菠菜色素的提取與分離

1、菠菜色素的提取與分離菠菜色素的提取與分離 實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康?、學(xué)習(xí)從植物中提取色素的方法。、學(xué)習(xí)從植物中提取色素的方法。2、學(xué)習(xí)薄層色譜和柱色譜的原理及其操、學(xué)習(xí)薄層色譜和柱色譜的原理及其操作方法。作方法。 實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理 綠色植物如菠菜葉中含有葉綠素綠色植物如菠菜葉中含有葉綠素(綠綠色色) 、胡蘿卜素、胡蘿卜素(橙黃色橙黃色)和葉黃素和葉黃素(黃色黃色)等等多種天然色素。多種天然色素。 通過(guò)柱色譜和薄層色譜對(duì)菠菜葉中的上通過(guò)柱色譜和薄層色譜對(duì)菠菜葉中的上述幾種色素進(jìn)行分離。述幾種色素進(jìn)行分離。 實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理 薄層色譜，常用薄層色譜，常用TLCTLC表示，屬于固液表示，屬于固液吸附色譜。

2、化合物在薄層板上的吸附劑（吸附色譜?；衔镌诒影迳系奈絼ü坦潭ㄏ喽ㄏ啵┖腿軇┱归_(kāi)劑（）和溶劑展開(kāi)劑（流動(dòng)相流動(dòng)相）之間進(jìn)行分）之間進(jìn)行分離，由于各種化合物的吸附能力各不相同，離，由于各種化合物的吸附能力各不相同，在展開(kāi)劑上移時(shí)，它們進(jìn)行不同程度的解吸，在展開(kāi)劑上移時(shí)，它們進(jìn)行不同程度的解吸，從而達(dá)到分離的目的。也就是在反復(fù)的吸附從而達(dá)到分離的目的。也就是在反復(fù)的吸附解析吸附過(guò)程中，吸附能力較弱的溶質(zhì)，首解析吸附過(guò)程中，吸附能力較弱的溶質(zhì)，首先被展開(kāi)劑解析下來(lái)，隨展開(kāi)劑推向前去；先被展開(kāi)劑解析下來(lái)，隨展開(kāi)劑推向前去；而吸附能力強(qiáng)的溶質(zhì)解析較慢，被展開(kāi)劑推而吸附能力強(qiáng)的溶質(zhì)解析較慢，被展開(kāi)劑

3、推移不愿，從而達(dá)到分離的目的。移不愿，從而達(dá)到分離的目的。實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理展開(kāi)前展開(kāi)前展開(kāi)后展開(kāi)后吸附吸附解析解析吸附吸附解析解析實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理ab溶劑前沿在色譜法中，展開(kāi)劑移動(dòng)的速率與溶質(zhì)移動(dòng)在色譜法中，展開(kāi)劑移動(dòng)的速率與溶質(zhì)移動(dòng)的速率的比值，常用比移值的速率的比值，常用比移值Rf來(lái)來(lái)表示表示: : 溶劑的洗脫能力按下列次序遞增：溶劑的洗脫能力按下列次序遞增：石油醚、四氯化碳、甲苯、苯、二氯甲烷、石油醚、四氯化碳、甲苯、苯、二氯甲烷、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、丙酮、丙醇、乙醇、氯仿、乙醚、乙酸乙酯、丙酮、丙醇、乙醇、甲醇、水、吡啶、乙酸。甲醇、水、吡啶、乙酸。吸附劑吸附劑 常用吸附劑有氧化鋁、

4、硅膠等。吸附劑常用吸附劑有氧化鋁、硅膠等。吸附劑對(duì)化合物的吸附能力與分子的極性有關(guān)，極對(duì)化合物的吸附能力與分子的極性有關(guān)，極性越強(qiáng)，吸附能力越大，分子中含有極性較性越強(qiáng)，吸附能力越大，分子中含有極性較大的基團(tuán)，其吸附能力也越強(qiáng)。大的基團(tuán)，其吸附能力也越強(qiáng)。實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理前沿線色斑起始線實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理薄層色譜的用途：薄層色譜的用途： 1 1、化合物的定性檢驗(yàn)、化合物的定性檢驗(yàn)2 2、快速分離少量物質(zhì)、快速分離少量物質(zhì)3 3、跟蹤反應(yīng)進(jìn)程、跟蹤反應(yīng)進(jìn)程4 4、化合物純度的檢驗(yàn)、化合物純度的檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理 柱色譜是通過(guò)色譜柱來(lái)實(shí)現(xiàn)分離的。在柱色譜是通過(guò)色譜柱來(lái)實(shí)現(xiàn)分離的。在

5、色譜柱內(nèi)裝有固體吸附劑色譜柱內(nèi)裝有固體吸附劑( (固定相固定相) )如氧化鋁如氧化鋁或硅膠。液體樣品從柱頂加入，當(dāng)液體流經(jīng)或硅膠。液體樣品從柱頂加入，當(dāng)液體流經(jīng)吸附劑時(shí)，由于吸附劑表面對(duì)液體中各組分吸附劑時(shí)，由于吸附劑表面對(duì)液體中各組分吸附能力不同而按一定的順序吸附。然后從吸附能力不同而按一定的順序吸附。然后從柱頂加入洗脫劑柱頂加入洗脫劑( (流動(dòng)相流動(dòng)相) )，樣品中的各組分，樣品中的各組分隨洗脫劑按一定的順序從色譜柱下端流出，隨洗脫劑按一定的順序從色譜柱下端流出，根據(jù)不同顏色分段收集。根據(jù)不同顏色分段收集。實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)裝置實(shí)驗(yàn)裝置實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟1、菠菜色素的提取、菠菜色素的提取

6、2、薄層層析、薄層層析 3、柱層析、柱層析 菠菜色素的提取菠菜色素的提取1、研磨、研磨 在研缽中放入在研缽中放入10 g新鮮并剪新鮮并剪碎的菠菜葉，加入碎的菠菜葉，加入15 mL3：2(體積比體積比)石油醚一乙醇混合石油醚一乙醇混合液，適當(dāng)研磨液，適當(dāng)研磨(不要研成糊狀，不要研成糊狀，否則會(huì)給分離造成困難否則會(huì)給分離造成困難)，將，將提取液用滴管轉(zhuǎn)移到分液漏斗提取液用滴管轉(zhuǎn)移到分液漏斗中。反復(fù)三次，合并提取液。中。反復(fù)三次，合并提取液。2、洗滌和干燥、洗滌和干燥 向提取液中加入向提取液中加入l0 mL飽和飽和NaC1溶液，棄去水層，溶液，棄去水層，再用再用l0 mL蒸餾水洗滌兩次。蒸餾水洗滌兩

7、次。將有機(jī)層轉(zhuǎn)入干燥的小錐將有機(jī)層轉(zhuǎn)入干燥的小錐形瓶中，加無(wú)水硫酸鈉干形瓶中，加無(wú)水硫酸鈉干燥半小時(shí)。燥半小時(shí)。菠菜色素的提取菠菜色素的提取3、蒸餾、蒸餾 將干燥后的液體過(guò)濾將干燥后的液體過(guò)濾至圓底燒瓶中，進(jìn)行蒸餾，至圓底燒瓶中，進(jìn)行蒸餾，直至燒瓶中濃縮液直至燒瓶中濃縮液1mL左左右。右。菠菜色素的提取菠菜色素的提取薄層層析薄層層析1、點(diǎn)樣、點(diǎn)樣 先用鉛筆在距薄層板一端先用鉛筆在距薄層板一端1cm處輕輕劃一橫線作為起始處輕輕劃一橫線作為起始線，然后用毛細(xì)管吸取樣品，線，然后用毛細(xì)管吸取樣品，在起始線上小心點(diǎn)樣，斑點(diǎn)直在起始線上小心點(diǎn)樣，斑點(diǎn)直徑一般不超過(guò)徑一般不超過(guò)2mm。若在同。若在同一板上

8、點(diǎn)幾個(gè)樣，樣點(diǎn)間距離一板上點(diǎn)幾個(gè)樣，樣點(diǎn)間距離應(yīng)為應(yīng)為1-1.5cm。2、展開(kāi)、展開(kāi) 在層析缸中加入配好的展開(kāi)劑，在層析缸中加入配好的展開(kāi)劑，使其高度不超過(guò)使其高度不超過(guò)1cm。將點(diǎn)好的。將點(diǎn)好的薄層板小心放入層析缸中，點(diǎn)樣薄層板小心放入層析缸中，點(diǎn)樣一端朝下，浸入展開(kāi)劑中。蓋好一端朝下，浸入展開(kāi)劑中。蓋好瓶蓋，觀察展開(kāi)劑前沿上升到一瓶蓋，觀察展開(kāi)劑前沿上升到一定高度時(shí)取出，盡快在板上標(biāo)上定高度時(shí)取出，盡快在板上標(biāo)上展開(kāi)劑前沿位置。展開(kāi)劑前沿位置。薄層層析薄層層析薄層層析薄層層析色素種類色素種類胡蘿卜素胡蘿卜素葉黃素葉黃素葉綠素葉綠素a a葉綠素葉綠素b b展展開(kāi)開(kāi)劑劑1 1a ab bR R

9、f f展展開(kāi)開(kāi)劑劑2 2a ab bR Rf f薄層層析結(jié)果薄層層析結(jié)果展開(kāi)劑：展開(kāi)劑：（1 1）石油醚）石油醚- -丙酮，體積比為丙酮，體積比為4:1 （2 2）石油醚）石油醚- -乙酸乙酯，體積比為乙酸乙酯，體積比為3:2ab溶劑前沿柱層析柱層析1、裝柱、裝柱 在層析柱中加入在層析柱中加入60mL石油石油醚，稱取醚，稱取30g中性氧化鋁中性氧化鋁緩緩緩緩加入層析柱中。打開(kāi)下端活加入層析柱中。打開(kāi)下端活塞，放出溶劑，直至氧化鋁塞，放出溶劑，直至氧化鋁表面剩下表面剩下12mm高，關(guān)閉活高，關(guān)閉活塞。塞。 柱層析柱層析2、過(guò)柱、過(guò)柱 將菠菜色素的濃縮液用滴管將菠菜色素的濃縮液用滴管小心滴加到層析

10、柱頂部。加完小心滴加到層析柱頂部。加完后打開(kāi)下端活塞，讓液面下降后打開(kāi)下端活塞，讓液面下降到柱面以下到柱面以下1mm左右，關(guān)閉活左右，關(guān)閉活塞。加數(shù)滴石油醚，打開(kāi)活塞，塞。加數(shù)滴石油醚，打開(kāi)活塞，使液面下降經(jīng)過(guò)幾次反復(fù)，使使液面下降經(jīng)過(guò)幾次反復(fù)，使色素全部進(jìn)入柱體。色素全部進(jìn)入柱體。 柱層析柱層析3、洗脫、洗脫 從柱頂加入石油醚從柱頂加入石油醚-丙酮溶丙酮溶液（液（9:1），層析即開(kāi)始進(jìn)行，），層析即開(kāi)始進(jìn)行，用錐形瓶收集。當(dāng)?shù)谝粋€(gè)有色用錐形瓶收集。當(dāng)?shù)谝粋€(gè)有色成分即將滴出時(shí)，取另一錐形成分即將滴出時(shí)，取另一錐形瓶收集。接收完后用石油醚瓶收集。接收完后用石油醚-丙酮溶液（丙酮溶液（ 7:3 ）

11、洗脫，換錐）洗脫，換錐形瓶接收。形瓶接收。 注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)1、點(diǎn)樣不能戳破薄層板面，各樣點(diǎn)間距、點(diǎn)樣不能戳破薄層板面，各樣點(diǎn)間距1-1.5cm，樣點(diǎn)直徑應(yīng)不超過(guò)，樣點(diǎn)直徑應(yīng)不超過(guò)2mm。2、展開(kāi)時(shí)，不要讓展開(kāi)劑前沿上升至底線。、展開(kāi)時(shí)，不要讓展開(kāi)劑前沿上升至底線。否則，無(wú)法確定展開(kāi)劑上升高度，即無(wú)法否則，無(wú)法確定展開(kāi)劑上升高度，即無(wú)法求得求得Rf 值和準(zhǔn)確判斷粗產(chǎn)物中各組分在薄值和準(zhǔn)確判斷粗產(chǎn)物中各組分在薄層板上的相對(duì)位置。層板上的相對(duì)位置。 3、層析柱中氧化鋁表面任何時(shí)候都不得露出、層析柱中氧化鋁表面任何時(shí)候都不得露出液面，以防有空氣進(jìn)入。液面，以防有空氣進(jìn)入。4、待色素全部進(jìn)入柱體后，方可進(jìn)行洗脫，、待色素全部進(jìn)入柱體后，方可進(jìn)行洗脫，以防有拖尾影響分離效果。以防有拖尾影響分離效果。思考題思考題P125 2