4個(gè)香菇品種的AFLP分子標(biāo)記研究

1、4個(gè)香菇品種的AFLP分子標(biāo)記研究4個(gè)香菇品種的AFLP分子標(biāo)記討論 1.3.4 選擇性擴(kuò)增。將預(yù)擴(kuò)增產(chǎn)物稀釋后作為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增。反應(yīng)體系：2×PCR Mix 10 L，Eprimer 1 L20 mol/L，Mprimer 1 L20 mol/L，模板DNA 5 L預(yù)擴(kuò)產(chǎn)物稀釋20倍，加ddH2O至20 L。PCR擴(kuò)增程序：95 預(yù)變性5 min;95 變性35 s，65 復(fù)性35 s每循環(huán)降低0.7 ，72 延長1 min，12個(gè)循環(huán);94 變性30 s，56 復(fù)性30 s，72 延長1 min，23個(gè)循環(huán)。 1.3.5 聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測分析。選擇擴(kuò)增PCR產(chǎn)物和上樣

2、緩沖液比例83，旋渦混勻，94 變性10 min后，于6%變性聚丙烯酰胺凝膠進(jìn)行垂直電泳分析，銀染后觀看。利用Quantity One軟件對4個(gè)樣品、12對引物組合擴(kuò)增產(chǎn)物測序儀得到的原始數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，依據(jù)無帶和有帶狀況轉(zhuǎn)化為0和1數(shù)據(jù)矩陣。接受NTSYSpc 2.11軟件包進(jìn)行個(gè)體相像系數(shù)計(jì)算，并接受UPGMA法進(jìn)行聚類分析，利用popgene和NTSYS軟件對樣品進(jìn)行遺傳多樣性分析。2 結(jié)果與分析2.1 聚丙烯酰胺凝膠分析利用12對隨機(jī)引物組合對4個(gè)香菇品種的基因組DNA進(jìn)行擴(kuò)增，AFLP擴(kuò)增產(chǎn)物長度介于100500 bp之間，條帶清晰。擴(kuò)增電泳圖譜見圖1。擴(kuò)增條帶總數(shù)為239條，其中多態(tài)

3、性條帶為100條;引物組合P5擴(kuò)增出的多態(tài)性條帶最多，多態(tài)百分比為65.38%;引物組合P9擴(kuò)增出的多態(tài)性條帶最少，多態(tài)百分比為15.38%。2.2 品種多態(tài)性分析由表3可知，香菇LB-21擴(kuò)增出的條帶總數(shù)為180條，其中多態(tài)性條帶41條，多態(tài)比率最低，為22.78%，特有條帶2條;香菇L808、香菇215分別擴(kuò)增出195、188條，多態(tài)性條帶分別為52、49條，其中特有條帶分別為12、2條;香菇B15-1擴(kuò)增出的條帶總數(shù)為196條，多態(tài)性條帶57條，多態(tài)比率最高，為29.08%，含特有條帶7條。2.3 遺傳相像性系數(shù)分析由表4可知，4個(gè)香菇品種之間的遺傳相像性系數(shù)改變范圍為0.669 50.

4、878 7。香菇LB-21與香菇L808、香菇215之間的遺傳性系數(shù)較小，說明遺傳距離較遠(yuǎn);與香菇B15-1之間的遺傳相像性系數(shù)較高，為0.874 5。香菇L808與香菇215之間的遺傳相像性系數(shù)較高，為0.878 7;與香菇B15-1之間的遺傳性系數(shù)較小，說明遺傳距離較遠(yuǎn)。2.4 聚類分析接受UPGMA法進(jìn)行聚類分析，得到4個(gè)香菇品種的親緣關(guān)系樹狀圖。從圖2可以看出，4個(gè)香菇品種被分為了2組，其中香菇LB-21與香菇B15-1為一組，說明這2個(gè)品種親緣關(guān)系相對較近，遺傳相像性系數(shù)為0.874 5;香菇L808與香菇215為一組，兩者親緣關(guān)系較近，遺傳相像性系數(shù)為0.878 7。3 結(jié)論試驗(yàn)結(jié)果說明，接受12對隨機(jī)引物組合擴(kuò)增4個(gè)香菇品種基因組DNA，香菇B15-1擴(kuò)增條帶總數(shù)為196條，多態(tài)性條帶57條，多態(tài)比率最高29.08%，含有特有條帶7條香菇L808、香菇215擴(kuò)增條帶總數(shù)分別為195、188條，多態(tài)性條帶分別為52、49條，其中特有條帶分別為12、2條;香菇LB-21擴(kuò)增條帶總數(shù)為180條，其中多態(tài)性條帶41條，多態(tài)比率最低22.78%，特有條帶2條。4個(gè)香菇品種之間的遺傳相像性系數(shù)改變范圍為0.669 50.878 7。接受UPGMA法進(jìn)行聚類分析，結(jié)果發(fā)覺，4個(gè)品種被分成了2組，其中香菇LB-21與香菇B15-1為一組，說明