動(dòng)物細(xì)胞融合

1、2.2.2 動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞融合 與單克隆抗體與單克隆抗體齊河一中齊河一中 何濤何濤溫故而知新溫故而知新植物細(xì)胞雜交植物細(xì)胞雜交（馬鈴薯番茄）（馬鈴薯番茄）融合融合的原的原生質(zhì)生質(zhì)體體ABAB再再生生出出細(xì)細(xì)胞胞壁壁植物細(xì)胞的融合植物細(xì)胞的融合雜雜種種細(xì)細(xì)胞胞AB雜雜種種植植株株脫脫分分化化愈愈傷傷組組織織再再分分化化植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)原生質(zhì)體原生質(zhì)體B原生質(zhì)體原生質(zhì)體A去去 壁壁去去 壁壁人人工工誘誘導(dǎo)導(dǎo)植物細(xì)胞植物細(xì)胞A植物細(xì)胞植物細(xì)胞B傳說(shuō)中的天馬能否利用細(xì)胞工程傳說(shuō)中的天馬能否利用細(xì)胞工程技術(shù)得以實(shí)現(xiàn)呢？技術(shù)得以實(shí)現(xiàn)呢？三、動(dòng)物細(xì)胞融合三、動(dòng)物細(xì)胞融合1.1.概念：概念： 動(dòng)

2、物細(xì)胞融合也稱細(xì)胞雜交，是指動(dòng)物細(xì)胞融合也稱細(xì)胞雜交，是指兩兩個(gè)或多個(gè)個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)一個(gè)細(xì)胞的過(guò)細(xì)胞的過(guò)程。程。 融合后形成的具有兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞融合后形成的具有兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞遺傳信息的遺傳信息的單核細(xì)胞單核細(xì)胞，稱為雜交細(xì)胞。，稱為雜交細(xì)胞。2 2、動(dòng)物細(xì)胞融合基本原理：、動(dòng)物細(xì)胞融合基本原理： 與植物原生質(zhì)體融合的基本原理相與植物原生質(zhì)體融合的基本原理相同，即細(xì)胞膜的流動(dòng)性。同，即細(xì)胞膜的流動(dòng)性。3、誘導(dǎo)方式、誘導(dǎo)方式物理法：物理法：化學(xué)法：化學(xué)法：生物法：生物法： 滅活的病毒滅活的病毒. .過(guò)程：過(guò)程：、植物體細(xì)胞雜交和動(dòng)物細(xì)胞融合的比較、植物體細(xì)胞雜交和動(dòng)物

3、細(xì)胞融合的比較比較項(xiàng)目比較項(xiàng)目植物體細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜交動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞融合原理原理細(xì)胞融合方法細(xì)胞融合方法誘導(dǎo)方法誘導(dǎo)方法用途用途獲得獲得植物新品種植物新品種細(xì)胞膜的細(xì)胞膜的流動(dòng)性流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞的全能性細(xì)胞的全能性去除細(xì)胞壁去除細(xì)胞壁后誘后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合導(dǎo)原生質(zhì)體融合使細(xì)胞分散后使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合誘導(dǎo)細(xì)胞融合物理（離心、振物理（離心、振蕩、電刺激）蕩、電刺激）化學(xué)（聚乙二醇）化學(xué)（聚乙二醇）電激、電激、PEG、滅活的病毒滅活的病毒制備單克隆抗體制備單克隆抗體、動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)的發(fā)展簡(jiǎn)史告訴、動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)的發(fā)展簡(jiǎn)史告訴我們：科學(xué)技術(shù)是不斷發(fā)展的。那么，

4、我們：科學(xué)技術(shù)是不斷發(fā)展的。那么，實(shí)現(xiàn)動(dòng)物細(xì)胞融合有什么意義呢？實(shí)現(xiàn)動(dòng)物細(xì)胞融合有什么意義呢？打破生殖隔離，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能；打破生殖隔離，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能；廣泛應(yīng)用多個(gè)學(xué)科領(lǐng)域；廣泛應(yīng)用多個(gè)學(xué)科領(lǐng)域；重要用途：重要用途：四、單克隆抗體四、單克隆抗體 自主閱讀自主閱讀P52：傳統(tǒng)的抗體的生產(chǎn)方法及缺陷是傳統(tǒng)的抗體的生產(chǎn)方法及缺陷是什么？什么？1.B1.B淋巴細(xì)胞受抗原刺激后，可以產(chǎn)生特異性抗淋巴細(xì)胞受抗原刺激后，可以產(chǎn)生特異性抗體。體。2. 2.動(dòng)物在免疫反應(yīng)過(guò)程中，體內(nèi)產(chǎn)生特異性抗動(dòng)物在免疫反應(yīng)過(guò)程中，體內(nèi)產(chǎn)生特異性抗體種類可達(dá)百萬(wàn)種以上，每種抗體對(duì)特定的抗原體種類可達(dá)百萬(wàn)種以上，每種抗

5、體對(duì)特定的抗原具有特異性免疫作用。具有特異性免疫作用。3. 3.但但每一個(gè)淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體每一個(gè)淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體。4. 4.在體外，在體外，一個(gè)淋巴細(xì)胞是不可能增殖的。一個(gè)淋巴細(xì)胞是不可能增殖的。產(chǎn)量低、純度低；產(chǎn)量低、純度低；而且制備抗體特異性差。而且制備抗體特異性差。分析：分析： B B淋巴細(xì)胞與抗體的關(guān)系淋巴細(xì)胞與抗體的關(guān)系、單克隆抗體、單克隆抗體McAb（概念）（概念） 由單個(gè)由單個(gè)B B淋巴細(xì)胞經(jīng)過(guò)淋巴細(xì)胞經(jīng)過(guò)無(wú)性繁殖無(wú)性繁殖（克隆），（克?。纬苫蛐拖嗤募?xì)胞群，這一細(xì)胞群所產(chǎn)形成基因型相同的細(xì)胞群，這一細(xì)胞群所產(chǎn)生的生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體化學(xué)

6、性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體稱為單稱為單克隆抗體?？寺】贵w。 那么，如何那么，如何大量獲得化學(xué)性質(zhì)單一、特異大量獲得化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體性強(qiáng)的抗體？（即？（即單克隆抗體單克隆抗體）一個(gè)一個(gè)B B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體骨髓瘤細(xì)胞（癌細(xì)胞）能無(wú)限增殖骨髓瘤細(xì)胞（癌細(xì)胞）能無(wú)限增殖雜種細(xì)胞雜種細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)、設(shè)計(jì)方案：、設(shè)計(jì)方案：動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞融合單克隆單克隆抗體抗體既能產(chǎn)生特異性抗既能產(chǎn)生特異性抗體，又能大量繁殖體，又能大量繁殖雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)融合技術(shù)B 、BB 、B瘤瘤 、瘤瘤、瘤瘤 、瘤、瘤只有雜種細(xì)

7、只有雜種細(xì)胞才能活胞才能活動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)3.3.單克隆抗體制單克隆抗體制備過(guò)程備過(guò)程獲得產(chǎn)生相應(yīng)抗獲得產(chǎn)生相應(yīng)抗體的體的B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞過(guò)程總結(jié)過(guò)程總結(jié)第一步：免疫機(jī)體誘導(dǎo)相應(yīng)第一步：免疫機(jī)體誘導(dǎo)相應(yīng)B淋巴細(xì)胞的產(chǎn)生淋巴細(xì)胞的產(chǎn)生第二步：獲取第二步：獲取B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合第三步：在選擇培養(yǎng)基上選擇雜交瘤細(xì)胞第三步：在選擇培養(yǎng)基上選擇雜交瘤細(xì)胞第四步：培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞從中挑選出能產(chǎn)生所第四步：培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞從中挑選出能產(chǎn)生所 需抗體的雜交瘤細(xì)胞需抗體的雜交瘤細(xì)胞第五步：將該雜交瘤細(xì)胞在體內(nèi)或體外培養(yǎng)第五步：將該雜交瘤細(xì)胞在體內(nèi)或體外培養(yǎng) 增增殖，從中提取單克隆抗體增增殖，從中提取單克隆抗體4 4、單克隆抗體的、單克隆抗體的特點(diǎn)和應(yīng)用特點(diǎn)和應(yīng)用與常規(guī)抗體相比，單克隆抗體與常規(guī)抗體相比，單克隆抗體特異性強(qiáng)，特異性強(qiáng)，靈敏度高，產(chǎn)量高，靈敏度高，產(chǎn)量高，優(yōu)越性十分明顯。優(yōu)越性十分明顯。應(yīng)用：應(yīng)用：特點(diǎn)：特點(diǎn)：可用于作為診斷試劑：有準(zhǔn)確，高效，快速的可用于作為診斷試劑：有準(zhǔn)確，高效，快速的優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)可用于疾病治療可用于疾病治療可用于運(yùn)載藥物（作為運(yùn)載對(duì)應(yīng)疾病的藥物的可用于運(yùn)載藥物（作為運(yùn)載對(duì)應(yīng)疾病的藥物的 “生物導(dǎo)彈生物導(dǎo)彈“。）。）“生物導(dǎo)彈生物導(dǎo)彈”單克隆抗體藥物單克隆抗體藥物課堂小結(jié)課堂小結(jié)兩個(gè)過(guò)程兩個(gè)過(guò)程動(dòng)物細(xì)胞融合過(guò)程動(dòng)物細(xì)胞融