生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)預(yù)習(xí)及實(shí)驗(yàn)報(bào)告范例 還原糖和總糖的測(cè)定

1、實(shí)驗(yàn) 還原糖和總糖的測(cè)定實(shí)驗(yàn)二：(Fehling試劑)直接(熱)滴定定糖法一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵?初步掌握費(fèi)林試劑熱滴定定糖法的原理和方法。2正確掌握滴定管的使用方法和熱滴定終點(diǎn)的判斷方法。二、實(shí)驗(yàn)原理思 考(一)基本原理還原糖是指含有自由醛基(如葡萄糖)或酮基(如果糖)的單糖和某些二糖(如乳糖、麥芽糖)。在堿性溶液中，還原糖能將金屬離子(Cu2+、Hg2+、Ag+等)還原，而還原糖本身則被氧化成各種羥酸類化合物。該特性常用于還原糖的定性和定量測(cè)定。(二)本實(shí)驗(yàn)反應(yīng)原理1、Fehling試劑（又稱作酒石酸銅溶液）介紹：A液：由硫酸銅和次甲基藍(lán)組成1、硫酸銅的作用是什么？1、Cu2+用于將來(lái)被還原成

2、Cu+2、次甲基藍(lán)的作用是什么？2、氧化還原指示劑B液：由氫氧化鈉、酒石酸鉀鈉和亞鐵氰化鉀組成3、氫氧化鈉的作用是什么？3、一、生成Cu(OH)2，二、創(chuàng)造堿性反應(yīng)環(huán)境4、酒石酸鉀鈉的作用是什么？4、用以生成可溶性絡(luò)合物酒石酸鈉銅5、亞鐵氰化鉀的作用是什么？5、生成可溶性復(fù)鹽，以便于觀察滴定終點(diǎn)用前將A、B兩液等體積混合時(shí)，依次反應(yīng)：(1) 2NaOH + CuSO4 = Cu(OH)2 （天藍(lán)色）+ Na2SO4(2) 在堿性溶液中：酒石酸鈉銅為可溶性絡(luò)合物。2、酒石酸銅與還原糖熱滴定時(shí)的反應(yīng)：紅色氧化亞銅沉淀生成：在加熱條件下，用樣液滴定，樣液中的還原糖與酒石酸鉀鈉銅反應(yīng)，酒石酸鉀鈉銅被還

3、原糖還原，產(chǎn)生紅色氧化亞銅沉淀，還原糖則被氧化和降解反應(yīng)生成的氧化亞銅沉淀與斐林試劑中的亞鐵氰化鉀（黃血鹽）反應(yīng)生成可溶性復(fù)鹽：6、為什么要生成可溶性復(fù)鹽？6、便于觀察滴定終點(diǎn)亞甲基藍(lán)為氧化-還原指示劑指示滴定終點(diǎn)7、為什么亞甲基藍(lán)可為滴定終點(diǎn)指示劑？7、因?yàn)閬喖谆{(lán)氧化能力比Cu2+弱，因此Cu2+會(huì)先被還原。當(dāng)Cu2+被全部還原后，稍過(guò)量的還原糖可使藍(lán)色的氧化型的亞甲基藍(lán)還原為無(wú)色的還原型的亞甲基藍(lán)，即指示到達(dá)滴定終點(diǎn)。(4) 根據(jù)樣液消耗量即可計(jì)算出還原糖的含量。三、實(shí)驗(yàn)用品思考答案用品量實(shí)際用量(一)、實(shí)驗(yàn)材料：紅薯粉（可換淀粉）班級(jí)：16g(二)、實(shí)驗(yàn)試劑：Fehling試劑A液:分

4、別稱取15g CuSO45H2O和 0.05g 亞甲基藍(lán)于燒杯中；加50100mL蒸餾水將它們?nèi)芙?；轉(zhuǎn)移到1000mL容量瓶中；定容到1000mL。8、為什么要分開(kāi)配制A、B液？什么時(shí)候混合較佳？用品：電子天平、100/200mL燒杯1、玻棒、1000mL容量瓶、蒸餾水計(jì)算：533n，適當(dāng)放大（一般多配1/3左右）配1000mLCuSO45H2O= (g)亞甲基藍(lán)= (g)Fehling試劑B液:先稱取50g 酒石酸鉀鈉和+ 75g NaOH，溶于水；再稱取 4g亞鐵氰化鉀，溶解分別轉(zhuǎn)移到1000mL容量瓶中；定容到1000mL。9、為什么貯存于具橡皮塞玻璃瓶中？用品：100/200mL燒杯2

5、、1000mL容量瓶配1000mL酒石酸鉀鈉= (g)NaOH = (g)亞鐵氰化鉀= (g)(3) 0.1%葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液：G在98105下干燥至恒重為無(wú)水葡萄糖；準(zhǔn)確稱取1.000g無(wú)水葡萄糖，用少量蒸餾水溶解；轉(zhuǎn)移到1000mL容量瓶中，加水約置750ml往容量瓶中加入5-8mL濃HCl；定容1000ml。10、G為什么在98105下干燥？葡萄糖中的水分是吸濕水還是結(jié)晶水？8、因?yàn)槠咸烟侵械乃质俏鼭袼?，?8105下可以使之汽化除去，并且該溫度不致使葡萄糖碳化。稱量瓶或表面皿或培養(yǎng)皿1套烘箱，10mL移液管G= (g)濃鹽酸= （mL） 標(biāo)準(zhǔn)液葡萄糖濃度C= g/mL11、為什么加5

6、- 8mL濃HCl？可以防止微生物生長(zhǎng)。(4)6mol/L鹽酸溶液*：配100mL6mol/L鹽酸：吸取258.00mL 36%的發(fā)煙鹽酸，定容到100mL。12、這樣配出的鹽酸是標(biāo)準(zhǔn)濃度嗎？可用量筒量取嗎？200mL容量瓶，10mL移液管配200mL(5) I-IK溶液分別稱取5g I和10g IK于燒杯中，溶解，定容至100ml?？捎萌萘科咳≌麴s水，燒杯中溶解后即可分裝。為什么？因?yàn)槭嵌ㄐ栽噭?5/50ml滴瓶6配200mLI= (g)IK= (g)(6) 10% NaOH稱取50g NaOH，溶于500ml蒸餾水中。冷卻至室溫。13、盛于什么容器中？用滴瓶分裝，實(shí)驗(yàn)完成后該如何處理滴瓶

7、？塑料試劑瓶500ml1，50ml滴瓶4配500mLNaOH= (g)(7) 0.1%酚酞指示劑稱取0.1g酚酞溶于100ml蒸餾水中。25/50ml滴瓶4配100mL酚酞= (g)(8) 蒸餾水。14、根據(jù)反應(yīng)原理，指出這些試劑中哪些是定量試劑，哪些是定性試劑。* 36%濃鹽酸摩爾濃度 = 1.178936% / 36.5 1000mL/L =11.6275 mol/L濃鹽酸的36%-38%是指質(zhì)量濃度，密度是1.19g/ml。摩爾濃度=1190g 36.5%（假設(shè)的鹽酸濃度） / 36.5（HCL的分子量） 1000mL/L =11.9mol/L.(三)、實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備名稱規(guī)格臺(tái)套數(shù)使用電

8、子天平1公用烘箱1公用電熱恒溫水浴鍋2公用調(diào)溫電爐n/2每?jī)山M共用稱量瓶/培養(yǎng)皿1套公用100ml燒杯/150ml錐形瓶5公用250mL錐形瓶2+11n*2個(gè)公用*每組至少需6個(gè)才能輪換使用100ml容量瓶2+2n2個(gè)公用1000ml容量瓶3公用200ml容量瓶2公用5ml移液管4公用10ml移液管n+33支公用，每組1支移液管架1公用100mL量筒1公用50/100ml漏斗n試劑瓶若干500mL塑料試劑瓶1公用25/50/100mL棕色滴瓶6公用25/50/100mL滴瓶4+4公用吸耳球n滴定管n/2+ 2nn/2：每?jī)山M共用玻璃棒n或 2n白瓷板n定量濾紙2n先每組發(fā)一張吸水紙若干玻璃珠若

9、干四、實(shí)驗(yàn)程序步驟注意事項(xiàng)及問(wèn)題答案儀器、藥品及用量實(shí)際用量班級(jí)用量(n=共16組)（一）、樣品中還原糖的提?。海ū静襟E不做，僅供了解、參考與思考）從實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蛯?shí)驗(yàn)材料角度考慮，老師為什么取消這一步驟的實(shí)驗(yàn)？1、準(zhǔn)確稱取紅薯粉2g于100-200ml燒杯/錐形瓶中；電子天平、100-200ml燒杯/錐形瓶1紅薯粉樣品重量= (g)紅薯粉2n=2n(g)電子天平1臺(tái)250ml錐形瓶1n2、加入85%乙醇5060ml，混勻；50/100ml量筒1，玻棒150/100ml量筒4個(gè)，公用玻棒1n=n支3、50恒溫水浴保溫30min，不時(shí)攪拌；提前加熱到50。恒溫水浴鍋2臺(tái)4、過(guò)濾；漏斗1，濾紙1，10

10、0/200ml燒杯/錐形瓶1漏斗1n=n個(gè)定量濾紙1n=n張100/200ml燒杯/錐形瓶1n=n個(gè)5、濾渣再用85%乙醇提取二次，合并提取液；三次提取液總量不能超過(guò)100ml。為什么用乙醇提??？相似相溶6、定容至100ml。100ml容量瓶1100ml容量瓶1n=n個(gè)（二）、樣品中總糖的水解及提取：1、稱取紅薯粉1g（換淀粉，稱0.5g）于250ml錐形瓶中如果樣品的測(cè)定從第一步開(kāi)始開(kāi)始平行處理3個(gè)樣，直到測(cè)定，我們做的是重復(fù)還是平行？重復(fù)與平行是同一個(gè)概念嗎？電子天平、250ml錐形瓶1樣品重量m= g紅薯粉1gn = n g電子天平1臺(tái)（公用）250ml錐形瓶1n=n個(gè)樣品真需要象指導(dǎo)中

11、要求的一樣精確稱取1.000g嗎？為什么？2、加入6mol/L HCl 10ml，蒸餾水15ml6mol/L HCl的作用是什么？為什么不用發(fā)煙鹽酸？10ml移液管2支（公用）、玻棒12支、移液管架1個(gè)（公用）10ml移液管2支（公用）移液管架1個(gè)（公用）玻棒1n=n支6mol/L HCl 10mln = 10n mL3、沸水浴中加熱30min沸水浴鍋需提前準(zhǔn)備好。恒溫水浴鍋2臺(tái)（公用）4、檢驗(yàn)水解程度：取12滴水解液置于白瓷板上，加1滴I-IK溶液檢驗(yàn)檢驗(yàn)樣品以1滴為宜。白瓷板1滴管125/50/100mL棕色滴瓶6個(gè)（公用）白瓷板1n=n個(gè)滴管1n=n支25/50/100mL棕色滴瓶6個(gè)（

12、公用）檢驗(yàn)樣品以1滴為宜。為什么？隨著水解進(jìn)程，檢驗(yàn)依次會(huì)出現(xiàn)什么現(xiàn)象？為什么？5、水解畢，冷卻至室溫6、中和：加入1滴酚酞指示劑，以10%的NaOH中和至溶液成微紅色為什么要中和？是進(jìn)行滴定中和嗎？25/50/100mL滴瓶4個(gè)（公用）100mL滴瓶8個(gè)（兩組共用）25/50/100mL滴瓶4個(gè)（公用）100mL滴瓶8個(gè)（兩組共用）酚酞指示劑100mL10%NaOH 500mL7、將樣品水解溶液定容至100ml100ml容量瓶1100ml容量瓶1n=n個(gè)8、將7中的溶液過(guò)濾漏斗1，定量濾紙1，100/ 200/250ml燒杯/錐形瓶1漏斗1n=n個(gè)定量濾紙2n=2n張100/200/250m

13、l燒杯/錐形瓶1n=n個(gè)9、稀釋：取濾液10ml，定容至100ml， 10ml移液管1，100ml容量瓶110ml移液管1n=n支100ml容量瓶1n=n個(gè)10、結(jié)果：得到稀釋1000倍的總糖水解液（三）、堿性酒石酸銅溶液的標(biāo)定1、準(zhǔn)確吸取堿性酒石酸銅甲液和乙液各5ml，置于250ml錐形瓶中，加蒸餾水10ml，加3粒玻璃珠玻璃珠的作用是什么？5ml移液管2，250ml錐形瓶13，(10ml移液管1)，玻璃珠5ml移液管4（公用）堿性酒石酸銅甲液和乙液各5ml3n=15n mL250ml錐形瓶3n=3n個(gè)玻璃珠，若干2、從滴定管中滴加約9ml葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液于錐形瓶中為什么只加約9ml？需要做平

14、行嗎？為什么？25/50ml滴定管125/50ml滴定管8支（兩組共用）3、加熱使其在2min中內(nèi)沸騰，準(zhǔn)確沸騰30s為保證盡快沸騰，需先將電爐預(yù)熱?？烧{(diào)電爐可調(diào)電爐8個(gè)（兩組共用）為什么需使沸騰？1、加快還原糖與Cu2+的反應(yīng)速度；2、防止空氣進(jìn)入，保證還原型亞甲基藍(lán)不被再氧化成氧化型；3、使得Cu2O不被氧化成CuO。為什么要保證溶液在2min內(nèi)沸騰？且準(zhǔn)確沸騰30s？保持蒸發(fā)量基本一致，使堿度不變，減少誤差，避免耗糖量增加。如何簡(jiǎn)便知道你的測(cè)試結(jié)果的準(zhǔn)確性？做平行試驗(yàn)，看樣液消耗量相差量，不應(yīng)該超過(guò)0.1ml。4、趁熱以1滴G標(biāo)準(zhǔn)液/2s速度滴定，至藍(lán)色褪去為終點(diǎn)滴定時(shí)不能隨意搖動(dòng)錐形瓶

15、，更不能從熱源上取下滴定。標(biāo)定酒石酸銅消耗的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液體積：V1= mL，V2= mL，V3= mL= mL為什么不能搖動(dòng)和從熱源上取下錐形瓶？(四)、樣品中糖的定量測(cè)定1、樣品溶液預(yù)測(cè)定為什么要進(jìn)行預(yù)測(cè)定？以確定還原糖濃度是否在0.1%左右，過(guò)大則稀釋。濃度過(guò)大則增加樣品量，增加滴定時(shí)間，造成更大誤差。(1)、準(zhǔn)確吸取堿性酒石酸銅甲液和乙液各5ml，置于250ml錐形瓶中，加蒸餾水10ml，加3粒玻璃珠玻璃器具前面用過(guò)，清洗烘干再用。堿性酒石酸銅甲液和乙液各5ml3n=15n mL(2)、加熱使其在2min中內(nèi)沸騰，準(zhǔn)確沸騰30s(3)、趁熱以先快后慢的速度從滴定管中滴加樣品溶液，待溶液藍(lán)

16、色變淺時(shí)以1滴樣液/2s速度滴定，至藍(lán)色褪去為終點(diǎn)。樣液消耗體積：V4= mL，V5= mL，V6= mL= mL 25/50ml滴定管n支2、樣品溶液測(cè)定(1) 準(zhǔn)確吸取堿性酒石酸銅甲液和乙液各5ml，置于250ml錐形瓶中，加蒸餾水10ml，加3粒玻璃珠，玻璃器具前面用過(guò)，清洗烘干再用。堿性酒石酸銅甲液和乙液各5ml3n=15n mL(2) 加入比預(yù)測(cè)時(shí)樣品溶液消耗總體積少1ml的樣液；為什么？以保證在1分鐘內(nèi)完成滴定工作，和標(biāo)準(zhǔn)曲線工作條件盡可能一致，減少誤差，提高準(zhǔn)確度。(3) 加熱使其在2min中內(nèi)沸騰，準(zhǔn)確沸騰30s； (4) 趁熱以1滴樣液/2s速度滴定，至藍(lán)色褪去為終點(diǎn)。樣液消

17、耗體積：V7= mL，V8= mL，V9= mL= mL五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果及計(jì)算堿性酒石酸銅的標(biāo)定預(yù)測(cè)定總糖樣品測(cè)定(%)總糖耗糖液體積(ml)相當(dāng)葡糖含量(mg)平均值(mg)計(jì)算公式：堿性酒石酸銅的標(biāo)定：F = C F10ml堿性酒石酸銅溶液相當(dāng)于G的量，mgC標(biāo)準(zhǔn)G溶液的濃度，mg/ml標(biāo)定時(shí)消耗標(biāo)準(zhǔn)G溶液的體積，mL總糖含量：m樣品重量，g總糖樣品溶液的總體積1000mg換算成g的系數(shù)實(shí)驗(yàn)報(bào)告示范實(shí)驗(yàn) 還原糖和總糖的測(cè)定實(shí)驗(yàn)二：(Fehling試劑)直接(熱)滴定定糖法一、實(shí)驗(yàn)原理還原糖是指含有自由醛基(如葡萄糖)或酮基(如果糖)的單糖和某些二糖(如乳糖、麥芽糖)。在堿性溶液中，還原糖能將金

18、屬離子(Cu2+、Hg2+、Ag+等)還原，而還原糖本身則被氧化成各種羥酸類化合物。該特性常用于還原糖的定性和定量測(cè)定。菲林試劑是將堿性酒石酸銅甲液和乙液等體積混合后，生成可溶性的酒石酸鉀鈉銅；在加熱條件下，還原糖與酒石酸鉀鈉銅反應(yīng)，酒石酸鉀鈉銅被還原糖還原，產(chǎn)生紅色氧化亞銅沉淀，還原糖則被氧化和降解。氧化-還原指示劑亞甲基藍(lán)氧化能力比二價(jià)銅弱，在溶液中二價(jià)銅離子全部被還原后，稍過(guò)量的還原糖可使藍(lán)色的氧化型的亞甲基藍(lán)還原為無(wú)色的還原型的亞甲基藍(lán)，即達(dá)滴定終點(diǎn)。根據(jù)樣液消耗量可計(jì)算出還原糖的含量。二、實(shí)驗(yàn)用品（一）、器材（需要給出數(shù)量）電熱恒溫水浴鍋、調(diào)溫電爐、烘箱100ml燒杯、250mL錐形

19、瓶、100ml容量瓶、1000ml容量瓶、5ml移液管、10ml移液管、吸管、50/100ml漏斗、吸耳球、滴定管、玻璃棒、白瓷板、定量濾紙、玻璃珠若干（二）、試劑堿性酒石酸銅甲液：15g CuSO45H2O + 0.05g 亞甲基藍(lán) + H2O，溶解；定容1000ml。堿性酒石酸銅乙液：50g 酒石酸鉀鈉 + 75g NaOH，溶于水；+ 4g亞鐵氰化鉀，溶解；定容1000ml。0.1%葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液：G在98100下干燥至恒重；準(zhǔn)確稱取1.000g無(wú)水葡萄糖，蒸餾水溶解；加水約750ml時(shí)，加入5mlHCl；定容1000ml。I-IK溶液：5g I + 10g IK，溶于100ml蒸餾水中。6mol/L HCl：258.00ml濃HCl（36%），稀釋至500ml。10%NaOH：50g NaOH溶于500ml蒸餾水中。0.1%酚酞指示劑：0.1g酚酞溶于100ml蒸餾水中。（三）、材料紅薯粉（換淀粉，酸水解）三、實(shí)驗(yàn)操作步驟（一）、樣品中總糖的水解及提?。簻?zhǔn)確稱取紅薯粉（換淀粉0.5g）1g于250ml錐形瓶中；加入6mol/L HCl 10m