流式多因子檢測(cè)技術(shù)

1、流式高通量多因子檢測(cè)技術(shù)及應(yīng)用流式高通量多因子檢測(cè)技術(shù)及應(yīng)用 題綱題綱IIII. AimPlex AimPlex多因子檢測(cè)技術(shù)的原理和特質(zhì)多因子檢測(cè)技術(shù)的原理和特質(zhì)III.需具備什么樣的實(shí)驗(yàn)條件，才能開(kāi)展需具備什么樣的實(shí)驗(yàn)條件，才能開(kāi)展AimPlexAimPlex檢測(cè)工作？檢測(cè)工作？ VI. AimPlexAimPlex產(chǎn)品應(yīng)用產(chǎn)品應(yīng)用 I.多因子檢測(cè)技術(shù)在生物醫(yī)藥研究中的應(yīng)用多因子檢測(cè)技術(shù)在生物醫(yī)藥研究中的應(yīng)用 流式多因子檢測(cè)技術(shù)流式多因子檢測(cè)技術(shù)在生物醫(yī)藥研究中的應(yīng)用在生物醫(yī)藥研究中的應(yīng)用細(xì)胞因子與疾病細(xì)胞因子與疾病免疫調(diào)節(jié)作用：免疫調(diào)節(jié)作用： 調(diào)節(jié)著每個(gè)細(xì)胞乃至組織活動(dòng)； 直接參與了細(xì)胞

2、間相互作用以及細(xì)胞外微環(huán)境的變化參與疾病發(fā)生：參與疾病發(fā)生：類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎； 強(qiáng)直性脊柱炎SLE； 銀屑?。?細(xì)胞因子風(fēng)暴以Th淋巴細(xì)胞為樞紐的細(xì)胞因子調(diào)節(jié)網(wǎng)細(xì)胞因子與疾病治療細(xì)胞因子與疾病治療多因子檢測(cè)技術(shù)多因子檢測(cè)技術(shù)xMapR&DMillplexBioplexLuminex平臺(tái)平臺(tái)CBAFlowcytomix流式流式基礎(chǔ)基礎(chǔ)上上AimPlex流式多重定量技術(shù)流式多重定量技術(shù) -檢測(cè)細(xì)胞表面蛋白或胞內(nèi)蛋白檢測(cè)細(xì)胞表面蛋白或胞內(nèi)蛋白多因子檢測(cè)與疾病研究多因子檢測(cè)與疾病研究腫瘤生物學(xué)免疫相關(guān)代謝心血管疾病干細(xì)胞研究神經(jīng)生物學(xué)腫瘤移植細(xì)胞凋亡更少樣本更少樣本高通量高通量更短時(shí)間更短時(shí)間多

3、因子檢測(cè)涵蓋了很多研究領(lǐng)域多因子檢測(cè)涵蓋了很多研究領(lǐng)域多因子檢測(cè)產(chǎn)品廣泛應(yīng)用于疾病的研究多因子檢測(cè)產(chǎn)品廣泛應(yīng)用于疾病的研究 腫瘤腫瘤 ( (如肝癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、子宮頸癌等如肝癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、子宮頸癌等) ) 心血管疾病心血管疾病 ( (如如高血壓高血壓、動(dòng)脈粥樣硬化動(dòng)脈粥樣硬化) ) 糖尿病、肥胖癥糖尿病、肥胖癥 自閉癥、老年癡呆癥自閉癥、老年癡呆癥 自身免疫性疾病自身免疫性疾病 ( (系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、哮喘、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、哮喘、 過(guò)敏反應(yīng)等過(guò)敏反應(yīng)等) ) 炎癥感染炎癥感染 ( (如結(jié)腸炎、克羅恩氏病、敗血癥等如結(jié)腸炎、克羅恩氏病、

4、敗血癥等) ) 傳染性疾病傳染性疾病 ( (如艾滋病、肝炎等如艾滋病、肝炎等) ) 其它其它 ( (如多發(fā)性硬化癥、營(yíng)養(yǎng)不良、青光眼、阻塞性肺病、銀如多發(fā)性硬化癥、營(yíng)養(yǎng)不良、青光眼、阻塞性肺病、銀 屑病等屑病等) )多因子檢測(cè)應(yīng)用領(lǐng)域多因子檢測(cè)應(yīng)用領(lǐng)域開(kāi)發(fā)研究開(kāi)發(fā)研究大學(xué)大學(xué)政府專業(yè)管理機(jī)構(gòu)政府專業(yè)管理機(jī)構(gòu)醫(yī)學(xué)中心醫(yī)學(xué)中心藥物研發(fā)藥物研發(fā)生物技術(shù)企業(yè)生物技術(shù)企業(yè)藥物公司藥物公司臨床研究臨床研究醫(yī)院醫(yī)院醫(yī)學(xué)中心醫(yī)學(xué)中心早期診斷早期診斷臨床實(shí)驗(yàn)室臨床實(shí)驗(yàn)室大學(xué)檢測(cè)測(cè)試中心大學(xué)檢測(cè)測(cè)試中心實(shí)驗(yàn)室診斷實(shí)驗(yàn)室診斷醫(yī)院醫(yī)院專業(yè)檢測(cè)機(jī)構(gòu)專業(yè)檢測(cè)機(jī)構(gòu)所有流式細(xì)胞儀客戶所有流式細(xì)胞儀客戶 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)、生物學(xué)研究

5、基礎(chǔ)免疫學(xué)研究 細(xì)胞生物學(xué)如信號(hào)傳導(dǎo)、凋亡 癌癥研究、傳染病等藥物開(kāi)發(fā)和療效研究什么是什么是AimPlexAimPlex多因子檢測(cè)技術(shù)？多因子檢測(cè)技術(shù)？AimPlexAimPlex多因子檢測(cè)技術(shù)：多因子檢測(cè)技術(shù)：利用不同尺寸、不同熒光強(qiáng)度的多個(gè)微球群實(shí)現(xiàn)多因子的檢測(cè)利用該技術(shù)，配合任何一臺(tái)配備488nm激發(fā)光的流式細(xì)胞儀，即可實(shí)現(xiàn)24個(gè)指標(biāo)的同步檢測(cè)。 AimPlexAimPlex技術(shù)原理技術(shù)原理 流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)蛋白抗原的檢測(cè)； 結(jié)合抗原標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)曲線，可實(shí)現(xiàn)對(duì)蛋白抗原的定量檢測(cè)。 一系列熒光強(qiáng)度不同的微球包被有特異性捕獲抗體，與待測(cè)樣本孵育后，加入檢測(cè)抗體，形成“三明治”復(fù)

6、合物45123不同大小，不同熒光強(qiáng)度的捕獲微球，在FCM FL4檢測(cè)不同的目標(biāo)蛋白PE 熒光強(qiáng)度即為靶蛋白量456123微球微球FL2 (Reporter Parameter)FL4(Differentiator Parameter)不同大小種類微球分布不同大小種類微球分布AimPlexAimPlex檢測(cè)過(guò)程檢測(cè)過(guò)程60分鐘的抗原抗體孵育30分鐘生物素化檢測(cè)抗體孵育20分鐘鏈霉素親和素-PE孵育 具有具有488nm488nm激發(fā)光源激發(fā)光源AimPlexAimPlex結(jié)果的提取和分析結(jié)果的提取和分析流式細(xì)胞儀流式細(xì)胞儀： 幾乎所有流式細(xì)胞儀都可以使用，只要幾乎所有流式細(xì)胞儀都可以使用，只要 F

7、CAP Array 3.0 FCAP Array 3.0 軟件可計(jì)算軟件可計(jì)算被測(cè)樣本中待檢物的濃度被測(cè)樣本中待檢物的濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線分析標(biāo)準(zhǔn)曲線分析FCAP array 3.0 Software110100100010000100000110100100010000MFIpg/mLStandard Curves - Human 7-PlexIL-4IFNgIL-2TNFaIL-6IL-8Human Th1/Th2 Standard: Blank樣本檢測(cè)舉例樣本檢測(cè)舉例Human Th1/Th2 Standard: 14 pg/mlHuman Th1/Th2 Standard: 42 pg/mlH

8、uman Th1/Th2 Standard: 123 pg/mlHuman Th1/Th2 Standard: 370 pg/mlHuman Th1/Th2 Standard: 1,111 pg/mlHuman Th1/Th2 Standard: 3,333 pg/mlHuman Th1/Th2 Standard: 10,000 pg/mlHuman Th1/Th2 unknown 1Human Th1/Th2 unknown 2AimPlexAimPlex優(yōu)勢(shì)優(yōu)勢(shì)l 高通量，多指標(biāo)高通量，多指標(biāo)同時(shí)檢測(cè)一個(gè)標(biāo)本多達(dá)24個(gè)指標(biāo)l 需要標(biāo)本量少需要標(biāo)本量少節(jié)省樣品（25 L）、試劑、實(shí)驗(yàn)空間、儀

9、器設(shè)備l 選擇靈活選擇靈活研究人員可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，自由組合檢測(cè)指標(biāo)l 耗時(shí)短耗時(shí)短整個(gè)過(guò)程只需3個(gè)多小時(shí)l 要求低要求低 - 適用于所有含488激發(fā)光的流式細(xì)胞儀l 寬范圍，高靈敏寬范圍，高靈敏 -更寬檢測(cè)范圍，高靈敏度，高特異性，高重復(fù)性更寬的檢測(cè)范圍更寬的檢測(cè)范圍1.0010.00100.001000.0010000.001.0010.00 100.00 1000.00 10000.00100000.00MFIpg/mLFull Range Std CurveLower concentration range standard curve for better calculation o

10、f samples with very low AFP concentration藥明康德客戶需求：檢測(cè)小鼠肝癌模型的AFP濃度AimPlex and Luminex產(chǎn)品對(duì)比y = 0.5948x + 8.0123R = 0.971605001000050010001500AimPlex (pg/mL)Luminex (pg/mL)IFNy = 0.6238x - 3.149R2 = 0.969905001000050010001500AimPlex(pg/mL)Luminex (pg/mL)IL-10y = 0.9792x + 113.69R2 = 0.9694050001000005000

11、10000AimPlex (pg/mL)Luminex (pg/mL)IL-6y = 1.0737x + 10.264R2 = 0.92920200040000100020003000AimPlex (pg/mL)Luminex (pg/mL)TNFy = 0.8712x + 13.712R2 = 0.939102004000200400AimPlex (pg/mL)Luminex (pg/mL)IL-17Ay = 0.653x - 0.1998R2 = 0.98070.05.010.015.00102030AimPlex (pg/mL)Luminex (pg/mL)IL-4y = 0.941

12、4x - 6.6486R2 = 0.995502000400060000.002000.00 4000.00 6000.00AimPlex (pg/mL)Luminex (pg/mL)IL-2人外周血不同處理后分別用Aimplex Th1/Th2/Th17 (7個(gè)指標(biāo)）檢測(cè)和Luminex試劑盒檢測(cè)結(jié)果對(duì)比AimPleAimPlex x ELISAELISAAimPlexELISA樣本量15uL 350-700ul 所需檢測(cè)板 1塊 7塊 操作時(shí)間4h47h 檢測(cè)范圍2-5000pg/mL 2 - 1500pg/ml 反應(yīng)體系同一 不同 價(jià)格價(jià)格 10800元元18000元元例子：例子：40個(gè)

13、樣本個(gè)樣本 7個(gè)指標(biāo)：個(gè)指標(biāo)：IFN-gamma,IL-10,IL-17A,IL-2,IL-4,IL-6,TNF-alpha可供測(cè)試的樣品來(lái)源高度多樣化可供測(cè)試的樣品來(lái)源高度多樣化 血清血清 血漿血漿 腦脊液腦脊液 條件培養(yǎng)基條件培養(yǎng)基 各種細(xì)胞裂解液各種細(xì)胞裂解液 各種組織裂解液各種組織裂解液 - 肺、支氣管、子宮內(nèi)膜組織、肝、脾、腦、宮頸等組織。 淚液淚液 前列腺液前列腺液羊水羊水 各種各種 腹水、肝囊腫液腹水、肝囊腫液 支氣管肺泡灌洗液支氣管肺泡灌洗液 骨裂解液、滑液等骨裂解液、滑液等 齦溝液、齦溝液、唾液、痰液唾液、痰液 血凝塊血凝塊普通常見(jiàn)樣品普通常見(jiàn)樣品非常規(guī)樣品非常規(guī)樣品幾乎所有

14、液質(zhì)幾乎所有液質(zhì)( (fluids) )的生物樣本！的生物樣本！小鼠血凝塊樣本檢測(cè)小鼠血凝塊樣本檢測(cè)Serum and blood clot lysate samples of mice treated with or without (Con) LPS were tested using AimPlex mouse cytokine assays. This experiment indicates that besides serum, blood clot (after lysed with AimPlex lysis buffer) can be used for measuremen

15、ts of many cytokines in blood and precious serum samples can be saved for other assays. Page 35AimPlexAimPlex產(chǎn)品形式產(chǎn)品形式預(yù)混多因子單因子抗原標(biāo)準(zhǔn)品種屬種屬：人、小鼠、大鼠、靈長(zhǎng)類，狗：人、小鼠、大鼠、靈長(zhǎng)類，狗低低價(jià)價(jià)定定制制 Th1/Th2/Th17 7-plex Th1/Th2/Th17 7-plex kitkitT輔助細(xì)胞對(duì)免疫系統(tǒng)的建立和功能健全起重要作用。AimPlex人和鼠及NH PTh 17多重檢測(cè)系列產(chǎn)品可同步定量檢測(cè)由Th1， Th2，Th17和Treg細(xì)胞分泌的

16、細(xì)胞因子，為Th細(xì)胞功能鑒定提供有效的檢測(cè)工具。IFNgamma, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-17A and TNFalpha需具備什么樣的實(shí)驗(yàn)條件，才能開(kāi)需具備什么樣的實(shí)驗(yàn)條件，才能開(kāi)展多因子檢測(cè)工作？展多因子檢測(cè)工作？ AimPlexAimPlex易于在普通實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展易于在普通實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展AimPlex Filter Plate WasherAimPlexAimPlex不同應(yīng)用領(lǐng)域試劑盒不同應(yīng)用領(lǐng)域試劑盒應(yīng)用分組名稱應(yīng)用分組名稱候選待檢物候選待檢物呼吸道炎癥組sCD30, sE-selectin, sICAM-1, IL-4, IL-5, IL-6, IL-8,

17、 IL-10, IL-12p70, IL-13, IL-17A, , IFN-gamma, MCP-1, TNF-alpha, sVCAM-1, NGF特應(yīng)性皮炎組sCD30, sICAM-1, IL-4, IL-5, IL-13, TNF- alpha擴(kuò)充的心血管組Adiponectin, sCD40L, CRP, sE-selectin, sICAM-1, IL-1beta, IL-6, IL-8, , MCP-1, MPO, PAI-1, sP-selectin, TNF-alpha, t-PA, sVCAM-1糖尿病組Adiponectin, CRP, sICAM-1, IFN-alp

18、ha, IFN-gamma, Iso-Insulin, IL-1beta, IL-6, IL-8, IL-10, , Leptin, MCP-1, MIP-1alpha, MIP-1beta, NGF, PAI-1, Resistin, TNF-alpha, TNF-beta, t-PA生長(zhǎng)和分化組G-CSF, IFN- alpha, IFN-gamma, IL-1beta, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12p70, IL-13, , IL-23, MCP-1, NGF, TNF-alpha免疫調(diào)控組sCD30, sCD40L, IL-4,

19、IL-6, IL-10, IL-12p70, IL-13, IL-23, IFN-alpha, IFN-gamma, TNF-alpha炎癥組sCD30, sCD40L, CRP, sE-selectin, G-CSF, sICAM-1, IFN- alpha, IFN-gamma, IL-1beta, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12p70, IL-13, IL-17A, , IL-23, MCP-1, MIG, MIP-1alpha, MIP-1beta, sPECAM-1, sP-selectin, TNF-alpha, sTNF-R1, sVCAM-1多發(fā)性

20、硬化癥組sCD30, sICAM-1, IFN-gamma, IL-4, IL-8, IL-10, IL-12p70, IL-17A, , MCP-1, MIP-1beta, TNF-alpha, TNF-beta, sVCAM-1AimPlexAimPlex不同應(yīng)用領(lǐng)域試劑盒不同應(yīng)用領(lǐng)域試劑盒擴(kuò)充的肥胖癥組Adiponectin, sCD40L, CRP, sICAM-1, IL-6, , Leptin, MCP-1, MPO, NGF, OPG, PAI-1, Resistin, TNF-alpha, sTNF-R1疼痛組sICAM-1, IL-1beta, IL-6, IL-8, IL-

21、10, IL-12p70, IFN-gamma, MCP-1, MIP-1 alpha, MIP-1beta, NGF, TNF-alpha, sVCAM-1先兆子癇組Adiponectin, IFN-gamma, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12p70, , TNF-alpha類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎組sCD30, sE-selectin, sICAM-1, sICAM-3, IFN-alpha, IL-1beta, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12p70, IL-13, IL-17A, , IL-23, MCP-1, MIP-1alpha, sP-selectin, TNF-alpha, sVCAM-1膿毒癥/敗血性休克癥組Sepsis (CRP,