食品毒理學(xué)論文亞硝酸鈉對小鼠肝臟谷丙轉(zhuǎn)氨酶GPT和谷草轉(zhuǎn)氨酶GOT的影響

1、綜合設(shè)計性實驗報告亞硝酸鈉對小鼠肝臟谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）和谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT）的影響摘要：研究探討亞硝酸鹽急性中毒對小鼠肝損傷的作用。通過將小鼠分組后進行不同劑量的亞硝酸鈉溶液灌胃，使小鼠肝臟損傷，收取小鼠血液后，利用分光光度計測定其血清的吸光值，而后利用谷內(nèi)轉(zhuǎn)氨酶（GPT）和谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT）標準曲線計算出肝臟受損小鼠的GPTGOT舌力，不同劑量梯度比較就能得出亞硝酸鹽對小鼠GPT?口GOT舌力的影響。關(guān)鍵詞：亞硝酸鈉、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT）、肝臟組織0引言亞硝酸鈉是工業(yè)用鹽，由于其具有咸味且價錢便宜，常在非法食品制作時用作食鹽的不合理替代品。亞硝酸鹽類也是食品添加劑，

2、起著色、防腐作用，廣泛用于熟肉類、灌腸類和罐頭等動物性食品。亞硝酸鹽對人體的損害作用機理是使血液中的低鐵血紅蛋白氧化成高鐵血紅蛋白，失去運輸氧的能力而引起組織缺氧性損害。了解亞硝酸鈉對肝臟的影響情況，對修訂亞硝酸鹽食品添加劑安全使用劑量和有效治療亞硝酸鹽急性中毒具有參考意義。1 材料與方法1.1 儀器和藥品1試劑（1） 磷酸鹽緩沖液（0.1mol/L,pH7.4）:取甲液420ml和乙液80ml,混合均勻即得。甲液（0.1mol/L磷酸二氫鈉）：取NaHPO12H2O35.82g,加蒸儲水溶解后稀釋至1000ml。乙液（0.1mol/L磷酸二氫鉀）：取無水KHPO13.61g,加蒸儲水溶解后稀

3、釋至l000ml。丙酮酸鈉標準液（2mmol/L）:在100ml磷酸鹽緩沖液中溶解22.0mg丙酮酸鈉。(3)0.4mol/L氫氧化鈉溶液：先配1mol/LNaOH(稱取NaOH40g用蒸儲水溶解后稀釋至1000ml即得),以1mol/LNaOH稀釋配成0.4mol/LNaOH。SGPT基質(zhì)液：精確稱取DL-丙氨酸1.79g和a-酮戊二酸29.2mg,放于100ml燒杯內(nèi)，加入少量(約15m1僻酸鹽緩沖液及少量1mol/L的NaOHS使其溶解，并調(diào)pH至7.4,放入100ml容量瓶內(nèi)，用磷酸鹽緩沖液定容，4c冰箱保存，此液每升含a-酮戊二酸2mmol丙氨酸200mm(5)SGOT基質(zhì)液：在10

4、0ml的燒杯中加入29.2mga-酮戊二酸和2.66gDL-大門冬氨酸，再加入足量的1mol/L氫氧化鈉，配成溶液，用1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH為7.4,移入100mg容量瓶中，用磷酸鹽緩沖液定容，4c溫箱保存。此液每升含a-酮戊二酸2mmol天門冬氨酸200mmol(6)2,4-二硝基苯肌液(1mmol/L):稱取19.8mg2,4-二硝基苯肌，力口1mol/L鹽酸至100ml使之成為溶液。盛于棕色瓶內(nèi)備用。(7)亞硝酸鈉溶液：亞硝酸鈉0.5g+蒸儲水100ml(c=5mg/ml)02.器材分光光度計、注射器(1m1)、灌胃針頭、試管、鼠籠。1.2動物及分組健康、未妊娠的小鼠。亞硝酸鈉Ld

5、220mg/kg(小鼠，經(jīng)口)，小鼠每只體重大概20g(0.02kg),小鼠胃容量為0.4ml(400ul)分組灌胃亞硝酸鈉攝入質(zhì)量亞硝酸鈉溶液攝入量(c=5mg/ml)1/20LD500.22mg44ul1/10LD500.44mg88ul1/5LD500.88mg176ul1.3樣品制備1 .損傷鼠肝臟取健康、未妊娠小鼠以10%四氯化碳植物油溶液灌胃(0.1m1/10g)損害其肝臟2 .制備血清取損傷肝24h后的鼠全血（斷頭取血）放入干凈試管中，靜置后取其血清。同法制取健康小鼠的血清（對照），均置入冰箱保存待用。1.4檢測方法1、標準曲線的繪制SGO下口SGP環(huán)能用一個標準曲線，在作標準曲

6、線時，應(yīng)分別加入基質(zhì)液，按表1操作。表1SGOT和SGPTS準曲線制作步驟單位：ml試齊空白123450.1mol/L磷酸鹽緩沖液0.100.100.100.100.100.10內(nèi)酮酸鈉標準液（2mmol/L）00.050.100.150.200.25SGPT/SGOT質(zhì)液0.500.450.400.350.300.25相當(dāng)于內(nèi)酮酸實際含量（mol）00.100.200.300.400.50相當(dāng)于GPT舌力（IU）0285797150200相當(dāng)于GOT舌力（IU）02461114190置37c水浴中預(yù)熱5min2,4-0.500.500.500.500.500.50置37c水浴中保溫20min

7、0.4mol/L氫氧化鈉5.05.05.05.05.05.0混勻，37c保溫10min后取出，冷卻至室溫，于520nm處進行比色,以蒸儲水調(diào)“0”讀取各管光密度。將各管光密度減去“空白”管光密度，所得差值與其對應(yīng)的酶活力單位數(shù)作圖。標準曲線應(yīng)作24套，求其均值較為理想。2、測定鼠肝臟谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶活性。（1） 取干凈試管3支，各標以“肝損”、“正常對照”、“水對照”，分別準確加入SGP砒質(zhì)液或SGOTS質(zhì)液各1.0ml。（2） 將試管置于37。叵溫水浴中溫?zé)?3min。然后在“肝損”管中加入0.2ml肝損鼠血清；在“正常對照”管中加入0.2ml正常鼠血清；在“水對照”管中加入0.2ml

8、蒸儲水。（3） 將上述3支試管均放入37。叵溫水浴中溫?zé)?0min,取出試管，立即分別加入1.0ml2,4-二硝基苯肌液，混勻后在室溫下置20min。(4)分別加入10.0ml的0.4mol/L氫氧化鈉溶液，蓋好試管，混合均勻，在室溫下靜置5min。肝損正常對照水對照SGPW質(zhì)與！或SGOTS質(zhì)液ml1.01.01.037c恒溫水浴中溫?zé)?3min血清ml0.20.2蒸儲水ml0.237c恒溫水浴中溫?zé)?0min2,4-二硝基苯肌液ml1.01.01.0混勻后在室溫下置20min0.4mol/L氫氧化鈉溶液10.010.010.0混合均勻，在室溫卜靜置5min(5)用蒸儲水調(diào)“0”，在520n

9、m波長處測定光密度。(6)在標準曲線上查取各自的SGO偵SGPT含量(每毫升血清中的國際單位數(shù)，IU/ml)。2結(jié)果與分析2.1標準曲線GPT活力(IU)0285797150200吸光值(520nn)00.1310.2480.296(誤差太大，去除)0.2220.245GPT標準曲線y-0.000Sx+C.08BR*2-0.54612.2轉(zhuǎn)氨酶活性測定試管名光密度SGP哈量IU水對照00正常對照0.405351.3肝損（四氯化碳）0.640612.41/20LD500.394339.41/10LD500.373315.61/5LD500.358298.83討論與結(jié)論由于GO砒質(zhì)液配制失敗，故無法