微生物知識(shí)及潔凈區(qū)作業(yè)及衛(wèi)生

1、微生物知識(shí)及潔凈區(qū)作業(yè)及衛(wèi)生培訓(xùn)質(zhì)量部 李均 2015.01目錄u一、微生物知識(shí) 1、微生物概念及特點(diǎn) 2、微生物類群和形態(tài)結(jié)構(gòu) 3、微生物的營養(yǎng) 4、消毒與滅菌的概念 5、消毒與滅菌的方法 6、GMP與微生物 7、微生物污染的途徑 8、防止微生物污染的原則 微生物微生物(microorganism)：是存在于自然界的一大群體形微小、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、肉眼直接看不見，必須借助光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡放大數(shù)百倍、數(shù)千倍，甚至數(shù)萬倍才能觀察到的微小生物。特點(diǎn)：特點(diǎn)： 1）種類多、分布廣）種類多、分布廣 2）個(gè)體小、面積大）個(gè)體小、面積大 3）吸收多、轉(zhuǎn)化快）吸收多、轉(zhuǎn)化快 4）適應(yīng)強(qiáng)、易變異）適應(yīng)強(qiáng)、易變異

2、肺炎鏈球菌肺炎鏈球菌細(xì)菌的形態(tài)細(xì)菌的形態(tài)1、微生物概念及特點(diǎn) 2、微生物的類群和形態(tài)結(jié)構(gòu)1.1 細(xì)菌1.2 真菌1.3 霉菌1.4 酵母菌1.5 病毒 1.1 1.1 細(xì)菌細(xì)菌形態(tài)構(gòu)造形態(tài)構(gòu)造細(xì)菌是一類細(xì)胞細(xì)而短、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、細(xì)胞壁堅(jiān)韌，以二分裂方式無性繁殖的原核微生物，分布廣泛。細(xì)菌按其形態(tài)不同，主要分為球菌、桿菌和螺形菌三類。 充足的營養(yǎng) 合適的PH值 ：7.2-7.6 適宜的溫度 ：嗜溫菌為20-40C 必要的氣體：CO2和氧氣 1.1 1.1 細(xì)菌細(xì)菌生長條件生長條件 真菌是一類有細(xì)胞壁，無葉綠素，以寄生或腐生方式生存，少數(shù)為單細(xì)胞，多數(shù)為多細(xì)胞，能進(jìn)行無性或有性繁殖的一類真核細(xì)胞型微生

3、物。I. 單細(xì)胞：呈圓形或卵圓形，稱為酵母菌II. 多細(xì)胞：由菌絲和孢子組成，并交織成 團(tuán)，稱絲狀菌或霉菌2.1 2.1 真菌真菌概念及分類概念及分類 最適的溫度為2228，最適的pH值為46。真菌對(duì)熱的抵抗力不強(qiáng)，一般加熱6070 1小時(shí)即被殺死對(duì)干燥、日光、紫外線和一些化學(xué)消毒劑有抵抗力對(duì)2.5碘酒、10甲醛則較敏感2.1 2.1 真菌真菌生長條件生長條件 霉菌是絲狀真菌的俗稱構(gòu)成霉菌營養(yǎng)體的基本單位是菌絲。霉菌主要依靠產(chǎn)生形形色色的孢子進(jìn)行繁殖。對(duì)人類的不利之處則是易于造成污染、霉變和易于傳播動(dòng)植物的霉菌病害。 菌落正反面的顏色和邊緣與中心的顏色常不一致。 3.1 3.1 霉菌霉菌概念概

4、念 尤其喜歡在偏酸性且含糖較多的環(huán)境中生長酵母菌是單細(xì)胞真核微生物包括無性繁殖和有性繁殖。菌落質(zhì)地均勻，正反面和邊緣、中央部位的顏色都很均一，菌落多為乳白色，少數(shù)為紅色，個(gè)別為黑色。4.1 4.1 酵母菌酵母菌概念及特點(diǎn)概念及特點(diǎn) 病毒屬非細(xì)胞型微生物形態(tài)：桿狀、球狀和這兩種形態(tài)結(jié)合的復(fù)合型結(jié)構(gòu)：螺旋對(duì)稱型、20面體立體對(duì)稱型和復(fù)合對(duì)稱型。增殖：只有在宿主的活細(xì)胞里才能進(jìn)行增殖5.1 5.1 病毒病毒概念及特點(diǎn)概念及特點(diǎn)乙肝病毒 多數(shù)病毒耐冷不耐熱。pH59范圍內(nèi)穩(wěn)定，強(qiáng)酸或強(qiáng)堿條件下可被滅活。X射線、射線和紫外線都能滅活病毒?；瘜W(xué)消毒劑、抗生素及中草藥等。除強(qiáng)酸、強(qiáng)堿消毒劑外，酚類、氧化劑、

5、鹵素類、醇類等對(duì)病毒均有滅活作用。5.1 5.1 病毒病毒理化因素對(duì)病毒的影響理化因素對(duì)病毒的影響 水水 碳源：碳源：為有機(jī)碳源（異養(yǎng)微生物）和無機(jī)碳源（自養(yǎng)微生物）兩大類氮源：氮源：主要是供給合成菌體結(jié)構(gòu)的原料無機(jī)鹽類：無機(jī)鹽類： P、S、K、Na、Ca、Mg、Fe等生長因子：生長因子：主要是B族維生素的化合物等 3、微生物的營養(yǎng)消毒消毒（disinfection) 殺死物體上病原微生物的方法，并不一定能殺死含芽胞的細(xì)菌或非病原微生物。用以消毒的藥品稱為消毒劑(disinfectant)。滅菌滅菌（sterilization） 殺滅物體上所有微生物的方法。滅菌比消毒要求高，包括殺滅細(xì)菌芽胞在

6、內(nèi)的全部病原微生物和非病原微生物。抑菌抑菌：抑制體內(nèi)或體外細(xì)菌的生長繁殖。常用的抑菌劑為各種抗生素，可抑制細(xì)菌的繁殖。防腐防腐：防止或抑制體外細(xì)菌生長繁殖的方法，細(xì)菌一般不死亡。同一種化學(xué)藥品在高濃度時(shí)為消毒劑，低濃度時(shí)常為防腐劑。 4、消毒與滅菌的概念 5.1 物理學(xué)方法：物理學(xué)方法： 用于消毒滅菌的物理因素有熱力、輻射、過濾等。5.2 化學(xué)方法：化學(xué)方法： 影響微生物的化學(xué)組成、物理結(jié)構(gòu)和生理活性。 潔凈室(區(qū))應(yīng)定期消毒，使用的消毒劑不得對(duì)設(shè)備、物料和成品產(chǎn)生污染。消毒劑品種應(yīng)定期更換，防止產(chǎn)生耐藥菌株。 5、消毒與滅菌的方法 紫外線：作用于DNA，使細(xì)菌DNA的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄受到干擾，導(dǎo)致

7、細(xì)菌變異或死亡。常用于室內(nèi)的空氣消毒。電離輻射 ： 對(duì)各種細(xì)菌均有致死作用。常用于大量一次性醫(yī)用塑料制品的消毒和食品的消毒。微波 ：多用于檢驗(yàn)室用品、無菌室的用具的消毒。5.1 物理方法輻射滅菌 v高溫對(duì)細(xì)菌具有明顯的致死作用，因此最常用于消毒與滅菌。v多數(shù)無芽孢的細(xì)菌經(jīng)5560作用3060分鐘后死亡。v干熱滅菌法v濕熱滅菌法v相同溫度下，濕熱滅菌法的滅菌效力比干熱滅菌法大。5.1 物理方法熱力滅菌 用物理阻留的方法將液體或空氣中的細(xì)菌除去,以達(dá)到除菌目的。 濾菌器含有微細(xì)小孔0.22微米,只允許液體或氣體通過,而大于孔徑的細(xì)菌等顆粒不能通過 。 適用范圍：血清、毒素、抗生素以及空氣等的除菌。

8、5.1 物理方法濾過除菌 類別類別作用機(jī)制作用機(jī)制常用種類常用種類用途用途酚類蛋白變性，細(xì)胞膜損傷石炭酸地面、器具表面、皮膚消毒醇類蛋白變性乙醇皮膚、體溫計(jì)消毒氧化劑氧化、蛋白沉淀高錳酸鉀皮膚、尿道、蔬菜、水果消毒重金屬鹽氧化、蛋白酶變性紅汞、硫柳汞皮膚、粘膜、小創(chuàng)傷消毒氧化劑氧化、蛋白沉淀過氧乙酸、碘酒塑料、玻璃器材、皮膚消毒表面活性劑蛋白變性，細(xì)胞膜損傷新潔而滅手術(shù)洗手、浸泡手術(shù)器械5.1 化學(xué)方法消毒劑種類 酒精能使菌體蛋白質(zhì)脫水變性，常用酒精殺菌濃度為70-75%。 氯的消毒作用，即是HCLO作用，HCLO是中性分子，可以擴(kuò)散至帶負(fù)電的細(xì)菌表面，并穿過細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部，由于氯原子的氧

9、化作用，破壞某些酶系統(tǒng)，最終致細(xì)菌死亡。 表面活性劑作用：破壞細(xì)胞膜，使蛋白質(zhì)變性。 5.1 化學(xué)方法消毒劑殺菌原理 法規(guī)要求：中國藥典微生物限度檢查法規(guī)定的檢查項(xiàng)目包括細(xì)菌數(shù)、霉菌數(shù)、酵母菌數(shù)和控制菌檢查；藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范也對(duì)藥品生產(chǎn)的環(huán)境提出了具體的要求，包括但不限于沉降菌、浮游菌、表面微生物、塵埃粒子等。藥品內(nèi)在質(zhì)量要求：微生物會(huì)使得原輔料、產(chǎn)品變質(zhì)、使藥品含量、雜質(zhì)、純度、外觀等質(zhì)量指標(biāo)發(fā)生變化，這些指標(biāo)的改變可能使藥品失效，甚至在上述變化過程中還會(huì)產(chǎn)生有毒有害的物質(zhì)而威脅人們的健康。6、GMP與微生物 7.1 空氣 7.2 制藥用水7.3 表面7.4 人員7.5 物料 7、微生物

10、污染的途徑 傳播污染的第一幫兇就是空氣，空氣攜帶著敵人來污染藥品。每立方米的空氣中至少含有60萬顆塵粒，同時(shí)還存在著大量的微生物，在這樣的空氣條件下進(jìn)行生產(chǎn)，肯定會(huì)污染藥品。 因此，要杜絕帶有大量塵埃微粒和微生物的空氣污染藥品的辦法是對(duì)空氣采取過濾的措施，把隱藏在空氣中的敵人通通過濾掉，使空氣質(zhì)量達(dá)到我們的要求。這就是要建立密閉廠房和空氣凈化系統(tǒng)的原因。對(duì)空氣處理，只過濾了塵粒，但還有大量微生物存在空氣中，所以采取對(duì)空氣消毒的措施來消滅微生物，例如：臭氧消毒的方式等殺死微生物。但是常使用一種消毒劑會(huì)使微生物產(chǎn)生耐藥性，因此，在使用消毒劑時(shí)，必須定期交替使用。7.1 空氣 減少空氣中微生物的方法

11、：（1）空氣潔凈技術(shù)采用的過濾方法 空氣凈化裝置可用于整個(gè)房間如無菌操作室，也可只 限于操作區(qū)域局部如超凈工作臺(tái)。（2）化學(xué)消毒方法：采用消毒劑作用于室內(nèi)空氣和物體表 面。（3）紫外線照射方法 ：采用紫外線對(duì)室內(nèi)空氣進(jìn)行照射。7.1 空氣 第二個(gè)幫兇是水，從理論上來講，微生物在純水中是不能生長的。但是，所有的各類水，不管怎樣仔細(xì)地蒸溜或過濾，總會(huì)含有一定量的可溶性有機(jī)物和鹽類。正是這些可溶性的物質(zhì)可被微生物利用作為它們生長的養(yǎng)料源泉。水是我們藥品生產(chǎn)不可缺少的要素之一，不只是用于生產(chǎn)中，還用于設(shè)施、設(shè)備清洗中。當(dāng)帶有大量塵埃粒子和微生物的水用于生產(chǎn)或清洗設(shè)施、設(shè)備時(shí)，就轉(zhuǎn)移到藥品上面，污染了藥

12、品。因此，我們直接用于藥品生產(chǎn)的水必須經(jīng)過處理，以防止微生物通過水來污染產(chǎn)品。7.2 制藥用水 減少制藥用水中微生物的方法：（1）化學(xué)消毒劑方法 對(duì)水的消毒以化學(xué)消毒劑方法較常用，效果也最好。 常使用次氯酸鈉或通氯氣。（2）膜過濾法 適用于水系統(tǒng)的連續(xù)循環(huán)處理（3）紫外線照射法 在水系統(tǒng)中應(yīng)用紫外線照射消毒，適 用于需要特殊處理的水（如光學(xué)透明度要求高），一 般在末端之前。7.2 制藥用水 第三個(gè)幫兇是表面，包括：天花板、墻壁、地面、設(shè)備、容器、工具或桌子；由于空氣中的濕度，所有表面都包上一層含水的薄膜。這層薄膜由于靜電吸引而飽含塵埃微粒，有很多時(shí)候，表面還覆蓋一層油狀物質(zhì)，此層油膜易受到塵粒

13、污染。表面因塵埃微粒和微生物由空氣傳播的回降而受到污染。 請(qǐng)記?。阂粋€(gè)表面看起來很干凈，而實(shí)際上已經(jīng)被千百萬個(gè)微生物所污染，除非已經(jīng)做了正確的消毒滅菌7.3 表面 第四個(gè)幫兇可能是大家都不會(huì)想到的，它就是我們自己，人體是一個(gè)永不休止的污染媒介。當(dāng)您每天來藥廠上班時(shí)，您也許隨身將幾百萬細(xì)菌帶入工廠。人體體表皮膚與外界相通的腔道如口腔、鼻腔、腸道、眼結(jié)膜、泌尿生殖道等均存在不同種類的微生物，其中有些微生物可以長期寄居在人的體表、皮膚和黏膜上。7.4 人員 人員污染的途徑和方式人的頭發(fā)和皮膚人的頭發(fā)和皮膚：每分鐘從人類皮膚中要散發(fā)出約10,000個(gè)微生物嘴巴和鼻子嘴巴和鼻子水滴水滴：呼吸、咳嗽和噴嚏

14、將產(chǎn)生出大量水滴，這種水滴既含有塵粒污染也含有微生物污染?？人砸淮蔚陌l(fā)菌量為70700個(gè)(min人)，噴嚏一次的發(fā)菌量為400060000個(gè)(min人).衣著衣著：潔凈室內(nèi)當(dāng)工作人員穿無菌服時(shí)，靜止時(shí)的發(fā)菌量為10300個(gè)/(min人)，軀體一般活動(dòng)時(shí)的發(fā)菌量為1501000個(gè)(min人)，快步行走時(shí)的發(fā)菌量為9002500個(gè)(min人)化妝品和珠寶手飾化妝品和珠寶手飾：發(fā)膠、氣霧除臭劑、眼臉膏、香粉等，為微生物污染提供了極好的源泉。耳環(huán)、戒指、項(xiàng)鏈、手鏈等首飾，因?yàn)樗鼈冸y于清洗，所以可能成為感染源或污染源。 生產(chǎn)過程中的人為差錯(cuò)生產(chǎn)過程中的人為差錯(cuò)：當(dāng)員工沒有按照SOP進(jìn)行工作時(shí)，車間的污染

15、程度增加。 人體不同部位所帶細(xì)菌數(shù)量部位部位細(xì)菌數(shù)量細(xì)菌數(shù)量手部前額頭皮腋窩鼻腔分泌物唾液糞便1001000/ cm21000100000/ cm2約100萬/ cm2約1000萬/ g約1000萬/ g約10億/ g710億/ g 人體的發(fā)塵人體的發(fā)塵潔凈室操作人員是最主要的發(fā)塵源。潔凈室操作人員是最主要的發(fā)塵源。 第五個(gè)幫兇為物料，系指原料、輔料和包裝材料原料、輔料和包裝材料等。原則是盡量減少微生物數(shù)量，預(yù)防發(fā)生污染。符合要求的物料是生產(chǎn)合格產(chǎn)品的前提，因此用于生產(chǎn)的物料必須是符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的。一方面我們所使用的物料必須經(jīng)檢驗(yàn)合格，最重要的另一方面必須保證物料在使用的過程中不得受到污染。 切

16、記：（1）進(jìn)入潔凈區(qū)的物料必須對(duì)其外包裝處理。 （2）流轉(zhuǎn)過程的物料必須密閉。 （3）盛裝物料的容器具必須是經(jīng)過無毒的。7.5 物料 了解污染源：對(duì)藥品生產(chǎn)全過程可能造成污染的來源，進(jìn)行深入的了解研究進(jìn)行微生物監(jiān)測(cè)：I.對(duì)潔凈室空氣中的浮游菌、沉降菌的監(jiān)測(cè)；II. 對(duì)無菌設(shè)備清潔滅菌的驗(yàn)證；III. 對(duì)非無菌藥品進(jìn)行細(xì)菌和活菌數(shù)測(cè)定和病原菌的限制性檢查等。8、防止微生物污染的原則 目錄二、潔凈區(qū)作業(yè)及衛(wèi)生要求培訓(xùn) 1、潔凈區(qū)操作常識(shí) 2、藥品生產(chǎn)潔凈室（區(qū)）空氣潔凈度級(jí)別 3、人員進(jìn)出入潔凈區(qū)程序 4、物料進(jìn)出潔凈區(qū)程序 5、物品及工具進(jìn)出潔凈區(qū)程序 6、潔凈區(qū)生產(chǎn)管理 人員要求 -對(duì)新職工進(jìn)

17、行全面的健康檢查-建立生產(chǎn)人員健康檔案-培養(yǎng)藥品生產(chǎn)人員良好的個(gè)人衛(wèi)生習(xí)慣-進(jìn)入潔凈區(qū)不得化妝，佩戴飾物。-不得將工作服穿離工作區(qū)。-應(yīng)養(yǎng)成良好的衛(wèi)生習(xí)慣，勤洗澡、修指甲、刮臉，進(jìn)入 潔凈區(qū)不得佩帶戒指等首飾和手表、不得化妝?；加衅?膚病、傳染病和呼吸道疾病的人員不宜上崗。-潔凈區(qū)各室之間、潔凈區(qū)與非潔凈區(qū)之間嚴(yán)禁串崗。-潔凈區(qū)應(yīng)限制進(jìn)入該區(qū)域人員的數(shù)量 。1、潔凈區(qū)操作常識(shí) 生產(chǎn)環(huán)境衛(wèi)生要求 1、潔凈區(qū)操作常識(shí)頻次潔凈區(qū)清潔內(nèi)容一般區(qū)清潔內(nèi)容階段操作結(jié)束清潔操作間地面、臺(tái)面殘留的藥物；停用的工具清洗并消毒清潔操作間地面、臺(tái)面的殘留物；停用的工具清洗每 班清潔操作間地面、門窗、容器清洗并消毒，

18、處理垃圾（無人接班時(shí)則還應(yīng)執(zhí)行每日清潔內(nèi)容）清潔操作間地面、門窗、工具處理垃圾（無人接班時(shí)則還應(yīng)執(zhí)行每日清潔內(nèi)容）每 日清潔各通道、更衣室、操作間送回風(fēng)口、墻面、地面，非操作間地面、地漏、鐘、緩沖間及垃圾桶、洗手池、水池、工作臺(tái)面、貨架、拖把架、鞋柜（地面用配制的消毒液進(jìn)行消毒）清潔更衣室、通道、墻面、地面垃圾桶、洗手池、水池、工作臺(tái)面、貨架、拖把架及門廳地面、鞋柜每 周清潔天花板、燈具、可見管線外表及配電箱清潔天花板、燈具、清潔配電箱、可見管線外表 2、藥品生產(chǎn)潔凈室（區(qū)）空氣潔凈度級(jí)別潔凈度級(jí)別潔凈度級(jí)別（靜態(tài)）（靜態(tài)）塵粒最大允許數(shù)塵粒最大允許數(shù)/個(gè)個(gè)m-3微生物最大允許數(shù)微生物最大允許

19、數(shù)0.5m5m浮游菌/cfum-3沉降菌/cfu4h-1A級(jí)35202011B級(jí)352029105C級(jí)352000290010050D級(jí)352000029000200100 （1）進(jìn)入潔凈區(qū)一更室后，脫下一般區(qū)工作鞋，放入更鞋柜 外側(cè) 。（2）轉(zhuǎn)身從更鞋柜內(nèi)側(cè)取出潔凈工作鞋換上 。（3）脫下一般生產(chǎn)區(qū)工作服，裝入袋中。 （4）按口罩工作服上衣工作褲的順序穿好 （5）整理工作服（6）手消毒3、人員進(jìn)出入潔凈區(qū)程序 將物料送入緩沖間，關(guān)閉緩沖間門，脫去外包或進(jìn)行清潔（去塵、擦凈）處理，開啟紫外燈照射30分鐘并填寫紫外燈使用記錄或在緩沖間用75%乙醇對(duì)物料表面進(jìn)行擦拭消毒。潔凈區(qū)接料人從緩沖間取出物料，關(guān)緩沖間門，將物料運(yùn)至?xí)捍骈g或指定地點(diǎn)。 物料出潔凈區(qū)時(shí)，將物料送入緩沖間，關(guān)緩沖間門。 取料人從緩沖間取出物料，關(guān)緩沖間門，即可將物料運(yùn)至指定地點(diǎn)。4、物料進(jìn)出潔凈區(qū)程序 進(jìn)入的工具、儀器、零部件、設(shè)備等均應(yīng)進(jìn)行擦洗、除塵或除去外包裝、消毒等必要的凈化處理，并按規(guī)定程序進(jìn)行清潔