細(xì)菌內(nèi)毒素方法學(xué)驗(yàn)證方案

1、細(xì)菌內(nèi)毒素方法學(xué)驗(yàn)證方案生效日期:再驗(yàn)證時(shí)間:審批表部門姓名簽名日期制定人質(zhì)量管理部年月曰審核人質(zhì)量管理部年月曰審核人輻射防護(hù)部年月曰批準(zhǔn)人質(zhì)量管理部年月曰1 .概述細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法在藥品的熱原限量控制中應(yīng)用廣泛，本方案通過(guò)對(duì)無(wú)菌氯化鈉溶液、配套藥盒和本公司所生產(chǎn)的得/9mTc放射性藥品的細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)，對(duì)生產(chǎn)過(guò)程進(jìn)行質(zhì)量控制。因此對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素檢驗(yàn)方法的驗(yàn)證就顯得尤為重要。2 .目的為了保證所購(gòu)買的無(wú)菌氯化鈉溶液、配套藥盒和本公司所生產(chǎn)的得產(chǎn)mTc放射性藥品的細(xì)菌內(nèi)毒素檢驗(yàn)方法的專屬性和靈敏性，且保證檢測(cè)結(jié)果可符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求，特制定此方案。3 .范圍本方案適用于無(wú)菌氯化鈉溶液、配套藥盒以及本

2、公司所生產(chǎn)的得99mTc放射性藥品的無(wú)菌檢查方法的驗(yàn)證。4 .確認(rèn)小組成員與職責(zé)成立確認(rèn)小組，明確各成員及相應(yīng)職責(zé)。職務(wù)部門姓名職責(zé)組長(zhǎng)質(zhì)量管理部負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案和報(bào)告的批準(zhǔn)，指導(dǎo)驗(yàn)證項(xiàng)目的實(shí)施。組員質(zhì)量管理部負(fù)責(zé)起草驗(yàn)證方案，負(fù)責(zé)驗(yàn)證項(xiàng)目的實(shí)施，協(xié)調(diào)、解決驗(yàn)證過(guò)程出現(xiàn)的問(wèn)題，參與結(jié)果評(píng)價(jià)，完成驗(yàn)證報(bào)告。組員質(zhì)量管理部參與驗(yàn)證項(xiàng)目實(shí)施的具體工作，收集、整理驗(yàn)證所需文件，完成測(cè)試、檢驗(yàn)記錄和復(fù)核記錄的填寫。組員質(zhì)量管理部負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案和報(bào)告審核，參與完成驗(yàn)證項(xiàng)目的實(shí)施，驗(yàn)證總結(jié)和結(jié)果評(píng)價(jià)的會(huì)簽。組員輻射防護(hù)部監(jiān)督整個(gè)驗(yàn)證項(xiàng)目的實(shí)施，保證實(shí)施過(guò)程的安全性。5 .參考文件5.1 確認(rèn)與驗(yàn)證管理規(guī)程5.2

3、中國(guó)藥典2010年版二部附錄XIE6 .驗(yàn)證所需儀器和材料6.1驗(yàn)證中所用到的儀器：電子天平、電熱干燥箱、恒溫水浴箱、水銀溫度計(jì)和旋渦混合器，驗(yàn)證所涉及到的儀器均經(jīng)過(guò)檢定或確認(rèn)合格，且在有效期內(nèi)。.2驗(yàn)證所需試劑：具有國(guó)家主管部門的批準(zhǔn)文號(hào)的邕試劑和由中國(guó)藥品生物制品檢定所統(tǒng)一發(fā)放的細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品。.驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)在實(shí)驗(yàn)結(jié)果中，必須要陽(yáng)性對(duì)照都為陽(yáng)性、供試品陽(yáng)性對(duì)照都為陽(yáng)性且陰性對(duì)照都為陰性時(shí)，實(shí)驗(yàn)有效。.驗(yàn)證步驟實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備驗(yàn)證前首先要進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品的制備，內(nèi)毒素限值的確定。然后確認(rèn)邕試劑是否進(jìn)行靈敏度復(fù)核和干擾試驗(yàn)。確定干擾試驗(yàn)中的最大稀釋倍數(shù)(MVD。根據(jù)2010年版中國(guó)藥典二部附錄

4、XIE細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法中規(guī)定，細(xì)菌內(nèi)毒素限值計(jì)算公式：L=K/M式中L為供試品的細(xì)菌內(nèi)毒素限值，本品以EU/m喪示；K為人每千克體重每小時(shí)最大可接受的內(nèi)毒素劑量，注射劑K=5EU/(kg.h);M為人用每千克體重每小時(shí)的最大供試品劑量，人均體重按60kg計(jì)算，人體表面積按1.62m2#算。注射時(shí)間若不足1小時(shí)，按1小時(shí)計(jì)算。本品以腺甘蛋氨酸計(jì)最大劑量為1000mgL=5EU/（kg.h）*60kg*1h/1000mg=0.3EU/mg因止匕本品的細(xì)菌內(nèi)毒素限值為0.3EU/mg。確定最大有效稀釋倍數(shù)（MVD樣品溶液的制備：取注射用*適量（約相當(dāng)于含腺甘蛋氨酸500mg力口入注射用溶劑5ml,再

5、用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水稀釋至每1ml含腺甘蛋氨酸10mg勺溶液。本品內(nèi)毒素限值為0.3EU/mg。MVD=cLAL=0.3EU/mlc=10mg/ml入1=0.5EU/ml,X2=0.25EU/ml因此MVD=6,MVD=12細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備取細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品一支，輕彈瓶壁，使粉末落入瓶底，然后用砂輪在瓶頸上部輕輕劃痕，75%酉精棉球擦拭后啟開，啟開過(guò)程中應(yīng)防止玻璃屑落入瓶?jī)?nèi)。按照標(biāo)準(zhǔn)品說(shuō)明書，加入規(guī)定量的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水溶解其內(nèi)容物，用封口膜將瓶口封嚴(yán)，置旋渦混合器上混合15分鐘。然后進(jìn)行稀釋，制備成4個(gè)濃度的細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液，即2入、1入、0.5入、0.25人（入為所復(fù)核的邕

6、試對(duì)的標(biāo)示靈敏度）,每稀釋一步均應(yīng)在旋渦混合器上混合30秒鐘。8.2細(xì)菌內(nèi)毒素檢查在細(xì)菌內(nèi)毒素檢查中，每批供試品必須做2支供試品管和2支供試品陽(yáng)性對(duì)照，同時(shí)每次實(shí)驗(yàn)必須做2支陽(yáng)性對(duì)照和2支陰性對(duì)照。操作方法備內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照溶液取1支細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品，用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水稀釋成4個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液即2入、1入、0.5入、0.25入（方法同8.1.3）。供試品溶液的制備：（稀釋倍數(shù)不得超過(guò)MVD取注射用*加入注射用溶劑并制成每1ml含腺甘蛋氨酸10mg勺溶液，再根據(jù)MV加入細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水稀釋，再用此稀釋液將8.2.1.1中的同支細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品稀釋成4個(gè)濃度即2入、入、0.5入、0.25人的含內(nèi)

7、毒素的供試品溶液。陽(yáng)性對(duì)照溶液的制備用檢查用水將內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品稀釋制成2人濃度的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液（方法同8.2.1.1.）<供試品陽(yáng)性對(duì)照溶液的制備用待檢測(cè)的供試品溶液或其稀釋液將內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品制成2人濃度的內(nèi)毒素溶液。（方法同8.2.1.3.供試品陽(yáng)性對(duì)照溶液的制備）。陰性對(duì)照液用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水邕試劑的準(zhǔn)備取規(guī)格為0.1ml/支的邕試劑8支，輕彈瓶壁使粉末落入瓶底，用砂輪在瓶頸輕輕劃痕，75%酒精棉球擦拭后啟開備用，防止玻璃屑落入瓶?jī)?nèi)。每支加入0.1ml檢查用水溶解，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)瓶壁，使內(nèi)容物充分溶解，避免產(chǎn)生氣泡。力口樣取8支（管）溶解好的邕試劑，其中2支加入0.1ml供試品溶液或其稀釋液

8、（其稀釋倍數(shù)不得超過(guò)MVD）作為供試品管，2支加入0.1ml陽(yáng)性對(duì)照溶液作為陽(yáng)性對(duì)照管（PC）,2支加入0.1ml檢查用水作為陰性對(duì)照管（NC）,2支加入0.1ml供試品陽(yáng)性對(duì)照溶液作為供試品陽(yáng)性對(duì)照管（PPC）。將試管中溶液輕輕混勻后，用生口膜封閉管口，垂直放入37c±1C水浴或適宜恒溫器中，保溫60±2分鐘。保溫和取放試管過(guò)程應(yīng)避免受到振動(dòng)造成假陰性結(jié)果。結(jié)果判斷判斷標(biāo)準(zhǔn)當(dāng)陽(yáng)性對(duì)照都為陽(yáng)性、供試品陽(yáng)性對(duì)照都為陽(yáng)性且陰性對(duì)照都為陰性時(shí)，實(shí)驗(yàn)有效。若供試品2管均為陰性，認(rèn)為該供試品符合規(guī)定；如供試品2管均為陽(yáng)性，應(yīng)認(rèn)為不符合規(guī)定；如2管中1管為陽(yáng)性，1管為陰性，按上述方法另

9、取4支供試品管復(fù)試，4管中如有1管為陽(yáng)性，即認(rèn)為不符合規(guī)定。若第一次實(shí)驗(yàn)時(shí)供試品的稀釋倍數(shù)小于MVD而結(jié)果出現(xiàn)2管均為陽(yáng)性或2管中1管為陽(yáng)性時(shí)，按同樣方法復(fù)試，復(fù)試時(shí)要求將其稀釋至MVD。判斷結(jié)果：（記錄附后）.確認(rèn)總結(jié)對(duì)每一項(xiàng)測(cè)試結(jié)果均應(yīng)有記錄和簽名，并與相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)做比較，最后給出合格與否的結(jié)論。.質(zhì)量保證：質(zhì)量保證員對(duì)驗(yàn)證過(guò)程進(jìn)行復(fù)核并簽名，以證明該驗(yàn)證方案已被執(zhí)行，從而說(shuō)明細(xì)菌內(nèi)毒素檢驗(yàn)符合生產(chǎn)要求。.背離標(biāo)準(zhǔn)的處理在驗(yàn)證過(guò)程中，若與標(biāo)準(zhǔn)存在偏差、例外等情況時(shí)，都要作好相應(yīng)的記錄。對(duì)于超出標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定誤差的，則應(yīng)填寫記錄并制定糾錯(cuò)方案，任何對(duì)背離標(biāo)準(zhǔn)所采取的糾正措施都必須經(jīng)質(zhì)量管理部經(jīng)理的批準(zhǔn)。.驗(yàn)證報(bào)告.