實驗五巨噬細胞吞噬現(xiàn)象觀察

1、實驗五巨噬細胞吞噬現(xiàn)象觀察實驗目的實驗目的 1、通過對小白鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞活動的觀察，加深理解細胞吞噬作用的過程及其意義；2、掌握小白鼠腹腔注射給藥和頸椎脫臼處死方法。 實驗原理 細胞吞噬作用原來是單細胞動物攝取營養(yǎng)物質(zhì)的方法，也是原始防御作用。隨著動物界的進化，在大多數(shù)高等動物體內(nèi)，吞噬作用不再是細胞的進食方式，而是作為防御細菌、病毒、真菌、原生生物感染的保護機制而存在，此外，吞噬作用還能幫助多細胞動物清除受傷后形成的組織碎片和發(fā)育過程中的凋亡細胞。在高等動物體內(nèi)，具有吞噬功能的細胞包括中性粒細胞、單核細胞或巨噬細胞，即大小兩類吞噬細胞，專司吞噬作用，成為非特異性免疫功能非特異性免

2、疫功能的重要組成部分。非特異性免疫功能非特異性免疫功能是人類在種系進化過程中形成的由遺傳而獲得的免疫防衛(wèi)功能，它是先天就具備的。非特異免疫構(gòu)成機體生存必不可少的抵抗外來病原體的第一道防線，它對病原體的識別不具有特異性，也無記憶。實驗原理 巨噬細胞由骨髓干細胞分化生成，然后進入血液到達各組織內(nèi)，并進一步分化為各種巨噬細胞各種巨噬細胞。他們是機體內(nèi)吞噬能力最強的細胞。單核細胞和巨噬細胞都能消滅侵入機體的細胞，吞噬異物顆粒，消除體內(nèi)衰老、損傷的細胞和變性的細胞間質(zhì)、殺傷腫瘤。當病原微生物或其它異物侵入機體時，能招引巨噬細胞，而巨噬細胞又有趨化性，能響應招引因子的招引，產(chǎn)生活躍的變形運動，主動向病原體

3、和異物移行，在接觸到病原體或異物時，即伸出偽足，將之包圍并內(nèi)吞入胞質(zhì)，形成吞噬體，繼而細胞質(zhì)中的初級溶酶體與吞噬泡發(fā)生融合，形成吞噬性溶酶體，通過其中水解酶等作用下，將病原體殺死，消化分解，最后將不能消化的殘渣排出細胞外。 參與非特異性免疫的單核細胞進入組織后，可分化成巨噬細胞，巨噬細胞分布廣泛，由于其分布的器官組織不同，使巨噬細胞不僅具有不同的名稱，而且在形態(tài)和功能上也表現(xiàn)異質(zhì)性，如存在于胸腹腔的游離巨噬細胞，脾與淋巴結(jié)中的游走和固定的巨噬細胞，結(jié)締組織中的組織細胞，肺泡中的塵細胞，肝組織中的枯氏細胞、神經(jīng)組織中的小膠質(zhì)細胞等，這些細胞都具有吞噬功能。 巨噬細胞是機體免疫應答的主要細胞之一，

4、對實驗動物巨噬細胞吞噬能力的測定，是其非特異免疫能力的檢測的一項重要指標，目前本實驗在病理、免疫、腫瘤學研究領域仍然廣泛使用。由于巨噬細胞含有大量的溶酶體、吞噬體和殘余體，因此以臺盼藍、卡紅染料注射到實驗動物體內(nèi)，可以見到巨噬細胞胞質(zhì)內(nèi)聚集很多藍色、紅色顆粒，而其他細胞則不攝取或僅少量攝取染料顆粒，因此常用該方法鑒別巨噬細胞和其他細胞。巨噬細胞的生成單核細胞（上）和巨噬細胞（下）單核細胞（上）和巨噬細胞（下）吞噬作用吞噬作用溶酶體的功能巨噬細胞正在吞噬衰老的紅細胞巨噬細胞正在吞噬衰老的紅細胞巨噬細胞吞噬細菌（電鏡）（電鏡）實驗用品實驗用品1.器材：顯微鏡，解剖盤，剪刀，鑷子，離心機，注射器，吸

5、管，玻片，吸水紙。2.材料 ：小白鼠，1%雞紅細胞懸液（取無污染的雞血1ml，放入盛有4ml Alsever溶液瓶中，混勻置4冰箱保存?zhèn)溆?，一周?nèi)使用。使用前加入0.85%生理鹽水以1500r/min離心10min，洗滌兩次，再用生理鹽水配成1%濃度懸液。 抽取靜脈血試劑3.試劑：（1）0.85%生理鹽水（2）Alsever溶液：葡萄糖 2.05g檸檬酸鈉 0.89g檸檬酸 0.05g氯化鈉 0.42g蒸餾水 100ml 調(diào)PH值至7.2，過濾滅菌或高壓滅菌10min，置4冰箱保存。 （3）0.4%臺盼藍(trypan blue)染液 臺盼藍染粉 0.4g 0.85%生理鹽水 100ml（4）

6、6%淀粉肉湯（含臺盼藍染液） 牛肉膏 0.3g 蛋白胨 1.0g 氯化鈉 0.5g 蒸餾水 100ml 加熱后加入可溶性淀粉6.0克，促使溶解，再煮沸滅菌，置4冰箱保存。用時水浴融化，加入適量臺盼藍染液混勻，使呈藍色。 實驗步驟實驗步驟1、在實驗前一天，給小白鼠腹腔注射6%的淀粉肉湯（含臺盼藍）1ml。2、實驗時，取一只注射過淀粉肉湯的小白鼠，腹腔注射1%的雞紅細胞懸液1ml，輕按小白鼠腹部，使懸液分散。3、20min后，用頸椎脫臼法處死小白鼠（用右手抓住鼠尾，左手拿一把剪刀或鑷子按住頸椎，右手用力向后拉即可）。徒手抓小白鼠給小白鼠腹腔注射給藥給小白鼠腹腔注射給藥實驗步驟實驗步驟4、將小白鼠置

7、于解剖盤中，把腹部剪開一小口子，把內(nèi)臟推向一側(cè)，用吸管吸取適量的生理鹽水沖洗腹腔，并吸取腹腔液，吸時一吸一松，以免把內(nèi)臟吸出。5、每人取一張干凈載玻片，滴一滴腹腔液，蓋上蓋玻片，置顯微鏡下觀察。6、每人取一張干凈載玻片，滴一滴沒有注射淀粉肉湯的腹腔液，蓋上蓋玻片，置顯微鏡下觀察。 取腹腔液觀察與結(jié)果觀察與結(jié)果 由于細胞未經(jīng)染色，因此觀察時視野亮度需要適當調(diào)低。巨噬細胞體積較大，呈圓形或者不規(guī)則形，表面有偽足，胞質(zhì)中含有數(shù)量不等、大小不一的藍色顆粒，為淀粉顆粒被吞噬后形成的吞噬體。雞紅細胞為橢圓形、淡黃色，細胞核也為橢圓形。在顯微鏡下可以觀察到巨噬細胞吞噬雞紅細胞的過程：有的紅細胞位于巨噬細胞的表面，有的被部分吞入，有的被完全吞入，形成吞噬泡。有的吞噬泡體積縮小、呈圓形，表明已與溶酶體發(fā)生融合，泡內(nèi)物質(zhì)正被消化分解。 巨