尿11項檢測干化學(xué)測定的原理

1、干化學(xué)測定的原理 干化學(xué)法尿pH檢查的原理是采用酸堿指示劑法，其測試膜塊區(qū)含有甲基紅(pH4.66.2)和溴麝香草酚藍(lán)(pH6.07.6)。兩種酸堿指示劑適量配合可反映尿pH4.59.0的變異范圍。二、干化學(xué)法檢查尿pH的注意事項 (1)檢測時尿標(biāo)本必須新鮮，放置過久細(xì)菌分解尿液成分可導(dǎo)致pH改變，大多數(shù)細(xì)菌如變形等，分解尿素產(chǎn)生氨，可使尿液呈堿性；但在少數(shù)情況下，細(xì)菌也分解尿液成分產(chǎn)生酸性物質(zhì)，使尿q偏酸。(2)當(dāng)腎臟分泌的尿液含有過多的碳酸氫鹽和碳酸緩沖對時，如果尿液放置時間過久，尿液中?氧化碳會自然擴散到空氣中，使尿pH增高。3)在測定過程中，應(yīng)嚴(yán)格按規(guī)定的時間將試劑帶浸泡尿液標(biāo)本中，浸

2、尿時間過長，尿pH呈減低4)在使用多項試劑帶進(jìn)行測定時，要認(rèn)真閱讀使用說明，嚴(yán)格按說明書進(jìn)行操作，試劑帶上不能浸量的尿液標(biāo)本，防止試劑帶相互之間的“溢出"(runover)現(xiàn)象，影響尿pH測定。5)尿液pH主要反映腎臟在維持血漿和細(xì)胞外液正常氫離子濃度方面的能力，而干化學(xué)法測定只4半定量的實驗結(jié)果。因此在臨床觀察結(jié)果時，不要單從尿pH測定值分析，要結(jié)合臨床其他資料駐數(shù)據(jù)，綜合分析才能得出正確的判斷。方法原理：干化學(xué)法尿pH檢查的原理是采用酸堿指示劑法，其測試膜塊區(qū)含有甲基紅(pH4.66.2)和溴麝香草酚藍(lán)(pH6.07.6)。兩種酸堿指示劑適量配合可反映尿pH4.59.0的變異范圍

3、。臨床意義：1、尿pH檢測了解體內(nèi)酸堿平衡情況在代謝性酸中毒、痛風(fēng)、糖尿病、腎結(jié)石、型腎小管酸中毒、白血病和壞血病時，常有強酸性尿。堿中毒及原發(fā)性醛固酮增多癥、腎小管酸中毒(、型)、泌尿系變形桿菌感染時，可呈堿性尿。2、觀察尿pH變化，指導(dǎo)臨床用藥，預(yù)防腎結(jié)石的形成和復(fù)發(fā)，減輕泌尿系微生物的感染研究證明，某些腎結(jié)石的形成與尿pH變化密切相關(guān)，如在尿pH降低時容易形成酸性結(jié)石；而在尿PH增加時容易形成堿性結(jié)石。因此，臨床對于某些患者有形成酸性結(jié)石(如尿酸和胱氨酸結(jié)石)傾向S時如果給藥使尿pH保持堿性或至少尿pH在6.5以上，就不會形成酸性結(jié)石。相反，臨床對于某些患者有形成堿性結(jié)石(如磷酸鈣結(jié)石)

4、傾向時，如果給藥使尿pH保持酸性，也就不會形成堿性結(jié)石。此外，堿性尿可促進(jìn)某些微生物的生長發(fā)育，同樣使尿液呈酸性也可預(yù)防細(xì)菌的生長，減少泌尿系統(tǒng)的感染。尿pH檢測不僅可了解體內(nèi)酸堿平衡情況，還可監(jiān)控尿pH變化對其他膜塊區(qū)反應(yīng)的干擾作用，如尿蛋白測定、尿比重檢查受尿pH影響很大，因此，當(dāng)尿pH明顯升高或減低時，要考慮同時檢測尿比重、尿蛋白結(jié)果：是否可靠或用其他方法進(jìn)行檢測。 。第二節(jié) 尿比重(比密)測定尿液比重(比密)(specificgravity，SG)是指尿液與純水的重量之比，是尿中溶解物質(zhì)濃度的指標(biāo)。溶解于尿液中的固體物質(zhì)，主要是尿素和氯化鈉，前者反映食物中的蛋白質(zhì)含量，后者反映食物中的

5、含鹽量，在正常生理情況下，尿比重與排出的水分、鹽類和尿量有關(guān)。尿比重測定可以估計腎臟濃縮功能。由于尿比重還受年齡、飲水量、出汗等因素的影響，故多次測定比單次測定更能反映腎臟濃縮功能。尿比重測定在臨床使用的方法較多，如稱重法、浮標(biāo)法(尿比重計法)、液滴落下法、超聲波法、折射儀法，于化學(xué)試劑帶法，等等。由于干化學(xué)試劑帶法具有簡便、快速，測定尿比重不受非離子成分如葡萄擾，且同時給出多項尿液參數(shù)結(jié)果，現(xiàn)已廣泛使用。但由于試驗結(jié)果劃分范圍跨度大，敏感性較比學(xué)法測比重只能用于健康人及初診病人篩選試驗。根據(jù)美國NCCLS文件，折射儀法為尿比重檢測的參考方法。 一、干化學(xué)法測試的原理 。干化學(xué)試劑帶法測定尿比

6、重的膜塊中主要含有兩種成分(表32)：一種是電解質(zhì)共聚體，即甲氧乙面丁烯二酸(methoxyethylenemaleic acid)共聚合體(圖31)；另一種是酸堿指示劑溴麝香草酚藍(lán)（PH6.o76)。除這兩種物質(zhì)外，還含有其他物質(zhì)如緩沖劑等。其測試原理模式見圖32。二、干化學(xué)法尿比重檢查注意事項 (1)尿液標(biāo)本必須新鮮，不能含有強堿、強酸等物質(zhì)(如奎寧、嘧啶等藥物)，這些物質(zhì)的存在都會直接影響試劑帶測定尿比重。當(dāng)尿液pH70時，應(yīng)該在干化學(xué)法測定結(jié)果的基礎(chǔ)上增加0005作為由強堿尿損失的補償。其補償機理是：當(dāng)尿液pH7o時，尿液必將存在著氫氧根離子(OH)，它的存在會中和掉由尿液離子成分使電

7、解質(zhì)聚合體釋放出來的氫離子(H)，導(dǎo)致氫離子不與酸堿指示劑反應(yīng)，結(jié)果偏低。在強酸性尿液時，干化學(xué)法測定尿比重結(jié)果明顯偏高，但在一般情況下尿液不可能呈強酸性，所以影響不如堿性尿那么直接。表33顯示不同尿pH對尿比重的影響。(2)尿比重計法、折射儀法和干化學(xué)法是采用不同的原理測定尿液比重，測定的結(jié)果必將有一定的定鮑差距，如尿液中非離子型化合物(如葡萄糖、造影劑等)，可導(dǎo)致比重計和折射法測定結(jié)果偏 (3)尿蛋白濃度增高時，由于蛋白分子本身是兩性電解質(zhì)，即本身既有電荷又有固體量，所以對三下按都有影響，以干化學(xué)法最為明顯，折射儀法次之，。比重計法影響最小。教科書規(guī)定，每增加logL質(zhì)，折射儀法應(yīng)在原測定

8、值的基礎(chǔ)上減去o005，比重計法碎去0003。尿蛋白干擾干化學(xué)法測定原指示劑呈現(xiàn)顏色而使結(jié)果偏高。表35顯示不同濃度尿蛋白對尿比重的影響。(4)干化學(xué)法不宜用于新生兒尿比重檢查，這可能是由于新生兒尿比重太低，僅在1002004之間的緣故。 (5)由于干化學(xué)法所測尿比重結(jié)果間隔較大，不能反映較小的比重變化，因此只能用于過高或過低汞比重病人的篩選，對于病理性特別是系統(tǒng)觀察的病例仍以折射儀法更為理想。 NCCLS建議以折射儀法作為干化學(xué)法測定尿比重的參比方法，浮標(biāo)法(比重計法)測定尿比重不再使用。折射儀法可用去離子水或蒸餾水和已知濃度溶液監(jiān)測其測量結(jié)果是否準(zhǔn)確，如蒸餾水比重應(yīng)為000；0513mol

9、兒氯化鈉溶液，比重應(yīng)為1015；0856mol兒氯化鈉溶液，比重應(yīng)為1022'；263mol兒蔗糖溶液，比重應(yīng)為1034。 三、尿比重檢查的臨床意義 尿比重的參考值在10151025之間，早晨第一次尿標(biāo)本的比重最高，通常>1020；在多次隨機尿標(biāo)本中，尿比重在1025以上，提示腎濃縮功能正常。(1)尿比重的高低主要取決于腎臟的濃縮功能，它與尿內(nèi)所含溶質(zhì)的多少成正比，而與尿量成反比，并與尿液的顏色深淺平行。尿比重增高：表示尿液濃縮，見于急性腎炎、蛋白尿、糖尿病、高熱、大量出汗、脫水、心功能不全、流行性出血熱少尿期等。尿比重減低：表示腎臟濃縮機能減退，見于尿崩癥、慢性腎炎、精神性多飲

10、多尿癥、原發(fā)性醛固酮增多癥、流行性出血熱多尿期及恢復(fù)期。尿比重比較固定：尿比重變化不大，一般固定在1010左右，呈等張尿，表示腎實質(zhì)有嚴(yán)重?fù)p害。(2)用尿比重和尿量的動態(tài)變化來監(jiān)測腎結(jié)石病人的尿物理變化，可用于指導(dǎo)病人飲食習(xí)慣，預(yù)防病人結(jié)石的再次形成。(3)尿比重的高低不僅直接反映腎臟濃縮功能，而且還能監(jiān)測全自動尿沉渣分析儀對紅細(xì)胞形態(tài)析是否受尿比重的影響(尿比重偏低，可使紅細(xì)胞形態(tài)由均一性向多形性轉(zhuǎn)變)。第三節(jié)尿蛋白測定一 測定原理尿液蛋白質(zhì)的測定方法采用的是指示劑蛋白質(zhì)誤差法，即在一定的條件下（PH為.時），溴酚藍(lán)產(chǎn)生出陰離子，與帶陽離子的蛋白質(zhì)（主要是白蛋白）結(jié)合發(fā)生顏色變化。二、干化學(xué)

11、法測定尿蛋白的注意事項 干化學(xué)法測定尿蛋白操作簡單快速、敏感性高，但該法是利用尿蛋白與某些染料相結(jié)合而產(chǎn)生的歹色變化來測定蛋白含量，因此在使用中，無論用哪一種方法進(jìn)行尿蛋白定性檢查，都必須重視下列問題。(一)尿液pH 尿液標(biāo)本必須新鮮，變質(zhì)的尿液會使尿pH發(fā)生變化，或者尿液本身過酸、過堿都會影響實驗結(jié)吳當(dāng)病人服用奎寧、奎寧丁和嘧啶等藥物時，引起尿液呈強堿尿(pH9o)，超過了試劑帶本身的緩沖耄力，會使干化學(xué)法出現(xiàn)假陽性結(jié)果；而用磺基水楊酸法和加熱乙酸法作尿蛋白定性時，因尿液過堿，遠(yuǎn)熏蛋白質(zhì)的等電點出現(xiàn)假陰性結(jié)果。鑒別方法是用稀醋酸將尿液pH調(diào)至56后再進(jìn)行實驗，借以區(qū)爺是否由于強堿尿而導(dǎo)致干化

12、學(xué)法的假陽性，或磺基水楊酸法和加熱乙酸法的假陰性。同樣，當(dāng)尿滯pH<30時，也會引起尿蛋白定性試驗的假陰性。表38顯示不同pH值對尿蛋白測定結(jié)果的影響。 (二)尿液所含蛋白成分 不同的尿蛋白測定方法對病人尿液內(nèi)不同類型蛋白質(zhì)檢測的敏感性不同，測定結(jié)果也不相同：三擻娟教授等經(jīng)實驗證實，尿中球蛋白濃度為4000mg兒以下時，干化學(xué)法蛋白定性為陰性，只有當(dāng)其芝譬達(dá)5 500mgL時，才出現(xiàn)可疑反應(yīng)；白、球蛋白比值為1：2的蛋白尿，蛋白濃度高達(dá)2000mg兒芝·會出現(xiàn)陽性(+)反應(yīng)，干化學(xué)法測量球蛋白的敏感性僅為白蛋白的1100150。磺基水楊酸定性三卅球蛋白反應(yīng)的靈敏度亦較白蛋白低，

13、濃度同時為2 000mg幾時，白蛋白出現(xiàn)陽性(+)反應(yīng)，球蛋三，：勺囚性(+)反應(yīng)；在白、球蛋白尿中，球蛋白比例增大，則陽性程度減弱。加熱乙酸定性法和雙縮脲定量三可以對白蛋白、球蛋白顯示同樣的敏感性，表39顯示同一份標(biāo)本不同測定方法測定尿蛋白的差異程蔓：加熱乙酸法對于單純球蛋白尿具有特殊反應(yīng)，即濃度從500mg兒到5 500mg兒濃度的尿液，此法車表現(xiàn)為大小不等的凝塊狀而尿液本底并不顯現(xiàn)明顯混濁，從而提示本法可能為高度非選擇性蛋白尿F：篩試驗。因此在進(jìn)行腎病患者尿蛋白測定時，特別是在疾病發(fā)展過程中需要系統(tǒng)觀察尿蛋白含量的振例，最好使用磺基水楊酸法(或加熱乙酸法)和雙縮脲法進(jìn)行定性、定量實驗。

14、標(biāo)本編號干化學(xué)法(mg兒)雙縮脲法(mg兒)(三)尿液中的干擾物 研究證明，多種物質(zhì)(多為藥物)可使尿蛋白不同檢查方法呈現(xiàn)出假陽性和假陰性結(jié)果。叢玉隆等曾凝；了了多種抗生素對尿蛋白測定影響的研究，發(fā)現(xiàn)青霉素族藥物對其有明顯的干擾作用。為了證明這一筆者對大劑量青霉素靜脈注射患者用藥前后進(jìn)行了尿蛋白的檢測，結(jié)果表明：尿液內(nèi)青霉素濃度罐：立4萬Uml時，對干化學(xué)法測定尿蛋白產(chǎn)生假陰性，而對磺基水楊酸法測定尿蛋白產(chǎn)生假陽性(表)。靜脈滴注青霉素240萬U組2h內(nèi)，320萬U組3h內(nèi)，480萬U組5h內(nèi)，尿中青霉素濃度可達(dá)到影響尿蛋白測定水平(表311和表312)，可對磺基水楊酸法產(chǎn)生假陽性，對干化學(xué)法

15、產(chǎn)生假陰 因此，對于含蛋白尿的患者使用青霉素治療時，使用不同的測定尿蛋白方法需要考慮不同的干擾作主即磺基水楊酸法使結(jié)果增強或出現(xiàn)假陽性，干化學(xué)法測試使結(jié)果偏低甚至出現(xiàn)假陰性。除此之外，尿等有高濃度有機碘造影劑(如膽影葡胺、泛影葡胺、碘番酸)及尿酸鹽時，磺基水楊酸法可呈假陽性，而化學(xué)法和加熱乙酸法影響較小。（四）。尿液存放時間及污染尿液存放時間過久而致細(xì)菌生長繁殖，或尿液受其他分泌物如陰道分泌物污染，或含有較多細(xì)胞成屢渣試劑帶測試原理及注意事項分時，也可出現(xiàn)陽性反應(yīng)。但這種蛋白尿絕非泌尿系統(tǒng)病變所致。 四、尿蛋白測定的臨床意義(一)參考范圍尿蛋白定性試驗一般為陰性。(二)生理性蛋白尿或無癥狀性蛋

16、白尿 生理性蛋白尿，指泌尿系統(tǒng)并無器質(zhì)性病變，而是由于各種體內(nèi)環(huán)境因素只怔常機體的影響所導(dǎo)2的尿蛋白含量增多，可分為功能性蛋白尿和體位性(直立性)蛋白尿。 1功能性蛋白尿功能性蛋白尿是指機體劇烈運動、發(fā)熱、低溫刺激、精神緊張、交感神經(jīng)興奮等所致的，暫時性、輕度白尿。其形成機理可能是由于上述諸因素使腎血管痙攣或充血，導(dǎo)致腎小球毛細(xì)血管壁的通透性增一旦誘發(fā)因素消失，尿蛋白也迅速消失，此類蛋白尿定性試驗一般不超過陽性(牛)，定量試驗5g24h尿，多見于青少年。2體位性蛋白尿體位性蛋白尿又稱直立性蛋白尿，是指由于直立位或腰部前突時引起的輕度或中度蛋白尿。其特點ZI司尿蛋白定性為陰性，起床活動若干時間后

17、出現(xiàn)蛋白尿，再平臥后又轉(zhuǎn)為陰性。常發(fā)生于青少年，一直年齡增長而消失。此種蛋白尿的發(fā)生機理尚不完全明了，可能與直立時前突的脊柱壓迫腎靜脈；直才由于腎向下移動，腎靜脈被動扭曲，而使腎臟處于暫時瘀血狀態(tài)，與淋巴血流受阻有關(guān)。此類蛋白尿試驗陽性可達(dá)什，甚至卅，但臥床休息后可消夫。(三)病理性蛋白尿病理性蛋白尿指泌尿系統(tǒng)因器質(zhì)性病變，尿內(nèi)持續(xù)出現(xiàn)蛋白而盲。導(dǎo)致蛋臼尿的原因很多，通?？傻鬄橐韵?種。1腎小球性蛋白尿腎小球性蛋白尿是由于腎小球濾過膜受損而使通透性增加，濾出較多的血漿蛋白，超過了腎小管重工能力。此型蛋白尿最為常見，蛋白尿以白蛋白為主，也含有一些分子量較大的球蛋白，分子量4萬以吁蛋白質(zhì)含量極少。

18、2腎小管性蛋白尿腎小管性蛋白尿是由于炎癥或中毒引起近曲小管對低分子量蛋白質(zhì)的重吸收障礙而導(dǎo)致的以低分曼蛋白質(zhì)為主的蛋白尿。此類的特點是以p：微球蛋白、溶菌酶等增多為主，白蛋白正?；蜉p度增多。3混合性蛋白尿混合性蛋白尿是由于腎病同時累及腎小球和腎小管而產(chǎn)生的蛋白尿。此類特點是白蛋白和pz微球三司時增多。4溢出性蛋白尿溢出性蛋白尿主要是血循環(huán)中出現(xiàn)低分子量蛋白質(zhì)(如游離血紅蛋白、肌紅蛋白)或本周氏蛋白過寄小球濾過及腎小管重吸收功能均正常而溢出尿液中。此類主要見于骨髓瘤、骨骼肌嚴(yán)重創(chuàng)傷及大嘰梗塞等。5組織性蛋白尿組織性蛋白尿是指在尿液形成過程中，腎小管代謝產(chǎn)生的和腎組織破壞分解的蛋白質(zhì)，以及炎癥或嚴(yán)

19、刮激泌尿系統(tǒng)分泌的蛋白(如TatumHorsfall糖蛋白等)。 上述蛋白尿可分為腎前性、腎性及腎后性蛋白尿。本周蛋白尿、血紅蛋白尿、肌紅蛋白尿、溶菌酶尿籬哥前性蛋白尿。腎性蛋白尿見于腎小球或腎小管疾病，可因炎癥、血管病(高血壓病)、中毒(藥物、重曝車)等原因引起。腎后性蛋白尿則見于腎盂、輸尿管、膀胱、尿道的炎癥、腫瘤、結(jié)石。動態(tài)觀察尿蛋尋，對上述疾病的診斷、病情觀察、判斷療效和及時了解是否出現(xiàn)藥物副作用等均有一定意義。 （四)蛋白尿的分類 至白尿可按尿中蛋白含量的多少分為輕、中、重三類。輕度蛋白尿：尿蛋白含量<05g24h，可見苷，管及腎小球病變的非活動期、腎盂腎炎、體位性蛋白尿等；中

20、度蛋白尿：尿蛋白含量在o54；乙除腎炎外，見于高血壓腎動脈硬化、多發(fā)性骨髓瘤等；重度蛋白尿：尿蛋白>4g24h，可見于噔蘭腎小球腎炎及紅斑狼瘡性腎炎、腎病綜合征等。以上分類是相對的，當(dāng)病變同時累及腎小球及腎虧；乙低分子量、高分子量蛋白質(zhì)均增多，此時動態(tài)觀察24h尿蛋白量有助病程觀察及療效判斷。（五)蛋白尿的選擇性叫。年Blainly等首先提出了蛋白尿選擇性的概念作為判斷腎小球損傷嚴(yán)重程度的指標(biāo)。選擇性學(xué)法測定尿中的中分子量蛋白質(zhì)和高分子量蛋白質(zhì)的比值來確定的。有關(guān)選擇性蛋白尿、非選擇性蛋白尿及選擇性蛋白尿指數(shù)(SPl)將在以下章節(jié)介紹。第四節(jié) 尿糖測定 嚴(yán)格地說，尿糖測定應(yīng)該是尿葡萄糖測

21、定。正常人尿內(nèi)可有微量葡萄糖，尿內(nèi)含糖量為o565mmol24h，定性試驗為陰性。尿糖定性試驗常用班氏法、葡萄糖氧化酶法和干化學(xué)法。 一、干化學(xué)法測試的原理 干化學(xué)試劑帶法測定尿糖的膜塊中主要含有葡萄糖氧化酶、過氧化物酶和色源及其他物質(zhì)。不同家采用色源有異(表313)，主要有兩類：采用碘化鉀作色源(如美國Ames公司的Clinitek“200型采用聯(lián)甲苯胺作色源(如德國寶靈曼公司的MiditronR型)。測定尿糖的原理是：膜塊內(nèi)葡萄糖氧化酶(GOD)作用于尿液中葡萄糖，使其形成葡萄糖醛酸和過氧化氫(H20：)，后者再被過氧化氫酶(POD)售化釋放出O，后者使色源呈現(xiàn)不同的顏色變化。三、尿糖測定

22、的臨床意義尿糖一般是指尿液中葡萄糖而言，其來源于血液中的葡萄糖。正常人腎臟的腎糖閾值是90180mgd1)。一般情況下血糖濃度相對比較恒定，空腹血糖為444666mmolL，進(jìn)食必一999mmo兒，由腎小球濾過的葡萄糖幾乎全部可被腎小管重吸收，只有極微量部分由尿北為056167mmol，濃度為028083mmolL，用任何常規(guī)性檢查均不能測出。葡萄糖是否會出現(xiàn)于尿中，一是要看血糖濃度，二是要看腎小管重吸收的能力，即腎糖閾值。 尿中是否出現(xiàn)葡萄糖取決于三個因素：C動脈血液由葡萄糖濃度；每分鐘流經(jīng)腎小球的血漿量；近端腎小管上皮細(xì)胞重吸收葡萄糖的能力，即腎糖團：弩糖團可隨腎小球濾過率和腎小管葡萄糖重

23、吸收率的變化而變化。當(dāng)腎小球濾過率減低時，可導(dǎo)致·腎糖闊·提高；而腎小管重吸收率減少時，則可引起腎糖閾降低。葡萄糖尿除可因血糖濃度過高引起外，也可因腎小管重吸收能力降低引起，后者血糖可正常。 (一)生理性糖尿生理性糖尿為一過性糖尿，是暫時性的，排除生理因素后恢復(fù)正常。1飲食性糖尿 短時間內(nèi)食用大量糖所致，糖的同化存在著個體差異，但健康人一次進(jìn)食葡萄糖200g以上即可產(chǎn)生糖尿。 ， 2應(yīng)急性糖尿 又稱一過性糖尿。原因是顱腦外傷、腦血管意外、情緒激動等情況下，延腦血糖中樞受刺激，導(dǎo)致腎上腺素、胰高血糖素大量釋放，因而可出現(xiàn)暫時性高血糖和糖尿。 3妊娠性糖尿 以妊娠中末期多見，由

24、于腎小球濾過增加，腎小管的重吸收相對減少；另外，妊娠末期和哺乳期間可因乳腺產(chǎn)生乳糖過多而至乳糖尿。 (二)病理性糖尿 1真性糖尿 真性糖尿是由于胰島素絕對或相對不足，血糖濃度超過腎糖閾值而從尿中排出所致。尿糖檢查不僅是診斷糖尿病的重要依據(jù)，也是指導(dǎo)臨床醫(yī)生胰島素使用量的依據(jù)之一，判斷療效的主要指標(biāo)之一。但如果并發(fā)腎小球硬化癥，則腎小球濾過減少，腎糖閾升高，此時血糖雖已超過÷般的腎糖閾值，尿糖卻表現(xiàn)為陰性。但于進(jìn)食后2h由于負(fù)載增加，則可見血糖升高，尿糖陽性。對于此類糖尿病患者，不但需同時做空腹血糖、尿糖檢查，進(jìn)食后2h尿糖檢查，還需進(jìn)一步做糖耐量試驗等檢查，以明確診斷。 2腎性糖尿

25、· 。 腎性糖尿是由于腎小管對葡萄糖的重吸收功能減退，腎糖閾降低而引起的糖尿。如家族性糖尿(先天性近曲小管重吸收功能缺陷)，無明顯癥狀。新生兒糖尿是因近曲小管功能尚未完善。以上均應(yīng)與真性糖尿病相區(qū)別，其鑒別要點為腎性糖尿時空腹血糖及糖耐量試驗結(jié)果均正常。 3其他糖尿 生長激素、甲狀腺素、腎上腺素、皮質(zhì)醇、胰高血糖素都可使血糖濃度上升而引起糖尿。甲狀腺功能亢進(jìn)，甲狀腺素分泌過多，使消化道腸壁的血流加速和糖的吸收增快，因而在飯后血糖增高，出現(xiàn)糖尿；肢端肥大癥，可因生長激素分泌旺盛而致血糖升高，出現(xiàn)糖尿；嗜鉻細(xì)胞瘤，可因腎上腺素和去腎上腺素大量分泌，致使磷酸化酶活性增強，促使肝糖原降解為葡

26、萄糖，引起血糖升高而出現(xiàn)糖尿；興氏(Cushing)綜合征，可因皮質(zhì)醇分泌增多，使糖原異生旺盛，抑制己糖激酶和對胰島素作用，因而二理糖尿。此外，肝功能障礙時血糖升高也可見糖尿。第五節(jié) 尿酮體的測定 。一、千化學(xué)法測定的原理 二、千化學(xué)法測定尿酮體的注意事項 (1)由于尿酮體中的丙酮和乙酰乙酸都具有揮發(fā)性，乙酰乙酸更易受熱分解成丙酮，尿液被細(xì)菌污誕虧，酮體消失。因此，尿液必須新鮮，及時送檢，以免因酮體的揮發(fā)或分解，出現(xiàn)假陰性結(jié)果或偏低籌吳： (2)干化學(xué)法對乙酰乙酸的敏感性為50100mgL，對丙酮的敏感性為400700mgL，不與p羥三鬟發(fā)生作用。但各大廠家生產(chǎn)的試劑帶存在差異，對酮體測定成分

27、不同，應(yīng)加以注意。注意干化學(xué)法與酮體粉法的敏感度差異，同一病理標(biāo)本，兩種方法可能出現(xiàn)截然不同的結(jié)果，分析結(jié)果時應(yīng)特別注意。(3)不同病程酮體成分的變化會給檢測結(jié)果帶來差異。不同病因引起的酮癥其酮體的成分可不同，即使同一病人在不同病程也可有差異。在糖尿病酮癥酸中毒早期，酮體的主要成分是伊羥丁酸，乙酰乙酸很少或缺乏，此時測量可導(dǎo)致對總酮體量估計不足；在糖尿病酮癥酸中毒癥狀緩解之后，乙酰乙酸含量反而比急性期初始含量高。因此檢驗人員必須注意病程發(fā)展，與臨床醫(yī)生共同分析實驗結(jié)果的可靠性，這就是分析后質(zhì)控的重要內(nèi)容。 三、尿酮體測定的臨床意義 正常情況下，由肝臟產(chǎn)生的酮體經(jīng)血液運送到其他組織，氧化成二氧化

28、碳和水并產(chǎn)生能量。當(dāng)糖代謝發(fā)生障礙時，脂肪的分解代謝增多，這時肝內(nèi)酮體產(chǎn)生的速度超過肝外組織利用的速度，血中酮體增加，稱酮血癥；過多的酮體從尿排出，稱酮尿，可大概分為以下4種情況。 (一)糖尿病酮癥酸中毒 由于糖利用減少，分解脂肪產(chǎn)生酮體增加而引起酮癥。未控制或治療不當(dāng)?shù)奶悄虿〕霈F(xiàn)筍中毒或昏迷時，尿酮體檢查極有價值。應(yīng)與低血糖、心腦疾病酸中毒或高血糖滲透性糖尿病昏迷相區(qū)別。酮癥酸中毒時尿酮體陽性，而后者尿酮體一般不增高。但應(yīng)注意糖尿病酮癥者腎功能嚴(yán)重?fù)p傷而腎閾值增高時，尿酮體亦可減少，甚至完全消失。 (二)非糖尿病性酮癥 如感染性疾病(肺決、傷寒、敗血癥、結(jié)核等發(fā)熱期)，嚴(yán)重嘔吐、腹瀉，長期饑

29、餓、禁食，全身麻醉后等，均可出現(xiàn)酮癥，這些情況相當(dāng)常見。婦女孕期因妊娠反應(yīng)嘔吐、進(jìn)食少，體脂降解代謝明顯增多，發(fā)生酮癥而致酮尿。(三)中毒如氯仿、乙醚麻醉后、磷中毒等(四)服用雙胍類降糖藥服用降糖靈時，由于藥物有抑制細(xì)胞呼吸的作用，可出現(xiàn)血糖正常、尿酮體陽性的現(xiàn)象第六節(jié) 尿膽紅素、尿膽原檢查 膽紅素是血紅蛋白分解代謝的中間產(chǎn)物，是膽汁中的主要成分，其代謝產(chǎn)物有尿(糞)膽原等。當(dāng)各種原因造成膽紅素產(chǎn)生過多，或肝細(xì)胞攝取、結(jié)合及排泄等過程發(fā)生障礙時，均可導(dǎo)致血、尿、糞便中膽紅素及其代謝產(chǎn)物(尿膽原等)的改變。對這些物質(zhì)進(jìn)行檢驗，可協(xié)助臨床診斷。 一、千化學(xué)法測定的原理 尿膽紅素試劑帶的主要組成見表

30、319。其測定原理，是在強酸介質(zhì)中直接膽紅素與二氯苯胺重氮鹽起偶聯(lián)反應(yīng)生成紅色的復(fù)合物(圖312)；其反應(yīng)過程，是重氮鹽作用膽紅素中央使其裂開，再結(jié)合形2分子的偶氮膽紅素而呈現(xiàn)顏色變化。尿膽原測定原理：根據(jù)干化學(xué)試劑帶組成的不同，其測定方法有所差異。試劑帶的組成及其特性見。美國Ames公司采用，在強酸條件下尿膽原和對二甲氨基苯甲醛發(fā)生醛化反應(yīng)，生成櫻紅色縮靶圖313)；德國寶靈曼公司采用，在強酸條件下尿膽原和對甲氧基苯重氮四氟化硼發(fā)生重氮鹽偶生成胭脂紅色化合物。二、千化學(xué)法測定的注意事項 (1)標(biāo)本必須新鮮，以免膽紅素在陽光照射下成為膽綠素，尿膽原氧化成尿膽素。 (2)尿液中含高濃度維生素C和

31、亞硝酸鹽時，抑制偶氮反應(yīng)，使尿膽紅素呈假陰性；當(dāng)患者接受大劑量氯丙嗪治療或尿中含有鹽酸苯偶氮吡啶的代謝產(chǎn)物時，可呈假陰性。 (3)尿液中一些內(nèi)源性物質(zhì)如膽色素原、吲哚、膽紅素等，可使尿膽原檢查結(jié)果出現(xiàn)假陽性，一些藥物(如吩噻嗪)也可產(chǎn)生顏色，干擾實驗。 (4)正常人尿膽原排出量每天波動很大，夜間和上午量少，午后則迅速增加，在午后24時達(dá)最高峰；同時尿膽原清除率與尿pH，相關(guān)，pH50時，清除率為2mlmin，pH80時，增加至25m1min。因此有學(xué)者提倡預(yù)先給患者服用碳酸氫鈉堿化尿液，收集午后24時(2h排出量)進(jìn)行測定，以提高檢出率。 (5)對于阻塞性黃疸尿膽原減少的病人，不能使用干化學(xué)法

32、進(jìn)行測定，因為大多數(shù)尿液試劑帶都沒有設(shè)制檢測尿膽原陰性這一項。三、尿膽紅素、尿膽原檢查的臨床意義 膽色素(bilepigments)是指血紅素的一系列代謝產(chǎn)物，包括膽紅素、膽綠素、膽素原族和膽素族化合物。膽素原族和膽素族化合物種類較多，命名交叉重復(fù)，臨床上常簡化為：凡是糞便中的膽素原族化合物統(tǒng)稱為糞膽原；其氧化產(chǎn)物膽素族化合物統(tǒng)稱為糞膽素；存在于尿液中的同類化合物，則相應(yīng)地稱為尿膽原和尿膽素。 膽紅素是血紅蛋白的代謝產(chǎn)物，衰老紅細(xì)胞破壞后釋放出的血紅蛋白經(jīng)分解產(chǎn)生的膽紅素約占膽紅素總量的80，其余20來自其他血紅素蛋白，包括肌紅蛋白、過氧化物酶、過氧化氫酶及大多數(shù)細(xì)胞色素等的分解代謝。正常成人

33、每天形成250300mg的膽紅素。 膽紅素在肝；脾及骨髓的網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞中產(chǎn)生。這些細(xì)胞將衰老的紅細(xì)胞破壞，釋出血紅蛋白，血素與其結(jié)合的珠蛋白分開。在微粒體血紅素加氧酶系催化下，血紅素原卟啉環(huán)上的。次甲基橋從碳膈子的兩側(cè)斷裂，從而產(chǎn)生相等克分子的CO、鐵及膽綠素。這一步驟是需氧反應(yīng)，并需有NADPH的參刃。膽綠素進(jìn)一步在可溶性的膽綠素還原酶(其輔酶亦為NADPH)的催化下，迅速被還原為膽綠素，老者很快被還原為膽紅素。 在生理pH條件下，膽紅素是難溶于水的脂溶性物質(zhì)。在網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)生成的膽紅素進(jìn)入血液乏。即與血漿清蛋白或。球蛋白(以清蛋白為主)結(jié)合成復(fù)合體。這種結(jié)合又限制了膽紅素自由透過各種主物

34、膜，使其對組織細(xì)胞不致發(fā)生毒性作用。正常人每100ml血漿中的血漿蛋白能與2025mg膽紅蓑豸合，而正常人血漿膽紅素濃度只不過110mg兒，所以正常情況下不致有大量游離膽紅素進(jìn)入組豢而產(chǎn)生毒性作用。 咀紅素在血中以膽紅素一清蛋白的形式運輸，但因其尚未經(jīng)過肝細(xì)胞轉(zhuǎn)化結(jié)合，故稱為未結(jié)合膽紅囂或游離膽紅素。此種膽紅素隨血液循環(huán)至肝臟，很快就被肝細(xì)胞攝取。一旦膽紅素進(jìn)入肝細(xì)胞，就與韁胞中的膽紅素結(jié)合蛋白質(zhì)結(jié)合，于是不再返回越出細(xì)胞膜，從而促使膽紅素不斷向肝細(xì)胞內(nèi)透入。進(jìn)殲細(xì)胞內(nèi)的膽紅素主要與葡萄糖醛酸結(jié)合，生成葡萄糖醛酸膽紅素酯(在肝內(nèi)主要是1分子膽紅素結(jié)蘭：分子葡萄糖醛酸，形成雙葡萄糖醛酸膽紅素)，

35、也有少部分與硫酸根、甲基、乙?；?、甘氨酸或葡萄糖磺萋等相結(jié)合。此種膽紅素也稱為結(jié)合膽紅素。 結(jié)合膽紅素自肝細(xì)胞釋放至毛細(xì)膽管，成為膽汁的一種特殊組成成分。膽紅素隨膽汁排出腸道，自畫插末端起在腸道細(xì)菌作用下進(jìn)行水解和還原反應(yīng)，脫去了葡萄糖醛酸和加氫成無色的膽素原族化合櫥包括中膽素原、糞膽素原及尿膽素原等。所形成的膽素原族化合物基本上隨糞便排出(正常成人每天入糞便中排出膽素原族化合物約40280mg)，約有10一20可被腸粘膜重吸收，再經(jīng)門靜脈轉(zhuǎn)入肝鱉。構(gòu)成膽素原的腸肝循環(huán)，僅有極少部分膽素原進(jìn)入體循環(huán)而由尿排出(正常成人每日從尿中排出尿躚原約0540mg)。 進(jìn)入血液的膽素原族約80與血漿蛋白質(zhì)

36、結(jié)合，僅有一小部分可以通過腎小球濾出。在腎近曲小管中可被重吸收一部分，在遠(yuǎn)曲小管中又可排出一部分。尿中膽素原族的排出量與下列因素有關(guān)。 1尿液pH 酸性尿中膽素原族趨于不解離狀態(tài)，具脂溶性，易被腎小管重吸收，故排出量減少；反之，在堿性尿中膽素原族趨于解離狀態(tài)，水溶性，不易被腎小管重吸收，故排出量增多。 2膽紅素的形成量 當(dāng)膽紅素的來源增加，如患溶血性黃疸時，隨膽汁排出的膽紅素增加，在腸道形成的膽素原族也增多，故重吸收并進(jìn)入體循環(huán)而自尿中排出的膽素原族的量也增多；而當(dāng)膽紅素形成減少，如再生障礙性貧血時，尿中膽素原族的排出量減少。 3肝細(xì)胞功能 由于膽素原族的腸肝循環(huán)中逸入體循環(huán)的量直接取決于肝臟

37、清除膽素原族的功能，因此尿中膽素原排出量增多，可較敏感地反映肝細(xì)胞損傷。臨床經(jīng)驗表明，在病毒性肝炎早期未出現(xiàn)黃疸之前往往已可發(fā)現(xiàn)尿中膽素原族增多。 4，膽道梗阻 患梗阻性黃疸時，膽紅素不能順利排入腸腔，膽素原族形成減少，尿中膽素原族的量也相應(yīng)減少；在膽道完全梗阻時，尿中膽素原族完全消失。 正常人血漿中膽紅素的總量不超過10mg幾，其中未結(jié)合膽紅素占45。膽紅素代謝異常而致體內(nèi)積蓄，遂成黃疸，其特征為血漿中膽紅素水平升高，皮膚、鞏膜及粘膜黃染。黃疽大致分成三大類。 (1)肝前性黃疸 或稱溶血性黃疸，系敗血癥、蠶豆病、瘧疾、異型輸血等使紅細(xì)胞大量破壞，血紅蛋白釋出過多所致。 (2)肝原性黃疸 或稱

38、肝細(xì)胞性黃疸，是指在感染(如病毒性肝炎)、中毒及肝硬化等肝病時，由于肝細(xì)胞內(nèi)或肝內(nèi)毛細(xì)膽管廣泛性病變，使肝細(xì)胞對膽紅素攝取、結(jié)合、轉(zhuǎn)運及排泄障礙所致。 (3)肝后性黃疸 或稱梗阻性黃疸，由于結(jié)石、腫瘤或先天性膽道閉鎖等原因造成總膽管梗阻所致。(2)肝原性黃疸 或稱肝細(xì)胞性黃疸，是指在感染(如病毒性肝炎)、中毒及肝硬化等肝病時，由于肝細(xì)胞內(nèi)或肝內(nèi)毛細(xì)膽管廣泛性病變，使肝細(xì)胞對膽紅素攝取、結(jié)合、轉(zhuǎn)運及排泄障礙所致。第七節(jié) 尿亞硝酸鹽測定 干化學(xué)試劑帶法檢驗?zāi)蛞簛喯跛猁}是尿液自動化分析儀設(shè)置的多項檢測之一，主要用于尿路感染的快速過篩試驗，方法簡便易行，得到廣泛應(yīng)用。 一、干化學(xué)法測定的原理 干化學(xué)試

39、劑帶法測定尿亞硝酸鹽試劑帶膜塊中，主要含有氨基磺胺(或氨基苯砷酸)和1，2，3，4四氫并喹啉3酚(或N萘基乙二胺)物質(zhì)(表322)，而大多數(shù)尿路感染是由大腸埃希氏菌引起，正常人尿液中含有來自食物或蛋白質(zhì)正常代謝產(chǎn)物的硝酸鹽。 當(dāng)尿液中有大腸埃希氏菌增加時，可將硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，其可將膜塊中的氨基磺胺(或氨基苯砷酸)重氮化而成重氮鹽，后者與1，2，3，4四氫并喹啉3酚(或N萘基乙二胺)偶聯(lián)，使膜塊產(chǎn)生圖316、圖317)，借以診斷患者是否被腸桿菌科細(xì)菌感染。其檢出敏感度為0306mgL。 二、實驗注意事項 (一)尿路感染的病原微生物種類 尿亞硝酸鹽檢查先決條件是尿液中的致病菌必須含有硝酸鹽還

40、原酶。從尿路感染患者尿液分離出巧病原微生物有：大腸假單胞菌、變形假單胞菌、克雷伯氏桿菌、糞鏈球菌、葡萄球菌、綠膿假單胞菌、厭氧菌(如消化球菌、消化鏈球菌、韋榮氏球菌、擬桿菌)、酵母菌(如白色念珠菌、圓球擬酵母菌)、支原體刃人型支原體、酵母支原體)等。急性尿路感染單純由大腸桿菌引起者占85，而慢性腎炎由大腸桿菌引起者占52，有些則是大腸桿菌與其他細(xì)菌(如葡萄球菌、腸球菌)的混合感染。腸菌科的大腸桿菌、虱大腸桿菌、變形桿菌、產(chǎn)氣桿菌÷綠膿桿菌及部分厭氧菌皆含硝酸鹽還原酶，可使尿亞硝酸鹽測定呈陽蘭反應(yīng)。而糞鏈球菌因缺乏此酶可出現(xiàn)陰性反應(yīng)。用婦女陰道及宮頸部分離出的多種真菌進(jìn)行了還原適酸鹽實

41、驗研究，結(jié)果表明短密青霉菌還原硝酸鹽陽性率很高，約為7273，五峰霉菌為67，65，酵母及假絲酵母屬真菌還原陽性率低。白曲霉、土曲霉、黃柄曲霉、屢地青霉、產(chǎn)紫青霉及磚紅酵母還原陽吃率很高。尿路感染的病原微生物種類見表323。(二)體內(nèi)適量硝酸鹽的存在尿液中需有適量硝酸鹽，一是來源于食物中的硝酸鹽，如加工肉制品及某些地區(qū)飲水也是硝酸鹽的來源，二是來源于體內(nèi)蛋白質(zhì)正常代謝產(chǎn)物的硝酸鹽；三是體內(nèi)可由氨內(nèi)源性合成硝酸鹽。尿硝酸鹽排泄增加不是因體內(nèi)硝酸鹽分解代謝降低，而是加速硝酸鹽的生物合成所致。體內(nèi)缺乏硝酸鹽，盡管有細(xì)菌也將出現(xiàn)假陰性結(jié)果。 (三)尿液標(biāo)本留取的時間 尿液應(yīng)在膀胱停留間隔4h以上，使細(xì)

42、菌有充分的作用時間，故以早晨留取第一次尿液為宜。間隔時間過短，試驗易呈假陰性反應(yīng)。留取尿液樣杯應(yīng)清潔，并應(yīng)盡快檢測，否則易出現(xiàn)假陽性。 (四)藥物的影響 使用利尿劑可使尿中硝酸鹽含量不高，本試驗呈假陰性；硝基呋喃可能降低亞硝酸鹽反應(yīng)的靈敏性；非那吡啶可引起假陽性；使用抗生素細(xì)菌被抑制時，可出現(xiàn)假陰性；使用大量維生素C(250mgL或以上)時，可出現(xiàn)假陰性結(jié)果等。高比重尿可使本試驗敏感性降低；若尿液中含亞硝酸鹽離子lmg兒，可出現(xiàn)假陰性。 三、尿亞硝酸鹽測定的臨床意義 (1)參考范圍，尿亞硝酸鹽定性試驗，一般為陰性。 (2)尿亞硝酸鹽陽性常見于大腸埃希氏菌引起的泌尿系感染，其檢出敏感度為0306

43、mgL。同時符合以下三個條件：感染的細(xì)菌含有硝酸鹽還原酶；食物中含有適量的硝酸鹽；尿液標(biāo)本在膀胱停留間隔4h以上，并除外藥物等干擾因素。此實驗診斷大腸埃希氏菌感染的符合率為80，反之呈陰性結(jié)果。因此，本實驗陰性并不能排除菌尿的可能；同樣，亞硝酸鹽陽性也不能完全肯定泌尿系統(tǒng)感染，標(biāo)本放置過久或污染可呈假陽性，應(yīng)結(jié)合其他尿液檢查結(jié)果綜合分析，得出正確的判斷。 (3)文獻(xiàn)報告，單一測定亞硝酸鹽診斷尿路感染的敏感性比干化學(xué)檢查白細(xì)胞25Pl低，而比白細(xì)胞100Pl高；按白細(xì)胞100P1診斷尿路感染的特異性，比亞硝酸鹽陽性及白細(xì)胞25P1要高；同時用干化學(xué)法測定亞硝酸鹽及白細(xì)胞時，亞硝酸鹽陽性+白細(xì)胞2

44、51組合方式診斷尿路感染，比亞硝酸鹽陽性+白細(xì)胞100山診斷尿路感染可靠性大。用亞硝酸鹽+白細(xì)胞組合，敏感性和特異性分別為898和92o，陰性預(yù)測值986，說明陽性不能肯定為菌尿，但陰性基本可除外菌尿。檢出革蘭氏陰性桿菌尿優(yōu)于革蘭氏陽性菌尿。當(dāng)白細(xì)胞25弘1時，亞硝酸鹽反應(yīng)陰性，靈敏度835，陰性預(yù)測值970。當(dāng)白細(xì)胞500P1時，亞硝酸鹽反應(yīng)陽性，靈敏度40，陽性預(yù)測值為100。在聯(lián)合應(yīng)用亞硝酸鹽+白細(xì)胞測定5218份尿液，對10m1的菌尿敏感性為792，特異性為81，0。 (4)亞硝酸鹽+干化學(xué)白細(xì)胞檢查+顯微鏡檢查的組合，靈敏度和陰性預(yù)測值100，此時的亞硝酸鹽特異性和陽性預(yù)測值100。

45、 (5)亞硝酸鹽+干化學(xué)白細(xì)胞檢查+尿培養(yǎng)用于診斷產(chǎn)科病人的尿路感染，尿培養(yǎng)陽性證實亞硝酸鹽和白細(xì)胞的敏感性分別為43和77，特異性為99和96，兩個試驗組合的敏感性和特異性為92和95。 (6)亞硝酸鹽+干化學(xué)白細(xì)胞檢查+蛋白質(zhì)試劑帶檢測新生兒和嬰兒尿路感染，陽性預(yù)測值很低，陰性預(yù)測值為994，男、女性別之間無差異。由此認(rèn)為，試劑帶有助于嬰兒尿路感染的診斷；可避免進(jìn)行昂貴的培養(yǎng)。 綜上所述，亞硝酸鹽可作為尿路感染的過篩試驗。但由于亞硝酸鹽單一試驗影響因素較多，如將亞硝酸鹽十干化學(xué)白細(xì)胞檢查組合觀察，必要時用未離心尿標(biāo)本直接涂片進(jìn)行革蘭氏染色油鏡檢查，可大大提高尿路感染診斷的可靠性。第八節(jié) 尿

46、白細(xì)胞、紅細(xì)胞測定 近年來，干化學(xué)尿液自動化分析逐步在國內(nèi)普及，但不少操作者由于對干化學(xué)缺乏嚴(yán)格的過篩標(biāo)準(zhǔn)旬質(zhì)量控制措施，往往造成實驗誤差，甚至延誤疾病的診斷。目前較為突出的是，只看干化學(xué)檢查的白細(xì)抱、紅細(xì)胞結(jié)果，而忽視顯微鏡檢查的傾向。由于干化學(xué)法檢查與顯微鏡檢查是兩種不同的實驗方法，很雄找出完全對應(yīng)的關(guān)系，本節(jié)著重討論檢驗工作中常見的一些問題。 一、千化學(xué)法測定的原理 尿紅細(xì)胞測定試劑帶膜塊中的主要特性見表324。其測試原理是：尿液中的血紅蛋白或其破壞釋敦的游離血紅蛋白均含有亞鐵血紅素，后者具有過氧化氫酶樣活性，可使過氧化物分解釋放出新生態(tài)氧能使無色的鄰甲聯(lián)苯胺(或四甲替聯(lián)苯胺)變成藍(lán)色的

47、鄰甲聯(lián)苯胺(或四甲替聯(lián)苯胺)物質(zhì)(見圖318)。 尿白細(xì)胞試劑帶測定膜塊中的主要成分(表325)是吲哚酚酯、重氮鹽兩種，其測定原理基于粒細(xì)胞胞漿內(nèi)含有酯酶，此酶可作用于膜塊中的吲哚酚酯，使其產(chǎn)生吲哚酚，后者與重氮鹽反應(yīng)形成紫色縮合物(圖319)，其顏色深淺與細(xì)胞的多少呈比例關(guān)系。二、干化學(xué)法檢查注意事項(一)試劑帶的批間差異試劑帶不同而引起同1份標(biāo)本測定結(jié)果的差異。 (二)標(biāo)本對結(jié)果的影響尿液標(biāo)本必須新鮮，留尿后盡量立即測定，以免紅、白細(xì)胞破壞，導(dǎo)致干化學(xué)法與鏡檢法的人為實驗誤差。干化學(xué)法既可測定完整的細(xì)胞成分，又能測定因細(xì)胞破壞胞漿內(nèi)涵物來辨別細(xì)胞的有無(通過特異或非特異性酯酶檢測白細(xì)胞，通

48、過血紅蛋白的過氧化物酶樣反應(yīng)檢測紅細(xì)胞)，因此報告時要了解臨床診斷，綜合分析，排除相互結(jié)果的干擾。某些腎病患者的終尿，由于各種原因使細(xì)胞裂解，可導(dǎo)致儀器壬與目測法的差異。筆者認(rèn)為，此類標(biāo)本最好不使用干化學(xué)法。(三)干擾物對紅、白細(xì)胞測定的影響1.對白細(xì)胞試驗的干擾干化學(xué)法檢查尿內(nèi)白細(xì)胞的原理，是基于粒細(xì)胞漿內(nèi)含有酯酶，可作用于試劑帶膜塊中的吲哚酚酯，操作時應(yīng)注意：應(yīng)了解此法只能測定粒細(xì)胞，不與淋巴細(xì)胞反應(yīng)，在腎移植病人發(fā)生排異反應(yīng)尿中二淋巴細(xì)胞為主時，會出現(xiàn)陰性結(jié)果，此類病人不應(yīng)用干化學(xué)法檢驗，應(yīng)該以顯微鏡檢查法為準(zhǔn)。尿液污染甲醛，或高濃度膽紅素，或使用某些藥物(如呋喃咀啶)時，可產(chǎn)生假陽性；

49、尿蛋白>5gL，或尿液含有大劑量先鋒IV、慶大霉素等藥物時，可使結(jié)果偏低或出現(xiàn)假陰性。2對紅細(xì)胞試驗的干擾 尿液中含有對熱不穩(wěn)定酶、肌紅蛋白或菌尿，可引起干化學(xué)法測定尿紅細(xì)胞的假陽性；易使檢測紅紐胞出現(xiàn)假陽性的原因主要是熱不穩(wěn)定過氧化物酶的干擾。筆者對690例尿液進(jìn)行了分析，其中113例化學(xué)陽性，鏡檢陰性，進(jìn)一步用金標(biāo)法抗Hb單克隆抗體檢查也為陰性；但將尿液加熱煮沸后再進(jìn)行一化學(xué)檢查，結(jié)果為陰性，說明假陽性是由于存在不耐熱的過氧化物酶所致。尿液中大量維生素C的存苧，可競爭性抑制反應(yīng)致使干化學(xué)法產(chǎn)生假陰性，應(yīng)予警惕。為了探討何種方式用藥可對試驗有干擾，筆舌使用了前述的方法(見第四節(jié))，發(fā)現(xiàn)

50、靜脈滴注維生素C5h后才能達(dá)到不影響尿紅細(xì)胞測定的水平。百此靜脈滴注后，原則上在5h內(nèi)不要留尿液標(biāo)本進(jìn)行檢測；不同廠家的儀器和試劑帶對維生素C的影碉程度也不同(表326)。儀器1的試劑帶中含有破壞維生素C的酶，尿內(nèi)維生素C濃度高達(dá)1 000mg時，也不干擾紅細(xì)胞的檢測；儀器2、儀器3及配套試劑帶則較差，維生素C濃度分別在200mgL和omgL時即有干擾。為了避免這個問題，目前國外有多種抵抗維生素C干擾的試劑帶，或使用可同時檢測維生素C的試劑帶，在檢測尿液病理成分的同時監(jiān)測尿維生素C的濃度。 (四)細(xì)胞破壞造成的“假陰性”現(xiàn)象所述“假陽性”、“假陰性”現(xiàn)象，是以顯微鏡檢查為基礎(chǔ)的。由于干化學(xué)法是

51、檢測細(xì)胞胞漿內(nèi)涵物來Q別細(xì)胞的有無(通過特異或非特異性酯酶檢測白細(xì)胞，通過血紅蛋白的過氧化物酶樣反應(yīng)檢測紅細(xì)墅，在實際工作中可能存在下列問題：由于尿液在膀胱貯存時間過長或標(biāo)本放置時間延長，導(dǎo)致白細(xì)眶破壞，酯酶釋放到尿液中，造成干化學(xué)法陽性、鏡檢陰性的所謂“假陽性”現(xiàn)象。腎病患者的紅細(xì)胞在腎蛀或泌尿道破壞，或尿比重過低、尿pH偏高，均易造成紅細(xì)胞破壞，血紅蛋白放出并出現(xiàn)尿中，造成謂紅細(xì)胞干化學(xué)檢查的“假陽性”現(xiàn)象。因此在干化學(xué)法結(jié)果與顯微鏡下所見出現(xiàn)矛盾時，要結(jié)合臨床綜合分析，甚至要動態(tài)觀察，切不可一概否定干化學(xué)法結(jié)果。(五)鏡檢法與干化學(xué)法的相應(yīng)關(guān)系 有作者報道了干化學(xué)與鏡檢兩種方法檢查尿紅細(xì)

52、胞實驗結(jié)果的對應(yīng)關(guān)系，發(fā)現(xiàn)這兩種方法雖然結(jié)Q沒有明顯的對應(yīng)關(guān)系，但每一等級尿分析儀結(jié)果對應(yīng)鏡檢紅細(xì)胞計數(shù)有較好的百分比范圍，特別是干學(xué)“neg”檔，<3HP占100，紅細(xì)胞101，鏡檢正常占9982，35HP占018。鑒于此種現(xiàn)象筆者認(rèn)為在排除上述病理或其他干擾因素存在下，儀器結(jié)果為“紅細(xì)胞10Pl”時，可以省略顯微鏡喧查，而其他檔次(25l、50P1、1501和250P1)均有較大的交叉，必須鏡檢。 由于尿液分析儀白細(xì)胞檢測與顯微鏡下計數(shù)實驗原理截然不同，報告方式是兩種不同的概念，很難找出兩者的對應(yīng)關(guān)系，迄今還沒有一種直接的換算方式。屢有文獻(xiàn)報道了計算板計數(shù)與儀器結(jié)果的內(nèi)在聯(lián)系，Alw

53、all報道每高倍視野白細(xì)胞數(shù)大約是儀器法報告(白細(xì)胞數(shù)FAl)數(shù)的11；Loosyt等指出，白細(xì)胞Pl是白細(xì)胞高倍視野的108倍，筆者的實驗結(jié)果是8，7倍，因此儀器法白細(xì)胞檢查只是一個篩選實驗，決不可代替顯微鏡檢查。三、千化學(xué)過篩的標(biāo)準(zhǔn) 所謂過篩，就是在儀器、試劑帶質(zhì)量合格，檢驗人員相對穩(wěn)定的條件下制定一個標(biāo)準(zhǔn)，達(dá)到此標(biāo)準(zhǔn)可視為尿沉渣成分在正常范圍內(nèi)，免除進(jìn)一步顯微鏡檢查。一般認(rèn)為，鏡檢結(jié)果白細(xì)胞數(shù)在o5HP、紅細(xì)胞數(shù)在03HP和透明管型在01LP的范圍內(nèi)，為尿沉渣參考范圍。如果一個標(biāo)本經(jīng)過兩種方法檢查，干化學(xué)結(jié)果符合過篩標(biāo)準(zhǔn)，鏡檢結(jié)果在正常范圍，說明過篩是正確的。干化學(xué)結(jié)果不符合過篩標(biāo)準(zhǔn)，鏡檢結(jié)果也異常，說明過篩是正確的。干化學(xué)結(jié)果異常，鏡檢結(jié)果正常，視為假陽性；反之干化學(xué)結(jié)果正常，鏡檢結(jié)果異常，視為假陰性。由于過篩的目的是篩出正常、鏡檢病理性標(biāo)本，因此過篩的原則是不能出現(xiàn)假陰性，否則就耍漏診。干化學(xué)結(jié)果假陽性的標(biāo)本經(jīng)過鏡檢后即可得到糾正。雖假陽性不如假陰性那么重要，但假陽性結(jié)果過多，鏡檢量過多，達(dá)不到過篩的目的。為了探討過篩標(biāo)準(zhǔn)，筆者利用雙盲法同時對6349例尿液標(biāo)本采用干化學(xué)法(寶靈曼公司生產(chǎn)的MiditronR型尿液分析儀和配套試劑帶)和顯微鏡檢查方法進(jìn)行對比分析。結(jié)果顯示：