紫外分光光度法測定維生素C和維生素E含量

1、紫外分光光度法測定維生素C和維生素E含量【摘要】本實驗利用紫外分光光度法測定由維生素 C和維生素E組成的混合物中各組分的濃度。在這兩種組分組成的混合物中，彼此都不影響另一種物質(zhì)的光吸收性質(zhì)，根據(jù)相互間光譜的重疊的程度采用相對的方法進行定量測定。【關(guān)鍵詞】紫外分光光度法；維生素 C;維生素E;濃度1、 引言維生素C （抗壞血酸）和維生素 E（ %-生育酚）在食品中能起抗氧化劑作用，即它們在一定時間內(nèi)防止油脂變性。兩者結(jié)合在一起比單獨使用的效果更佳，因為它們在抗氧化性能方面是“協(xié)同的”。因此，它們作為一種有用的組合試劑用于各種食品中。維生素C 是水溶性的，維生素E是酯溶性的，它們都能溶于無水乙醇，

2、因此能在同一溶液中， 能夠利用紫外可見分光光度法測定雙組分相同的原理，在紫外光區(qū)測定它們。2、實驗原理根據(jù)朗伯比爾定律，用紫外可見分光光度法很容易定量測定在此光譜區(qū)內(nèi)有吸收的單一成分。由兩種組分組成的混合物中，若彼此都不影響另一種物質(zhì)的光吸收性質(zhì)，可根據(jù)相互間光譜重疊的程度，采用相對的方法來進行定量測定。例如，當(dāng)兩組分吸收峰部分重疊時，選擇適當(dāng)?shù)牟ㄩL，仍可按測定單一組分的方法處理；但當(dāng)兩組分吸收峰大部分重疊時，則宜采用解聯(lián)立方程組或雙波長法等方法進行測定。混合組分中在入1處的吸收等于組分A和組分B分別在入i處的吸光度之和，即：人同理，混合組分在入2處吸光度之和）應(yīng)為： 人人降人降入若先用A B

3、組分的標樣，分別測的 A B兩組分在入和入處的摩爾吸收系數(shù)K K K K 當(dāng)測的未知試樣在入1和入 人人人人1 處的吸光度和 后，解下列二元一次方程組：人人人人人人降人降入即可求得A、B兩組分各自的濃度 和。（、j、5）（jjjj）人人人人人人人人（入 L j入一般來說，為了提高檢測的靈敏度， 入1和入2宜分別選擇在A、B 兩組分最大吸收峰處或其附近。3、紫外分光光度法測定維生素C和維生素E含量3.1 、儀器試劑儀器：紫外-可見分光光度計（天津港東UV-4501S） ，石英吸收池一對試劑：維生素C （抗壞血酸），維生素E（ %-生育酚），無水乙醇3.2 、實驗步驟3.2.1 、 檢查儀器開機預(yù)

4、熱20min,并調(diào)試至正常工作狀態(tài)3.2.2 、 配制系列標準溶液(1)配制維生素C系列標準溶液：稱取0.0132g維生素C,溶 于無水乙醇中，定量轉(zhuǎn)移入1000 mL容量瓶中，用無水乙醇稀釋至標 線，搖勻。此溶液濃度為7.50 x mol/L。分別吸取上述溶液4.00 mL， 6.00 mL， 8.00 mL ， 10.00 mL 于 4 只潔凈干燥的50 mL 容量瓶中，用無水乙醇稀釋至標線，搖勻。(2)配制維生素E系列標準溶液：稱取維生素 E0.0488g,溶于 無水乙醇中，定量轉(zhuǎn)移入1000 mL容量瓶中，用無水乙醇稀釋至標線， 搖勻。此溶液濃度為1.13 x mol/L.分別吸取上述

5、溶液4.00 mL 6.00 mL, 8.00 mL, 10.00 mL于4只潔凈干燥的50mL容量瓶中，用 無水乙醇稀釋至標線，搖勻。3.2.3 、 繪制吸收光譜曲線以無水乙醇為參比，在220320 nm范圍測定維生素C和維生素 E的吸收光譜曲線，確定維生素C和維生素E的最大吸收波長入 和入 ，分別作為和。3.2.4 、 繪制標準曲線(1)維生素C標準曲線：以無水乙醇為參比，分別在波長 和 處 測定5個維生素C標準溶液的吸光度值。(2)維生素E標準曲線：以無水乙醇為參比，分別在波長 和 處 測定 5 個維生素E 標準溶液的吸光度值。3.2.5 . 、 未知液的測定取未知液5.00 mL于50

6、mL容量瓶中，用無水乙醇稀至標線，搖勻.在波長 和 處分別測定其吸光度結(jié)束工作(1)實驗完畢，關(guān)閉電源。取出吸收池，清洗晾干后入盒保存(2)清理工作臺，罩上儀器防塵罩，填寫儀器使用記錄。4、實驗數(shù)據(jù)處理4.1、 、 測定紅色曲線維生素 c光度吸收曲線黑色曲線一一維生素 E光度吸收曲線由儀器作圖分析直接可得 入=273.1nm,入=291.9nmo4.2、Vc與Ve在、處的光度吸收圖Vc/Ve (mDVc1=8Vc2=12Vc3=16Vc4=20Ve1=8Ve2=12Ve3=16Ve4=20入=273.1nm0.0590.06280.06790.07210.06080.0630.06680.06

7、820.068入=0.04030.04190.04250.04380.05740.06490.07520.08160.07244.3、Vc與Ve的標準曲線圖Vc在入 處的線性回歸方程為：y=1480x+0.04991 , k入=1480.Vc在入 處的線性回歸方程為：y=370x+0.03824, k入 .Ve在入處的線性回歸方程為：y=575.22124x+0.0556 , k入Ve 在入 處的線性回歸方程為：y=1834.070x+0.04076 , k入=1834.070.4.4、Vc、Ve的濃度、=0。068、 =0。0724人入k、=1480 jjj =1834.070入入入入代入下

8、式有代入下式有（入5、結(jié)果分析與討論在本實驗中，要用石英比色皿而不能用玻璃比色皿，這是因為一 般紫外光區(qū)用石英比色皿，可見光區(qū)用玻璃比色皿。石英比色皿可用 在全波段，玻璃比色皿只能用于 340nm以上波長，因為玻璃不透紫外 光。本實驗中所用的參比溶液為乙醇，參比溶液又叫 空白溶液，測量 時用作比較的、不含被測物質(zhì)但其基體盡可能與試樣溶液相似的溶 液，主要是用作空白調(diào)零，即直接從儀器上減去空白試驗產(chǎn)生的干擾 值。因此本實驗中根據(jù)維生素C E的溶解性質(zhì)，需要用乙醇作為本 次實驗的參比溶液而不是水。紫外可見光度法測定參數(shù)是吸光度 A,該值與入射光強度和透射 光比值有關(guān)，入射光增大，透射光也增大，增大檢測器的放大倍數(shù)， 也影響入射光和透射光的檢測，而且除待測物之外，其它物質(zhì)也可能 對入射光產(chǎn)生吸