應(yīng)進(jìn)一步鑒定。 Lancefield抗原群菌落大?。╩m）菌種名PYRVPCAMPBGURA0.5化膿性鏈球菌 A0.5米勒鏈球菌 B 無乳鏈球菌 C0.5馬鏈球菌C0.5米勒鏈球菌F0.5米勒鏈球菌 G0.5似馬鏈球菌G0.5米勒鏈球菌未分群0.5

23、米勒鏈球菌 桿菌肽敏感試驗(yàn) A群鏈球菌對(duì)0.04U桿菌肽幾乎全部敏感。 從臨床分離的菌株中有5%15%非A群鏈球菌如B、C和G群鏈球菌等也敏感。 而其他群鏈球菌絕大多數(shù)對(duì)其耐藥。 可作為A群鏈球菌的篩選試驗(yàn)。有別于其他PYR陽性的溶血性細(xì)菌（豬鏈球菌、海豚鏈球菌）和A群小菌落溶血性鏈球菌（米勒鏈球菌）。 CAMP試驗(yàn) 無乳鏈球菌能產(chǎn)生CAMP因子，它可促進(jìn)金黃色葡萄球菌溶血能力，使其產(chǎn)生顯著的協(xié)同溶血作用。本法可作為無乳鏈球菌的初步鑒定試驗(yàn)非溶血鏈球菌鑒定菌 種optochin敏感試驗(yàn)?zāi)懼芫囼?yàn)?zāi)懼呷~苷試驗(yàn)肺炎鏈球菌S+草綠色鏈球菌R牛鏈球菌R+草綠色鏈球菌鑒定 菌 群VP脲酶精氨酸七葉苷

24、甘露醇山梨醇溫和鏈球菌群變異鏈球菌群唾液鏈球菌群/米勒鏈球菌群/ 第三節(jié) 腸球菌屬 一、概述 腸球菌屬（Enterococus） 廣泛分布在自然界，常棲居在人、動(dòng)物的腸道和女性生殖道 為醫(yī)院感染的重要病原菌二、臨床意義 腸球菌廣泛分布于自然環(huán)境及人和動(dòng)物消化道內(nèi)。近年來，研究者在腸球菌內(nèi)發(fā)現(xiàn)了一個(gè)約包含150個(gè)基因的致病DNA片段，稱為“致病島”。包括多種致病因子，可增強(qiáng)腸球菌離開人類腸道后的侵襲力，引起腸道外感染。二、臨床意義 致病因素 表面黏附素、炎癥調(diào)節(jié)因子 、毒性分泌物。 所致疾病 泌尿系感染。 心內(nèi)膜炎 腹膜炎 牙髓疾病 腹腔和盆腔創(chuàng)傷時(shí)腸球菌感染較常見。 腸球菌引起的菌血癥常發(fā)生于

25、有嚴(yán)重基礎(chǔ)疾患的老年人、長期住院接受抗菌藥物治療的免疫功能低下患者。 臨床標(biāo)本中分離最常見的是糞腸球菌，約占80%90%，屎腸球菌約占5%10%，很少分離到腸球菌屬的其他種。 三、微生物學(xué)檢驗(yàn) 腸球菌的基本特性 形態(tài)結(jié)構(gòu) 為革蘭陽性球菌、呈單個(gè)，成對(duì)或短鏈狀排列，呈球桿狀；液體培養(yǎng)基中呈卵圓形、鏈狀排列。無芽胞和莢膜，個(gè)別菌種有稀疏鞭毛。 抗原成分 含鏈球菌D群抗原。培養(yǎng)特性 兼性厭氧，最適生長溫度35，多數(shù)菌株在10和45均能生長。 營養(yǎng)要求不高。 部分糞腸球菌菌株在含有兔血、馬血或人血的平板上出現(xiàn)溶血，而在羊血平板上不出現(xiàn)。其他菌種出現(xiàn)溶血或不溶血。 所有菌株在含6.5%NaCl肉湯中能生

26、長，在40%膽汁培養(yǎng)基中能分解七葉苷。抵抗力 腸球菌屬細(xì)菌 對(duì)頭孢菌素類、林可霉素類和磺胺類抗菌藥物耐藥。 近年來主要表現(xiàn)為對(duì)氨基糖苷類耐藥和對(duì)萬古霉素耐藥。 對(duì)萬古霉素的耐藥是由van A、van B和van C等基因介導(dǎo)。（二）腸球菌的臨床檢驗(yàn)程序 標(biāo)本采集 常規(guī)方法采集血、尿、創(chuàng)傷標(biāo)本和其他拭子。 標(biāo)本直接檢查 顯微鏡檢查 涂片染色顯微鏡檢查可見單個(gè)、成雙或短鏈排列卵圓形革蘭陽性球菌。 核酸檢測 16s rRNA基因、efaA、ace是常用的檢測腸球菌的靶基因。 萬古霉素耐藥基因van的檢測可直接指示對(duì)萬古霉素的耐藥性。 分離培養(yǎng)與鑒定 標(biāo)本接種于含血瓊脂平板，若送檢標(biāo)本中含革蘭陰性桿菌

27、，可選用選擇鑒別培養(yǎng)基，常用的有： 疊氮膽汁七葉苷瓊脂，可抑制革蘭陰性菌生長，而腸球菌分解七葉苷產(chǎn)生黑色菌落； 哥倫比亞多粘菌素-萘啶酸瓊脂（CAN） 苯乙基乙醇瓊脂（PEA） 接種標(biāo)本平板置于3537，孵育24h后形成灰白、不透明、表面光滑、直徑0.51mm大小的圓形菌落，血平板上為溶血或不溶血，糞腸球菌的某些菌株在馬血、兔血平板上出現(xiàn)溶血。初步鑒定 腸球菌屬細(xì)菌革蘭染色陽性，卵圓形，單個(gè)、成雙或短鏈排列。 觸酶陰性、膽汁七葉苷和PYR陽性、6.5% NaCl肉湯中能生長。 但糞腸球菌培養(yǎng)于含血的培養(yǎng)基中，可合成細(xì)胞色素或觸酶或兩者皆有，因而某些菌株可表現(xiàn)為觸酶弱陽性。與其他觸酶陰性、兼性厭

28、氧革蘭陽性球菌鑒別 菌屬萬古霉素分解葡萄糖產(chǎn)氣PYR膽汁七葉苷6.5%NaCl生長溫度1045腸球菌屬敏感乳球菌屬敏感VV鏈球菌屬敏感aV明串珠菌屬耐藥VbVV腸球菌屬間的菌種鑒定 有賴于糖代謝試驗(yàn)。根據(jù)對(duì)甘露醇，山梨醇和精氨酸的代謝分成五群。 第一群 分解甘露醇、山梨糖產(chǎn)酸，不水解精氨酸； 第二群 分解甘露醇和水解精氨酸； 第三群 水解精氨酸，不分解甘露醇、山梨醇和山梨糖， 第四群為 不分解甘露醇，山梨糖，不水解精氨酸， 第五群為 分解甘露醇，不分解山梨糖，不水解精氨酸， 第四節(jié) 其他需氧革蘭陽性球菌 一、觸酶陽性的革蘭陽性球菌 微球菌屬（Micrococcus）、巨球菌屬(Macrococ

29、cus)、動(dòng)球菌屬(Planococcus)、考氏考克氏菌(Kocuria kristinae)以及觸酶微弱陽性的差異球菌屬(Alloiococcus)和粘性羅氏菌(Rothia mucilaginosa) 二、觸酶陰性的革蘭陽性球菌 乳球菌屬（Lactococcus）、氣球菌屬（Aerococcus）、片球菌屬（Pediococcus）、孿生球菌屬（Gemella）、白聯(lián)球菌屬（Leuconostoc）和生活力缺損菌屬（Abiotrophia）第五節(jié) 奈瑟菌屬 奈瑟菌屬包括 淋病奈瑟菌（N.gonorrhoeae） 腦膜炎奈瑟菌（N.meningitidis） 解乳糖奈瑟菌、干燥奈瑟菌、微黃

30、奈瑟菌、粘液奈瑟菌、淺黃奈瑟菌、灰色奈瑟菌、延長奈瑟菌、去氮奈瑟菌和多糖奈瑟菌等 僅淋病奈瑟菌和腦膜炎奈瑟菌對(duì)人致病 二、臨床意義 腦膜炎奈瑟菌 致病因素 莢膜 菌毛 內(nèi)毒素 所致疾病 流行性腦脊髓膜炎 可導(dǎo)致機(jī)體免疫缺陷患者的非腦脊髓膜炎、急性或慢性菌血癥 引起老年人肺炎、結(jié)膜炎等 可以在鼻咽部形成帶菌狀態(tài) 二、臨床意義 淋病奈瑟菌 致病因素 菌毛 脂多糖 IgA1蛋白酶 外膜蛋白P 所致疾病 單純性淋病 盆腔炎 口咽部和肛門直腸淋??； 淋菌性結(jié)膜炎 播散性淋病微生物學(xué)檢驗(yàn) 奈瑟菌屬的基本特性 形態(tài)結(jié)構(gòu) 革蘭陰性雙球菌，菌體直徑0.61.5m，形似雙腎或咖啡豆樣，凹面相對(duì) 抗原成分 腦膜炎奈

31、瑟菌 莢膜多糖抗原 具有群特異性。分為至少13個(gè)血清群,與人類疾病關(guān)系密切的主要是A、B、C、Y及W-135群。A群及C群是引起流行性腦脊髓膜炎的主要血清群。 外膜蛋白 淋病奈瑟菌 菌毛蛋白抗原、外膜蛋白抗原、脂寡糖抗原培養(yǎng)特性 大多數(shù)奈瑟菌屬細(xì)菌需要在培養(yǎng)基中添加羊血、兔血或血清，對(duì)脂肪酸敏感，在培養(yǎng)基中需加入可溶性淀粉。需氧生長，初次分離需要5%7%CO2和高濕度刺激生長。最適生長溫度3537，低于30不生長。 血瓊脂平板或巧克力（色）瓊脂平板上呈光滑、濕潤、透明或半透明、直徑12mm的不溶血、圓形、灰藍(lán)色菌落； 卵黃瓊脂平板上為無色、光滑、濕潤奶油狀的菌落。在液體培養(yǎng)基中呈輕度或中度混濁

32、生長，無菌膜。 腦膜炎奈瑟菌于孵育24小時(shí)后在培養(yǎng)基上發(fā)生自溶。抵抗力 奈瑟菌屬細(xì)菌對(duì)寒冷、干燥和熱的抵抗力弱，對(duì)化學(xué)消毒劑敏感。對(duì)青霉素敏感，但近年來由質(zhì)粒介導(dǎo)的內(nèi)酰胺酶所致的耐藥在淋病奈瑟菌中產(chǎn)生較多。 生化特性菌 種在巧克力平板上的菌落形態(tài)MTMMLNYC生長試驗(yàn)氧化分解產(chǎn)酸硝酸鹽還原多糖合成DNA酶巧克力平板或血平板（22）營養(yǎng)瓊脂（35）葡萄糖麥芽糖乳糖蔗糖果糖腦膜炎奈瑟菌灰褐色、半透明 、 光 滑 1 2mm+-V+-淋病奈瑟菌灰褐色，半透明，光滑0.51mm+-+-卡他莫拉菌淺紅棕色，不透明，干燥13mmV+-+-+奈瑟菌屬的臨床檢驗(yàn)程序 1.標(biāo)本采集 腦膜炎奈瑟菌 無菌方法抽取

33、腦脊液、關(guān)節(jié)液、血液、瘀點(diǎn)穿刺液等標(biāo)本，采集后立即送往實(shí)驗(yàn)室，或用血平板進(jìn)行床邊接種后置35孵育。血液標(biāo)本接種在血液培養(yǎng)瓶中置35孵育。標(biāo)本運(yùn)送時(shí)需要35保溫。 淋病奈瑟菌 用無菌塑料棒滌綸拭子，伸入陰道后穹隆或?qū)m頸內(nèi)1cm處停留1015秒時(shí)間，蘸取陰道和宮頸分泌物； 采集尿道分泌物時(shí)應(yīng)棄去前段膿性分泌物，留取后段作為標(biāo)本； 尿液可作為檢查標(biāo)本； 直腸肛拭標(biāo)本應(yīng)廢棄第一根污染棉簽，用第二根棉簽醮取的分泌物； 新生兒結(jié)膜炎時(shí)應(yīng)采取眼結(jié)膜表面分泌物。標(biāo)本直接檢查 顯微鏡檢查 腦脊液 直接或經(jīng)離心后取沉淀涂片 皮膚瘀點(diǎn)滲出液涂片 革蘭染色后顯微鏡下見白細(xì)胞內(nèi)外的革蘭陰性雙球菌，可報(bào)告“檢出革蘭陰性雙

34、球菌，疑似腦膜炎奈瑟菌”。有助于流行性腦脊髓膜炎早期診斷。標(biāo)本直接檢查 顯微鏡檢查 疑為淋病的標(biāo)本采集后應(yīng)立即涂片、革蘭染色、顯微鏡檢查。 男性尿道分泌物和新生兒眼結(jié)膜分泌物標(biāo)本中見到中性多形核細(xì)胞內(nèi)、外較多的革蘭陰性雙球菌，可報(bào)告“檢出革蘭陰性雙球菌，疑似淋病奈瑟菌”。 由于女性陰道和直腸有許多正常菌群寄居，當(dāng)女性宮頸或直腸拭子標(biāo)本涂片中見到胞內(nèi)、胞外大量革蘭陰性雙球菌時(shí)，必須由培養(yǎng)結(jié)果加以證實(shí)?？乖瓩z測 膠乳凝集試驗(yàn) 包括腦膜炎奈瑟菌A、C、Y、W125血清型的多價(jià)抗體和血清型B抗體核酸檢測 腦膜炎奈瑟菌 檢測靶片段的基因有16S rRNA 基因、轉(zhuǎn)錄調(diào)控基因crgA、莢膜轉(zhuǎn)移基因ctrA

35、和插入序列IS1106等 淋病奈瑟菌 隱蔽性質(zhì)粒、染色體基因探針、抗淋病奈瑟菌胞嘧啶DNA 甲基轉(zhuǎn)移酶基因、透明蛋白(opa)基因、菌毛DNA 探針、rRNA 基因探針和porA 基因。分離培養(yǎng)與鑒定 分離培養(yǎng) 腦脊液 接種在巧克力瓊脂或羊血瓊脂平板 咽拭子或鼻咽拭子 接種在選擇性培養(yǎng)基上如改良的Thayer-Martin（MTM）、GC-Lect、New York City（NCY）等培養(yǎng)基。 血液標(biāo)本 經(jīng)增菌培養(yǎng)基增菌培養(yǎng)后，移種至巧克力（色）瓊脂或羊血瓊脂平板上。置5%7%CO2 35孵育培養(yǎng)，每隔24小時(shí)觀察平板。 疑為淋病奈瑟菌感染的標(biāo)本接種于 選擇培養(yǎng)基如MTM、Martin-Lewis（ML）或NYC。立即置于5%CO2氣體條件下3537孵育。每隔24小時(shí)觀察平板。鑒定 初步鑒定 直徑12mm，灰褐色、光滑、半透明、稍扁的菌落，涂片革蘭染色見陰性雙球菌，氧化酶和觸酶試驗(yàn)陽性可初步確定為奈瑟菌屬。 最終鑒定 葡萄糖和麥芽糖