第八章植物體細(xì)胞雜交

1、.第八章第八章 植物體細(xì)植物體細(xì)胞雜交胞雜交第一節(jié)第一節(jié) 植物體細(xì)胞雜交的概念植物體細(xì)胞雜交的概念第二節(jié)第二節(jié) 原生質(zhì)體融合原生質(zhì)體融合第三節(jié)第三節(jié) 雜種細(xì)胞的選擇和體細(xì)胞雜種的鑒定雜種細(xì)胞的選擇和體細(xì)胞雜種的鑒定第四節(jié)第四節(jié) 細(xì)胞質(zhì)雜種細(xì)胞質(zhì)雜種第五節(jié)第五節(jié) 原生質(zhì)體的遺傳修飾原生質(zhì)體的遺傳修飾第六節(jié)第六節(jié) 體細(xì)胞雜交的技術(shù)的應(yīng)用體細(xì)胞雜交的技術(shù)的應(yīng)用.1 植物體細(xì)胞雜交的概念植物體細(xì)胞雜交的概念一 植物原生質(zhì)體融合技術(shù)的發(fā)展二 植物細(xì)胞雜交類(lèi)型.一 植物原生質(zhì)體融合技術(shù)的發(fā)展1 原生質(zhì)體融合技術(shù)發(fā)展 1960年，Kocking用酶法制備高等植物原生質(zhì)體首次獲得成功；1970年，Power首

2、次用硝酸鈉進(jìn)行為誘導(dǎo)劑進(jìn)行了較大規(guī)模的原生質(zhì)體 誘導(dǎo)融合；1971年，Takebe首次從離體煙草原生質(zhì)體培養(yǎng)中獲得再生完整植株；1972年，Carlson首次獲得粉藍(lán)煙草和郎氏煙草的細(xì)胞雜種，這也是第 一個(gè)植物細(xì)胞雜種1974年，Kao將聚乙二醇誘導(dǎo)融合法應(yīng)用于植物細(xì)胞融合并建立了相應(yīng) 的融合技術(shù)；1978年，Melchers獲得了第一個(gè)屬間細(xì)胞雜種（番茄馬鈴薯）；1981年，Zimmerman發(fā)明了電融合儀，并首次提出了電融合概念；1987年，Schweiger建立了單對(duì)原生質(zhì)體電融合技術(shù)程序。.一 植物原生質(zhì)體融合技術(shù)的發(fā)展2 植物體細(xì)胞雜交（somatic hybridization):

3、 將植物不同種、屬甚至科間的原生質(zhì)體通過(guò)人工誘導(dǎo)方法融合，然后進(jìn)行離體培養(yǎng)再生植株的技術(shù)。v1972年，Carlson首次獲得粉藍(lán)煙草和郎氏煙草的細(xì)胞雜種，這也是第一個(gè)植物體細(xì)胞雜種。v19781978年梅爾徹斯年梅爾徹斯(Melchers)(Melchers)等首次獲得了番茄和馬等首次獲得了番茄和馬鈴薯的屬間體細(xì)胞雜種鈴薯的屬間體細(xì)胞雜種“Potamato”“Potamato”。.去掉細(xì)胞壁去掉細(xì)胞壁原生質(zhì)體融合原生質(zhì)體融合. 白菜白菜甘藍(lán)甘藍(lán).3 意義克服有性不親和性障礙。使喪失形態(tài)發(fā)生能力的細(xì)胞恢復(fù)形態(tài)發(fā)生雙親葉綠體，線粒體DNA重組產(chǎn)生新的核 外遺傳系統(tǒng)。.二 植物細(xì)胞雜交類(lèi)型1 植物

4、體細(xì)胞雜交類(lèi)型（1）體細(xì)胞雜交 雙親的體細(xì)胞原生質(zhì)體進(jìn)行融合，培養(yǎng)篩選鑒定，從而獲得雜種植株的過(guò)程。（2）配子-體細(xì)胞雜交 一個(gè)為體細(xì)胞原生質(zhì)體，一個(gè)為性細(xì)胞原生質(zhì)體，融合獲得三倍體植株。.二 植物細(xì)胞雜交類(lèi)型（3）配子間細(xì)胞雜交 均為性細(xì)胞的原生質(zhì)體融合，精-精，卵-卵，精-卵原生質(zhì)體融合。（4）微細(xì)胞雜交 誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生高頻率的微核，分離制備含有微核的原生質(zhì)體，只攜帶一條染色體。微小原生質(zhì)體：只含有細(xì)胞核或部分染色體。通過(guò)轉(zhuǎn)移單個(gè)完整的染色體，建立單染色體添加系，解決細(xì)胞雜交出現(xiàn)的難題。.二 植物細(xì)胞雜交類(lèi)型（5）細(xì)胞質(zhì)雜交 受體親本的原生質(zhì)體與供體親本的細(xì)胞質(zhì)雜交，主要改變細(xì)胞質(zhì)遺傳，改良

5、葉綠體和線粒體基因組成。細(xì)胞質(zhì)雜交可以縮短育種時(shí)間。（6）細(xì)胞核的吸收 受體親本原生質(zhì)體與供體親本原生質(zhì)體細(xì)胞核融合，只是供體的核基因轉(zhuǎn)移。.二 植物細(xì)胞雜交類(lèi)型2 原生質(zhì)體融合類(lèi)型（1）對(duì)稱融合：兩個(gè)完整原生質(zhì)體的融合，在合子中包含兩個(gè)親本全套染色體和部分細(xì)胞質(zhì)。（2）非對(duì)稱融合：使親本的細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核失活再融合。 A細(xì)胞核B細(xì)胞質(zhì) A完整細(xì)胞B細(xì)胞質(zhì) A完整細(xì)胞B細(xì)胞質(zhì)和部分細(xì)胞核.2 原生質(zhì)體融合原生質(zhì)體融合一 融合方法二 影響原生質(zhì)體融合的因素三 融合產(chǎn)物的細(xì)胞學(xué).原生質(zhì)體融合.雜交的兩個(gè)細(xì)胞雜交的兩個(gè)細(xì)胞用纖維素酶、果膠酶處用纖維素酶、果膠酶處理細(xì)胞壁理細(xì)胞壁原生質(zhì)體、原生質(zhì)體、經(jīng)離

6、心、振經(jīng)離心、振動(dòng)、電刺激動(dòng)、電刺激用聚二乙醇用聚二乙醇（）（）誘導(dǎo)誘導(dǎo)融合后的原生質(zhì)體融合后的原生質(zhì)體再生細(xì)胞壁再生細(xì)胞壁雜種細(xì)胞雜種細(xì)胞脫分化脫分化細(xì)胞分裂細(xì)胞分裂愈傷組織愈傷組織雜種植株雜種植株再分化再分化（植物體細(xì)胞（植物體細(xì)胞融合完成的標(biāo)融合完成的標(biāo)志）志）植植物物細(xì)細(xì)胞胞融融合合植物植物組織組織培養(yǎng)培養(yǎng).一一 融合方法融合方法1自發(fā)融合自發(fā)融合在酶解細(xì)胞壁的過(guò)程中，有些相鄰的原生質(zhì)體能彼此融合形成同核體(homokaryon)，每個(gè)同核體包含240個(gè)核。 形成的原因：由不同細(xì)胞間胞間連絲的擴(kuò)展和粘連造成的。 減少自發(fā)融合的措施：在用酶液處理之前，使細(xì)胞受到強(qiáng)烈的質(zhì)壁分離藥物的作用，

7、切斷胞間連絲。 .一一 融合方法融合方法2.誘發(fā)融合 （1）NaNO3處理 1909年，Kuster在一個(gè)發(fā)生了質(zhì)壁分離的表皮細(xì)胞中，低滲NaNO3溶液可以引起2個(gè)亞原生質(zhì)體的融合。 缺點(diǎn)：異核體(heterokaryon)形成頻率不高，對(duì)細(xì)胞具有毒害作用。.一一 融合方法融合方法（2）多聚化合物法 加入一些多聚化合物如多聚鳥(niǎo)氨酸，改變?cè)|(zhì)體表面的物理特性，增強(qiáng)原生質(zhì)體內(nèi)吞作用。缺點(diǎn)：可能使細(xì)胞膜不可逆破壞。.一一 融合方法融合方法（3）高PH-高濃度鈣離子處理 改變膜的通透性，使細(xì)胞融合，可以使種間細(xì)胞融合。 缺點(diǎn)：但對(duì)于有些原生質(zhì)體系統(tǒng)，這樣高的pH值是有毒的。.一一 融合方法融合方法（

8、4）PEG誘導(dǎo)v原理：PEG分子具有輕微的負(fù)極性，故可以與具有正極性基團(tuán)的水、蛋白質(zhì)和碳水化合物等形成氫鍵，從而在原生質(zhì)體之間形成分子橋，其結(jié)果是使原生質(zhì)體發(fā)生粘連進(jìn)而促使原生質(zhì)體的融合。另外，PEG能增加類(lèi)脂膜的流動(dòng)性，也使原生質(zhì)體的核、細(xì)胞器發(fā)生融合成為可能。.一一 融合方法融合方法v特點(diǎn)： 異核體形成的頻率高，可重復(fù)性強(qiáng)，對(duì)大多數(shù)細(xì)胞低毒；形成雙核異核體的頻率高。.一一 融合方法融合方法v注意事項(xiàng)：PEG的分子量: (MW 15006000)分子量大融合效果好，但有毒害作用；分子量小，不易誘導(dǎo)融合。使用濃度15%-45%。一年生植物用低分子量，多年生植物用高分子量。酶溶液濃度。原生質(zhì)體來(lái)

9、源。PEG的稀釋逐步進(jìn)行。在PEG溶液中，加入鈣離子可以提高融合效率。.一一 融合方法融合方法vPEG融合的技術(shù)要點(diǎn)融合劑的配制：A液：氯化鈣，磷酸二氫鉀，甘露醇，PEG；B液：氯化鈣，磷酸二氫鉀，甘露醇融合原生質(zhì)體的密度與比例：105原生質(zhì)體/mL，比例1:1原生質(zhì)體融合方式：將原生質(zhì)體懸浮液均勻地滴入培養(yǎng)皿底部，然后加入融合劑；在原生質(zhì)體懸浮液滴中間加入融合液A；在原生質(zhì)體懸浮液頂部加入融合液B。.完整洋蔥原生質(zhì)體（完整洋蔥原生質(zhì)體（4040） 完整煙草原生質(zhì)體完整煙草原生質(zhì)體（40）.PEG法原生質(zhì)體的融合圖示法原生質(zhì)體的融合圖示圖一煙草葉肉細(xì)胞和洋蔥根尖細(xì)胞原生質(zhì)體融合（40） 圖二煙

10、草葉肉和洋蔥根尖細(xì)胞原生質(zhì)體的異源融合PEG法原生質(zhì)體的融合圖示法原生質(zhì)體的融合圖示圖一煙草葉肉細(xì)胞和洋蔥根尖細(xì)胞原生質(zhì)體融合（40）.一一 融合方法融合方法（5）電融合v原理：在電場(chǎng)中原生質(zhì)體排列在一起，在高頻電流作用下，原生質(zhì)膜發(fā)生可逆擊穿，而導(dǎo)致融合，然后細(xì)胞膜恢復(fù)完整。v優(yōu)點(diǎn)：對(duì)細(xì)胞無(wú)毒害；融合效率高；操作簡(jiǎn)單，利用細(xì)胞融合儀。v融合參數(shù)：交流電壓電流強(qiáng)弱，電脈沖大小，處理時(shí)間，脈沖寬度，脈沖次數(shù)。.兩個(gè)電極間串珠狀原生質(zhì)體. 細(xì)胞電融合儀.二 影響原生質(zhì)體融合的因素1 原生質(zhì)體的質(zhì)量 必須要活力強(qiáng)的原生質(zhì)體，活力弱在融合過(guò)程中導(dǎo)致原生質(zhì)體死亡。2 融合方法 首先應(yīng)選擇電融合，其次考慮

11、PEG。3 融合參數(shù) PEG法一般考慮PEG的相對(duì)分子質(zhì)量，純度，濃度處理時(shí)間，原生質(zhì)體的生理狀態(tài)。電融合主要考慮原生質(zhì)體密度，融合液的成分，電流強(qiáng)度，脈沖次數(shù)和寬幅。.三 融合產(chǎn)物的細(xì)胞學(xué)v在膜融合以后的數(shù)小時(shí)內(nèi)，2個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)混在一起，形成一個(gè)雙核異核體。 在雙親親緣關(guān)系較近的異核體中，兩個(gè)核有可能同步進(jìn)行第一次有絲分裂，而且在這個(gè)過(guò)程中，二者的染色體被一個(gè)共同的紡錘體所牽引，在有絲分裂末期形成兩個(gè)雜種子細(xì)胞。最終分化出體細(xì)胞雜種，其核內(nèi)具有雙親的染色體組。v在雙親親緣關(guān)系比較遠(yuǎn)的雜種細(xì)胞中，兩個(gè)來(lái)源不同的染色體組常常不能完全結(jié)合在一起。.3 雜種細(xì)胞的選擇和體細(xì)胞雜種的鑒定雜種細(xì)胞的選

12、擇和體細(xì)胞雜種的鑒定一 原生質(zhì)體融合產(chǎn)物及雜種細(xì)胞發(fā)育二 雜種細(xì)胞的選擇系統(tǒng)三 雜種細(xì)胞再生植株的鑒定四 體細(xì)胞雜種的遺傳特性.一一 原生質(zhì)體融合產(chǎn)物及雜種細(xì)胞發(fā)育原生質(zhì)體融合產(chǎn)物及雜種細(xì)胞發(fā)育1 原生質(zhì)體融合產(chǎn)物原生質(zhì)體融合產(chǎn)物原生質(zhì)體融合是一個(gè)混合體，同核體，異核體，未融合的雙親原生質(zhì)體。v同核體：細(xì)胞質(zhì)融合，細(xì)胞核也融合，形成真正雜種細(xì)胞。v異核體：細(xì)胞質(zhì)融合而細(xì)胞核未融合，兩個(gè)細(xì)胞核共同存在一個(gè)細(xì)胞質(zhì)中。v 不對(duì)稱雜種：異核體中兩個(gè)細(xì)胞核，若親緣關(guān)系較遠(yuǎn)，其中一個(gè)核中的染色體會(huì)被排除掉，形成不對(duì)稱雜種。v細(xì)胞質(zhì)雜種：細(xì)胞質(zhì)依舊是雜合的，其中一個(gè)細(xì)胞核完全消失。.一一 原生質(zhì)體融合產(chǎn)物及

13、雜種細(xì)胞發(fā)育原生質(zhì)體融合產(chǎn)物及雜種細(xì)胞發(fā)育2 雜種細(xì)胞的發(fā)育動(dòng)態(tài) v核質(zhì)重組核質(zhì)重組v細(xì)胞器重組細(xì)胞器重組v部分核物質(zhì)或細(xì)胞器丟失部分核物質(zhì)或細(xì)胞器丟失v核分裂的非同步性核分裂的非同步性.一一 原生質(zhì)體融合產(chǎn)物及雜種細(xì)胞發(fā)育原生質(zhì)體融合產(chǎn)物及雜種細(xì)胞發(fā)育3 體細(xì)胞雜種的特點(diǎn)v形態(tài)上的趨中性形態(tài)上的趨中性 v變異幅度大變異幅度大 v非整倍性非整倍性 v雙親性狀的共顯性雙親性狀的共顯性 v偏親現(xiàn)象偏親現(xiàn)象.二二 雜種細(xì)胞的選擇系統(tǒng)雜種細(xì)胞的選擇系統(tǒng)1 互補(bǔ)選擇系統(tǒng) 根據(jù)兩個(gè)具有不同生理或遺傳特性的親本，在形成雜種細(xì)胞時(shí)，能產(chǎn)生互補(bǔ)作用，根據(jù)這一特性只有發(fā)生互補(bǔ)作用的雜種細(xì)胞在特定的培養(yǎng)基上才能生長(zhǎng)

14、，而淘汰非雜種細(xì)胞。（1）激素自養(yǎng)互補(bǔ)選擇 兩個(gè)親本都需要外源生長(zhǎng)素，融合后由于互補(bǔ)作用，能產(chǎn)生內(nèi)源激素，可以在無(wú)外源激素的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，采用無(wú)外源生長(zhǎng)激素培養(yǎng)基可以篩選出雜種細(xì)胞。.二二 雜種細(xì)胞的選擇系統(tǒng)雜種細(xì)胞的選擇系統(tǒng)（2）葉綠體缺失互補(bǔ)系統(tǒng) 利用葉綠體缺失突變體與野生互補(bǔ)來(lái)選擇雜種細(xì)胞。突變體能生長(zhǎng)，野生不能生長(zhǎng)，雜種細(xì)胞能生長(zhǎng)。.二二 雜種細(xì)胞的選擇系統(tǒng)雜種細(xì)胞的選擇系統(tǒng)（3）營(yíng)養(yǎng)缺陷型互補(bǔ)選擇 利用營(yíng)養(yǎng)缺陷型突變體，在有某種營(yíng)養(yǎng)成分的培養(yǎng)基中不能生長(zhǎng)，而雜種細(xì)胞起互補(bǔ)作用可以生長(zhǎng)。如硝酸還原酶缺陷突變體不能在以硝酸鹽作為唯一氮源的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，而雜合可以生長(zhǎng)。CnX-, nia-

15、.二二 雜種細(xì)胞的選擇系統(tǒng)雜種細(xì)胞的選擇系統(tǒng)（4）抗性互補(bǔ)選擇系統(tǒng) 利用兩個(gè)抗性有差異的原生質(zhì)體，每個(gè)親本對(duì)藥物敏感性分別被對(duì)方的抗性所掩蓋。兩個(gè)單抗親體融合后會(huì)產(chǎn)生雙抗的雜種細(xì)胞，利用選擇培養(yǎng)基可以把雜種細(xì)胞選擇出來(lái)。.二二 雜種細(xì)胞的選擇系統(tǒng)雜種細(xì)胞的選擇系統(tǒng)（5）抗光性互補(bǔ)選擇系統(tǒng) 利用兩個(gè)突變體，由非等位隱性基因控制，正常光照生長(zhǎng)緩慢，葉色淡綠，經(jīng)過(guò)融合，具有兩隱性基因的雜種細(xì)胞，經(jīng)抗光互補(bǔ)，在光照下正常生長(zhǎng)。對(duì)高光強(qiáng)具有抗性。.二二 雜種細(xì)胞的選擇系統(tǒng)雜種細(xì)胞的選擇系統(tǒng)2 根據(jù)物理特性選擇（可見(jiàn)標(biāo)志可見(jiàn)標(biāo)志）（1）根據(jù)可見(jiàn)標(biāo)志選擇 根據(jù)不同原生質(zhì)體具有不同顏色，雜種細(xì)胞具有不同顏色，

16、或細(xì)胞質(zhì)狀態(tài)不同。如：非綠色原生質(zhì)體與含有葉綠體的原生質(zhì)體的融合。（半綠半白）.二二 雜種細(xì)胞的選擇系統(tǒng)雜種細(xì)胞的選擇系統(tǒng)（2）根據(jù)熒光標(biāo)記選擇 將兩種原生質(zhì)體群體分別用不同的熒光染料標(biāo)記，然后通過(guò)熒光顯微鏡鑒別異核體。（3）應(yīng)用熒光激活細(xì)胞分選儀自動(dòng)分離雜種細(xì)胞。.二二 雜種細(xì)胞的選擇系統(tǒng)雜種細(xì)胞的選擇系統(tǒng)3 組織培養(yǎng)篩選法（1）根據(jù)愈傷組織生長(zhǎng)差別選擇 在曼陀羅和煙草種間體細(xì)胞雜交以及在小麥和某些其他禾谷類(lèi)植物屬間體細(xì)胞雜交中，發(fā)現(xiàn)雜種愈傷組織表現(xiàn)生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)現(xiàn)象，因此融合處理后只要挑選生長(zhǎng)快、長(zhǎng)的最大的愈傷組織，就會(huì)從中分化出體細(xì)胞雜種.二二 雜種細(xì)胞的選擇系統(tǒng)雜種細(xì)胞的選擇系統(tǒng)（2）植株再

17、生能力的差別選擇 不同來(lái)源的原生質(zhì)體分化再生植株的能力不同。 在體細(xì)胞雜交中，只要有一個(gè)親本的原生質(zhì)體能夠再生植株，融合產(chǎn)生的雜種細(xì)胞就能再生植株。.二二 雜種細(xì)胞的選擇系統(tǒng)雜種細(xì)胞的選擇系統(tǒng)（3）根據(jù)生長(zhǎng)和分化對(duì)培養(yǎng)基要求的差別選擇 不同來(lái)源的原生質(zhì)體對(duì)培養(yǎng)基成分和激素的要求不同。 設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基只有雜種細(xì)胞能夠生長(zhǎng)。.三三 雜種細(xì)胞的再生植株鑒定雜種細(xì)胞的再生植株鑒定1 形態(tài)學(xué)鑒定 體細(xì)胞雜交具有兩個(gè)親本的形態(tài)學(xué)性狀，通過(guò)葉片大小、顏色、花形、株高等，表面毛狀體特征進(jìn)行初步鑒定。.三三 雜種細(xì)胞的再生植株鑒定雜種細(xì)胞的再生植株鑒定2 細(xì)胞學(xué)鑒定 染色體數(shù)目和形態(tài)具有種的特征，融合體細(xì)胞染色體

18、會(huì)加倍，有不同染色體形態(tài)特征。.三三 雜種細(xì)胞的再生植株鑒定雜種細(xì)胞的再生植株鑒定3 生化分析 主要是同工酶分析，雜種細(xì)胞的同工酶表現(xiàn)為雙親的酶帶的綜和，或出現(xiàn)雙親特有的譜帶。.三三 雜種細(xì)胞的再生植株鑒定雜種細(xì)胞的再生植株鑒定4 分子生物學(xué)分析 對(duì)雜種細(xì)胞進(jìn)行DNA進(jìn)行分析，用Southern 印記雜交法和分子標(biāo)記， 另外對(duì)雜種細(xì)胞的細(xì)胞器DNA進(jìn)行比較分析，比較葉綠體和線粒體中DNA不同。.四四 體細(xì)胞雜種的遺傳特性體細(xì)胞雜種的遺傳特性1 細(xì)胞分裂與染色體丟失v分裂幾次細(xì)胞死亡v發(fā)育過(guò)程某一親本的細(xì)胞核部分或全部丟失v雜種細(xì)胞染色體數(shù)目發(fā)生變化，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)含物變化。.四四 體細(xì)胞雜種的遺傳特

19、性體細(xì)胞雜種的遺傳特性2 基因轉(zhuǎn)移和性狀表達(dá)v由于染色體丟失，會(huì)使一方親本的部分或個(gè)別基因與另一方親本的染色體發(fā)生整合，實(shí)現(xiàn)親本間基因轉(zhuǎn)移，某些性狀在后代得以表達(dá)。v性狀分離相當(dāng)嚴(yán)重.四四 體細(xì)胞雜種的遺傳特性體細(xì)胞雜種的遺傳特性3 體細(xì)胞雜種在遺傳上不穩(wěn)定 雜種細(xì)胞在遺傳上不穩(wěn)定。原因：親緣關(guān)系的遠(yuǎn)近，培養(yǎng)過(guò)程中的染色體變異，細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核遺傳物質(zhì)的重組。.4 細(xì)胞質(zhì)雜種一 細(xì)胞質(zhì)雜種的概念二 細(xì)胞質(zhì)雜種獲得途徑三 細(xì)胞質(zhì)雜種的鑒定.一一 細(xì)胞質(zhì)雜種的概念細(xì)胞質(zhì)雜種的概念1 細(xì)胞質(zhì)雜種：原生質(zhì)體融合時(shí)，一方的原生質(zhì)體只得到另一方的細(xì)胞質(zhì)形成的雜種細(xì)胞。胞質(zhì)雜種(cybrid): 兩種來(lái)源不同

20、的核外遺傳成分（細(xì)胞器）與一個(gè)特定的核基因組結(jié)合在一起。核質(zhì)雜種(nucleo-cytoplasmic hybrid): 一個(gè)親本的細(xì)胞核與另一個(gè)親本的細(xì)胞質(zhì)基因組結(jié)合。.一一 細(xì)胞質(zhì)雜種的概念細(xì)胞質(zhì)雜種的概念2 特點(diǎn) 只有一個(gè)親本的核基因，雙親的細(xì)胞質(zhì)，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)雄性不育性狀表達(dá)的控制。細(xì)胞質(zhì)雄性不育容易實(shí)現(xiàn)不育系、保持系和恢復(fù)系的配套，是當(dāng)前玉米育種中利用的主要類(lèi)型 .二 獲得細(xì)胞質(zhì)雜種的途徑常先把異種胞質(zhì)供體物種原生質(zhì)體的核滅活，然后再將它與異種胞質(zhì)受體物種的原生質(zhì)體融合。紫外照射可以使核滅活。1 一個(gè)正常的原生質(zhì)體與一個(gè)失去核的原生質(zhì)體融合。2 一個(gè)正常的原生質(zhì)體與一個(gè)核失活的原生質(zhì)體融合。3 用原生質(zhì)體與亞原生質(zhì)體或微原生質(zhì)體融合。4 在雜種細(xì)胞的增殖過(guò)程中，一個(gè)親本染色體丟失。5 用抑制劑處理得到細(xì)胞質(zhì)雜種。.三三 細(xì)胞質(zhì)雜種的鑒定細(xì)胞質(zhì)雜種的鑒定1 葉綠體，線粒體DNA 的分析2 雄性不育性狀的表現(xiàn)，光合作用變化，與碳代謝有關(guān)的酶類(lèi)，對(duì)抗生素抗性的變化。.5 原生質(zhì)體的遺傳修飾原生質(zhì)體的遺傳修飾一 細(xì)胞核移植二 葉綠體移植三 染色體的攝取四 微生物移植.一一 細(xì)胞核移植細(xì)胞核移植1 細(xì)胞核分離（1）方法：勻漿直接從植物組織中分離細(xì)胞核，將組織搗碎進(jìn)行勻加入去污劑，溶解細(xì)胞膜，