生化實(shí)驗(yàn)03斐林試劑比色法測(cè)還原糖含量ppt課件

1、Designed by XK Wang 實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)03 植物組織中復(fù)原糖含量的測(cè)定植物組織中復(fù)原糖含量的測(cè)定 斐林試劑比色法斐林試劑比色法Designed by XK Wang Designed by XK Wang 資料：新穎植物葉片資料：新穎植物葉片 儀器設(shè)備：分光光度計(jì)、分析天平、低速離心機(jī)、水浴鍋等儀器設(shè)備：分光光度計(jì)、分析天平、低速離心機(jī)、水浴鍋等 試劑：試劑：1. 斐林試劑斐林試劑A液：液：40g CuSO45H2O溶解于蒸餾水定容至溶解于蒸餾水定容至1.0L。2. 斐林試劑斐林試劑B液：液：200g酒石酸鉀鈉酒石酸鉀鈉KNaC4H4O65H2O與與150g NaOH溶于蒸餾水中，并

2、定容至溶于蒸餾水中，并定容至1.0L。 A、B兩液分別儲(chǔ)存，運(yùn)用前按兩液分別儲(chǔ)存，運(yùn)用前按1：1體積混合。體積混合。 已配好已配好Designed by XK Wang 0.1葡萄糖規(guī)范液 烘干的純葡萄糖100.00mg，加蒸餾水溶解定容至100ml 濃度：1.00 mg / ml 已配好斐林試劑斐林試劑藍(lán)色藍(lán)色Cu2O 磚紅色磚紅色不溶于水不溶于水Designed by XK Wang 三、實(shí)驗(yàn)方法與步驟1. 規(guī)范曲線的制造 取5支試管編號(hào)，按下表分別參與各試劑。項(xiàng)目123451.1.標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液（標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液（mlml）0.000.002.002.004.004.006.006.00樣品液

3、樣品液 6 ml6 ml2.H2.H2 2O(ml)O(ml)6.006.004.004.002.002.000.000.000.000.00每管葡萄糖含量每管葡萄糖含量(mg)(mg)0.000.002.002.004.004.006.006.00 待測(cè)待測(cè)3.3.斐林試劑量斐林試劑量(ml)(ml)4.004.004.004.004.004.004.004.004.004.00 A A590590值值A(chǔ)1A1A2A2A3A3A4A4A5A5 吸光值差值吸光值差值( (AA590590 ) )A1-A1A1-A1A1-A2A1-A2A1-A3A1-A3A1-A4A1-A4A1-A5A1-A5

4、Designed by XK Wang 處置方法：處置方法： 加斐林試劑后搖勻，加蓋加斐林試劑后搖勻，加蓋 沸水浴中沸水浴中15min，自然冷卻，自然冷卻轉(zhuǎn)入離心管，平衡后放入離心機(jī)！轉(zhuǎn)入離心管，平衡后放入離心機(jī)！ 離心：離心：2500 r/min 5min 小心取出，取上清液測(cè)吸光值小心取出，取上清液測(cè)吸光值Designed by XK Wang 規(guī)范曲線繪制：規(guī)范曲線繪制： 以葡萄糖量以葡萄糖量(mg)為橫為橫座標(biāo)，吸光度差值座標(biāo)，吸光度差值(A590 為縱座標(biāo)，在座標(biāo)紙上繪為縱座標(biāo)，在座標(biāo)紙上繪制出規(guī)范曲線。制出規(guī)范曲線。比色測(cè)定：比色測(cè)定：用用H2O作調(diào)作調(diào)0空白參比液！空白參比液！在

5、在590nm波長(zhǎng)下測(cè)定各管的吸光度。波長(zhǎng)下測(cè)定各管的吸光度。Designed by XK Wang 3.04.0g樣品樣品 加水研磨成勻漿后轉(zhuǎn)入加水研磨成勻漿后轉(zhuǎn)入50ml大試大試管管 80水浴水浴20min間歇震蕩間歇震蕩 冷卻后轉(zhuǎn)入冷卻后轉(zhuǎn)入100ml容量瓶定容、過(guò)濾后得到待測(cè)溶液。容量瓶定容、過(guò)濾后得到待測(cè)溶液。 取待測(cè)液取待測(cè)液6.0ml進(jìn)展測(cè)定按制造規(guī)范曲線的步驟。進(jìn)展測(cè)定按制造規(guī)范曲線的步驟。2 樣品復(fù)原糖提取與測(cè)定樣品復(fù)原糖提取與測(cè)定Designed by XK Wang Designed by XK Wang 樣品復(fù)原糖的含量樣品復(fù)原糖的含量%100*1000STVWNVXDesigned by XK Wang 2種溫度水浴處置，不可弄混種溫度水浴處置，不可弄混離心機(jī)運(yùn)用留意平安。離心機(jī)運(yùn)用留意平安。思索：比較雙縮脲試劑與斐林試劑的差別？思索