土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)課件

1、土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)第一頁，共三十八頁。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)第二頁，共三十八頁。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)硝化細(xì)菌、固氮菌、根瘤菌：硝化細(xì)菌、固氮菌、根瘤菌：硝化細(xì)菌硝化細(xì)菌固氮菌固氮菌根瘤菌根瘤菌代謝方式代謝方式自養(yǎng)需氧型自養(yǎng)需氧型異養(yǎng)需氧型異養(yǎng)需氧型異養(yǎng)需氧型異養(yǎng)需氧型能量來源能量來源NH3有機(jī)物有機(jī)物豆科植物的有機(jī)物豆科植物的有機(jī)物轉(zhuǎn)換過程轉(zhuǎn)換過程將將NH3轉(zhuǎn)變成轉(zhuǎn)變成NO2-、 NO3-固氮酶催化機(jī)理總反應(yīng)式固氮酶催化機(jī)理總反應(yīng)式為：為： N2+8 e-+8 H+16 MgATP+16 H2O2 NH3+H2+16MgADP + 16 Pi在固氮酶的作用下

2、，在固氮酶的作用下，根瘤中的菌體將分子根瘤中的菌體將分子態(tài)氮轉(zhuǎn)化為氨態(tài)氮態(tài)氮轉(zhuǎn)化為氨態(tài)氮（同左）（同左）第三頁，共三十八頁。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)第四頁，共三十八頁。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)第五頁，共三十八頁。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)第六頁，共三十八頁。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)第七頁，共三十八頁。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)思考思考2該培養(yǎng)基對(duì)微生物該培養(yǎng)基對(duì)微生物 （具有（具有(jyu)，不具有，不具有(jyu)）選擇作用。如果具有）選擇作用。如果具有(jyu)，其，其選擇機(jī)制是選擇機(jī)制是 。具有具有(jyu)只有能夠只有能夠(nnggu)以尿素作為氮源

3、的微生以尿素作為氮源的微生物才能在該培養(yǎng)基上生長物才能在該培養(yǎng)基上生長第八頁，共三十八頁。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)第九頁，共三十八頁。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)第十頁，共三十八頁。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù) 當(dāng)樣品的稀釋當(dāng)樣品的稀釋(xsh)度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表 面生長的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋面生長的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋 液中的一個(gè)活菌，通過統(tǒng)計(jì)平板上的液中的一個(gè)活菌，通過統(tǒng)計(jì)平板上的 菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有 多少活菌。多少活菌。第十一頁，共三十八頁。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)第十二頁，共三十八頁。土

4、壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)如何如何(rh)從平板上的菌落數(shù)推測出每克從平板上的菌落數(shù)推測出每克樣品中的菌落數(shù)？樣品中的菌落數(shù)？教材教材(jioci)P22第十三頁，共三十八頁。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)第十四頁，共三十八頁。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)實(shí)例實(shí)例(shl)分析分析P22 你認(rèn)為哪個(gè)你認(rèn)為哪個(gè)(n ge)同學(xué)的結(jié)果更接近真實(shí)同學(xué)的結(jié)果更接近真實(shí)值？值？ 你認(rèn)為這兩位同學(xué)的實(shí)驗(yàn)需要改進(jìn)你認(rèn)為這兩位同學(xué)的實(shí)驗(yàn)需要改進(jìn)嗎？如果需要，如何改進(jìn)？嗎？如果需要，如何改進(jìn)？第十五頁，共三十八頁。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)實(shí)例實(shí)例(shl)分析分析P22 第一同學(xué)只涂布了一個(gè)平

5、板，第一同學(xué)只涂布了一個(gè)平板，沒有設(shè)置沒有設(shè)置重復(fù)組，因此結(jié)果重復(fù)組，因此結(jié)果(ji gu)不具有說服力。不具有說服力。 第二位同學(xué)考慮到設(shè)置重復(fù)組的問題，第二位同學(xué)考慮到設(shè)置重復(fù)組的問題，涂布了三個(gè)平板，但是涂布了三個(gè)平板，但是其中其中1個(gè)平板的計(jì)個(gè)平板的計(jì)數(shù)結(jié)果與數(shù)結(jié)果與2個(gè)相差太遠(yuǎn)，說明在操作過程個(gè)相差太遠(yuǎn)，說明在操作過程中可能出現(xiàn)了錯(cuò)誤，因此，不能簡單地將中可能出現(xiàn)了錯(cuò)誤，因此，不能簡單地將3個(gè)平板的計(jì)數(shù)值用來求平均值個(gè)平板的計(jì)數(shù)值用來求平均值。第十六頁，共三十八頁。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)第十七頁，共三十八頁。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)第十八頁，共三十八頁。土壤中分解尿

6、素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)菌落計(jì)數(shù)菌落計(jì)數(shù)配制土壤配制土壤溶液溶液系列稀釋系列稀釋涂布平板涂布平板與培養(yǎng)與培養(yǎng)根據(jù)圖示根據(jù)圖示27填寫以下實(shí)驗(yàn)填寫以下實(shí)驗(yàn)(shyn)流程：流程：實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：第十九頁，共三十八頁。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù) 從肥沃、濕潤的土壤中取樣。先鏟去表層土從肥沃、濕潤的土壤中取樣。先鏟去表層土3cm3cm左右，再取樣（左右，再取樣（3-8cm3-8cm），將樣品裝入事先準(zhǔn)備），將樣品裝入事先準(zhǔn)備(zhnbi)(zhnbi)好的信封中。好的信封中。 制備以制備以的選擇培養(yǎng)基。的選擇培養(yǎng)基。第二十頁，共三十八頁。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù) 準(zhǔn)備準(zhǔn)備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)

7、基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基和和選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基將菌液稀釋將菌液稀釋相同的倍數(shù)，在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上生長的菌落數(shù)目相同的倍數(shù)，在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上生長的菌落數(shù)目應(yīng)明顯多于選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目，因此，應(yīng)明顯多于選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目，因此，可以作為可以作為，。由于初次實(shí)驗(yàn)，對(duì)于稀釋的范圍沒有把握。由于初次實(shí)驗(yàn)，對(duì)于稀釋的范圍沒有把握，因此選擇了一個(gè)較為寬泛的范圍：稀釋倍數(shù)為，因此選擇了一個(gè)較為寬泛的范圍：稀釋倍數(shù)為10103 310107 7。每個(gè)稀釋度下需要。每個(gè)稀釋度下需要3 3個(gè)個(gè)選擇培養(yǎng)基，選擇培養(yǎng)基，1 1個(gè)牛肉膏個(gè)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，因此共需要蛋白胨培養(yǎng)基，因此共需要1515個(gè)選擇培養(yǎng)基，

8、個(gè)選擇培養(yǎng)基，5 5個(gè)牛肉個(gè)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。此外，還需要準(zhǔn)備膏蛋白胨培養(yǎng)基。此外，還需要準(zhǔn)備8 8個(gè)個(gè)滅菌滅菌(mi jn)(mi jn)的的試管和試管和1 1個(gè)個(gè)滅菌的移液管。滅菌的移液管。第二十一頁，共三十八頁。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)第二十二頁，共三十八頁。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)第二十三頁，共三十八頁。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)時(shí)要實(shí)驗(yàn)時(shí)要對(duì)對(duì)培養(yǎng)皿作好培養(yǎng)皿作好標(biāo)記標(biāo)記。注明培。注明培養(yǎng)基類型養(yǎng)基類型(lixng)(lixng)、培養(yǎng)、培養(yǎng)時(shí)間、稀釋時(shí)間、稀釋度、培養(yǎng)物度、培養(yǎng)物等。等。 第二十四頁，共三十八頁。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)第二十五頁

9、，共三十八頁。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù) 當(dāng)菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)，選取菌落數(shù)在當(dāng)菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)，選取菌落數(shù)在3030300300的的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)平板進(jìn)行計(jì)數(shù)(j sh)(j sh)。在同一稀釋度下，。在同一稀釋度下，至少至少對(duì)對(duì)3 3個(gè)平板進(jìn)行重復(fù)計(jì)數(shù)，然后求出平均值個(gè)平板進(jìn)行重復(fù)計(jì)數(shù)，然后求出平均值，并根據(jù)平板所對(duì)應(yīng)的稀釋度計(jì)算出樣品中細(xì)菌并根據(jù)平板所對(duì)應(yīng)的稀釋度計(jì)算出樣品中細(xì)菌的數(shù)目。的數(shù)目。 第二十六頁，共三十八頁。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)第二十七頁，共三十八頁。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)（六）鑒定（六）鑒定：篩選后必鑒定：篩選后必鑒定 鑒別培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基：加入某種指示劑

10、或化學(xué)加入某種指示劑或化學(xué)藥品，不影響微生物的生存藥品，不影響微生物的生存鑒定分解尿素的細(xì)菌。鑒定分解尿素的細(xì)菌。原理：脲酶催化原理：脲酶催化(cu hu)(cu hu)尿素分解成氨尿素分解成氨培養(yǎng)基堿性增強(qiáng)培養(yǎng)基堿性增強(qiáng) 酚紅變紅酚紅變紅脲酶脲酶陽性陽性第二十八頁，共三十八頁。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)第二十九頁，共三十八頁。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)課題成果課題成果(chnggu)與評(píng)價(jià)與評(píng)價(jià) （一）培養(yǎng)（一）培養(yǎng)(piyng)(piyng)物中是否有雜菌污染物中是否有雜菌污染以及選擇培養(yǎng)以及選擇培養(yǎng)(piyng)(piyng)基是否篩選出菌落基是否篩選出菌落 ，說明培養(yǎng)基沒有

11、被雜菌污染。，說明培養(yǎng)基沒有被雜菌污染。，說明，說明選擇培養(yǎng)基已篩選出一些菌落。選擇培養(yǎng)基已篩選出一些菌落。第三十頁，共三十八頁。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)如果學(xué)生選取的是同一種土樣，統(tǒng)計(jì)的結(jié)果應(yīng)該如果學(xué)生選取的是同一種土樣，統(tǒng)計(jì)的結(jié)果應(yīng)該接近。如果結(jié)果相差太遠(yuǎn)，需要接近。如果結(jié)果相差太遠(yuǎn)，需要(xyo)(xyo)進(jìn)一步分析產(chǎn)生進(jìn)一步分析產(chǎn)生差異的原因。差異的原因。（二）樣品的稀釋操作（二）樣品的稀釋操作(cozu)是否成功是否成功 如果得到了如果得到了2 2個(gè)或個(gè)或2 2個(gè)以上菌落數(shù)目在個(gè)以上菌落數(shù)目在3030300300的的平板，則說明稀釋操作比較成功平板，則說明稀釋操作比較成功(c

12、hnggng)(chnggng)，并能夠進(jìn)行，并能夠進(jìn)行菌落的計(jì)數(shù)。菌落的計(jì)數(shù)。 （三）重復(fù)組的結(jié)果是否一致（三）重復(fù)組的結(jié)果是否一致第三十一頁，共三十八頁。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)相關(guān)相關(guān)(xinggun)(xinggun)連連接：接：第三十二頁，共三十八頁。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)相關(guān)相關(guān)(xinggun)(xinggun)連連接：接：第三十三頁，共三十八頁。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)第三十四頁，共三十八頁。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)1.1.對(duì)細(xì)菌群體生長規(guī)律測定的正確的表述是（對(duì)細(xì)菌群體生長規(guī)律測定的正確的表述是（ ） A.A.在液體培養(yǎng)基上進(jìn)行在液體培養(yǎng)基上

13、進(jìn)行 B.B.至少接種一種細(xì)菌至少接種一種細(xì)菌 C.C.接種一個(gè)細(xì)菌接種一個(gè)細(xì)菌 D.D.及時(shí)補(bǔ)充消耗的營養(yǎng)物質(zhì)及時(shí)補(bǔ)充消耗的營養(yǎng)物質(zhì) 2.2.使用選擇培養(yǎng)基的目的是（使用選擇培養(yǎng)基的目的是（ ） A.A.培養(yǎng)細(xì)菌培養(yǎng)細(xì)菌 B.B.培養(yǎng)真菌培養(yǎng)真菌 C.C.使需要的微生物大量繁殖使需要的微生物大量繁殖 D.D.表現(xiàn)某微生物的特定性狀與其他表現(xiàn)某微生物的特定性狀與其他(qt)(qt)微生物加以區(qū)別微生物加以區(qū)別3.3.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分別是能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分別是( )( ) A.CO A.CO2 2和和N N2 2 B. B.葡萄糖和葡萄糖和NHNH3 3

14、 C.COC.CO2 2和尿素和尿素 D.D.葡萄糖和尿素葡萄糖和尿素A AC CD D第三十五頁，共三十八頁。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)4.4.下列說法不正確的是（下列說法不正確的是（ ） A.A.科學(xué)家從科學(xué)家從70708080度熱泉中分離到耐高溫的度熱泉中分離到耐高溫的TaqDNATaqDNA聚合酶聚合酶 B.B.統(tǒng)計(jì)某一稀釋度的統(tǒng)計(jì)某一稀釋度的5 5個(gè)平板的菌落數(shù)依次為個(gè)平板的菌落數(shù)依次為M1M1、M2M2、M3M3、M4M4、M5M5，以，以M3M3作為該樣品菌落數(shù)的估計(jì)值作為該樣品菌落數(shù)的估計(jì)值 C.C.設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)的主要目的是排除實(shí)驗(yàn)組中非測試因素對(duì)設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)的主要目的是

15、排除實(shí)驗(yàn)組中非測試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度 D.D.同其他生物環(huán)境相比同其他生物環(huán)境相比(xin b)(xin b)，土壤中的微生物數(shù)量最大，種，土壤中的微生物數(shù)量最大，種類最多。類最多。5.5.為培養(yǎng)和分離出酵母菌并淘汰雜菌，常在培養(yǎng)基中加入為培養(yǎng)和分離出酵母菌并淘汰雜菌，常在培養(yǎng)基中加入（）（） A.A.較多的氮源物質(zhì)較多的氮源物質(zhì) B.B.較多的碳源物質(zhì)較多的碳源物質(zhì) C.C.青霉素類藥物青霉素類藥物 D.D.高濃度食鹽高濃度食鹽B BC C第三十六頁，共三十八頁。土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)（09，寧夏，寧夏，15分）分）（1）

16、在大腸桿菌培養(yǎng)過程中，除考慮）在大腸桿菌培養(yǎng)過程中，除考慮(kol)營養(yǎng)條件外，還要考慮營養(yǎng)條件外，還要考慮(kol)_、_和滲透壓等條件。由于該細(xì)菌具有體積小、結(jié)構(gòu)簡單、變異類型容易選擇、和滲透壓等條件。由于該細(xì)菌具有體積小、結(jié)構(gòu)簡單、變異類型容易選擇、_、_等優(yōu)點(diǎn)，因此常作為遺傳學(xué)研究的實(shí)驗(yàn)材料。等優(yōu)點(diǎn)，因此常作為遺傳學(xué)研究的實(shí)驗(yàn)材料。 （2）在微生物培養(yǎng)操作過程中，為防止雜菌污染，需對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進(jìn)行）在微生物培養(yǎng)操作過程中，為防止雜菌污染，需對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進(jìn)行_（消毒、滅菌）；操作者的雙手需要進(jìn)行清洗和（消毒、滅菌）；操作者的雙手需要進(jìn)行清洗和_；靜止空氣；靜止空氣中的細(xì)菌可用紫外

17、線殺滅，其原因是紫外線能使蛋白質(zhì)變性，還能中的細(xì)菌可用紫外線殺滅，其原因是紫外線能使蛋白質(zhì)變性，還能_。 （3）若用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)大腸桿菌活菌的個(gè)數(shù)，要想使所得估計(jì)值更接近實(shí)際值，除應(yīng)）若用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)大腸桿菌活菌的個(gè)數(shù)，要想使所得估計(jì)值更接近實(shí)際值，除應(yīng)嚴(yán)格操作、多次重復(fù)外，還應(yīng)保證待測樣品稀釋的嚴(yán)格操作、多次重復(fù)外，還應(yīng)保證待測樣品稀釋的_。 （4）通常，對(duì)獲得的純菌種還可以依據(jù)菌落的形狀、大小等菌落特征對(duì)細(xì)菌進(jìn)行初步的）通常，對(duì)獲得的純菌種還可以依據(jù)菌落的形狀、大小等菌落特征對(duì)細(xì)菌進(jìn)行初步的_。 （5）培養(yǎng)大腸桿菌時(shí)，在接種前需要檢測培養(yǎng)基是否被污染。對(duì)于固體培養(yǎng)基應(yīng)采）培養(yǎng)大腸桿菌時(shí)，在接種前需要檢測培養(yǎng)基是否被污染。對(duì)于固體培養(yǎng)基應(yīng)采用的檢測方法是用的檢測方法是_。 （6）若用大腸桿菌進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，使用過的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)物必須經(jīng)過）若用大腸桿菌進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，使用過的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)物必須經(jīng)過_處理處理后才能丟棄，以防止培養(yǎng)物的擴(kuò)散。后才能丟棄，以防止培養(yǎng)物的擴(kuò)散。答案答案:（1）溫度）溫度 酸堿度酸堿度 易培養(yǎng)易培養(yǎng) 生活周期短生活周期短 （2）滅菌）滅菌 消毒消毒 損傷損傷(snshng)DNA的結(jié)構(gòu)的結(jié)構(gòu) （3）比例合適）比例合適 （4）鑒定）鑒定(或分類或分類)（5）將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適宜的時(shí)間）將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適