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1、實驗九實驗九 紫外分光光度法測定紫外分光光度法測定 核酸的含量核酸的含量一一 實驗原理實驗原理 核酸、核苷酸及其衍生物都具有共軛核酸、核苷酸及其衍生物都具有共軛雙鍵系統(tǒng)，能吸收雙鍵系統(tǒng)，能吸收紫外光紫外光。RNA和和DNA的的紫外吸收高峰在紫外吸收高峰在A260nm波長處。一般在波長處。一般在A260nm波長下，每波長下，每ml含含1gRNA溶液的光吸溶液的光吸收值為收值為0.022。所以測定未知濃度。所以測定未知濃度RNA溶液溶液A260nm波長的光吸收值即可計算出其中核酸波長的光吸收值即可計算出其中核酸的含量。的含量。二二 實驗操作實驗操作 1. 稱取核酸樣品稱取核酸樣品0.05g加入加入

2、2ml左右的左右的DW溶解（可在水浴鍋上加熱促其溶解）溶解（可在水浴鍋上加熱促其溶解）然后用玻璃棒然后用玻璃棒蘸取蘸取稀氨水調節(jié)稀氨水調節(jié)pH到到7使用使用pH試紙調節(jié)試紙調節(jié)調好后將樣品液定容調好后將樣品液定容到到5ml（使用（使用10ml量筒定容）量筒定容） 2. 取取2支離心管，按下表加樣支離心管，按下表加樣振蕩振蕩均勻均勻在冰箱中冷卻在冰箱中冷卻30min然后然后離心離心15min,V=8000離心管號離心管號12樣品液樣品液2ml2mlDW2ml-沉淀劑沉淀劑-2ml 3. 上清液稀釋上清液稀釋100倍：倍： 用移液管從離心管中移取用移液管從離心管中移取0.5ml上清液置上清液置于量筒中于量筒中用用DW定容到定容到50ml倒入小倒入小燒杯攪拌均勻燒杯攪拌均勻然后用紫外分光光度計測然后用紫外分光光度計測OD260nm值值A1,A24.

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