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1、1 / 9第四章生物化學(xué)與分子生物學(xué)技術(shù)(時(shí)間:90 分鐘滿分:100 分)一、選擇題(本題包括 15 小題,每小題 3 分,共 45 分)1. 紅細(xì)胞中含有大量的血紅蛋白,我們可以選用豬、牛、羊或其他脊椎動(dòng)物的血液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)來提取和分離血紅蛋白。下列關(guān)于血紅蛋白提取和分離的敘述,錯(cuò)誤的是()A. 血紅蛋白提取和分離一般按照樣品處理T粗分離T純化T純度鑒定的順序進(jìn)行B. 純化過程中要用生理鹽水充分溶脹凝膠來配制凝膠懸浮液C. 粗分離中透析的目的是為了去除相對(duì)分子質(zhì)量較小的雜質(zhì)D. 可采用 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法進(jìn)行純度鑒定答案 B解析 蛋白質(zhì)的提取和分離一般分為四步:樣品處理、粗分離、純化
2、和純度鑒定。提取和分 離血紅蛋白時(shí),首先通過洗滌紅細(xì)胞、血紅蛋白的釋放、離心等操作收集到血紅蛋白溶液, 即樣品處理;再通過透析法除去相對(duì)分子質(zhì)量較小的雜質(zhì),即樣品的粗分離;然后通過凝膠 色譜法將相對(duì)分子質(zhì)量較大的雜蛋白除去,即樣品純化,純化過程中凝膠應(yīng)用蒸餾水充分溶 脹后,配制成凝膠懸浮液,而不是用生理鹽水;最后經(jīng)SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行純度鑒定。2. 在分離蛋白質(zhì)時(shí),一定要加入緩沖溶液,其目的主要是()A. 使酶的活性最高B. 使蛋白質(zhì)的活性最高C維持蛋白質(zhì)所帶的電荷2 / 9D.使蛋白質(zhì)帶上電荷答案 C解析 加入緩沖溶液的目的是維持蛋白質(zhì)所帶電荷不發(fā)生改變,而不是使蛋白質(zhì)帶上電荷。3
3、. 分離純化蛋白質(zhì)的技術(shù)包括()A.電泳法 B.離心沉降法C.薄膜透析法 D.以上方法皆可以答案 D4. 下列對(duì)植物芳香油的理解中,正確的是()A. 組成成分主要是烴類化合物及其衍生物B. 來源廣泛,幾乎所有植物的任何器官都可提取芳香油C. 具有較強(qiáng)的揮發(fā)性且極易溶于有機(jī)溶劑,不溶于水D. 植物芳香油可從野生真菌中提取答案 C解析 植物芳香油組成較復(fù)雜,主要包括萜類化合物及其衍生物;芳香油主要來源于某些植 物的特殊器官,且受人們的使用情況影響,如玫瑰精油;具有較強(qiáng)的揮發(fā)性,并且極易溶于 有機(jī)溶劑,但不溶于水;植物芳香油應(yīng)從植物器官中提取。5. 玫瑰精油素有“液體黃金”之稱,下面是提取玫瑰精油的
4、實(shí)驗(yàn)流程圖,請(qǐng)據(jù)圖分析不正確的是()鮮玫瑰花+清水p AT油水混合物- 分離油層- 除水- 玫瑰油A. 提取玫瑰精油的方法是水蒸氣蒸餾法B. 和操作要求是分別加入氯化鈉和無水硫酸鈉C. 操作是萃取,以除去固體硫酸鈉D. 該實(shí)驗(yàn)流程也可用于從薄荷葉中提取薄荷油答案 C解析 加入氯化鈉是為了增大鹽水的濃度,有利于玫瑰油與水的分層;加入無水硫酸鈉是為 了吸收精油中殘留的水分;操作是利用過濾的方法除去固體硫酸鈉。6.在實(shí)驗(yàn)室中,做 PCR 通常使用的微量離心管是一種薄壁塑料管,此過程可以使用玻璃離心 管嗎?為什么( )A. 可以,玻璃離心管、塑料離心管都可以使用B. 不可以,玻璃離心管易碎,使用不安全
5、C. 不可以,玻璃離心管一般較大,不適合作為微量離心管D. 不可以,玻璃離心管容易吸附DNA答案 D3 / 9解析 DNA 可親和玻璃,在進(jìn)行 DNA 操作時(shí)應(yīng)使用塑料器皿。4 / 97. 某考古學(xué)家在西伯利亞泰加林地區(qū)的冰中,發(fā)現(xiàn)了一種冰凍的已滅絕的巨型動(dòng)物的肌肉,他想了解該巨型動(dòng)物的 DNA 與現(xiàn)今印度大象的 DNA 的相似性,于是做了如下檢測(cè)工作,其中正確的操作步驟及順序是()降低溫度,檢測(cè)處理后的雜合 DNA 雙鏈 通過 PCR 技術(shù)擴(kuò)增巨型動(dòng)物和大象的 DNA 把巨型動(dòng)物的 DNA 導(dǎo)入大象的細(xì)胞中 在一定溫度條件下,將巨型動(dòng)物和大象的DNA 水浴共熱A.B.C.D.答案 D8. P
6、CR 儀實(shí)質(zhì)上是一臺(tái)自動(dòng)調(diào)控溫度的儀器,下列關(guān)于它調(diào)控不同溫度的目的的敘述,錯(cuò)誤的是()A. 94C,使 DNA 分子變性,解開螺旋B. 55C,使 DNA 分子兩條單鏈與兩種引物結(jié)合C. 72C,使 DNA 分子開始復(fù)制,延伸D. 72C,使 DNA 分子恢復(fù)雙螺旋結(jié)構(gòu),恢復(fù)活性答案 D解析 PCR 利用 DNA 熱變性的原理,當(dāng)溫度上升到 94C時(shí),雙鏈 DNA 解旋為單鏈,A 項(xiàng)正確; 當(dāng)溫度下降到 55C左右時(shí),兩種引物通過堿基互補(bǔ)配對(duì)原則與兩條單鏈DNA 結(jié)合,恢復(fù)活性,B 項(xiàng)正確;當(dāng)溫度上升到 72C左右時(shí),在 DNA 聚合酶的作用下,根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則 合成新的 DNA 鏈,從
7、而實(shí)現(xiàn) DNA 鏈的延伸,故 C 項(xiàng)正確,D 項(xiàng)錯(cuò)誤。9.使用凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)實(shí)驗(yàn)中,相對(duì)分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)在凝膠中的行進(jìn)過程,可表示為圖中()*磁00AcD答案 B相對(duì)分子質(zhì)量大的通過凝膠間隙先被洗脫,相對(duì)分子質(zhì)量小的進(jìn)入凝膠內(nèi)部而后被洗脫。10.在 PCR 的實(shí)驗(yàn)操作中,下列說法正確的是()在微量離心管中添加各種試劑時(shí),只需要一個(gè)槍頭離心管的蓋子一定要蓋嚴(yán)用手指輕彈離心管壁離心的目的是使反應(yīng)液集中在離心管的底部解析相對(duì)分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)留在顆粒外面,相對(duì)分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)進(jìn)入顆粒內(nèi)部;5 / 9A.B.C.D. 答案 C解析 在微量離心管中添加反應(yīng)成分時(shí),每吸取一種試劑后,取液器
8、上的槍頭都必須更換,以確保實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性;蓋嚴(yán)離心管的蓋子,防止實(shí)驗(yàn)中外源DNA 虧染;用手指輕輕彈擊管的側(cè)壁,使反應(yīng)液混合均勻;離心目的是使反應(yīng)液集中在離心管的底部,提高反應(yīng)效果。11. 蛋白質(zhì)的提取和分離分為哪幾步,依次是 ()A. 樣品處理、凝膠色譜操作、SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳B. 樣品處理、凝膠色譜操作、純化C. 樣品處理、粗分離、純化、純度鑒定D. 樣品處理、純化、粗分離、純度鑒定答案 C解析 蛋白質(zhì)的提取和分離的程序分為:樣品處理、粗分離、純化、純度鑒定四步。A 項(xiàng)描述的是實(shí)驗(yàn)操作過程中的技術(shù)。12. 血清蛋白中含有清蛋白、丫一球蛋白、一球蛋白、ai球蛋白、a2一球蛋白。在其電泳
9、圖中,距點(diǎn)樣處由近及遠(yuǎn)的排列順序?yàn)?()A.ai球蛋白、丫一球蛋白、一球蛋白、a2球蛋白、清蛋白B. 丫一球蛋白、一球蛋白、a2球蛋白、a1球蛋白、清蛋白C. 一球蛋白、丫 一球蛋白、a2球蛋白、a1球蛋白、清蛋白D. 清蛋白、ai球蛋白、a2球蛋白、一球蛋白、丫一球蛋白答案 B解析 帶電顆粒直徑越小,越接近于球形,所帶凈電荷越多,則泳動(dòng)速率越快,距點(diǎn)樣處越 遠(yuǎn);反之,則越近。13. 下列關(guān)于植物芳香油的敘述,錯(cuò)誤的是 ()A. 揮發(fā)性強(qiáng),易溶于有機(jī)溶劑,一般來說價(jià)格昂貴B. 都是由天然植物的莖、葉、樹干、花、果實(shí)和種子等部位經(jīng)過萃取的濃縮液體C. 它是植物免疫和維護(hù)系統(tǒng)的精華D. 植物芳香油
10、廣泛地應(yīng)用于輕工、化妝品和食品制品等方面答案 B解析 植物芳香油不僅揮發(fā)性強(qiáng),而且易溶于有機(jī)溶劑,如石油醚、酒精、乙醚和戊烷等, 根據(jù)植物原料的特點(diǎn)選擇不同的提取方法,植物芳香油的提取方法有蒸餾、壓榨和萃取等。植物芳香油的存在對(duì)于保護(hù)植物體本身有重要作用。14. 用水蒸氣蒸餾法提取玫瑰精油時(shí),當(dāng)蒸餾完畢,下列哪項(xiàng)做法是正確的()A. 先撤出熱源,拆卸蒸餾裝置的順序與安裝時(shí)相同B. 先撤出熱源,拆卸蒸餾裝置的順序與安裝時(shí)相反6 / 9C. 先停止通水,拆卸蒸餾裝置的順序與安裝時(shí)相反D.先移走接收瓶,拆卸蒸餾裝置的順序與安裝時(shí)相同答案 B解析 蒸餾裝置包括:鐵架臺(tái)、酒精燈、石棉網(wǎng)、蒸餾瓶、橡皮膠塞
11、、蒸餾頭、溫度計(jì)、直 型冷凝管、接液管、錐形瓶,以及連接進(jìn)水口和出水口的橡皮管。安裝儀器一般按照自下而 上,從左到右的順序。具體安裝順序:固定熱源一一酒精燈;固定蒸餾瓶;安裝蒸餾 頭;連接冷凝管;連接接液管(尾接管):將接收瓶瓶口對(duì)準(zhǔn)尾接管的出口;將溫度計(jì)固定在蒸餾頭上。蒸餾完畢,應(yīng)先撤出熱源,然后停止通水,最后拆卸蒸餾裝置,拆卸順 序與安裝時(shí)相反。15. 下列關(guān)于離心沉降法的說法中,不正確的是()A. 目標(biāo)不同,需要控制不同的離心速率B. 能將分子大小、密度不同的蛋白質(zhì)分離C. 離心時(shí),離心管內(nèi)的溶液量要相同,但不需要對(duì)稱放置在離心機(jī)內(nèi)D. 離心后,分子大小、形狀不同的蛋白質(zhì)會(huì)分布在不同的沉
12、降層中答案 C解析 離心時(shí),離心管一定要對(duì)稱放置。二、非選擇題(本題包括 5 小題,共 55 分)16. (10 分)凝膠色譜技術(shù)是一種快速而又簡(jiǎn)單的分離技術(shù),對(duì)高分子物質(zhì)有很好的分離效果,目前已經(jīng)被多個(gè)領(lǐng)域廣泛應(yīng)用,不但應(yīng)用于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究,而且已經(jīng)大規(guī)模地用于工業(yè)生產(chǎn)。 據(jù)圖回答下列問題:(1)a、b 均為蛋白質(zhì)分子,其中先從層析柱中洗脫出來的是,原因是(2)自己制作凝膠色譜柱時(shí),在色譜柱底部 d 位置相當(dāng)于多孔板的結(jié)構(gòu)可由替代。(3)裝填凝膠色譜柱時(shí),色譜柱內(nèi)不能有氣泡存在,原因是。洗脫用的液體應(yīng)盡量與浸泡凝膠所用的液體(填“相同”或“不同”),洗脫時(shí),對(duì)洗脫7 / 9液的流速要求是。答案
13、(1)a a 相對(duì)分子質(zhì)量較大,無法進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道,只能在凝膠間隙中移動(dòng),路 程較短,移動(dòng)速度較快(2) 尼龍網(wǎng)和尼龍紗(3) 氣泡會(huì)攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序,降低分離效果(4) 相同保持穩(wěn)定解析(1)用凝膠色譜技術(shù)分離各種不同蛋白質(zhì)時(shí),大分子物質(zhì)由于直徑較大,只能分布于 顆粒之間,所以向下移動(dòng)的速度較快。小分子物質(zhì)除了可在凝膠顆粒間隙中擴(kuò)散外,還可以 進(jìn)入凝膠顆粒的微孔,在向下移動(dòng)的過程中,從一個(gè)凝膠顆粒內(nèi)擴(kuò)散到顆粒間隙后再進(jìn)入另一凝膠顆粒內(nèi),如此不斷地進(jìn)入和擴(kuò)散,小分子物質(zhì)的下移速度落后于大分子物質(zhì),所以大分子物質(zhì)先洗脫出來。(2)自己制作凝膠色譜柱時(shí),在色譜柱底部 d 位置相當(dāng)于
14、多孔板的結(jié)構(gòu) 可由尼龍網(wǎng)和尼龍紗替代。(3)在色譜柱中裝填凝膠的時(shí)候要盡量緊密, 以降低凝膠顆粒之間 的空隙。一是在裝填凝膠柱時(shí),不得有氣泡存在,因?yàn)闅馀輹?huì)攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序,降低分離效果。二是凝膠色譜操作過程中,不能發(fā)生洗脫液流干、 露出凝膠顆粒的現(xiàn)象。一旦發(fā)生上述兩種情況,凝膠色譜柱需要重新裝填。(4)洗脫液應(yīng)與浸泡凝膠所用液體相同,且洗脫液流速要穩(wěn)定,以免干擾洗脫結(jié)果。17.(8 分)商品化植酸酶主要來自微生物,首先篩選出產(chǎn)酶的菌株,然后制備植酸酶,請(qǐng)根據(jù)F面的流程圖回答下列問題:(1)I中的主要成分有哪些?;n中包含哪些成分?。(2)請(qǐng)寫出一種純化得到植酸酶的方法:;其依據(jù)是
15、。答案(1)小分子雜質(zhì)含植酸酶等多種蛋白質(zhì)(2)凝膠色譜法 根據(jù)蛋白質(zhì)之間分子量的大小差異進(jìn)行純化(或電泳法根據(jù)蛋白質(zhì)之間電荷、分子大小等差異進(jìn)行純化)解析 植酸酶是蛋白質(zhì),屬于大分子有機(jī)物,含酶的發(fā)酵液經(jīng)過透析后,能夠除去小分子雜 質(zhì),這樣就能夠得到植酸酶。對(duì)于粗提取的植酸酶可以用凝膠色譜法進(jìn)行提純,由于蛋白質(zhì) 帶有電荷,亦可用電泳法進(jìn)行純化。18.(13 分)蛋白質(zhì)分子的大小、形狀、結(jié)構(gòu)不同,所帶電荷的性質(zhì)和多少不同,以及在鹽溶 液中溶解度不同,可以利用以上的8 / 9不同對(duì)不同種類的蛋白質(zhì)進(jìn)行分離純化,請(qǐng)回答以下問題:(1) 分子大小:對(duì)于分子大小方面有一定差別的蛋白質(zhì)可采用密度梯度離心
16、、等方法將它們分開。(2) 形狀:對(duì)兩種相同質(zhì)量的蛋白質(zhì)而言,形蛋白質(zhì)具有較小的有效半徑,在通過膜、凝膠過濾或電泳凝膠中的小孔運(yùn)動(dòng)時(shí),遇到的摩擦力小,從而也能達(dá)到分離蛋白質(zhì)的目的。9 / 9(3)溶解度:蛋白質(zhì)具有鹽溶和現(xiàn)象, 根據(jù)蛋白質(zhì)在不同濃度的鹽溶液中不同,通過控制可分離析出蛋白質(zhì);蛋白質(zhì)在不同濃度的有機(jī)溶劑中的溶解度有很大不同,從基本不溶(10卩 g/mL)直至極易溶解(300 卩 g/mL)不等,故可分離蛋白質(zhì)。(4)電荷:蛋白質(zhì)凈電荷取決于,利用待分離樣品中各種分子帶電性質(zhì), 可用的方法將其分離;或者改變蛋白質(zhì)混合物溶液中的鹽離子濃度、pH 和(陰、陽)離子交換填料,不同蛋白質(zhì)對(duì)不
17、同的離子交換填料的吸附容量不同,蛋白質(zhì)因而分離。(5)穩(wěn)定性:多數(shù)蛋白質(zhì)加熱到94C時(shí)會(huì)因變性而沉淀,利用這一性質(zhì),可容易地將一種經(jīng)這樣加熱后的蛋白質(zhì)從大部分其他蛋白質(zhì)中分離開;也可用蛋白酶處理上清液,消化雜蛋白,留下某些的蛋白質(zhì)。答案(1)透析 電泳(2)球(3)鹽析 溶解度 鹽濃度(4)氨基酸殘基所帶的正負(fù)電荷 的總和 電泳 吸附容量不同或不被吸附(5)仍具有活性的可溶性抗蛋白酶解析 分離蛋白質(zhì)的方法除密度梯度離心法外,還有透析法和電泳法等;蛋白質(zhì)在不同鹽濃 度或有機(jī)溶劑溶液中溶解度不同;可通過調(diào)節(jié)鹽濃度或有機(jī)溶劑的濃度來析出相應(yīng)的蛋白質(zhì);不同蛋白質(zhì)所帶電荷的性質(zhì)和數(shù)量不同,因此可用電泳法
18、分離出不同的蛋白質(zhì)。19.(10 分)如圖為一種核酸分析方法,請(qǐng)據(jù)圖分析回答有關(guān)問題:TGG A C T T ( A A C Q C A T G C T,的材料酹麗碑勵(lì)機(jī)出璇謝被標(biāo)記片段F GG A CTTGAACGCATGCT.電泳2冃邛儀吏匸匚LIB專丁CT-AC rrc; A ALcArGc i31 b$L占. 占.1 J士hT GG AC TTG A ACGC A T G C T住瞇IK介黨上.車同拴度的DNA片段逋過電鈦 應(yīng)上仃熬.帯標(biāo)記的片用I國皿示所在說置(1)被分析的材料應(yīng)屬于一條鏈。如果它存在另一條互補(bǔ)鏈,該互補(bǔ)鏈的堿基序列是(在下圖中標(biāo)出):(2)如果選擇性斷開的位置是堿基
19、 G,那么隨機(jī)出現(xiàn)的被標(biāo)記片段應(yīng)有種,在電泳帶上被分離的顯示位置應(yīng)有處,在泳動(dòng)方向的最前端的片段是序列段,與圖示泳動(dòng)位置相比,在同樣電 泳條件下該片段應(yīng)位于的(填“上方”或“下方”)。(3)應(yīng)用上述原理分析了某種未知序列核酸的10 / 9一條單鏈,結(jié)果如圖所示,此結(jié)果說明,該核酸的此單鏈含個(gè)核苷酸,其 A:T: G:C=,同時(shí)也可推斷其堿基序列是。11 / 9答案(1)DNA 單 AGCATGCGTTCAAGTCCA(2) 55 TG 下方(3) 18 5 : 4 : 5:4 AACGTAGGGTTACCCTGA解析 從圖中可以看出,DNA 單鏈的磷酸末端即 5端的磷酸基團(tuán)被標(biāo)記, 如果選擇從
20、 A 處斷 開,DNA單鏈中有幾個(gè) A 就能形成幾條 DNA 片段。在凝膠介質(zhì)上,長度不同的 DNA 片段通過電泳時(shí)因相對(duì)分子質(zhì)量不同就會(huì)自然分開。根據(jù)產(chǎn)生DNA 片段的個(gè)數(shù)確定 DNA 中每種堿基的個(gè)數(shù),根據(jù)電泳時(shí)在電場(chǎng)中分布的先后順序可以確定四種堿基在DNA 單鏈中的排列順序。(1)根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則寫出互補(bǔ)鏈堿基,要注意反向平行。(2)由于此單鏈中的 G 堿基有5 個(gè),所以從 G 處斷裂也會(huì)產(chǎn)生 5 種被標(biāo)記片段,在電泳帶上也會(huì)顯示5 處位置,在距磷酸基的第二個(gè)堿基處就會(huì)斷裂,所以此片段為TG 比處的 TGGA 還短,所以運(yùn)動(dòng)速度比快,位于的下方。(3)此單鏈中的核苷酸數(shù)為 4 個(gè) T+ 5 個(gè) A+ 5 個(gè) G+ 4 個(gè) C= 18 個(gè),堿基序
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