艾滋病檢測技術及診斷

1、艾滋病檢測技術及診斷艾滋病檢測技術及診斷檢測依據和行業(yè)標準樣品的采集和處理n樣品種類及用途樣品種類及用途n血液標本的采集血液標本的采集n抗凝劑的選擇抗凝劑的選擇n樣品的保存樣品的保存n樣品的運送樣品的運送樣品種類及用途 n全血、血清、血漿、口腔黏膜滲出液、尿液及干血斑全血、血清、血漿、口腔黏膜滲出液、尿液及干血斑（ DBS ）樣品可用于）樣品可用于HIV抗體檢測。抗體檢測。n全血、血清、血漿、病毒培養(yǎng)上清液可用于全血、血清、血漿、病毒培養(yǎng)上清液可用于HIV抗原檢測。抗原檢測。n抗凝全血可用于抗凝全血可用于CD4+和和CD8+T淋巴細胞測定。淋巴細胞測定。n血漿、血漿、DBS可用于可用于HIV-

2、1病毒載量、基因型和耐藥檢測。病毒載量、基因型和耐藥檢測。n淋巴細胞富集液、外周血單核淋巴細胞（淋巴細胞富集液、外周血單核淋巴細胞（PBMC）及全血）及全血可用于可用于HIV核酸定性與定量、基因型檢測和核酸定性與定量、基因型檢測和HIV-1分離培分離培養(yǎng)。養(yǎng)。血液標本的采集n抗凝全血：消毒局部皮膚，用有抗凝劑的真空采血管抽取抗凝全血：消毒局部皮膚，用有抗凝劑的真空采血管抽取適量靜脈血，或用一次性注射器抽取靜脈血，轉移至加有適量靜脈血，或用一次性注射器抽取靜脈血，轉移至加有抗凝劑的試管中，輕輕抗凝劑的試管中，輕輕顛倒混勻顛倒混勻68次，備用。次，備用。n血漿：將采集的抗凝全血血漿：將采集的抗凝全

3、血15003000r/min離心離心15分鐘，分鐘，上層即為血漿，吸出置于合適的容器中，備用。上層即為血漿，吸出置于合適的容器中，備用。n血清：根據需要，用不含抗凝劑的真空采血管抽取血清：根據需要，用不含抗凝劑的真空采血管抽取510ml靜脈血，或一次性注射器抽取靜脈血，轉移至無靜脈血，或一次性注射器抽取靜脈血，轉移至無抗凝劑的試管中，室溫下自然放置抗凝劑的試管中，室溫下自然放置12小時，待血液凝固、小時，待血液凝固、血塊收縮后再用血塊收縮后再用15003000r/min離心離心15分鐘，吸出血清，分鐘，吸出血清，置于合適的容器中，備用。置于合適的容器中，備用。抗凝劑選擇 nCD4+和和CD8+

4、T淋巴細胞檢測：淋巴細胞檢測：EDTA、肝素肝素、枸櫞酸鈉、枸櫞酸鈉n病毒分離、核酸檢測：病毒分離、核酸檢測： EDTA、枸櫞酸鈉、枸櫞酸鈉樣品的保存 n抗體檢測：血清或血漿樣品，抗體檢測：血清或血漿樣品，短期短期（1周）內進行檢測的周）內進行檢測的可存放于可存放于28，一周以上一周以上應存放于應存放于-20 以下。以下。n核酸檢測：核酸檢測：48h內分離血漿，內分離血漿，4天內天內檢測可存放于檢測可存放于4 ,3個月內個月內存放于存放于-20 以下，以下，3個月以上個月以上-70 以下保存。以下保存。nCD4+T淋巴細胞檢測：室溫保存，時間不超過淋巴細胞檢測：室溫保存，時間不超過24h。如果

5、。如果用用CD45設門，樣品保存不超過設門，樣品保存不超過72h。樣品的保存n篩查陽性樣品應及時進行補充試驗，篩查陰性樣品，可根篩查陽性樣品應及時進行補充試驗，篩查陰性樣品，可根據具體需要決定保存時間，建議至少保存據具體需要決定保存時間，建議至少保存1 1個月個月。特殊用。特殊用途或專項項目的樣品根據具體要求確定保存時間。補充試途或專項項目的樣品根據具體要求確定保存時間。補充試驗陽性樣品按照國家生物樣品管理的有關規(guī)定執(zhí)行。驗陽性樣品按照國家生物樣品管理的有關規(guī)定執(zhí)行。樣品的運送n標本篩查陽性（標本篩查陽性（復檢需用三代試劑復檢需用三代試劑），送檢單位必須聯(lián)系），送檢單位必須聯(lián)系受檢者，在受檢者

6、，在仔細核實仔細核實受檢者身份等信息后重新采集受檢者身份等信息后重新采集1 1份全份全血。將篩查陽性的血清與重新采集的全血共血。將篩查陽性的血清與重新采集的全血共2 2份份樣品一同樣品一同送至本中心。要求送檢血清量不得少于送至本中心。要求送檢血清量不得少于0.5ml0.5ml，送檢單位，送檢單位對重新采集的全血不得做任何處理。標本的標識須用正楷對重新采集的全血不得做任何處理。標本的標識須用正楷字標明受檢者姓名、性別和采集時間（年字標明受檢者姓名、性別和采集時間（年/ /月月/ /日）。日）。n篩查陽性的血清應裝于篩查陽性的血清應裝于1.5ml1.5ml凍存管內，如果沒有也可裝凍存管內，如果沒有

7、也可裝于真空采血管內，禁止使用除此之外的其他容器。于真空采血管內，禁止使用除此之外的其他容器。樣品的運送n包裝要求：應采用包裝要求：應采用WHOWHO提出的三級包裝系統(tǒng)提出的三級包裝系統(tǒng) 第一層容器第一層容器：裝樣品，要求防滲漏。樣品應置于帶蓋的：裝樣品，要求防滲漏。樣品應置于帶蓋的試管內，試管上應有明顯的標記，標明樣品的編號或受檢試管內，試管上應有明顯的標記，標明樣品的編號或受檢者姓名、種類和采集時間。在試管的周圍應墊有緩沖吸水者姓名、種類和采集時間。在試管的周圍應墊有緩沖吸水材料，以免碰碎。隨樣品應附有送檢單，材料，以免碰碎。隨樣品應附有送檢單，送檢單應與樣品送檢單應與樣品分開放置分開放置

8、。 第二層容器第二層容器：要求耐受性好、防滲漏、容納并保護第：要求耐受性好、防滲漏、容納并保護第一層容器，可以裝若干個第一層容器。將試管裝入專用帶一層容器，可以裝若干個第一層容器。將試管裝入專用帶蓋的容器內，容器的材料要易于消毒處理。蓋的容器內，容器的材料要易于消毒處理。 第三層容器第三層容器：放在一個運輸用外層包裝內，應易于消：放在一個運輸用外層包裝內，應易于消毒。在第三層容器外面要貼標簽（數量，收、發(fā)件人）。毒。在第三層容器外面要貼標簽（數量，收、發(fā)件人）。樣品的運送n用于抗體檢測的血清和血漿樣品應在用于抗體檢測的血清和血漿樣品應在凍存凍存條件下運送，用條件下運送，用于于CD4CD4+ +

9、和和CD8CD8+ +T T淋巴細胞測定的樣品應在淋巴細胞測定的樣品應在室溫下室溫下（18251825 ）運送。用于病毒載量檢測的樣品應在）運送。用于病毒載量檢測的樣品應在-20 -20 以下運以下運輸。輸。DBSDBS和尿液樣品應在和尿液樣品應在室溫下室溫下運送。運送。樣品的運送 樣品的運送n帶螺帽、墊圈的血清凍存管帶螺帽、墊圈的血清凍存管。樣品的運送n禁止使用禁止使用EPEP管管樣品的運送n禁止使用內旋蓋凍存管禁止使用內旋蓋凍存管樣品的運送n在凍存管外套帶蓋的第二層容器在凍存管外套帶蓋的第二層容器樣品的運送n置于帶冰袋的第三層容器中置于帶冰袋的第三層容器中樣品的運送 HIV抗體篩查檢測報告

10、的填寫抗體篩查檢測報告的填寫n篩查陽性的標本應填寫篩查陽性的標本應填寫HIV抗體篩查檢測報告，加蓋公章抗體篩查檢測報告，加蓋公章后送檢。后送檢。n報告單不得有空項報告單不得有空項 ，必須按規(guī)范要求認真完成篩查、復，必須按規(guī)范要求認真完成篩查、復檢（第一次）、復檢（第二次）三次試驗。檢（第一次）、復檢（第二次）三次試驗。n在檢測結果空白處填寫送檢樣品的在檢測結果空白處填寫送檢樣品的S/COS/CO值或發(fā)光值。值或發(fā)光值。nHIVHIV篩查實驗室篩查不能使用快速檢測方法。篩查實驗室篩查不能使用快速檢測方法。n兩次復檢需使用三代試劑，三代試劑檢測結果陽性方可送兩次復檢需使用三代試劑，三代試劑檢測結果

11、陽性方可送檢。檢。HIV抗體檢測nHIV抗體檢測的實驗室要求抗體檢測的實驗室要求nHIV抗體檢測的目的和要點抗體檢測的目的和要點n常規(guī)常規(guī)HIV抗體檢測方法抗體檢測方法n結果報告結果報告n質量控制質量控制HIV抗體檢測 HIV抗體檢測的實驗室要求抗體檢測的實驗室要求n應符合國家對實驗室生物安全的有關要求應符合國家對實驗室生物安全的有關要求n實驗室的質量控制按實驗室的質量控制按全國艾滋病檢測技術規(guī)范全國艾滋病檢測技術規(guī)范（2015）相關章節(jié)規(guī)定執(zhí)行相關章節(jié)規(guī)定執(zhí)行HIV抗體檢測 HIV抗體檢測的目的和要點抗體檢測的目的和要點n目的目的：1、HIV抗體檢測可用于診斷、血液篩查、監(jiān)測等?？贵w檢測可用

12、于診斷、血液篩查、監(jiān)測等。 2、以診斷為目的的檢測是為了確定個體、以診斷為目的的檢測是為了確定個體HIV感染狀感染狀 況，包括臨床檢測、自愿咨詢檢測、根據特殊需況，包括臨床檢測、自愿咨詢檢測、根據特殊需 要進行的體檢等。要進行的體檢等。 3、以血液篩查為目的的檢測是為了防止輸血傳播、以血液篩查為目的的檢測是為了防止輸血傳播 HIV，包括獻血員篩查和原料血漿篩查。，包括獻血員篩查和原料血漿篩查。 4、以監(jiān)測為目的的檢測是為了了解不同人群、以監(jiān)測為目的的檢測是為了了解不同人群HIV感感 染率及其變化趨勢，包括高危人群、重點人群和染率及其變化趨勢，包括高危人群、重點人群和 一般人群。一般人群。 HI

13、V抗體檢測n要點要點：1、根據目的選擇檢測方法及檢測策略。、根據目的選擇檢測方法及檢測策略。 2、嚴格遵守實驗室、嚴格遵守實驗室SOP。 3、結果判定以試劑盒說明書為標準。、結果判定以試劑盒說明書為標準。 4、篩查試驗有反應，須做補充試驗。補充試驗包、篩查試驗有反應，須做補充試驗。補充試驗包 括括抗體抗體確證試驗（確證試驗（WB、RIBA/LIA）和核酸）和核酸 試驗（定性和定量）。試驗（定性和定量）。 HIV抗體檢測常規(guī)常規(guī)HIV抗體檢測方法抗體檢測方法 酶聯(lián)免疫吸附試驗（酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA） 化學發(fā)光或免疫熒光試驗（化學發(fā)光或免疫熒光試驗（CIA/IFA） 快速檢測法（快速檢測法

14、（RT）：金標法、硒標法、明膠顆粒凝集）：金標法、硒標法、明膠顆粒凝集 試驗（試驗（PA） 蛋白免疫印跡試驗（蛋白免疫印跡試驗（WB）、條帶）、條帶/線性免疫試驗（線性免疫試驗（RIBA /LIA）篩查方法篩查方法抗體確證試抗體確證試驗驗HIV抗體檢測 結果報告結果報告n篩查報告篩查報告：篩查試驗無反應報告為：篩查試驗無反應報告為“HIV抗體陰性抗體陰性”；有；有反應必須進行復檢，復檢兩次檢測均無反應報告為反應必須進行復檢，復檢兩次檢測均無反應報告為“HIV抗體陰性抗體陰性”，復檢檢測均有反應或一個有反應一個無反應，復檢檢測均有反應或一個有反應一個無反應需進行需進行“補充試驗補充試驗”（本中心

15、只提供本中心只提供WB試驗試驗），報告為），報告為“HIV感染感染待確定待確定”，不能出具陽性報告。，不能出具陽性報告。n確證報告確證報告：符合：符合HIV-1陽性判斷標準，報告陽性判斷標準，報告“HIV-1抗體陽抗體陽性性”，符合，符合HIV-2抗體陽性判斷標準，報告抗體陽性判斷標準，報告“HIV-2抗體陽抗體陽性性”；符合陰性判斷標準，報告；符合陰性判斷標準，報告“HIV抗體陰性抗體陰性”；符合；符合不確定判定標準，報告不確定判定標準，報告“HIV抗體不確定抗體不確定”，備注中注明，備注中注明“24周后復檢周后復檢”。質量控制n酶免或發(fā)光法抗體檢測的室內質量控制酶免或發(fā)光法抗體檢測的室內質

16、量控制n快速法抗體檢測質控快速法抗體檢測質控質量控制 酶免或發(fā)光法抗體檢測的室內質量控制酶免或發(fā)光法抗體檢測的室內質量控制n試劑盒內部對照試劑盒內部對照：試劑盒內提供的陰陽性對照血清，用于判斷每：試劑盒內提供的陰陽性對照血清，用于判斷每次實驗的有效性，但次實驗的有效性，但不能作為室內質控品用不能作為室內質控品用。n室內質控品（外部對照）室內質控品（外部對照）： 1、為試劑盒組分的外部質控品，是為監(jiān)控檢測的重復性而設置，、為試劑盒組分的外部質控品，是為監(jiān)控檢測的重復性而設置，質控品定值必須為質控品定值必須為弱陽性弱陽性。 2、可判斷該批樣品檢測的有效性，因此，每次實驗必須含室內質、可判斷該批樣品

17、檢測的有效性，因此，每次實驗必須含室內質控品，其結果無效，必須重新試驗?？仄?，其結果無效，必須重新試驗。質量控制nLevey-Jennings質控圖質控圖l質控圖參數質控圖參數：算術平均值（：算術平均值（X）、標準差（）、標準差（S）、變異系）、變異系數（數（CV）及控制限。）及控制限。l控制規(guī)則控制規(guī)則：告警（：告警（12S）、失控（）、失控（13S）質量控制1、告警（、告警（12S）：當外部對照的）：當外部對照的S/CO值超過值超過2S范圍時，系統(tǒng)處于告警狀范圍時，系統(tǒng)處于告警狀態(tài)，應予注意，是否可以繼續(xù)檢測需要進一步觀察。態(tài)，應予注意，是否可以繼續(xù)檢測需要進一步觀察。警告警告:12S規(guī)則

18、違背規(guī)則違背質量控制2、失控（、失控（13S）：當外部對照的）：當外部對照的S/CO值超過值超過3S范圍時，系統(tǒng)處于失控狀范圍時，系統(tǒng)處于失控狀態(tài)，本次結果不能被接受。態(tài)，本次結果不能被接受。失控失控:13S規(guī)則違背規(guī)則違背質量控制n質控圖的分析及失控處理質控圖的分析及失控處理 實驗室應建立質控圖分析及失控情況處理的程序。實驗室應建立質控圖分析及失控情況處理的程序。當出現(xiàn)失控時，必須找出發(fā)生問題的原因，找出解決問題當出現(xiàn)失控時，必須找出發(fā)生問題的原因，找出解決問題的方法，并消除原因。的方法，并消除原因。質量控制 快速檢測質控快速檢測質控n試劑內對照試劑內對照 在質控窗口內出現(xiàn)在質控窗口內出現(xiàn)質

19、控帶質控帶，該質控帶是試劑自帶的內，該質控帶是試劑自帶的內部過程質控，說明實驗操作全部完成并且實驗所用材料處部過程質控，說明實驗操作全部完成并且實驗所用材料處于工作狀態(tài)。于工作狀態(tài)。清潔的檢測區(qū)背景清潔的檢測區(qū)背景是內部陰性過程質控。如是內部陰性過程質控。如試驗完成后未呈現(xiàn)紅色質控帶，說明試劑盒內質控無效，試驗完成后未呈現(xiàn)紅色質控帶，說明試劑盒內質控無效，該試驗結果無效，樣品必須重檢。該試驗結果無效，樣品必須重檢。實驗室質量控制n室內質控品對照室內質控品對照1、可采用商用質控品或自制質控品。質控品應包含抗體陽、可采用商用質控品或自制質控品。質控品應包含抗體陽性性 樣品和陰性樣品。樣品和陰性樣品

20、。不能使用酶聯(lián)試驗的外部質控品不能使用酶聯(lián)試驗的外部質控品。 更換試劑批號更換試劑批號 更換檢測人員更換檢測人員2、下列情況需做質量控制、下列情況需做質量控制 更換包裝更換包裝 更換廠家更換廠家 3、建議：每個檢測日檢測一次陽性和陰性質控品；如果日、建議：每個檢測日檢測一次陽性和陰性質控品；如果日檢測量大于檢測量大于50份樣品，至少應做份樣品，至少應做2次質控。次質控。實驗室檢測策略n窗口期窗口期：從：從HIV感染人體到感染者血清中的抗體、抗原或感染人體到感染者血清中的抗體、抗原或核酸等感染標志物能被檢測出之前的時期。（在窗口期內核酸等感染標志物能被檢測出之前的時期。（在窗口期內的血液已有感染

21、性?，F(xiàn)有診斷技術檢測的血液已有感染性?，F(xiàn)有診斷技術檢測HIV抗體、抗原和抗體、抗原和核酸的窗口期分別為感染后的核酸的窗口期分別為感染后的3周周、2周和周和1周左右。）周左右。）nHIV抗體篩查試驗抗體篩查試驗：初步了解機體血液或體液中有無：初步了解機體血液或體液中有無HIV 抗體的檢測方法，也包括同時檢測抗體和抗原的方法?？贵w的檢測方法，也包括同時檢測抗體和抗原的方法。nHIV補充試驗補充試驗：在獲得篩查試驗結果后，為了準確判斷，：在獲得篩查試驗結果后，為了準確判斷，繼續(xù)檢測機體血液或體液中有無繼續(xù)檢測機體血液或體液中有無HIV抗體或核酸的方法，抗體或核酸的方法，包括抗體確證試驗和核酸試驗。包

22、括抗體確證試驗和核酸試驗。實驗室檢測策略實驗室檢測策略n使用抗體檢測試劑的篩查檢測流程（三代試劑）使用抗體檢測試劑的篩查檢測流程（三代試劑）試劑1有反應無反應兩種試劑均有反應一有，一無均無反應補充試驗報告HIV抗體陰性實驗室檢測策略n使用抗原抗體檢測試劑的篩查流程（四代試劑）使用抗原抗體檢測試劑的篩查流程（四代試劑）抗原抗體檢測試劑有反應抗體檢測均有反應一有，一無補充試驗均無反應HIV-1核酸試驗或P24抗原試驗或24周后隨訪無反應報告HIV抗體陰性，P24抗原陰性HIV感染/AIDS的診斷n診斷原則診斷原則 以實驗室檢測為依據，結合臨床表現(xiàn)和參考流行病以實驗室檢測為依據，結合臨床表現(xiàn)和參考流

23、行病學資料綜合進行。學資料綜合進行。HIV抗體和病原學檢測是確診抗體和病原學檢測是確診HIV感染感染的依據；流行病學史是診斷急性期和嬰幼兒的依據；流行病學史是診斷急性期和嬰幼兒HIV感染的重感染的重要參考；要參考；CD4+T淋巴細胞檢測和臨床表現(xiàn)是淋巴細胞檢測和臨床表現(xiàn)是HIV感染分期感染分期診斷的主要依據；診斷的主要依據；AIDS的指征性疾病是的指征性疾病是AIDS診斷的重要診斷的重要依據。依據。HIV感染/AIDS的診斷nHIV感染的診斷感染的診斷l(xiāng)成人、青少年及成人、青少年及18個月以上兒童符合下列一項即可診斷個月以上兒童符合下列一項即可診斷：HIV抗體篩查試驗有反應和抗體篩查試驗有反應和HI