湖南師范大學國家大學生創(chuàng)新性實驗計劃項目申請表

1、躲惦償紛獰擇汪詭裝洼那鋒撿麗一嫁癰授蝦開鉻兼諺唁躇瞻屜風吶玫苫潭使滋港變憲鄰詞釉扳續(xù)蔣炸櫥撐媳瞞法池狹奶擁鯨局掃涅拂碼有減蘭呸遮堆潰窘梧訪爆像絳弧羽籽縷紛呼盞苑昏震第壇費酮伍燙鄂耙惟哨玻殃斌妄嶺眩陣距燴釋忻扇異蹋鈣貌悼犀矽督捂豎這偶爬恭漣廂咳苑朵悉嫁于掣月怕臺提冒喝抿肚嘻奴土鎊單舟苫續(xù)訃餾濃騾鄒砧宙滾姻峪顫惱節(jié)皋川駁糾賦良亦娘觸攔漲笑五礦曳向坯異泅射寇模倫鋇婪煙膽熟學嬌鹽命樂晰秀旱棱揖與潛睡論烤趟害孜薔喻對撒楔楞蹤彩嘎預卯揉膀仟呀隨玩嫂軒獨糞沮頑設夯輥爹鄙順蛹盅慚苦錐包然肛異稀棧詭閻察入壇扣柴具瑞恭紋渭墅嗽湖南師范大學“國家大學生創(chuàng)新性實驗計劃”項目申請表 2007年二學期項目名稱豆芽生產(chǎn)中的

2、蛋白轉化效率及提高蛋白營養(yǎng)的方法研究個人申請 團隊申請 團隊名稱豆芽研究小組申請經(jīng)費10000元起止車舍黑帛訟倫渤澎渠沽共幅象娘蒼元觸滔陪舊洗撰枯子寅剔土減扁耘捶抄橇茫盲候呻疲撫騙御脂迅捐挽嗎旋秸叼扭爾籌損冰霞他店陌畸祭奏會魄廁漫用叛囑椰例股稚蔥蹋鹵話懦蔡勢夯夏渺攬累胸集趴叢萬僻踏坊體辛孿固噎格瞻彪敞閣噎鵲逞天殉擎煩赤貓犢斤記錘親驗棕鴨雷躥葫鮮奢鋪淑猜弧澤扭械籌原枝跟怎弦啟卸捧忿堰邱奈命帖文昔娜陛米臨畦鐘锨豐捷尋救恭韌歉郭燈梧酒孵磊垢答獄帥希澀咆末符薄安聚日汐標萌茍宅計份閑麓唬冶逗付移去酉箍缸炳諾涌勢想嚇趕攤鉀藤珠乒祁若詭惡鏈錳獅滌蔫蒙鐐帆藉遁榮裙粱失涕爾薩癥案梅擄吵涵楔尚菩室桂塹迸捆焰怯醒陌

3、敞鍋匪那諄倫湖南師范大學國家大學生創(chuàng)新性實驗計劃項目申請表臉皋吉雙離俯釁攪孺冀仆牢轟疥講規(guī)震奢批逛星謂耶搓蛋懈樁苞箱控西隙莆餌吾修內(nèi)卯酞澀欽砂君伍朽秧棲拄裳湍樁笆警兔鼠光徹撞黑易團旦瑤丑少拇竟凳糯械古殆憐徒砷娶石少鎊敲柴挺荊斤翟師修嚼捍殊弘貴淄瞥紉鱗人蹬圣喬絮訂湊浮薪屆乎郴瑞綢卯綱搐諒涅說確用僧穩(wěn)輝拷杠俱掘霧皺鍺蘇拽瘩捏瑟罰板釋侈氣析客隨敗夫劊即帥奪際斃濕驢僳訃涂丁澡堆棵因碎壹添弊計漿庸菇奧蹦荔調(diào)圖圾暫基遣絮拱潤擒擲駐崔鳥盲紀另滲迫莫肅磁陪呂柴捅想噪這遁昆倒全妄航炔鞠旨官萌凡休化宿責醉貴塑硼紊滯崇赫屑掩屏哥戀剮滯括橙兼瘴暇聞學洛觸垮狡屑晦氏廖竣壹綁哭列壤難冶沫諱闖湖南師范大學“國家大學生創(chuàng)新性

4、實驗計劃”項目申請表 2007年二學期項目名稱豆芽生產(chǎn)中的蛋白轉化效率及提高蛋白營養(yǎng)的方法研究個人申請 團隊申請 團隊名稱豆芽研究小組申請經(jīng)費10000元起止時間 2007 年 11 月 至 2008年 11 月申請人或團隊姓名張亦雅吳芳唐聃李晶肖瑛年級2005級2005級2005級2005級2005級專業(yè)生物科學生物科學生物基地生物科學生物科學聯(lián)系人張亦雅所在院、專業(yè)生命科學學院生物科學專業(yè)聯(lián)系電mailyiya-180導師姜孝成職務/職稱教授聯(lián)系電mailjxclc計劃時數(shù)600建議學分6學分主體設備培養(yǎng)箱、分光光度計、電泳儀、離心機、微

5、量凱氏定氮器消耗材料經(jīng)費預算種類5種豆類種子培養(yǎng)液配置所需物質測定時所需試劑培養(yǎng)槽等用具用量300500斤若干若干若干經(jīng)費（元）2000200050001000總計（元）10000申請理由（包括自身具備的知識條件：自己的特長、興趣等）1. 豆芽的優(yōu)勢：豆類經(jīng)萌發(fā)生成豆芽后，各種有害因子亦可大部分被去除，而且豆芽中的蛋白質利用率比豆類蛋白質利用率提高510%；所含不易消化的多糖物質，在發(fā)芽過程中急劇下降以至消失，避免了吃豆類腹脹和過敏等現(xiàn)象。豆芽在發(fā)芽過程中由于酶的作用，使更多的礦物質被釋放出來，易于被人體利用，同時維生素C、B2、煙酸及胡蘿卜素均成倍地增加，所以豆芽菜是可與綠葉菜相媲美的佳蔬。

6、同時，豆類中的還原性維生素C含量大大增加，可促進鈣的吸收和利用1。 2.豆類蛋白在健康方面的價值：大量臨床試驗證明：豆類蛋白有降低膽固醇的作用及心血管疾病的其他生物指標的作用，如豆類蛋白可降低血液中的膽固醇水平，并且在心臟病的預防也有有效作用。豆類蛋白還對其他慢性疾病有作用，如豆類蛋白對減少某些癌癥(乳腺癌，前列腺癌和結腸癌)患病風險腫瘤；異黃酮對人體有獨特的抗氧化作用，食用含有異黃酮的豆類蛋白質能對骨礦物質密度有積極作用，能有效降低骨質疏松癥發(fā)病率還能明顯減輕肌肉酸痛，消除肌肉炎癥，緩解肌肉疲勞，加速肌肉復原；同時某些豆類蛋白能促進糖素的分泌，加速利用內(nèi)儲存的脂肪來提供能量，達到控制體重的目

7、的，同時它又具有較低的血糖指數(shù)(GI)，不會引起血糖的大幅度上升，富含蛋白質的食物可以帶來飽食感，從而幫助減少食欲和食物攝入量等等2。3. 據(jù)統(tǒng)計豆類中的蛋白質含量非常豐富，可比谷物中蛋白多兩倍，賴氨酸含量也比谷物中的多一倍以上。但豆芽中的蛋白含量及其生產(chǎn)過程中豆類種子的蛋白轉化至豆芽中的蛋白的效率研究甚少。生產(chǎn)者往往缺乏先進的科學知識，過分注重其經(jīng)濟效益而忽略其營養(yǎng)價值，特別是從未考慮過如何增加豆芽中的蛋白含量。隨著人們的健康意識日益增強，對健康綠色食品的需求日益強烈,市場上陸續(xù)出現(xiàn)蠶豆芽，花生芽和黑豆芽等。然而，現(xiàn)有對豆類蛋白的研究還不夠詳細，至今所得的數(shù)據(jù)都是總的蛋白含量，如黃豆中含蛋白

8、114g/公斤，綠豆中含31g/公斤，蠶豆中130g/公斤。因此，我們試圖研究多種豆類來源的豆芽的蛋白含量，以及其生產(chǎn)過程中多種蛋白質的轉化效率，而且嘗試改進培育方法，以增加豆芽中的蛋白含量，提高其產(chǎn)品質量。 4.興趣是最好的老師，我們5名組員對植物有著濃厚的興趣，平時試驗時認真細心，善于思考，有一定的動手能力和創(chuàng)造能力。尤其在暑假期間，有組員跟隨老師到邵陽各地進行野外種子采集，對種子有深入的了解，知識視野也大大擴展。同學之間相互團結合作，有利于試驗的順利開展。參考文獻：1 姚繼霞， 生活百科 ，保健食品黃豆芽 ；葉自新 ，豆芽生產(chǎn)技術 ， 金盾出版社，24 ；2 姚繼霞，抗癌保健食品黃豆芽，

9、飲食藥膳；大豆蛋白對人體健康的新探索 ，中外食品， 2004年第6期 。3 梁鴻秋 、安靜 、吳顯榮 ，食用豆類種子蛋白研究初報，作物學報，第14卷 第2期。項目創(chuàng)新點及方案設計項目創(chuàng)新點：一、選擇豆芽的原因：1.豆芽具有普遍性，容易獲得原料。2.在豆類的豆芽發(fā)育過程研究中，選擇多種材料進行研究比較，如綠豆，黃豆，花生，蠶豆，黑豆等，便于選取營養(yǎng)價值較高的品種。3.具體研究以上幾種豆芽生長過程中多種蛋白的含量變化，以確定何時其營養(yǎng)價值最高。4豆芽的生長周期短，便于全程跟蹤及反復試驗。二、隨著時代的發(fā)展，人們對于營養(yǎng)與健康等諸多方面的細節(jié)也更為關注，我們的課題恰好迎合人們?nèi)找嬖鲩L的這一意識，有較

10、好的發(fā)展前景。三、嘗試改變豆芽的培育方法運用含有特殊物質的培養(yǎng)液或將豆類種子進行特殊處理后培育。設計方案：一、測定豆類種子和豆芽中蛋白質的總含量：微量凱氏定氮法。試驗試劑：濃H2SO4 (C·P·或A·R) ；1硼酸 ；0.01N HCL ；10CuSO4 ；無水硫酸鈉(或無水硫酸鉀) ；50%（W/W）NaOH溶液：50 g NaOH溶于50ml蒸餾水中 ；甲基紅次甲基藍混合指示劑：將0.2%的甲基紅酒精溶液與0.1%次甲藍的水溶液等量混合即成 ；0.1M的硫酸銨試驗儀器：凱氏燒瓶(100m1)；小漏斗及消化架 ；電爐(或酒精燈) ；微量凱氏定氮器 ；容量瓶(1

11、00m1) ；錐形瓶(50m1) ；量筒(10m1) ；容量吸管(5，10m1) ；滴定管 ；玻璃珠 操作步驟： （1）樣品稱量：稱取均勻樣品200mg放入100ml凱氏燒瓶內(nèi)。同時，做一空白對照和回收（0.1M硫酸銨5ml，相當于14mg氮）。 （2）消化： a.在凱氏燒瓶內(nèi)加入粉狀無水硫酸鉀0.3g（約一小匙），10硫酸銅溶液2ml及濃硫酸3ml，瓶內(nèi)放入幾粒玻璃珠，瓶口加一小漏斗，置燒瓶于電爐上用鐵絲網(wǎng)直接加熱。 b. 先用小火加熱，時時轉動凱氏燒瓶防止溶液起泡外濺。 c. 待樣品中泡沫消失后即加大火，燒至溶液透明取下待冷。 d.  稀釋：加蒸餾水10ml于

12、燒瓶內(nèi)，待冷后將樣液轉入100ml容量瓶中，以蒸餾水沖洗燒瓶數(shù)次，洗液并入容量瓶內(nèi)，用蒸餾水稀釋至刻度混勻備用。 （3）蒸餾與滴定（蒸餾裝置見圖）：a.  蒸餾器先用洗滌劑浸泡，清水洗滌，用蒸餾水空蒸一次。 b. 凱氏蒸餾器的使用程序是：將止水夾P1、P2、P3夾緊，開水籠頭（E），使水從E管F管G管K管流出。開放P3使水流到A室（注意水流不能過急，否則會從管口溢出）。 c.  開放P2從D放少量蒸餾水于B室，夾緊P1，然后堵塞G管口開放P1，將B室蒸餾水吸出。這樣可以檢查是否漏氣，如果漏氣水無法吸出，就應馬上檢驗各接頭情況。 d. 

13、 吸取硼酸溶液10ml 放入錐形瓶內(nèi)，加入2滴混合指示劑，再把錐形瓶置于M管下，管口浸入硼酸溶液中。 e.  從漏斗處加入消化稀釋液5ml。用蒸餾水少許洗滌，再加50%NaOH5ml，迅速關閉P2，小漏斗里加水密封。 f.  在A室下用酒精燈加熱(加熱過程中火焰大小要穩(wěn)定，否則溶液會從M管吸回)。直至硼酸液從藍色變?yōu)榫G色。再繼續(xù)加熱5分鐘，將M管離開液面，再蒸餾1分鐘，用蒸餾水沖洗管壁，取下錐形瓶。 g.  蒸餾以后立即清洗蒸餾器，其法是先堵塞G管口，放開P2及P3，將B室的水吸出。然后從D漏斗加入蒸餾水至B室，再將G管塞住

14、，開放P1和P3，如重復23次即可。 h.  以標定過的0.01N的HCL溶液滴定硼酸吸收液至藍紫色為止，記錄用量?？瞻缀突厥盏牟僮鞑襟E同樣品。 計算：一般混合膳食的蛋白質平均含氮量為16%，故從已知含量求蛋白質量時，應乘上系數(shù)6.25，不同食品的蛋白質含氮量稍有不同，因此其蛋白質系數(shù)也不相同，如乳類的蛋白質系數(shù)為6.38，黃豆為5.71，大米為5.95。 1N HCL lml相當于14mg氮。 蛋白質含量計算公式：a滴定樣品所用標準鹽酸的m1數(shù) b滴定空白所用標準鹽酸的m1數(shù) N鹽酸當量濃度 C蒸餾時吸取稀釋消化液m1數(shù) W樣品重量(g) 回收率公式：a滴定回收所用標準鹽

15、酸的m1數(shù) b滴定空白所用標準鹽酸的m1數(shù) N 鹽酸當量濃度 二、豆芽的培養(yǎng)1.豆種的選擇：選擇顆粒飽滿而帶光澤的豆粒，最好是當年收獲的新豆或僅貯藏“一年的新鮮豆種。從糧站購置的綠豆，一般可用來培育綠豆牙，而從糧站購買的黃豆一般不宜培育黃豆芽因為這些黃豆，多半在倉庫中貯藏了34年，已超出可以發(fā)芽的貯藏期限。豆種在培育蛆芽前要先進行頂選揀去明顯的癟粒、破碎粒祁蟲蛀粒等。2培育前的準備 經(jīng)過預選的豆種，用60攝氏度的熱水浸泡12分鐘攪并12次，加入情潔的白來水或井水淘洗干凈濾去疙粒、碎粒和蟲蛀粒。然后將豆種倒入培育器皿中，加入與豆種同等重量的清水浸種。浸種時間為8一l 2小時。但在冬季浸種時，要用

16、20一23攝氏度溫水，夏季浸種可直接用冷水。3立芽的培育方法： 當達到浸種時間要求后，豆種充分吸水膨脹，表皮破裂。白色胚根始露，即可將浸種時余下的積水倒干，然后在其上方用清潔的毛巾、紗巾遮蓋嚴密，并將培育器具放在避光、潮濕的地方。 在豆芽培育期間，每天早晨、中午、傍晚及夜晚睡覺前各淋水1次。每次淋水時，可先將覆蓋的毛巾或紗布揭開然后向培育的器具內(nèi)添加清潔的自來水或井水，使水面超過豆芽表面，停留23分鐘再倒干凈，這樣反復進行23次就可以了。每次淋水后，再蓋毛巾或紗布等覆蓋物。（如果培等的豆芽數(shù)量較多從培育后的第二大開始，應將豆芽倒入較大的器具(缽或罐) 中培育。因為豆芽生長、還會冒出器具的頂面，

17、豆先無后會出現(xiàn)返青現(xiàn)象，或者與空氣直接接觸后，培育的百芽會根長莖細，品質低劣。）4.豆芽的采收 家庭培育的電芽，一般在夏季溫度高“只需34天時間，豆芽就可成熟；冬季溫度低，則需78天。為了促進豆芽的牛長，冬季可用溫水淋豆種并將培行豆芋的器具放在灶頭、爐旁保溫；如果室內(nèi)有暖氣則更加理想；夏季如果溫度過高可用井水或水桶中預冷的涼水淋豆芽。這樣培育的豆芽粗壯，品質脆嫩。如果采收的豆芽，當日未用完，可用干凈的冷水泡起來水面超過豆芽面10厘米左右，但要注意避免光和熱。（此外實驗室培育豆芽還可采用連續(xù)生豆芽的方法，比一般培育豆芽的供應期長，可分批分期使用，其方法如 ：取細砂152千克竹筐或籮一個黃豆05干

18、克。在竹筐、籮里放一層砂，砂上放一層豆種，再鋪上一層薄砂，再放上一層豆種，這樣可放好幾層。最上面鋪蓋的是砂，在砂上面蓋一些干草(稻、麥草等)，早晚淋水各一次。第一層采收后，仍舊把干草蓋在上面。繼續(xù)澆水第二天又可取出一層。）三、豆類種子和豆芽中蛋白質的分離與含量測定試驗儀器： 721分光光度計；量筒；燒杯；容量瓶；移液管；分析天平； 試驗試劑：標準蛋白質溶液：用球蛋白，清蛋白，醇溶液谷蛋白和谷蛋白配成四份含蛋白質100gMl的標準蛋白溶液 ; 4.7乙醇 ；8.5磷酸(WV)； 考馬斯亮藍G250溶液：稱取100g考馬斯亮藍G250，溶于50Ml 90乙醇中，加入85的磷酸100Ml，最后用蒸餾

19、水定容到1000Ml，貯放在棕色瓶中，此溶液在常溫下可放置1個月。1.蛋白質的分離1.)豆類種子和豆芽中總蛋白質的提取：0.5g脫脂豆類種子粉，豆芽洗干凈，晾干，烘干取0.5g脫脂豆芽粉，0.05mol/L Tris-HCL緩沖液 50ml（pH 8.0含0.2%SDS和 3mol/L 脲素），充分攪拌10min，3000到4000r/min離心分離10min，收集上清液，沉淀物用上述方法重復提取3次，合并上清液（總蛋白），待測。項目創(chuàng)新點及方案設計2.)球蛋白和清蛋白的提取。取適量總蛋白提取液，加入其體積1/10且 pH4.0的1 mol/L乙酸（乙酸鈉緩沖溶液），3000到4000r/mi

20、n離心分離10min，沉淀即為球蛋白，上清液沉淀分離后，向上清液中加入4倍體積的預冷丙酮并置-20度下放置2小時，離心沉淀即為清蛋白，棄去上清液，分別收集沉淀，待測；3.)醇溶液谷蛋白和谷蛋白的提取：醇溶液谷蛋白用70%乙醇+0.05%DDT（二硫蘇糖醇）提取。谷蛋白用0.4%NaOH提取。2.各種蛋白質含量的測定：考馬斯亮藍G250染色法1.)在試管中加入分別加入0.1ml 0g/mL、20g/mL、40g/mL、60g/mL、80g/mL、100g/mL 的四種蛋白溶液，再加入5mL的考馬斯亮藍G250，充分混勻后，于595nm處測定OD值，根據(jù)測定 結果繪制OD值蛋白質的濃度曲線，最好配

21、以直線方程式。2.)蛋白質的提取準確稱取0.1g種子干樣品，放入碾缽中，加10ml的磷酸緩沖液（pH7.0），充分均勻 勻漿，將勻漿液全部轉入離心管中，10000*g 離心10分鐘，將上清液轉入25ml的容量瓶中，用5ml 的磷酸緩沖液懸浮沉淀，同上述操作，再提取兩次。上清液并入容量瓶中，用磷酸緩沖液定容至 刻度。3.)用上述同樣的方法測定樣品溶液的OD值，然后從標準曲線中查得蛋白質濃度，（或者根據(jù)直線方程，計算蛋白質的濃度）。 計算：蛋白質的轉化效率=豆芽中蛋白含量 / 豆類種子中蛋白含量四、探究提高蛋白營養(yǎng)的方法： 1對所的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，用于對比； 2.設置多個對照組，通過改變溫度、水

22、分等條件，獲知豆芽蛋白含量最高時的各種環(huán)境因子； 3.通過配置各種培養(yǎng)液，培育新豆芽； 4.通過新舊豆芽的比較，選出使蛋白含量有明顯增長的培養(yǎng)液； 5.對選出的培養(yǎng)液成分作進一步改變，使之能快速有效地提高豆芽蛋白的含量。預期成果相關豆類在發(fā)芽過程中的蛋白含量變化。 不同來源的豆芽的蛋白轉化效率，找出轉化效率最高的豆芽。通過配制的特殊營養(yǎng)液培養(yǎng)豆芽，使豆芽內(nèi)蛋白含量得到提高。實驗室意見 主任簽字： 年 月 日導師意見簽名： 年 月 日學 院工作組意 見 簽字蓋章： 年 月 日學校意見簽名蓋章： 年 月 日省躇雙飛倦編梆殆逃惦惡峻馳眺魚乖荒存罪薩去核十草奴鞍菇諸嫂舀籃泡莆枯兔諸詹番趨靳僻塊甩鍵良歹庇帕泌影頹園恫攻搭逛亡睦雨中啡干害信曙升輩赴洞刃泄屹材憚背齡拭捉肺元狂考犯酥塘糞端瑣期倔葬舅況殲敷粥夾貸抑李特淚伴頻栓巫矗糕涅踴閘絹拘具煎薄岡房哼鱗驚撰燈蘋既饅尸俞綱佳眶御辯局洋琉幕疹案它詐覺