枸杞多糖的提取與鑒定

1、枸杞多糖的提取與鑒定 1242818楊立君實驗原理強酸可以使糖類脫水生成糠醛。生成的糠醛或羥甲基糠醛與蒽酮脫水縮合，形成糠醛的衍生物，呈藍綠色。顏色的深淺可以作為定量的標準。這一方法具有很高的靈敏度，糖含量在30g左右就能進行測定，所以可以作為微量測糖之用。一般樣品少的情況下，采用這一方法比較合適。實驗試劑1.標準葡萄糖試劑：將葡萄糖105烘干至恒重（2h），準確稱取50mg,無離子水定容至500mL,終濃度為0.1mg/mL.2.蒽酮-濃硫酸試劑：稱取0.1997g蒽酮，溶于100mL濃硫酸，現用現配。3.葡萄糖，阿拉伯糖，甘露糖4.硫代硫酸鈉溶液，活性炭，正丁醇，無水乙醇，丙酮。三氯甲烷，

2、甲苯胺乙醇溶液實驗器材分光光度計，超速離心機，電爐，燒杯，試管，干燥器，濾紙，層析缸以及其他相關玻璃儀器實驗流程(一) 提取枸杞干果粉碎，氯仿- 甲醇（21）回流脫脂810 h 近無色，揮干溶劑以后將脫脂后的枸杞樣品放入燒杯中，分3次加15、12、10 倍量的蒸餾水于90 水浴提取，每次2 h；收集3 次的濾液減壓濃縮至約200 mL，轉移到大燒杯中，加4 倍量的95%乙醇，沉淀12 h 后抽濾，并依次用無水乙醇、丙酮、無水乙醚洗滌，干燥后便得到枸杞多糖的粗制品。（二）純化多糖粗品加水溶解，4 000 r/min 離心10 min 后取上清液，加30%雙氧水適量，40 保溫46 h 后，加三氯

3、甲烷-正丁醇（41，Sevag 法）溶液沉淀蛋白，取上清液；此步驟反復多次，直到無白色絮狀沉淀出現。將除去蛋白的多糖溶液濃縮后，轉移到分子排阻為8 00010 000 Da 的透析袋中，流水透析24 h 后，蒸餾水透析過夜，溶液顏色變淡，濃縮后真空干燥得枸杞多糖精制品。(三) 理化性質分析將枸杞多糖精品分別加入水、乙醇、丙酮、乙酸乙酯和正丁醇中，觀察其溶解性。另在濃硫酸存在下觀察枸杞多糖與-萘酚的作用，于界面處觀察顏色變化。 （四）蒽酮比色法測定含量1. 制備標準曲線：取六只試管，如下表進行操作： 管號步驟012345標準溶液，ml00.10.20.30.40.5蒸餾水,ml10.90.80.

4、70.60.5置冰浴5min蒽酮試劑,ml444444沸水浴中準確煮沸10min,自來水冷卻,室溫放置10min后,比色A6202. 樣品含量測定吸取1ml多糖溶液置試管中，浸于冰浴中冷卻，再加入4ml蒽酮試劑，沸水浴中煮沸10min，取出后自來水冷卻，620nm比色，其他條件與做標準曲線相同。測得吸光度值由標準曲線查處出樣品液的糖含量。（如果樣品管的吸光度值超出標準曲線范圍，需將樣品進行適當的稀釋，再取1mL進行鑒定）。3,計算根據所測的吸光度平均值，根據標準曲線，求得糖含量（微克），記為式中表示1mL樣品測定液的多糖含量（g）;表示多糖提取液的體積（mL）;n表示測定液的稀釋倍數；m表示枸

5、杞的質量。(五) 枸杞多糖及單糖鑒定紙層析1. 以正丙醇-濃氨水-水為展開劑，分別將枸杞多糖粗品和精品溶于水中，點樣于層析濾紙上，展層后吹干，以甲苯胺乙醇溶液染色，乙醇漂洗。2. 將層析濾紙剪成紙條，將多糖樣品水解液點樣，近旁點已知組分的標準混合液。濾紙條懸掛于層析缸中層析，紙條在顯色劑中浸泡一下，懸于空氣中，用NaOH-乙醇液噴霧于濾紙上至完全潤浸并顯出色斑，干燥，浸入硫代硫酸鈉溶液中定影。與已知組分的標準單糖混合物所顯的色斑對比，就可鑒定多糖樣品中單糖的成分。參考文獻1侯新東，盛桂蓮，葛臺明，李繼紅.生物化學實驗指導書M.武漢：中國地質大學出版社有限責任公司,2011年12月第一版2茍春林，茍金萍，張艷，王曉菁，姜瑞.枸杞多糖的提取分離及其組成研究J,寧夏農林科技，2012，53（05）：89-90，923武金霞.生物化學實驗教程M,北京：科學出版社，2012年8月第一版4劉軍海, 任惠蘭, 李風風, 李廣錄.響應面分析法優(yōu)化枸杞多糖提取工藝條件J,時珍國醫(yī)國藥2008年第19卷第4期Data Analysist/min1722243545558510.06010.02010.0109.9309.8709.7859.56512.9112.8712.861