化學(xué)藥物質(zhì)量控制分析方法驗(yàn)證技術(shù)指導(dǎo)原則

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上化學(xué)藥物質(zhì)量控制分析方法驗(yàn)證技術(shù)指導(dǎo)原則一、概述保證藥品安全、有效、質(zhì)量可控是藥品研發(fā)和評價應(yīng)遵循的基本原則，其中，對藥品進(jìn)行質(zhì)量控制是保證藥品安全有效的基礎(chǔ)和前提。為達(dá)到控制質(zhì)量的目的，需要多角度、多層面來控制藥品質(zhì)量，也就是說要對藥物進(jìn)行多個項(xiàng)目測試，來全面考察藥品質(zhì)量。一般地，每一測試項(xiàng)目可選用不同的分析方法，為使測試結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，必須對所采用的分析方法的科學(xué)性、準(zhǔn)確性和可行性進(jìn)行驗(yàn)證，以充分表明分析方法符合測試項(xiàng)目的目的和要求，這就是通常所說的對方法進(jìn)行驗(yàn)證。方法驗(yàn)證的目的是判斷采用的分析方法是否科學(xué)、合理，是否能有效控制藥品的內(nèi)在質(zhì)量。從本質(zhì)上講，方法驗(yàn)證

2、就是根據(jù)檢測項(xiàng)目的要求，預(yù)先設(shè)置一定的驗(yàn)證內(nèi)容，并通過設(shè)計合理的試驗(yàn)來驗(yàn)證所采用的分析方法能否符合檢測項(xiàng)目的要求。方法驗(yàn)證在分析方法建立過程中具有重要的作用，并成為質(zhì)量研究和質(zhì)量控制的組成部分。只有經(jīng)過驗(yàn)證的分析方法才能用于控制藥品質(zhì)量，因此方法驗(yàn)證是制訂質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)。方法驗(yàn)證是藥物研究過程中的重要內(nèi)容。本指導(dǎo)原則重點(diǎn)探討方法驗(yàn)證的本質(zhì)，將分析方法驗(yàn)證的要求與所要達(dá)到的目的結(jié)合起來進(jìn)行系統(tǒng)和規(guī)律性的闡述，重點(diǎn)闡述如何科學(xué)合理地進(jìn)行論證方案的設(shè)計。本指導(dǎo)原則主要包括方法驗(yàn)證的一般原則、方法驗(yàn)證涉及的三個主要方面、方法驗(yàn)證的具體內(nèi)容、對方法驗(yàn)證的評價等內(nèi)容。本原則與其他相關(guān)技術(shù)指導(dǎo)原則一起構(gòu)成較

3、完整的質(zhì)量控制指導(dǎo)原則。隨著我國新藥研發(fā)水平的不斷提高，對方法驗(yàn)證的認(rèn)識也會不斷深入，本指導(dǎo)原則將會逐步完善和修訂。由于生物制品和中藥的特殊性，本原則主要適用于化學(xué)藥品。二、方法驗(yàn)證的一般原則原則上每個檢測項(xiàng)目采用的分析方法，均需要進(jìn)行方法驗(yàn)證。方法驗(yàn)證的內(nèi)容應(yīng)根據(jù)檢測項(xiàng)目的要求，結(jié)合所采用分析方法的特點(diǎn)確定。同一分析方法用于不同的檢測項(xiàng)目會有不同的驗(yàn)證要求。例如，采用高效液相色譜法用于制劑的鑒別和雜質(zhì)定量試驗(yàn)應(yīng)進(jìn)行不同要求的方法驗(yàn)證，前者重點(diǎn)要求驗(yàn)證專屬性，而后者重點(diǎn)要求驗(yàn)證專屬性、準(zhǔn)確度、定量限。三、方法驗(yàn)證涉及的三個主要方面（一）需要驗(yàn)證的檢測項(xiàng)目檢測項(xiàng)目是為控制藥品質(zhì)量，保證安全有效而

4、設(shè)定的測試項(xiàng)目。根據(jù)檢測項(xiàng)目的設(shè)定目的和驗(yàn)證內(nèi)容的不同要求，本指導(dǎo)原則將需驗(yàn)證的檢測項(xiàng)目分為鑒別、雜質(zhì)檢查（限度試驗(yàn)、定量試驗(yàn)）、定量測定（含量測定、溶出度、釋放度等）、其他特定檢測項(xiàng)目等四類。鑒別的目的在于判定被分析物是目標(biāo)化合物，而非其它物質(zhì)，用于鑒別的分析方法要求具有較強(qiáng)的專屬性。雜質(zhì)檢查主要用于控制主成分以外的雜質(zhì)，如有機(jī)雜質(zhì)、無機(jī)雜質(zhì)等。雜質(zhì)檢查可分為限度試驗(yàn)和定量試驗(yàn)兩種情況。用于限度試驗(yàn)的分析方法驗(yàn)證側(cè)重專屬性和檢測限。用于定量試驗(yàn)的分析方法驗(yàn)證強(qiáng)調(diào)專屬性、準(zhǔn)確度和定量限。定量測定包括含量測定、制劑的溶出度測定等，由于此類項(xiàng)目對準(zhǔn)確性要求較高，故所采用的分析方法要求具有一定的專屬

5、性、準(zhǔn)確度和線性。其他特定檢測項(xiàng)目包括粒徑分布、旋光度、分子量分布等，由于這些檢測項(xiàng)目的要求與鑒別、雜質(zhì)檢查、定量測定等有所不同，對于這些項(xiàng)目的分析方法驗(yàn)證應(yīng)有不同的要求。（二）分析方法本指導(dǎo)原則所指分析方法是為完成上述各檢測項(xiàng)目而設(shè)定和建立的測試方法，一般包括分析方法原理、儀器及儀器參數(shù)、試劑、系統(tǒng)適用性試驗(yàn)、供試品溶液制備、對照品溶液制備、測定、計算及測試結(jié)果的報告等。測試方法可采用化學(xué)分析方法和儀器分析方法。這些方法各有特點(diǎn)，同一測試方法可用于不同的檢測項(xiàng)目，但驗(yàn)證內(nèi)容可不相同。（三）驗(yàn)證內(nèi)容驗(yàn)證內(nèi)容包括方法的專屬性、線性、范圍、準(zhǔn)確度、精密度、檢測限、定量限、耐用性和系統(tǒng)適用性等。四、

6、方法驗(yàn)證的具體內(nèi)容（一）專屬性專屬性系指在其他成分（如雜質(zhì)、降解物、輔料等）可能存在下，采用的分析方法能夠正確鑒定、檢出被分析物質(zhì)的特性。通常，鑒別、雜質(zhì)檢查、含量測定方法中均應(yīng)考察其專屬性。如采用的方法不夠?qū)?，?yīng)采用多個方法予以補(bǔ)充。1、鑒別反應(yīng)鑒別試驗(yàn)應(yīng)確證被分析物符合其特征。專屬性試驗(yàn)要求證明能與可能共存的物質(zhì)或結(jié)構(gòu)相似化合物區(qū)分，需確證含被分析物的供試品呈正反應(yīng)，而不含被測成分的陰性對照呈負(fù)反應(yīng)，結(jié)構(gòu)相似或組分中的有關(guān)化合物也應(yīng)呈負(fù)反應(yīng)。2、雜質(zhì)檢查作為純度檢查，所采用的分析方法應(yīng)確?？蓹z出被分析物中雜質(zhì)的含量，如有關(guān)物質(zhì)、重金屬、有機(jī)溶劑等。因此雜質(zhì)檢查要求分析方法有一定的專屬性。

7、在雜質(zhì)可獲得的情況下，可向供試品中加入一定量的雜質(zhì)，證明雜質(zhì)與共存物質(zhì)能得到分離和檢出，并具適當(dāng)?shù)臏?zhǔn)確度與精密度。在雜質(zhì)或降解產(chǎn)物不能獲得的情況下，專屬性可通過與另一種已證明合理但分離或檢測原理不同、或具較強(qiáng)分辨能力的方法進(jìn)行結(jié)果比較來確定?；?qū)⒐┰嚻酚脧?qiáng)光照射，高溫，高濕，酸、堿水解及氧化的方法進(jìn)行破壞（制劑應(yīng)考慮輔料的影響），比較破壞前后檢出的雜質(zhì)個數(shù)和量。必要時可采用二極管陣列檢測和質(zhì)譜檢測，進(jìn)行色譜峰純度檢查。3、含量測定含量測定目的是得到供試品中被分析物的含量或效價的準(zhǔn)確結(jié)果。在雜質(zhì)可獲得的情況下，對于主成分含量測定可在供試品中加入雜質(zhì)或輔料，考察測定結(jié)果是否受干擾，并與未加雜質(zhì)和輔

8、料的供試品比較測定結(jié)果。在雜質(zhì)或降解產(chǎn)物不能獲得的情況下，可采用另一個經(jīng)驗(yàn)證了的或藥典方法進(jìn)行比較，對比兩種方法測定的結(jié)果。也可采用破壞性試驗(yàn)（強(qiáng)光照射，高溫，高濕，酸、堿水解及氧化），得到含有雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的試樣，用兩種方法進(jìn)行含量測定，比較測定結(jié)果。必要時進(jìn)行色譜峰純度檢查，證明含量測定成分的色譜峰中不包含其他成分。（二）線性線性系指在設(shè)計的測定范圍內(nèi)，檢測結(jié)果與供試品中被分析物的濃度（量）直接呈線性關(guān)系的程度。線性是定量測定的基礎(chǔ)，涉及定量測定的項(xiàng)目，如雜質(zhì)定量試驗(yàn)和含量測定均需要驗(yàn)證線性。應(yīng)在設(shè)計的測定范圍內(nèi)測定線性關(guān)系?？捎靡毁A備液經(jīng)精密稀釋，或分別精密稱樣，制備一系列被測物質(zhì)濃度系

9、列進(jìn)行測定，至少制備5個濃度。以測得的響應(yīng)信號作為被測物濃度的函數(shù)作圖，觀察是否呈線性，用最小二乘法進(jìn)行線性回歸。必要時，響應(yīng)信號可經(jīng)數(shù)學(xué)轉(zhuǎn)換，再進(jìn)行線性回歸計算，并說明依據(jù)。（三）范圍范圍系指能夠達(dá)到一定的準(zhǔn)確度、精密度和線性，測試方法適用的試樣中被分析物高低限濃度或量的區(qū)間。范圍是規(guī)定值，在試驗(yàn)研究開始前應(yīng)確定驗(yàn)證的范圍和試驗(yàn)方法?？梢圆捎梅弦蟮脑纤幣渲瞥刹煌臐舛?，按照相應(yīng)的測定方法進(jìn)行試驗(yàn)。范圍通常用與分析方法的測試結(jié)果相同的單位（如百分濃度）表達(dá)。涉及到定量測定的檢測項(xiàng)目均需要對范圍進(jìn)行驗(yàn)證，如含量測定、含量均勻度、溶出度或釋放度、雜質(zhì)定量試驗(yàn)等。范圍應(yīng)根據(jù)劑型和（或）檢測項(xiàng)目

10、的要求確定。1、含量測定范圍應(yīng)為測試濃度的80100或更寬。2、制劑含量均勻度范圍應(yīng)為測試濃度的70130。根據(jù)劑型特點(diǎn)，如氣霧劑、噴霧劑，必要時，范圍可適當(dāng)放寬。3、溶出度或釋放度對于溶出度，范圍應(yīng)為限度的±20；如規(guī)定限度范圍，則應(yīng)為下限的-20至上限的+20。對于釋放度，如規(guī)定限度范圍為，從1小時后為20至24小時后為90，則驗(yàn)證范圍應(yīng)為0110。4、雜質(zhì)雜質(zhì)測定時，范圍應(yīng)根據(jù)初步實(shí)測結(jié)果，擬訂出規(guī)定限度的±20。如果含量測定與雜質(zhì)檢查同時測定，用面積歸一化法，則線性范圍應(yīng)為雜質(zhì)規(guī)定限度的-20至含量限度（或上限）的+20。（四）準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度系指用該方法測定的結(jié)果與真

11、實(shí)值或認(rèn)可的參考值之間接近的程度。有時也稱真實(shí)度。一定的準(zhǔn)確度為定量測定的必要條件，因此涉及到定量測定的檢測項(xiàng)目均需要驗(yàn)證準(zhǔn)確度，如含量測定、雜質(zhì)定量試驗(yàn)等。準(zhǔn)確度應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)建立，對于制劑一般以回收率試驗(yàn)來進(jìn)行驗(yàn)證。試驗(yàn)設(shè)計需考慮在規(guī)定范圍內(nèi)，制備3個不同濃度的試樣，各測定3次，即測定9次，報告已知加入量的回收率（）或測定結(jié)果平均值與真實(shí)值之差及其可信限。1、含量測定原料藥可用已知純度的對照品或符合要求的原料藥進(jìn)行測定，或用本法所得結(jié)果與已建立準(zhǔn)確度的另一方法測定的結(jié)果進(jìn)行比較。制劑可用含已知量被測物的各組分混合物進(jìn)行測定。如不能得到制劑的全部組分，可向制劑中加入已知量的被測物進(jìn)行測定，

12、必要時，與另一個已建立準(zhǔn)確度的方法比較結(jié)果。2、雜質(zhì)定量試驗(yàn)雜質(zhì)的定量試驗(yàn)可向原料藥或制劑中加入已知量雜質(zhì)進(jìn)行測定。如果不能得到雜質(zhì)，可用本法測定結(jié)果與另一成熟的方法進(jìn)行比較，如藥典方法或經(jīng)過驗(yàn)證的方法。如不能測得雜質(zhì)的相對響應(yīng)因子，可在線測定雜質(zhì)的相關(guān)數(shù)據(jù)，如采用二極管陣列檢測器測定紫外光譜，當(dāng)雜質(zhì)的光譜與主成分的光譜相似，則可采用原料藥的響應(yīng)因子近似計算雜質(zhì)含量（自身對照法）。并應(yīng)明確單個雜質(zhì)和雜質(zhì)總量相當(dāng)于主成分的重量比（）或面積比（）。（五）精密度精密度系指在規(guī)定的測試條件下，同一均質(zhì)供試品，經(jīng)多次取樣進(jìn)行一系列檢測所得結(jié)果之間的接近程度（離散程度）。精密度一般用偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對標(biāo)

13、準(zhǔn)偏差表示。用標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對標(biāo)準(zhǔn)偏差表示時，取樣測定次數(shù)應(yīng)至少6次。精密度可以從三個層次考察：重復(fù)性、中間精密度、重現(xiàn)性。1、重復(fù)性重復(fù)性系指在同樣的操作條件下，在較短時間間隔內(nèi)，由同一分析人員測定所得結(jié)果的精密度。重復(fù)性測定可在規(guī)定范圍內(nèi)，至少用9次測定結(jié)果進(jìn)行評價，如制備3個不同濃度的試樣，各測定3次，或100的濃度水平，用至少測定6次的結(jié)果進(jìn)行評價。2、中間精密度中間精密度系指在同一實(shí)驗(yàn)室，由于實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部條件改變，如時間、分析人員、儀器設(shè)備、測定結(jié)果的精密度。驗(yàn)證設(shè)計方案中的變動因素一般為日期、分析人員、設(shè)備。3、重現(xiàn)性指不同實(shí)驗(yàn)室之間不同分析人員測定結(jié)果的精密度。當(dāng)分析方法將被法定標(biāo)準(zhǔn)

14、采用時，應(yīng)進(jìn)行重現(xiàn)性試驗(yàn)。（六）檢測限檢測限系指試樣中的被分析物能夠被檢測到的最低量，但不一定要準(zhǔn)確定量。該驗(yàn)證指標(biāo)的意義在于考察方法是否具備靈敏的檢測能力。因此對雜質(zhì)限度試驗(yàn)，需證明方法具有足夠低的檢測限，以保證檢出需控制的雜質(zhì)。1、直觀法直觀評價可以用于非儀器分析方法，也可用于儀器分析方法。檢測限的測定是通過對一系列已知濃度被測物的試樣進(jìn)行分析，并以能準(zhǔn)確、可靠檢測被測物的最小量或最低濃度來建立。2、信噪比法用于能顯示基線噪音的分析方法，即把已知低濃度試樣測出的信號與噪聲信號進(jìn)行比較，計算可檢出的最低濃度或量。一般以信噪比為3：1時相應(yīng)的濃度或注入儀器的量確定檢測限。其他方法有基于工作曲線

15、的斜率和響應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)偏差進(jìn)行計算的方法等。無論用何種方法，均應(yīng)用一定數(shù)量的試樣，其濃度為近于或等于檢測限，進(jìn)行分析，以可靠地測定檢測限。（七）定量限定量限系指試樣中的被分析物能夠被定量測定的最低量，其測定結(jié)果應(yīng)具有一定的準(zhǔn)確度和精密度。定量限體現(xiàn)了分析方法是否具備靈敏的定量檢測能力。雜質(zhì)定量試驗(yàn)，需考察方法的定量限，以保證含量很少的雜質(zhì)能夠被準(zhǔn)確測出。常用信噪比法確定定量限。一般以信噪比為10：1時相應(yīng)的濃度或注入儀器的量進(jìn)行確定。1、直觀法直觀評價可以用于非儀器分析方法，也可用于儀器分析方法。定量限一般通過對一系列含有已知濃度被測物的試樣進(jìn)行分析，在準(zhǔn)確度和精密度都符合要求的情況下，來確定被測

16、物能被定量的最小量。2、信噪比法用于能顯示基線噪音的分析方法，即把已知低濃度試樣測出的信號與噪聲信號進(jìn)行比較，計算出可檢出的最低濃度或量。一般可信噪比為10：1。其他方法有基于工作曲線的斜率和響應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)偏差進(jìn)行計算的方法等。無論用何種方法，均應(yīng)用一定數(shù)量的試樣，其濃度為近于或等于定量限，進(jìn)行分析，以可靠地測定定量限。（八）耐用性耐用性系指測定條件發(fā)生小的變動時，測定結(jié)果不受影響的承受程度。耐用性主要考察方法本身對于可變試驗(yàn)因素的抗干擾能力。開始研究分析方法時，就應(yīng)考慮其耐用性。如果測試條件要求苛刻，則建議在方法中予以寫明。典型的變動因素包括：液相色譜法中流動相的組成、流速和pH值、不同廠牌或不

17、同批號的同類型色譜柱、柱溫等。氣相色譜法中載氣及流速、不同廠牌或批號的色譜柱、固定相、擔(dān)體、柱溫、進(jìn)樣口和檢測器溫度等。經(jīng)試驗(yàn)，應(yīng)說明小的變動能否符合系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求，以確保方法有效。（九）系統(tǒng)適用性試驗(yàn)對一些儀器分析方法，在進(jìn)行方法驗(yàn)證時，有必要將分析設(shè)備、電子儀器與實(shí)驗(yàn)操作、測試樣品等一起當(dāng)作完整的系統(tǒng)進(jìn)行評估。系統(tǒng)適用性便是對整個系統(tǒng)進(jìn)行評估的指標(biāo)。系統(tǒng)適用性試驗(yàn)參數(shù)的設(shè)置需根據(jù)被驗(yàn)證方法類型而定。色譜方法對分析設(shè)備、電子儀器的依賴程度較高，因此所有色譜方法均應(yīng)進(jìn)行該指標(biāo)驗(yàn)證，并將系統(tǒng)適用性作為分析方法的組成部分。具體驗(yàn)證參數(shù)和方法參考中國藥典有關(guān)規(guī)定。五、方法再驗(yàn)證在某些情況下，如原

18、料藥合成工藝改變、制劑處方改變、分析方法發(fā)生部分改變等，均有必要對分析方法再次進(jìn)行全面或部分驗(yàn)證，以保證分析方法可靠，這一過程稱為方法再驗(yàn)證。再驗(yàn)證原則：根據(jù)改變的程度進(jìn)行相應(yīng)的再驗(yàn)證。當(dāng)原料藥合成工藝發(fā)生改變時，可能引入新的雜質(zhì)，雜質(zhì)檢查方法和含量測定方法的專屬性就需要再進(jìn)行驗(yàn)證，以證明有關(guān)物質(zhì)檢查方法能夠檢測新引入的雜質(zhì)，且新引入的雜質(zhì)對主成份的含量測定應(yīng)無干擾。當(dāng)制劑的處方組成改變、輔料變更時，可能會影響鑒別的專屬性、溶出度和含量測定的準(zhǔn)確度，因此需要對鑒別、含量測定方法再驗(yàn)證。當(dāng)原料藥產(chǎn)地來源發(fā)生變更時，可能會影響雜質(zhì)檢查和含量測定的專屬性和準(zhǔn)確度，因此需要對雜質(zhì)檢查方法和含量測定方法進(jìn)行再驗(yàn)證。當(dāng)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中某一項(xiàng)目分析方法發(fā)生部分改變時，如采用高效液相色譜法測定含量時，檢測波長發(fā)生改變，則需要重新進(jìn)行檢測限、專屬性、準(zhǔn)確度、精密度、線性等內(nèi)容的驗(yàn)證，證明修訂后分析方法的合理性、可行性。同樣，已有國家標(biāo)準(zhǔn)的藥品質(zhì)量研究中，基于申報的原料藥合成工藝、制劑處方中的輔料等一般無法保證與已上市藥品的一致性，需對質(zhì)量標(biāo)