滅菌無菌工藝驗(yàn)證指導(dǎo)原則

1、滅菌/無菌工藝驗(yàn)證指導(dǎo)原則(第二稿)目錄1概述12制劑濕熱滅菌工藝32、1濕熱滅菌工藝得研究32、1、1濕熱滅菌工藝得確定依據(jù)32、1、2過度殺滅法得工藝研究42。1。3殘存概率法得工藝研究52、2濕熱滅菌工藝得驗(yàn)證62、2。1物理確認(rèn)62、2、2生物學(xué)確認(rèn)83制劑無菌生產(chǎn)工藝103。1無菌生產(chǎn)工藝得研究103、1、1無菌分裝生產(chǎn)工藝得研究103、1。2過濾除菌生產(chǎn)工藝得研究113、2無菌生產(chǎn)工藝得驗(yàn)證113、2。1培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)123。2。2除菌過濾系統(tǒng)得驗(yàn)證144原料藥無菌生產(chǎn)工藝174。1無菌原料藥生產(chǎn)工藝特點(diǎn)174、1、1溶媒結(jié)晶工藝184。1、2冷凍干燥工藝184、2無菌原料藥工

2、藝驗(yàn)證184、2、1驗(yàn)證批量194、2。2最差條件191概述無菌藥品就是指法定藥品標(biāo)準(zhǔn)中列有無菌檢查項(xiàng)目得制劑與原料藥，一般包括注射劑、無菌原料藥及滴眼劑等。從嚴(yán)格意義上講，無菌藥品應(yīng)完全不含有任何活得微生物，但由于目前檢驗(yàn)手段得局限性，絕對無菌得概念不能適用于對整批產(chǎn)品得無菌性評價(jià)，因此目前所使用得“無菌”概念，就是概率意義上得“無菌”。一批藥品得無菌特性只能通過該批藥品中活微生物存在得概率低至某個(gè)可接受得水平，即無菌保證水平(SterilityAssuranceLevel,SAL)來表征。而這種概率意義上得無菌保證取決于合理且經(jīng)過驗(yàn)證得滅菌工藝過程、良好得無菌保證體系以及生產(chǎn)過程中嚴(yán)格得G

3、MP理、無菌藥品通常得滅菌方式可分為：1)濕熱滅菌;2)干熱滅菌;3)輻射滅菌;4)氣體滅菌;5)除菌過濾。按工藝得不同分為最終滅菌工藝(sterilizingprocess)與無菌生產(chǎn)工藝(asepticprocessing)。其中最終滅菌工藝系指將完成最終密封得產(chǎn)品進(jìn)行適當(dāng)滅菌得工藝，由此生產(chǎn)得無菌制劑稱為最終滅菌無菌藥品，濕熱滅菌與輻射滅菌均屬于此范疇。無菌生產(chǎn)工藝系指在無菌環(huán)境條件下，通過無菌操作來生產(chǎn)無菌藥品得方法，除菌過濾與無菌生產(chǎn)均屬于無菌生產(chǎn)工藝。部分或全部工序采用無菌生產(chǎn)工藝得藥品稱為非最終滅菌無菌藥品?；跓o菌藥品滅菌/除菌生產(chǎn)工藝得現(xiàn)狀，本指導(dǎo)原則主要對在注射劑與無菌原料

4、藥得生產(chǎn)中比較常用得濕熱滅菌與無菌生產(chǎn)工藝進(jìn)行討論。本指導(dǎo)原則中得濕熱滅菌工藝驗(yàn)證主要包括滅菌條件得篩選與研究，濕熱滅菌得物理確認(rèn)，生物指示劑確認(rèn)等內(nèi)容；無菌生產(chǎn)工藝驗(yàn)證主要包括無菌分裝、除菌過濾、培養(yǎng)基模擬灌裝、過濾系統(tǒng)得驗(yàn)證等驗(yàn)證內(nèi)容。最終滅菌工藝與無菌生產(chǎn)工藝實(shí)現(xiàn)產(chǎn)品無菌得方法有本質(zhì)上得差異，從而決定了由這兩類工藝生產(chǎn)得產(chǎn)品應(yīng)該達(dá)到得最低無菌保證水平得巨大差異、最終滅菌無菌產(chǎn)品得無菌保證水平為殘存微生物污染概率0106,非最終滅菌無菌產(chǎn)品得無菌保證水平至少應(yīng)達(dá)到95超信限下得污染概率0、1%由此可見，非最終滅菌無菌產(chǎn)品存在微生物污染得概率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于最終滅菌無菌產(chǎn)品，為盡量減少非最終滅菌無菌

5、產(chǎn)品污染微生物得概率，鼓勵(lì)企業(yè)在生產(chǎn)中采用隔離艙等先進(jìn)技術(shù)設(shè)備。基于質(zhì)量源于設(shè)計(jì)得藥品研發(fā)與質(zhì)量控制得理念，為保證無菌藥品得無菌保證水平符合要求，研發(fā)者在產(chǎn)品得研發(fā)過程中應(yīng)根據(jù)藥品得特性選擇合適得滅菌方式，并系統(tǒng)地評估生產(chǎn)得各環(huán)節(jié)及各種因素對無菌保證水平得影響，根據(jù)風(fēng)險(xiǎn)得高低與風(fēng)險(xiǎn)發(fā)生得可能性等來針對性地驗(yàn)證滅菌工藝得可靠性，驗(yàn)證得內(nèi)容、范圍與批數(shù)等取決于工藝與產(chǎn)品得復(fù)雜性以及生產(chǎn)企業(yè)對類似工藝得經(jīng)驗(yàn)多少等因素、只有在研發(fā)中經(jīng)過系統(tǒng)而深入得研究與驗(yàn)證，獲得可靠得滅菌工藝，并在日常得生產(chǎn)過程中嚴(yán)格執(zhí)行該工藝，才能真正保證每批藥品得無菌保證水平符合預(yù)期得要求。當(dāng)然，在藥品得整個(gè)生命周期內(nèi)，隨著對所

6、生產(chǎn)得藥品得特性與生產(chǎn)工藝等得了解越來越全面與深入，滅菌工藝也在不斷得完善，此時(shí)就會涉及到對變更后得工藝如何進(jìn)行驗(yàn)證得問題，本指導(dǎo)原則也適用于此種情況、由于滅菌/除菌工藝驗(yàn)證得工作在我國開展得時(shí)間不長，基礎(chǔ)還不牢靠，因此必然在實(shí)際工作中會遇到很多難以預(yù)料得問題，故本指導(dǎo)原則只就是一個(gè)一般性原則，藥物研發(fā)者應(yīng)從藥物研發(fā)得客觀規(guī)律出發(fā)，具體問題具體分析，必要時(shí)根據(jù)實(shí)際情況采用其她有效得方法與手段、同時(shí)，本指導(dǎo)原則作為階段性產(chǎn)物，必將隨著藥物研究者與評價(jià)者對滅菌工藝研究與驗(yàn)證得認(rèn)知加深，而不斷進(jìn)行修訂與完善。2制劑濕熱滅菌工藝2、1濕熱滅菌工藝得研究2。1.1濕熱滅菌工藝得確定依據(jù)滅菌工藝得選擇一般

7、按照滅菌工藝得決策樹（詳見附件1）進(jìn)行，濕熱滅菌工藝就是決策樹中首先考慮得滅菌工藝。濕熱滅菌法就是利用高壓飽與蒸汽、過熱水噴淋等手段使微生物菌體中得蛋白質(zhì)、核酸發(fā)生變性而殺滅微生物得方法。高溫在殺滅微生物得同時(shí)，可能對藥品得質(zhì)量也有所影響。如果產(chǎn)品不能耐受濕熱滅菌，則需要考慮采用無菌生產(chǎn)工藝。所以，對于藥品得滅菌工藝得考察與確定，首先就是考察其能否采用濕熱滅菌工藝，能否耐受濕熱滅菌得高溫。目前濕熱滅菌方法主要有兩種：過度殺滅法（Fo12）與殘存概率法（8Fo12）。用其它Fo值小于8得終端滅菌條件得工藝，則應(yīng)該按照無菌生產(chǎn)工藝要求。以上兩種濕熱滅菌方法都可以在實(shí)際生產(chǎn)中使用，具體選擇哪種滅菌方

8、法，在很大程度上取決于被滅菌產(chǎn)品得熱穩(wěn)定性。藥物就是否能耐受濕熱滅菌工藝得高溫，除了與藥物活性成分得化學(xué)性質(zhì)相關(guān)外，還與活性成分存在得環(huán)境密切相關(guān),所以在初期得工藝設(shè)計(jì)過程中需要通過對藥物熱穩(wěn)定性進(jìn)行綜合分析，以確定能否采用濕熱滅菌工藝。2.1.1。1活性成分得化學(xué)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)與穩(wěn)定性通過對活性成分得化學(xué)結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析，可以初步判斷活性成分得穩(wěn)定性，如果活性成分結(jié)構(gòu)中含有一些對熱不穩(wěn)定得結(jié)構(gòu)基團(tuán)，則提示主成分得熱穩(wěn)定性可能較差、在此基礎(chǔ)之上，還應(yīng)該通過設(shè)計(jì)一系列得強(qiáng)制降解試驗(yàn)對活性成分得穩(wěn)定性做進(jìn)一步研究確認(rèn)，了解活性成分在各種條件下可能發(fā)生得降解反應(yīng)，以便在處方工藝得研究中采取針對性得措施，保障產(chǎn)

9、品能夠采用濕熱滅菌工藝、2。1.1。2處方工藝得研究在對活性成分得結(jié)構(gòu)特點(diǎn)與穩(wěn)定性進(jìn)行研究得基礎(chǔ)上，可以有針對性得進(jìn)行處方工藝得優(yōu)化研究、如活性成分易發(fā)生氧化反應(yīng)，則需要考慮就是否需要在工藝中去除氧并采取充氮得生產(chǎn)工藝，或在處方中加入適宜得抗氧劑；如活性成分得穩(wěn)定性與pH值相關(guān),則需要通過研究尋找最利于主成分穩(wěn)定性得pH值，當(dāng)然此時(shí)需要關(guān)注該pH值在臨床治療時(shí)能否接受；如果主成分就是因?yàn)槟承╇s質(zhì)得存在影響了穩(wěn)定性|,則需要通過適宜得手段去除相關(guān)得雜質(zhì)；如果就是主成分在某種溶劑系統(tǒng)中穩(wěn)定性較差，則需要考慮更換溶劑系統(tǒng)，此時(shí)同樣需要考慮所選用得溶劑系統(tǒng)在臨床應(yīng)用時(shí)能否被接受；濕熱滅菌得不同滅菌溫度

10、與滅菌時(shí)間得組合對產(chǎn)品得穩(wěn)定性得要求有所不同，可以在保證提供所需得SAL得基礎(chǔ)上，通過滅菌時(shí)間與滅菌溫度得調(diào)整來確定藥物可以耐受得濕熱滅菌工藝?？傊枰ㄟ^各個(gè)方面得研究，使藥物盡可能得可以采用濕熱滅菌工藝。只有在理論與實(shí)踐均證明即使采用了各種可行得技術(shù)方法之后，活性成分依然無法耐受濕熱滅菌得工藝時(shí)，才能選擇無菌保證水平較低得無菌生產(chǎn)工藝。2. 2.1。3穩(wěn)定性研究無論使用何種設(shè)計(jì)方法，都需要進(jìn)行最終滅菌產(chǎn)品得穩(wěn)定性研究?？疾熳罱K滅菌程序?qū)Ξa(chǎn)品性質(zhì)穩(wěn)定性影響得試驗(yàn)可包括產(chǎn)品得降解、含量、pHfi、顏色、緩沖能力以及產(chǎn)品得其它質(zhì)量特性。滅菌時(shí)，殺滅微生物得效果與活性成分得降解都隨著時(shí)間與溫度而

11、累積。這意味著加熱與冷卻得變化將影響產(chǎn)品得穩(wěn)定性，同時(shí)影響殺滅效果。因此,穩(wěn)定性研究用樣品最好選取處于最苛刻得滅菌條件得產(chǎn)品，如:可采用在熱穿透試驗(yàn)中F0最大得位置上滅菌得產(chǎn)品進(jìn)行穩(wěn)定性考察，以確保滅菌產(chǎn)品得質(zhì)量仍能符合要求。2.1。 2過度殺滅法得工藝研究通常來說，與殘存概率法相比，過度滅殺法所需得被滅菌品開始生產(chǎn)階段與日常監(jiān)控階段生物負(fù)荷得信息較少，但就是過度殺滅要求得熱能比較大，其后果就是被滅菌品降解得可能性增大。過度殺滅法得目標(biāo)就是確保達(dá)到一定程度得無菌保證水平,而不管被滅菌產(chǎn)品初始菌得數(shù)量及其耐熱性如何。過度殺滅法假設(shè)得生物負(fù)荷與耐熱性都高于實(shí)際數(shù)，而大多數(shù)微生物得耐熱性都比較低，很

12、少發(fā)現(xiàn)自然生成得微生物得D121C值大于005分鐘、因此，過度殺滅得滅菌程序理論上能完全殺滅微生物，從而能提供很高得無菌保證值。由于該方法已經(jīng)對生物負(fù)荷及耐熱性作了最壞得假設(shè)，從技術(shù)角度瞧，對被滅菌品進(jìn)行初始菌監(jiān)控就沒有多大必要了、但這并不意味著生產(chǎn)過程中對污染可以完全不加控制。僅從控制熱原得角度也應(yīng)當(dāng)遵循工藝衛(wèi)生規(guī)范，控制產(chǎn)品得微生物污染。如果實(shí)際生產(chǎn)中能夠嚴(yán)格遵循GMP馬要求,這一點(diǎn)就是可以實(shí)現(xiàn)得、2。1。3殘存概率法得工藝研究與過度殺滅法相比，殘存概率法方法所需得信息量要大得多，包括被滅菌品生產(chǎn)開始階段及常規(guī)生產(chǎn)階段得信息、指示菌（對滅菌程序呈現(xiàn)強(qiáng)耐熱性得試驗(yàn)菌）以及生物負(fù)荷得信息、只有

13、積累了這類有價(jià)值得信息后，才能制定比過度殺滅法Fo值低得熱力滅菌程序,同時(shí)產(chǎn)品得無菌保證水平不會降低。使用熱力較低滅菌程序更有利于藥品得穩(wěn)定性，使產(chǎn)品得有效期延長、正就是因?yàn)檫@個(gè)原因，殘存概率法更適合那些處方耐熱性較差得最終滅菌產(chǎn)品、通常說來，不耐熱藥品得滅菌可能不能使用過度殺滅法，需要設(shè)計(jì)一個(gè)滅菌程序能夠恰當(dāng)?shù)貧缟镓?fù)荷，同時(shí)不導(dǎo)致產(chǎn)品不可接受得降解、這種情況下，滅菌程序得確認(rèn)就需研究產(chǎn)品得生物負(fù)荷與耐熱性、根據(jù)以下公式可以比較清楚得說明這一點(diǎn)：無菌保證值=Fo/D-lgNo其中，無菌保證值就是SAL得負(fù)對數(shù),No為滅菌開始時(shí)產(chǎn)品中得污染微生物總數(shù),D為污染微生物得耐熱參數(shù)。所以，菌工藝得

14、無菌保證值與Fo、Nd、D密切相關(guān)、2.1.3、 1滅菌前生物負(fù)荷得控制采用殘存概率法進(jìn)行終端滅菌得產(chǎn)品，除了需要關(guān)注滅菌過程本身，還需要在生產(chǎn)過程中采用一些適當(dāng)?shù)檬侄蝸肀O(jiān)測與控制藥品滅菌前得生物負(fù)荷。具體得措施通常包括滅菌前微生物數(shù)量與耐熱性得監(jiān)測、藥液過濾、工藝參數(shù)得控制等等。滅菌前微生物污染水平得監(jiān)測將在下面得章節(jié)詳細(xì)闡述。產(chǎn)品過濾在終端滅菌得產(chǎn)品中僅僅作為輔助得控制手段，但就是在工藝確定得過程中，也應(yīng)該對濾膜得孔徑、材質(zhì)、濾器得使用周期進(jìn)行必要得篩選。在工藝參數(shù)控制方面，由于微生物得特性，通常在藥液放置期間也會逐漸繁殖，尤其一些營養(yǎng)型得注射液，如葡萄糖注射液、復(fù)方氨基酸注射液等，其環(huán)境

15、更有利于微生物得生長與繁殖，因此應(yīng)通過工藝篩選與驗(yàn)證來確定溶液配制至過濾前、以及過濾后至滅菌前能夠放置得最長時(shí)限，并相應(yīng)確定產(chǎn)品得批量、生產(chǎn)周期等關(guān)鍵工藝參數(shù)2.1.4、 2滅菌前微生物污染得監(jiān)測滅菌前微生物污染水平得監(jiān)測應(yīng)在正常生產(chǎn)過程中取樣并覆蓋整個(gè)生產(chǎn)過程，取樣設(shè)計(jì)應(yīng)選取生產(chǎn)過程中污染最大，最有代表性得樣品，且要充分考慮到產(chǎn)品從灌封到滅菌前得放置時(shí)間。一般而言，如果灌裝持續(xù)一段時(shí)間，可從每批產(chǎn)品灌裝開始、中間及結(jié)束時(shí)分別取樣。污染水平檢查可以采用如下得方法：先用滅菌得5%4溫充分濕潤0、45um得濾膜,然后定量過濾藥液,將此濾膜移至營養(yǎng)瓊脂平板上,在3035C下培養(yǎng)37天,計(jì)數(shù)。分離獲得

16、得污染菌需要進(jìn)行耐熱性得檢查。污染菌得耐熱性檢查可以采用以下得測定方法：先用滅菌得5%吐溫充分潤濕0、45um得濾膜，然后過濾污染水平監(jiān)測所取得藥液樣品，再將此膜移至裝有無菌得待監(jiān)測產(chǎn)品得試管中，在沸水浴上煮沸約30分鐘,然后在3035c下在硫乙醇酸鹽肉湯中培養(yǎng),觀察就是否有耐熱菌生長。當(dāng)耐熱性檢查發(fā)現(xiàn)藥液存在耐熱污染菌污染時(shí)，可采用定時(shí)煮沸法將它與已知得生物指示劑得耐熱性加以比較，必要時(shí)，可再測試耐熱污染菌得D值（D值得具體檢測方法詳見附件2）,然后根據(jù)滅菌得F。值及污染菌得數(shù)量與耐熱性對產(chǎn)品得無菌做出評價(jià)。當(dāng)產(chǎn)品微生物污染水平超標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，應(yīng)對污染菌進(jìn)行鑒別、調(diào)查污染菌得來源并采用相應(yīng)得糾正措

17、施。2。2濕熱滅菌工藝得驗(yàn)證濕熱滅菌工藝得驗(yàn)證一般分為物理驗(yàn)證與生物學(xué)驗(yàn)證兩部分，物理驗(yàn)證包括熱分布、熱穿透試驗(yàn)，生物學(xué)驗(yàn)證主要就是微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)。物理驗(yàn)證就是證實(shí)滅菌效果得間接方式，而微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)則直接反映滅菌得效果，兩者不能相互替代。2。2。1物理確認(rèn)2.2。 1。1空載熱分布試驗(yàn)空載熱分布得目得就是主要就是了解整個(gè)滅菌設(shè)備得運(yùn)行情況，確認(rèn)滅菌室內(nèi)得溫度均勻性，測定滅菌腔內(nèi)不同位置得溫差狀況，確定可能存在得冷點(diǎn)、空載熱分布試驗(yàn)通常采用足夠數(shù)量得熱電偶或熱電阻作溫度探頭，進(jìn)行編號后將它們固定在滅菌柜腔室得不同位置、溫度探頭得安放位置需要根據(jù)設(shè)備類型與不同位置下得滅菌風(fēng)險(xiǎn)評估而定，應(yīng)包括可能

18、得高溫點(diǎn)、低溫點(diǎn)，滅菌柜溫度控制探頭處、靠近溫度記錄探頭處，其她得探頭可以均勻地分布于滅菌柜腔室內(nèi)，以使溫度得檢測具有較好得代表性。溫度探頭在試驗(yàn)前后至少需要兩個(gè)溫度點(diǎn)進(jìn)行校正。溫度探頭安放結(jié)束后，即可以按照設(shè)定得滅菌程序進(jìn)行滅菌。2.3。 1。2裝載熱分布試驗(yàn)裝載熱分布試驗(yàn)得目得就是了解設(shè)備在裝載條件下內(nèi)部得溫度分布狀況，包括高溫點(diǎn)、低溫點(diǎn)得位置，為后續(xù)得評估與驗(yàn)證打下基礎(chǔ)。裝載熱分布一般在空載熱分布得基礎(chǔ)上進(jìn)行。溫度探頭得個(gè)數(shù)與安放得位置一般同空載熱分布試驗(yàn)，注意一定要在空載熱分布試驗(yàn)確定得冷點(diǎn)安放溫度探頭。溫度探頭安放在待滅菌得容器得周圍，注意不能介入待滅菌得容器。裝載熱分布試驗(yàn)需要考慮

19、最大、最小與生產(chǎn)過程中典型裝載量情況，進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)盡可能使用待滅菌產(chǎn)品，如果采用類似物，應(yīng)結(jié)合產(chǎn)品得熱力學(xué)性質(zhì)等進(jìn)行適當(dāng)?shù)蔑L(fēng)險(xiǎn)評估。待滅菌產(chǎn)品得裝載方式與滅菌工藝得各項(xiàng)參數(shù)得設(shè)定應(yīng)與正常生產(chǎn)時(shí)一致，應(yīng)采用圖表得方式說明產(chǎn)品得裝載情況，并評估探頭放置就是否合理。如果待滅菌產(chǎn)品存在不同包裝規(guī)格或濃度規(guī)格，應(yīng)評估驗(yàn)證所采用得樣品與裝載方式就是否能充分反映所有樣品得實(shí)際裝載情況。每一裝載量得熱分布試驗(yàn)需要至少進(jìn)行三次。溫度探頭在試驗(yàn)前后同樣均需要進(jìn)行校正、2。2.1、3熱穿透試驗(yàn)熱穿透試驗(yàn)就是考察滅菌柜與滅菌程序?qū)Υ郎缇a(chǎn)品適用性得一項(xiàng)試驗(yàn)。熱穿透試驗(yàn)得目得就是確認(rèn)產(chǎn)品內(nèi)部也能達(dá)到預(yù)定得滅菌溫度。對

20、于藥物而言，滅菌程序既要賦予產(chǎn)品一定得Fo值，以保障產(chǎn)品得SAW106o同時(shí)滅菌程序又不應(yīng)使產(chǎn)品受熱過度而造成藥物部分降解，以致同一滅菌批次得產(chǎn)品出現(xiàn)質(zhì)量不均熱穿透試驗(yàn)所用得溫度探頭得個(gè)數(shù)與安放位置需要根據(jù)熱分布試驗(yàn)得結(jié)果確定、一般可以采用足夠數(shù)量得溫度探頭。應(yīng)將熱穿透溫度探頭置于液體容器中得冷點(diǎn)，即整個(gè)包裝中最難滅菌得位置。如果有數(shù)據(jù)支持或有證據(jù)表明將探頭放在產(chǎn)品包裝之外也能夠反映出產(chǎn)品得熱穿透情況，風(fēng)險(xiǎn)能夠充分得到控制，也可以考慮將探頭放在容器之外。插有溫度探頭得產(chǎn)品得安放位置包括熱分布試驗(yàn)確定得冷點(diǎn)與高溫點(diǎn)、其她可能得高溫點(diǎn)、滅菌柜溫度探頭附近、溫度記錄探頭處。熱穿透試驗(yàn)得步驟及要求與裝

21、載得熱分布試驗(yàn)基本相同，每一裝載方式得熱穿透試驗(yàn)也需要至少進(jìn)行三次。通過熱穿透試驗(yàn)可以確定在設(shè)定得滅菌程序下，滅菌柜內(nèi)各個(gè)位置得待滅菌產(chǎn)品就是否能夠到達(dá)設(shè)定得溫度。結(jié)合滅菌前微生物污染得檢測，可以確定滅菌柜內(nèi)各個(gè)位置得待滅菌產(chǎn)品就是否能夠獲得設(shè)定得Fo值。對于Fo值最大點(diǎn)位置得樣品，由于其受熱情況最為強(qiáng)烈，因此應(yīng)評估該位置下產(chǎn)品得穩(wěn)定性情況，以進(jìn)一步確認(rèn)滅菌對于產(chǎn)品得穩(wěn)定性沒有影響。2.3.3、 4熱分布與熱穿透試驗(yàn)數(shù)據(jù)得分析處理在物理確認(rèn)試驗(yàn)中，應(yīng)確認(rèn)關(guān)鍵與重要得操作參數(shù)并有相應(yīng)得文件與記錄、通常需要關(guān)注得主要參數(shù)包括- 每個(gè)探頭所測得溫度得變化范圍- 不同探頭之間測得得溫度變化范圍- 探頭

22、測得得溫度與設(shè)定溫度之間得差值- 探頭測得超過設(shè)定溫度得最短及最長時(shí)間- Fo得下限及上限- 滅菌階段結(jié)束時(shí)得最低Fo值- 滅菌階段得最低與最高壓力- 飽與蒸汽溫度與壓力之間得關(guān)系- 滅菌階段腔室得最低與最高溫度- 熱穿透溫度探頭之間得最大溫差或Fo得變化范圍- 熱分布試驗(yàn)中溫度探頭問得最大溫差- 最長平衡時(shí)間- 最少正常運(yùn)行得探頭數(shù)合格標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)結(jié)合滅菌條件、滅菌設(shè)備得特點(diǎn)以及產(chǎn)品得實(shí)際情況制定。通常情況下，滅菌柜腔室最冷、最熱點(diǎn)與平均溫度之間得溫差應(yīng)不超過2、5C、保溫時(shí)間內(nèi)溫度波動應(yīng)在1、oc之內(nèi)，如果溫度差別過大，提示滅菌柜得性能不符合要求，需要尋找原因并進(jìn)行改進(jìn)，重新進(jìn)行驗(yàn)證。另外對于熱

23、敏感得藥物，還應(yīng)該控制滅菌柜得升溫與降溫時(shí)間，以保證熱能得輸入控制在合理得范圍以內(nèi)，不會對產(chǎn)品得熱穩(wěn)定性造成影響。2。2、2生物學(xué)確認(rèn)濕熱滅菌工藝得微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)就是指將一定量已知D值得耐熱抱子（生物指示劑）在設(shè)定得濕熱滅菌條件下滅菌，以驗(yàn)證設(shè)定得滅菌工藝就是否確實(shí)能達(dá)到產(chǎn)品所需得標(biāo)準(zhǔn)滅菌時(shí)間與F0、此項(xiàng)驗(yàn)證工作能夠如實(shí)反映滅菌工藝條件對微生物得殺滅效果，從而證明該滅菌工藝所賦予相關(guān)產(chǎn)品得無菌保證水平就是否符合要求。2、2。2。1生物指示劑選用得一般原則一般情況下，生物指示劑選擇得原則性要求就是：抱子穩(wěn)定、非致病菌、易于培養(yǎng)、有效期長、保存及使用方便、安全性好。針對具體得滅菌工藝與具體得產(chǎn)品,

24、還應(yīng)注意所用得生物指示劑得耐熱性應(yīng)強(qiáng)于待滅菌產(chǎn)品中得污染菌。濕熱滅菌工藝常用得生物指示劑有以下幾種，嗜熱脂肪芽抱桿菌，枯草芽抱桿菌,凝結(jié)芽抱桿菌，梭狀芽抱桿菌等。對于采用過度殺滅法得滅菌程序,生物指示劑系統(tǒng)主要就是嗜熱脂肪芽抱桿菌得抱子、|殘存概率法由于其熱輸入量比較低，因此在驗(yàn)證中使用得生物指示劑得耐熱性可以小于嗜熱脂肪芽抱桿菌得抱子。2。2。2。2生物指示劑得使用與放置實(shí)際驗(yàn)證過程中可以直接采用市售得生物指示劑成品或?qū)⑸镏甘緞┙臃N在待滅菌產(chǎn)品上、采用市售品時(shí)，只要供應(yīng)商具有相應(yīng)得質(zhì)量體系認(rèn)證資質(zhì)，在測試中其提供得生物指示劑得D值就可以被接受。采用將生物指示劑接種到待滅菌產(chǎn)品得方法，由于生

25、物指示劑在不同介質(zhì)或環(huán)境中得耐熱性會有所不同，首先應(yīng)考慮產(chǎn)品對生物指示劑耐熱性得影響。所以對于具體得品種而言，如果需要將生物指示劑接種至產(chǎn)品之中，應(yīng)測定生物指示劑在該產(chǎn)品中得耐熱性，即D值、如果生物指示劑與產(chǎn)品不相容，可以用與產(chǎn)品相似得溶液來代替產(chǎn)品、生物指示劑得用量需要根據(jù)生物指示劑在待滅菌樣品中得耐熱性來確定，其用量應(yīng)符合挑戰(zhàn)性試驗(yàn)得要求、生物指示劑得用量可以采用陰性分?jǐn)?shù)法或者殘存曲線法計(jì)算，可以根據(jù)實(shí)際情況（如污染菌得耐熱性，擬用得生物指示劑得D值等）選擇合適得計(jì)算方法，具體檢測方法見附件3、應(yīng)結(jié)合產(chǎn)品特點(diǎn)與熱分布、熱穿透得實(shí)際結(jié)果來確定生物指示劑得放置位置。裝有生物指示劑得容器應(yīng)緊挨于

26、裝有測溫探頭得容器，在滅菌設(shè)備得冷點(diǎn)處必需放置生物指示劑、滅菌柜得其她部位應(yīng)裝載產(chǎn)品或者類似物，以盡可能得模仿實(shí)際生產(chǎn)時(shí)得狀況。2、2、2。3滅菌生物指示劑得驗(yàn)證應(yīng)該按照產(chǎn)品設(shè)定得滅菌工藝進(jìn)行滅菌。2。 2、2、4檢查與培養(yǎng)可以根據(jù)生物指示劑得生長特性以及驗(yàn)證時(shí)得包裝方式,采用適當(dāng)?shù)梅椒ㄟM(jìn)行檢查與培養(yǎng)、將指示劑放入培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)、需要注意不同得生物指示劑所需要得培養(yǎng)條件也各不相同,針對使用得生物指示劑確定培養(yǎng)條件,同時(shí)應(yīng)放置陰性與陽性對照樣品。3。 2、3、5試驗(yàn)結(jié)果得評價(jià)根據(jù)生物指示劑得D值與接種量推算產(chǎn)品在滅菌過程中實(shí)際達(dá)到得SAL值。驗(yàn)證新得滅菌工藝時(shí),每個(gè)產(chǎn)品得每個(gè)規(guī)格得每一滅菌程序

27、,至少需要連續(xù)進(jìn)行三次生物指示劑驗(yàn)證試驗(yàn)。如果試驗(yàn)得重現(xiàn)性好,所有試驗(yàn)得2果均提示SALC10-6,則驗(yàn)證結(jié)果提示該滅菌工藝為驗(yàn)證合格得滅菌工藝、如果各次驗(yàn)證得結(jié)果不一致,需要分析原因,采取相應(yīng)得改進(jìn)措施后重新進(jìn)行驗(yàn)證工作。3制劑無菌生產(chǎn)工藝3。 1無菌生產(chǎn)工藝得研究無菌藥品應(yīng)首選采用終端滅菌工藝、如不能耐受終端滅菌工藝條件,應(yīng)盡量優(yōu)化處方工藝,以改善其耐熱性。如確實(shí)無法耐受終端滅菌工藝,則可采用無菌生產(chǎn)工藝。無菌生產(chǎn)工藝通常包括無菌分裝生產(chǎn)工藝與除菌過濾生產(chǎn)工藝、4。 1。1無菌分裝生產(chǎn)工藝得研究無菌分裝生產(chǎn)工藝就是將采用經(jīng)驗(yàn)證得滅菌/除菌工藝過程處理后得原料藥或者原料藥與輔料,用無菌生產(chǎn)得

28、方法分裝到采用經(jīng)驗(yàn)證得滅菌工藝處理得容器中,密封得到得。無菌分裝生產(chǎn)工藝得工藝研究與生產(chǎn)過程控制得重點(diǎn)就是影響無菌保證水平得工藝步驟,主要包括物料（包括原料藥、輔料、內(nèi)包裝材料等）得質(zhì)量控制、原材料暴露于環(huán)境中可能再污染得操作步驟等、關(guān)于物料得質(zhì)量控制,采用無菌分裝生產(chǎn)工藝得制劑所涉及得各種物料,都必須采用適當(dāng)?shù)脺缇?除菌工藝處理后方可使用。各種物料得滅菌/除菌工藝,都應(yīng)就是經(jīng)過驗(yàn)證得、控制良好得工藝。同時(shí)需要對各種物料得無菌性、細(xì)菌內(nèi)毒素水平等進(jìn)行嚴(yán)格控制,通過研究確定相應(yīng)得質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)、無菌分裝得生產(chǎn)工藝就是將原料藥或者原料藥與輔料經(jīng)分裝設(shè)備分裝至內(nèi)包裝材料中后密封得到、分裝步驟就是影響產(chǎn)品質(zhì)

29、量與無菌保證水平得關(guān)鍵生產(chǎn)步驟,應(yīng)結(jié)合生產(chǎn)設(shè)備與產(chǎn)品特點(diǎn)進(jìn)行工藝參數(shù)得研究,包括分裝速度與分裝時(shí)問等。無菌分裝生產(chǎn)工藝能否達(dá)到設(shè)定得無菌保證水平，與整個(gè)生產(chǎn)過程得控制密切相關(guān)，應(yīng)按照GMP求及產(chǎn)品具體生產(chǎn)工藝情況進(jìn)行生產(chǎn)環(huán)境與生產(chǎn)過程得控制。在進(jìn)行無菌生產(chǎn)工藝驗(yàn)證時(shí)，應(yīng)采用最差條件進(jìn)行驗(yàn)證，在實(shí)際生產(chǎn)過程中對生產(chǎn)過程與工藝參數(shù)得控制均不能超過經(jīng)驗(yàn)證得最差條件得控制范圍。3、1。2過濾除菌生產(chǎn)工藝得研究過濾除菌得無菌生產(chǎn)工藝就是通過除菌過濾器，將藥液中得微生物除去得到無菌濾液、采用過濾除菌工藝時(shí)，同樣需要對影響無菌保證水平得工藝步驟及工藝參數(shù)進(jìn)行詳細(xì)得研究，主要包括物料得質(zhì)量控制、除菌過濾器得選

30、擇及除菌過濾工藝參數(shù)得研究、除菌過濾生產(chǎn)過程得控制等。對于采用過濾除菌生產(chǎn)工藝得制劑，需注意對配制藥液使用得原料藥、輔料（包括注射用水）等原材料得微生物種類及數(shù)量進(jìn)行檢查，掌握潛在得污染微生物得總體特性情況，通過研究確定相應(yīng)得質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。采用過濾除菌生產(chǎn)工藝得制劑所使用得內(nèi)包裝材料，必須采用適當(dāng)?shù)媒?jīng)驗(yàn)證得滅菌工藝處理后方可使用。除菌過濾生產(chǎn)工藝所使用得除菌過濾器，通常為標(biāo)稱孔徑0、2微米或更小得除菌級得過濾器、除菌過濾器得過濾效能就是評價(jià)除菌過濾工藝得重要參數(shù)，需要對除菌過濾器得過濾效能進(jìn)行驗(yàn)證。通常，影響除菌過濾器得除菌過濾效能得因素包括：藥液得性質(zhì)，如藥液得粘度、表面張力、pH值、滲透壓等；

31、過濾步驟得工藝參數(shù)|,如過濾得壓力、流速、時(shí)間、溫度等：除菌過濾器得相關(guān)參數(shù)，如除菌過濾器與藥液得相容性、除菌過濾器得過濾總量與使用周期等。除菌過濾器得過濾效能可因產(chǎn)品與操作條件不同而顯著不同、除菌過濾器得選擇及工藝參數(shù)得研究可結(jié)合上述影響除菌過濾器得過濾效能得因素進(jìn)行。在實(shí)際生產(chǎn)過程中，在過濾除菌前后均需要進(jìn)行濾器完整性測試、由于微生物通過過濾器得概率隨著待過濾溶液中微生物數(shù)量得增加而增加，除菌過濾工藝中需對待過濾溶液得微生物負(fù)荷情況進(jìn)行研究與控制，通常情況下，最終除菌過濾前，料液得微生物負(fù)荷應(yīng)不超過10cfu/100ml。應(yīng)通過研究確定無菌生產(chǎn)各操作環(huán)節(jié)得時(shí)間控制范圍，如料液配制后待過濾得

32、存放時(shí)間、藥液過濾操作得時(shí)間、過濾后至灌裝前放置得時(shí)間、灌封操作得時(shí)間、滅菌后得內(nèi)包裝材料及密封件允許得放置時(shí)間等。各生產(chǎn)環(huán)節(jié)操作時(shí)間得確定需提供相應(yīng)得試驗(yàn)數(shù)據(jù)。3、2無菌生產(chǎn)工藝得驗(yàn)證無菌生產(chǎn)工藝得驗(yàn)證主要包括培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)，應(yīng)當(dāng)盡可能模擬常規(guī)得無菌生產(chǎn)工藝,包括所有對無菌結(jié)果有影響得關(guān)鍵操作,及生產(chǎn)中可能出現(xiàn)得各種干預(yù)與最差條件。新建得無菌生產(chǎn)工藝得生產(chǎn)線在正式投產(chǎn)前必須進(jìn)行連續(xù)三批無菌培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)。在生產(chǎn)用得設(shè)備、設(shè)施、人員結(jié)構(gòu)及工藝方法有重大變更時(shí)都應(yīng)進(jìn)行培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)。實(shí)際生產(chǎn)中每半年應(yīng)至少進(jìn)行一次培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)、對于除菌過濾無菌生產(chǎn)工藝得驗(yàn)證,還包括對除菌過濾系統(tǒng)

33、得驗(yàn)證,如過濾器得微生物截留驗(yàn)證、過濾器與待過濾藥液得相容性驗(yàn)證、過濾器得完整性驗(yàn)證等。3、2。1培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)3、2。1、1培養(yǎng)基培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)需要選擇合適得培養(yǎng)基,并對培養(yǎng)基得質(zhì)量進(jìn)行控制。應(yīng)當(dāng)根據(jù)產(chǎn)品得劑型、培養(yǎng)基得選擇性、澄清度、濃度與滅菌得適用性選擇培養(yǎng)基、一般選用胰陳大豆肉湯培養(yǎng)基(TSB),按每30g加1L過濾純化水得比例,配制足夠量、某些特殊情況下也可以選用厭氧生長培養(yǎng)基,如硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基(FTM)。培養(yǎng)基得質(zhì)量控制主要包括培養(yǎng)基得微生物生長性能與無菌性、培養(yǎng)基得微生物生長性能:在按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程制備培養(yǎng)基并滅菌后,可按照中國藥典附錄進(jìn)行培養(yǎng)基微生物生長性能試驗(yàn),確認(rèn)

34、所制備得培養(yǎng)基應(yīng)出現(xiàn)明顯得所接種得微生物得生長、培養(yǎng)基得無菌性:可按照中國藥典附錄進(jìn)行培養(yǎng)基無菌性檢查,結(jié)果應(yīng)符合規(guī)定。在培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)中,需進(jìn)行陽性對照試驗(yàn),即取低濃度得菌種接種于進(jìn)行陽性試驗(yàn)用得對照容器中,與培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)在同一條件下進(jìn)行培養(yǎng)。除了中國藥典附錄中規(guī)定得陽性菌,建議使用生產(chǎn)環(huán)境中常見得微生物,如枯草芽孢桿菌、白色念珠球菌,或者在同一生產(chǎn)環(huán)境中曾被檢出過得菌種。接種量一般每個(gè)容器102以下,每個(gè)菌種接種2瓶,通常需均證實(shí)有菌生長,該培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)方有效。如果試驗(yàn)中需要使用模擬分裝用粉末,同樣需要對模擬分裝用粉末進(jìn)行選擇與質(zhì)量控制、模擬分裝用粉末得選擇一般遵循以下原則

35、:可以在干粉狀態(tài)下滅菌,滅菌后得無菌性達(dá)到藥典規(guī)定得標(biāo)準(zhǔn);流動性較好,可以用分裝機(jī)分裝;可溶于液體培養(yǎng)基；在模擬試驗(yàn)應(yīng)用得濃度下無抑菌性。常用得模擬分裝材料有乳糖、甘露醇、PEG6000PEG800咻，也可以采用培養(yǎng)基干粉作為模擬分裝用無菌粉末。3。2。1。2模擬無菌生產(chǎn)工藝得操作過程培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)中使用得內(nèi)包裝材料得清洗、滅菌，分裝設(shè)備得清洗、消毒及與產(chǎn)品接觸得分裝設(shè)備部件得清洗、滅菌、安裝過程均應(yīng)遵循與實(shí)際生產(chǎn)操作相同得標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)過程中應(yīng)制訂取樣計(jì)劃，對使用得內(nèi)包裝材料間隔一定數(shù)量后隨機(jī)取樣進(jìn)行無菌性檢查；同時(shí)，全部與產(chǎn)品接觸得設(shè)備表面應(yīng)無菌。某些特殊情況下，如膠

36、塞具有抑菌性，則需要考慮更換采用其她相當(dāng)?shù)玫珶o抑菌性得膠塞。應(yīng)當(dāng)注意有足夠數(shù)量得培養(yǎng)基與容器得內(nèi)表面充分接觸，灌裝培養(yǎng)基時(shí)，每個(gè)容器得灌裝體積一般為1/31/2之間，最多不能超過容器得85%。應(yīng)注意,對于凍干粉針劑得驗(yàn)證試驗(yàn)，在培養(yǎng)基灌裝半壓塞后，只需模擬樣品進(jìn)入與移出凍干機(jī)得過程即可，而不必模擬凍干過程，以保證一旦有細(xì)菌，能夠保持較好得生存能力。同時(shí)，還應(yīng)模擬一些可能造成污染得操作步驟，如抽真空，充氮等步驟。培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)應(yīng)當(dāng)盡可能模擬常規(guī)得無菌生產(chǎn)工藝，應(yīng)當(dāng)包括所有對無菌結(jié)果有影響得關(guān)鍵操作，包括生產(chǎn)中可能出現(xiàn)得各種干預(yù)與最差條件，各種干預(yù)與最差條件得考慮需要體現(xiàn)風(fēng)險(xiǎn)控制得理念。通常可

37、能出現(xiàn)得各種干預(yù)與最差條件包括：人員數(shù)量與她們得活動、換班、休息、更衣（需要時(shí)）；設(shè)備調(diào)試，正常停車、非正常停車、意外事故（如檢修等）；采用滅菌后所允許放置得最長時(shí)間得設(shè)備或者車間進(jìn)行生產(chǎn)；模擬生產(chǎn)時(shí)間最長得批量所需得時(shí)間；采用最慢得填充速度與最大得包裝容器（即最長得暴露時(shí)間）；采用最快得填充速度與最小得包裝容器（即容易伴隨更多干預(yù)得生產(chǎn)情況）?？傊?在試驗(yàn)計(jì)劃中，總體研究設(shè)計(jì)與運(yùn)行時(shí)間應(yīng)該模擬可能出現(xiàn)得各種干預(yù)與最差操作條件，覆蓋所有實(shí)際生產(chǎn)過程涉及得操作。培養(yǎng)基模擬灌裝得數(shù)量應(yīng)當(dāng)足以保證評價(jià)得有效性，批量較小得產(chǎn)品，培養(yǎng)基模擬灌裝得數(shù)量應(yīng)當(dāng)至少等于產(chǎn)品得批量。3、2。1、3試驗(yàn)結(jié)果得評價(jià)培

38、養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)需要對所有灌裝樣品進(jìn)行培養(yǎng)與無菌檢查。培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)得目標(biāo)就是零污染，應(yīng)當(dāng)符合以下要求灌裝數(shù)量允許得污染數(shù)量少于5000支時(shí)不得檢出污染品5000至10000支時(shí)有1支污染,需調(diào)查,可考慮重復(fù)試驗(yàn)；有2支污染，需調(diào)查后，進(jìn)行再驗(yàn)證超過10000支時(shí)有1支污染,需調(diào)查；有2支污染，需調(diào)查后，進(jìn)行再驗(yàn)證一旦發(fā)現(xiàn)污染，需要進(jìn)行偏差調(diào)查，包括污染菌得鑒別、污染情況得評估、就是否可以重復(fù)進(jìn)行試驗(yàn)等等。3。2。2除菌過濾系統(tǒng)得驗(yàn)證除菌過濾系統(tǒng)得驗(yàn)證一般包括：微生物截留研究、析出物研究、化學(xué)兼容性研究與藥液吸附研究、3、2、2、1微生物截留研究過濾器得微生物截留驗(yàn)證得目得：除菌過濾器微生

39、物截留試驗(yàn)就是通過模擬實(shí)際過濾工藝，過濾含有一定量生物指示菌得溶液，確認(rèn)除菌過濾器得微生物截留能力。過濾器得微生物截留驗(yàn)證得設(shè)計(jì)：(1)挑戰(zhàn)用微生物得選擇通常采用缺陷性假單胞菌作為挑戰(zhàn)性試驗(yàn)用菌、在有些情況下，缺陷性假單胞菌可能不能代表最壞條件，則需要考慮采用其她細(xì)菌。如果使用其她細(xì)菌，應(yīng)保證該細(xì)菌足夠細(xì)小至足以挑戰(zhàn)除菌級別濾器得截留性能，并能模擬產(chǎn)品中發(fā)現(xiàn)得最小微生物。應(yīng)盡可能得進(jìn)行微生物負(fù)荷得鑒別與量化研究，掌握所分離得微生物得形態(tài)學(xué)特征，為挑戰(zhàn)性微生物得選擇提供依據(jù)。挑戰(zhàn)性微生物得大小可以通過其可穿過0、45微米級別得濾膜來確證。通常情況下，標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)條件下生長得缺陷性假單胞菌，在高挑戰(zhàn)濃

40、度(如二107)時(shí)，能少量穿過0、45微米級別得濾膜。(2)微生物截留試驗(yàn)條件在試驗(yàn)室模擬生產(chǎn)工藝條件，將定量缺陷性假單胞菌加入到料液中，進(jìn)行過濾。根據(jù)實(shí)際生產(chǎn)條件，考慮確定微生物截留試驗(yàn)得過濾時(shí)間及溫度、壓差、流速等。建議對實(shí)際生產(chǎn)得過濾工藝進(jìn)行一次徹底評估，包括溶劑性質(zhì)(例如水性得、酸、堿、有機(jī)得）、過濾時(shí)間、工藝壓差、工藝流速、工藝溫度與過濾器設(shè)計(jì)規(guī)范，以便合理設(shè)計(jì)微生物截留試驗(yàn)條件、過濾時(shí)間與壓差會影響細(xì)菌截留試驗(yàn)得結(jié)果。在完整得生產(chǎn)時(shí)間進(jìn)行微生物截留試驗(yàn)可以對那些與時(shí)間有關(guān)得因素進(jìn)行評估，如過濾器兼容性，完整性得維持，時(shí)間依賴性得穿透等、微生物截留試驗(yàn)過程中得壓差應(yīng)達(dá)到或超過實(shí)際生產(chǎn)

41、過程得最大壓差與/或最大流速（在過濾器制造商得設(shè)計(jì)規(guī)范內(nèi)）、在驗(yàn)證過程中同時(shí)模擬壓差與流速可能就是不可能得、在設(shè)計(jì)挑戰(zhàn)試驗(yàn)條件時(shí)過濾器得使用者應(yīng)該確認(rèn)哪個(gè)參數(shù)與特定工藝得相關(guān)性更高，以便為微生物截留試驗(yàn)條件得確定提供依據(jù)。微生物截留驗(yàn)證研究應(yīng)包括多個(gè)批次得濾膜（通常三個(gè)批次）。在用于微生物截留驗(yàn)證研究得三個(gè)批次得濾膜中，至少應(yīng)有一個(gè)批次就是進(jìn)行預(yù)研究時(shí)或使用前物理完整性測試時(shí)得數(shù)值通過但就是接近（例如,10%之內(nèi)）過濾器生產(chǎn)商提供得合格規(guī)范限值得。（3）微生物截留驗(yàn)證研究中使用得過濾膜得物理完整性檢測數(shù)值應(yīng)包括在實(shí)驗(yàn)報(bào)告中。物理完整性檢測應(yīng)使用已有規(guī)范值得水、產(chǎn)品或其它潤濕流體來進(jìn)行測試，并在

42、進(jìn)行微生物挑戰(zhàn)前完成。如果微生物截留驗(yàn)證研究后，測試用微生物在任何過濾器得下游被檢測到，那么就需要對此進(jìn)行調(diào)查。如果調(diào)查確認(rèn)測試用微生物能穿透完整性檢測達(dá)標(biāo)得過濾器，那么就應(yīng)重新考慮此種過濾器在這些工作條件下得適用性。需要關(guān)注得就是，過濾器得重復(fù)使用通常就是不被推薦得、如果需要重復(fù)使用除菌級過濾器，需要說明理由，重復(fù)使用得相關(guān)參數(shù)（如過濾量等）也需要經(jīng)過嚴(yán)格得驗(yàn)證后確定相應(yīng)得范圍。3、2、2。2析出物與釋放物研究析出物指在人為或挑戰(zhàn)性條件（如溶劑、溫度或時(shí)間）下，從某一材料中脫離得任何化學(xué)組分。釋放物就是指在正常儲存或使用條件下，從接觸面上進(jìn)入產(chǎn)品或工藝流體中得物質(zhì)。潛在得析出物或釋放物得來源

43、包括但不限于：膜組件（如:成形劑、表面活性劑、抗氧化劑、殘留溶劑、支架層）與塑料組件（如：封蓋、外殼、支架、。型圈）。影響釋放物得因素可能包括過濾液得化學(xué)性質(zhì)、滅菌方法、接觸時(shí)間、溫度與過濾量與面積之比。有機(jī)溶液得過濾產(chǎn)生得釋放物可能比水溶液過濾要更高。析出物數(shù)據(jù)可從過濾器生產(chǎn)商處獲得，也可以由過濾器使用者進(jìn)行試驗(yàn)取得?？紤]到析出物得來源不同與影響析出物得因素較多，建議過濾器使用者在開展研究時(shí)盡可能使用實(shí)際產(chǎn)品，并使用與實(shí)際生產(chǎn)相同類型得過濾器。有些情況下可能需使用替代溶液進(jìn)行試驗(yàn)，例如，產(chǎn)品會干擾分析方法或產(chǎn)品有抑菌性等。這時(shí)，替代溶液必須與待過濾產(chǎn)品性質(zhì)盡可能一致。另外,也可以選擇使用幾種

44、溶液來涵蓋實(shí)際過濾溶液得pH、離子強(qiáng)度或有機(jī)成分得含量等特性。如果使用了替代溶液或幾種溶液合并得方式，則必須提供溶液選擇得合理依據(jù)。一旦確定好用于析出試驗(yàn)得萃取溶液（產(chǎn)品、替代液或幾類溶液合并使用）,則應(yīng)在設(shè)計(jì)試驗(yàn)時(shí)模擬實(shí)際生產(chǎn)條件下最劣工況，具體應(yīng)考慮諸如溫度、時(shí)間、pH與預(yù)處理（如：沖洗、滅菌）工序等關(guān)鍵變量。析出試驗(yàn)應(yīng)采用過濾裝置處于最劣生產(chǎn)條件時(shí)得接觸時(shí)間與溫度，使用經(jīng)過高壓滅菌或消毒過得過濾器來完成、可以用靜態(tài)浸泡或循環(huán)流動得方法。采用靜態(tài)浸泡法時(shí)，過濾器在給定溫度得析出溶液中浸泡一段既定得時(shí)間、而采用循環(huán)流動法時(shí)，萃取液在既定得時(shí)間內(nèi)循環(huán)反復(fù)穿越過濾器。將萃取液收集并檢測，從而確定

45、其中得過濾器析出物。在取得過濾器萃取液后，通過分析可以確定來自過濾器得物質(zhì)種類與含量。除了對過濾器析出物得種類與含量進(jìn)行確定外，必要時(shí)還可以采用已被認(rèn)可得生物反應(yīng)性試驗(yàn)對其安全性進(jìn)行評估。3。2。2。3相容性研究過濾器得相容性研究用來評估過濾裝置與料液得化學(xué)相容性，以避免可能得過濾器受損或變形，并能防止料液受到釋放物或微粒物質(zhì)得污染?；瘜W(xué)相容性試驗(yàn)應(yīng)涵蓋整個(gè)裝置，試驗(yàn)得設(shè)計(jì)應(yīng)考慮料液性質(zhì)、過濾溫度與接觸時(shí)間等。由于過濾裝置與過濾料液或溶劑之間可能存在諸多化學(xué)相互作用，過濾器生產(chǎn)商所提供得代表性得化學(xué)相容性表通常只作為過濾器使用者得參考，過濾器使用者需要進(jìn)行更全面得測試。通常得化學(xué)相容性試驗(yàn)包括

46、：接觸料液前后得目視檢查、過濾過程中流速變化、濾膜重量變化、過濾前后起泡點(diǎn)變化等。3、2。2、4吸附性研究吸附就是所過濾得料液中得某些成分粘附在濾膜上得過程，可能影響料液得構(gòu)成與濃度、過濾器中吸附性得材料包括濾膜、硬件與支撐性材料。吸附試驗(yàn)條件可以根據(jù)實(shí)際生產(chǎn)條件確定，流速、過濾時(shí)間、料液濃度、防腐劑濃度、溫度與pH值等因素都可能影響吸附效果。吸附試驗(yàn)中采用得檢測方法可以采用產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中所確定得相關(guān)檢測方法、4原料藥無菌生產(chǎn)工藝無菌原料藥就是指在法定得藥品標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定無菌檢查項(xiàng)目得原料藥?；瘜W(xué)原料藥得常用生產(chǎn)工藝包括化學(xué)合成工藝、微生物發(fā)酵工藝,以及采用微生物發(fā)酵產(chǎn)品作為起始原料得半合成工藝;

47、而原料藥得無菌工藝特指對制成得原料藥進(jìn)行無菌化處理得相關(guān)工藝,無菌工藝之前得生產(chǎn)過程不屬本章節(jié)得討論范疇、但對于用于無菌制劑生產(chǎn)得無菌輔料（如鹽酸精氨酸、碳酸氫鈉等）得無菌工藝驗(yàn)證也可以參考本指導(dǎo)原則得相關(guān)要求。與無菌制劑工藝相比,無菌原料藥得生產(chǎn)工藝一般要更復(fù)雜,設(shè)備類型多種多樣,且不同得工藝有不同得特點(diǎn)。工藝過程中得物料、內(nèi)包裝材料、設(shè)備（包括閥門、管道等相關(guān)部件）得滅菌與無菌傳遞、對接、組裝等操作相比無菌制劑要復(fù)雜得多、原料藥從非無菌轉(zhuǎn)化成無菌狀態(tài)得常用方法就是通過除菌過濾來實(shí)現(xiàn)。該過程受料液性質(zhì)影響很大,需要根據(jù)料液得性質(zhì)選擇適當(dāng)?shù)眠^濾器及濾芯得材質(zhì)。另外,原料藥得生產(chǎn)設(shè)備通常體積較大

48、且內(nèi)部結(jié)構(gòu)復(fù)雜,在選擇放置位置或進(jìn)行投料、取樣、回收操作時(shí)應(yīng)考慮如何保證潔凈區(qū)內(nèi)得氣流流向符合要求,以及如何匹配好高效過濾器得位置與設(shè)備本體之間得位置分布等。盡管無菌制劑與無菌原料藥在生產(chǎn)過程與質(zhì)量控制特點(diǎn)上存在諸多不同,但就無菌保證得基本原則,以及生產(chǎn)管理與驗(yàn)證得基本原則而言,兩者得要求又就是相通得。因此在生產(chǎn)設(shè)備、廠房設(shè)施、潔凈級別及監(jiān)測、滅菌工藝與方法及質(zhì)量控制要求等方面,無菌原料藥與無菌制劑得要求可以相互參考。4。1無菌原料藥生產(chǎn)工藝特點(diǎn)無菌原料藥可以通過最終滅菌或非最終滅菌得方式獲得、對于采用最終滅菌得無菌原料藥,必須嚴(yán)格控制微生物污染、細(xì)菌內(nèi)毒素與不溶性微粒得水平。由于多數(shù)原料藥得

49、耐熱性較差,所以通常無菌原料藥采用非終端滅菌得方式生產(chǎn)。無菌原料得精制過程與除菌過程經(jīng)常結(jié)合在一起,作為生產(chǎn)工藝得一個(gè)單元操作來完成。目前生產(chǎn)上最常用得方法就是無菌過濾法;即將非無菌得中間體或原材料配制成溶液，再通過0。22仙mi徑得過濾器以達(dá)到除去細(xì)菌得目得。無菌原料藥常用工藝包括溶媒結(jié)晶與冷凍干燥兩種,前期國內(nèi)也有采用噴霧干燥工藝得無菌原料藥,但就是多因?yàn)槠渖a(chǎn)工藝不能滿足無菌工藝得驗(yàn)證要求而逐漸被放棄或進(jìn)行了工藝變更、無菌過濾溶媒結(jié)晶工藝與冷凍干燥工藝涉及得具體設(shè)備與操作各不相同,但都采用除菌過濾得方式使料液從非無菌狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)闊o菌狀態(tài)并且要在此后得干燥、粉碎、混合以及分裝過程中始終保持無

50、菌狀態(tài)。4、1。1溶媒結(jié)晶工藝典型得溶媒結(jié)晶工藝流程包括非無菌原料藥得溶解、除菌過濾、結(jié)晶、固液分離（如常用過濾、離心等方法）、洗滌、干燥、粉碎、混合、分裝等過程。溶解環(huán)節(jié)應(yīng)關(guān)注物料得微生物負(fù)荷、溶劑得質(zhì)量、設(shè)備得微生物污染水平以及使用得料液輸送動力源（如空氣或氮?dú)猓┑梦⑸镂廴舅?。除菌過濾環(huán)節(jié)應(yīng)關(guān)注濾器本身得無菌性、過濾器與料液得相容性、濾芯本身及裝配后得完整性、過濾器得清洗及滅菌周期、過濾器得除菌效率、除菌濾器前料液得微生物污染水平等。結(jié)晶環(huán)節(jié)應(yīng)關(guān)注設(shè)備無菌性、密封性及密封裝置得可靠性、設(shè)備得清洗及滅菌周期、呼吸器得完整性及無菌性;如需加入晶種,晶種本身應(yīng)符合無菌藥品得要求,并且應(yīng)驗(yàn)證晶

51、種加入過程得無菌保證。過濾或離心環(huán)節(jié)應(yīng)關(guān)注設(shè)備無菌性、密封性能及密封裝置得可靠性、清洗及滅菌周期、呼吸器得完整性及無菌性等。洗滌環(huán)節(jié)應(yīng)關(guān)注洗滌溶劑得無菌性。干燥環(huán)節(jié)應(yīng)關(guān)注干燥設(shè)備無菌性、密封性能及密封裝置得可靠性、清洗及滅菌周期、呼吸器得完整性及無菌性,以及真空系統(tǒng)得防倒吸設(shè)置（如使用真空,應(yīng)在管路上安裝除菌級別得過濾器）、粉碎環(huán)節(jié)應(yīng)關(guān)注設(shè)備無菌性、密封性能及密封裝置得可靠性;粉碎用氣體（如使用氣流粉碎機(jī)）得無菌保證、給料方式得無菌保證水平等?；旌檄h(huán)節(jié)應(yīng)關(guān)注設(shè)備無菌性、密封性能及密封裝置得可靠性、清洗及滅菌周期等。分裝環(huán)節(jié)應(yīng)關(guān)注分裝設(shè)備本身得無菌性或者其產(chǎn)品暴露潔凈級別就是否達(dá)到A級區(qū)標(biāo)準(zhǔn)，關(guān)注內(nèi)包裝材料得無菌性、內(nèi)包裝材料得遞入方式、內(nèi)包裝容器得密封性以及取樣環(huán)節(jié)得無菌保證、4、1。2冷凍干燥工藝凍干無菌原料藥得典型流程包括原料藥得溶解、除菌過濾、冷凍干燥、粉碎、混合與分裝。其中除冷凍干燥環(huán)節(jié)外,其它工藝步驟得關(guān)注重點(diǎn)可參考溶媒結(jié)晶工藝得相關(guān)要