實驗一--顯微鏡的使用

1、顯微鏡的使用實驗?zāi)康模?了解幾種顯微鏡的結(jié)構(gòu)，使用原理，用途。 掌握如何提高普通顯微鏡的分辨率的方法。實驗原理： 共同的原理：都是利用物鏡與目鏡的兩次成像原理實現(xiàn)將物體放大一定的倍數(shù)。 幾種顯微鏡的區(qū)別： 1、 普通光學(xué)顯微鏡：也叫復(fù)式顯微鏡，最大分辨力一般為0.2微米，從構(gòu)造上可分光學(xué)、機械和電子三大系統(tǒng)。應(yīng)用：適于觀察一般固定的，有色的透明度較高的標(biāo)本。 2、暗視野顯微鏡：原理：以丁達(dá)爾現(xiàn)象為基礎(chǔ)設(shè)計，光源不進(jìn)入物鏡，視野是暗的，被檢樣品因斜照射發(fā)生衍射和反射是亮的。可觀察到0.2-0.004微米直徑的微小粒子。應(yīng)用：但它分不清被檢物的細(xì)微構(gòu)造，它常用于觀察物體的存在與運動 3、相差顯微鏡

2、：原理：以光的干涉現(xiàn)象為基礎(chǔ)設(shè)計的，用裝有環(huán)狀光欄的聚光器造成的空心光線柱，使直射光 (背景) 和衍射光 (樣品) 分開。同時在物鏡的后焦面上裝有相位板，使直射光和衍射光發(fā)生干涉，從而把我們?nèi)庋鄄荒芤姷南辔徊钭優(yōu)榭梢姷恼穹?，同時相位板上裝有吸收膜，吸收部分直射 (或衍射)光以增加反差，使人們能夠看清更加細(xì)微的結(jié)構(gòu)。 應(yīng)用：所以相差顯微鏡一般用于觀察活細(xì)胞的細(xì)微結(jié)構(gòu)。 4、熒光顯微鏡：以紫外線 (3650A) 或藍(lán)紫光 (4200A) 照射某些物質(zhì)，可激發(fā)其產(chǎn)生熒光的原理為基礎(chǔ)設(shè)計的 獲得方法：利用一個高發(fā)光效率的光源，經(jīng)過一個濾光系統(tǒng)得到紫外光(或藍(lán)紫外光)，直接照射標(biāo)本中的自然熒光物質(zhì)，使

3、其產(chǎn)生自發(fā)熒光，再加以鏡檢。 以熒光染料先對標(biāo)本進(jìn)行染色，然后使之在上述光源照射下產(chǎn)生次生熒光，再加以鏡檢 應(yīng)用：觀察熒光(或次生熒光)物質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)分布情況，以及測定細(xì)胞器的生理活性。如何提高顯微鏡的分辨率？ 分辨率：物鏡分辨率是指分辨被檢樣品細(xì)微結(jié)構(gòu)的能力。通常以能清晰地分辨兩個物體點的最短距離來表示。其公式如下： R=0.61/ N.A R：分辨率； ：照射光線波長； N.A：物鏡數(shù)值孔徑 分辨率以分辨兩個點的最短距離表示，R值愈小，分辨能力愈大。增大數(shù)值孔徑，減小入射光的波長。 三、實驗用品： (一)材料：草履蟲，洋蔥內(nèi)表皮，紫鴨趾草等花粉，菠菜葉。 (二)用品：普通光學(xué)顯微鏡，暗視野顯微鏡，相差顯微鏡，熒光顯微鏡，載玻片， 蓋玻片，吸管，鑷子，剪刀等。四、實驗方法： 用哪種顯微鏡比較合適？l觀察草履蟲的（外形、運動、）纖毛、食物泡等。 取少許棉花纖維或擦鏡紙纖維？（阻礙草履蟲的運動，便于觀察），放于載玻片上，在其上滴一滴草履蟲懸液，然后加蓋玻片觀察。2洋蔥表皮細(xì)胞和菠菜葉的細(xì)胞核、葉綠體的觀察 在載玻片上滴一滴水，撕洋蔥鱗莖內(nèi)表皮或菠菜下表皮一小塊放于其中，使其展開，然