第三章生物制品的菌種與毒種

1、第三章 生物制品的菌種與毒種主要內(nèi)容：主要內(nèi)容：一、菌種、毒種的概念與分類一、菌種、毒種的概念與分類 二、菌種、毒種的一般要求二、菌種、毒種的一般要求 三、菌種、毒種的選育三、菌種、毒種的選育 一、生物制品菌種和毒種的概念與分類一、生物制品菌種和毒種的概念與分類 ( (一一) )概念概念 凡應(yīng)用于生物制品凡應(yīng)用于生物制品( (疫苗、免疫血清及診斷制劑等疫苗、免疫血清及診斷制劑等) )生產(chǎn)、檢生產(chǎn)、檢定和研究的細(xì)菌、病毒的原種，以及分類地位上在原蟲以下的生定和研究的細(xì)菌、病毒的原種，以及分類地位上在原蟲以下的生物種均屬生物制品的菌種與毒種范圍。其中主要指生物制品生產(chǎn)，物種均屬生物制品的菌種與毒種

2、范圍。其中主要指生物制品生產(chǎn)，檢定用的菌種與毒種。有人建議檢定用的菌種與毒種。有人建議, ,將制苗用的細(xì)胞株將制苗用的細(xì)胞株( (二倍體細(xì)胞二倍體細(xì)胞株、傳代細(xì)胞系等株、傳代細(xì)胞系等) )納入菌種與毒種的管理范圍。納入菌種與毒種的管理范圍。 菌（毒）種是國家的重要生物資源，現(xiàn)在世界各國對這項資菌（毒）種是國家的重要生物資源，現(xiàn)在世界各國對這項資源都極為重視，并設(shè)置各種專業(yè)性的保藏機構(gòu)，現(xiàn)在不少國家的源都極為重視，并設(shè)置各種專業(yè)性的保藏機構(gòu)，現(xiàn)在不少國家的菌種與毒種中心都用電子計算機進行管理，在歐洲甚至準(zhǔn)備對國菌種與毒種中心都用電子計算機進行管理，在歐洲甚至準(zhǔn)備對國家間的菌種中心用電子計算機聯(lián)網(wǎng)

3、。家間的菌種中心用電子計算機聯(lián)網(wǎng)。 ( (二二) )菌、毒種的分類菌、毒種的分類 生物制品用的菌種和毒種，按其在生物制品生產(chǎn)、檢定生物制品用的菌種和毒種，按其在生物制品生產(chǎn)、檢定過程中用途的不同，可分為四類：過程中用途的不同，可分為四類： 1.1.生產(chǎn)用的菌種和毒種生產(chǎn)用的菌種和毒種 2.2.工具菌種和毒種工具菌種和毒種3.3.檢定用的菌種和毒種檢定用的菌種和毒種 4.4.標(biāo)準(zhǔn)菌株標(biāo)準(zhǔn)菌株/ /毒株以及參考菌株毒株以及參考菌株/ /毒株毒株 直接生產(chǎn)用的菌和毒種直接生產(chǎn)用的菌和毒種 免疫用的菌和毒種免疫用的菌和毒種 加工用的菌和毒種加工用的菌和毒種 二、生物制品菌種和毒種的一般要求二、生物制品

4、菌種和毒種的一般要求 菌種和毒種是生物制品質(zhì)量的關(guān)鍵因素之一。制備疫苗、免疫血清菌種和毒種是生物制品質(zhì)量的關(guān)鍵因素之一。制備疫苗、免疫血清必須安全、有效；診斷制劑必須特異而敏感。必須安全、有效；診斷制劑必須特異而敏感。( (一一) )來源來源( (歷史歷史) )清楚，資料完整清楚，資料完整 由專門機關(guān)保管、分發(fā)的生物制品用菌種和毒種，對其來源、分離和由專門機關(guān)保管、分發(fā)的生物制品用菌種和毒種，對其來源、分離和傳代的歷史、生物學(xué)特性以及免疫學(xué)特性、安全與效力檢定等資料，有傳代的歷史、生物學(xué)特性以及免疫學(xué)特性、安全與效力檢定等資料，有關(guān)審批單位的鑒定，結(jié)論及審核批示材料均應(yīng)清楚。關(guān)審批單位的鑒定，

5、結(jié)論及審核批示材料均應(yīng)清楚。 獸醫(yī)生物制品制造規(guī)程獸醫(yī)生物制品制造規(guī)程規(guī)定，凡經(jīng)農(nóng)業(yè)部發(fā)給批準(zhǔn)文號的產(chǎn)品，生規(guī)定，凡經(jīng)農(nóng)業(yè)部發(fā)給批準(zhǔn)文號的產(chǎn)品，生產(chǎn)所需的菌種和毒種，由中監(jiān)所或中監(jiān)所委托分管的單位負(fù)責(zé)供應(yīng)。產(chǎn)所需的菌種和毒種，由中監(jiān)所或中監(jiān)所委托分管的單位負(fù)責(zé)供應(yīng)。 我國獸醫(yī)生物制品菌種和毒種管理我國獸醫(yī)生物制品菌種和毒種管理3 3種情況：中國獸藥監(jiān)察所（中監(jiān)所）鑒種情況：中國獸藥監(jiān)察所（中監(jiān)所）鑒定和保管；委托有關(guān)單位代管，如委托哈爾濱獸醫(yī)研究所管理的豬丹毒定和保管；委托有關(guān)單位代管，如委托哈爾濱獸醫(yī)研究所管理的豬丹毒GCGC4242菌菌苗株、黑龍江省生物制品一廠代管的禽霍亂苗株、黑龍江省生

6、物制品一廠代管的禽霍亂G190E140G190E140菌苗株等；各地菌種，由菌苗株等；各地菌種，由中監(jiān)所統(tǒng)一鑒定，如大腸桿菌。中監(jiān)所統(tǒng)一鑒定，如大腸桿菌。 ( (二二) )生物學(xué)特性比較典型生物學(xué)特性比較典型 生物學(xué)特性包括菌種和毒的形態(tài)特征、培養(yǎng)特性生物學(xué)特性包括菌種和毒的形態(tài)特征、培養(yǎng)特性( (菌落特征、蝕斑特征菌落特征、蝕斑特征) )：對動物的病原性特點及引起細(xì)胞病變的特征；生物化學(xué)、免疫學(xué)及血：對動物的病原性特點及引起細(xì)胞病變的特征；生物化學(xué)、免疫學(xué)及血清學(xué)特性等等，均應(yīng)符合標(biāo)準(zhǔn)。清學(xué)特性等等，均應(yīng)符合標(biāo)準(zhǔn)。 制造滅活苗的菌種和毒株，應(yīng)該是標(biāo)準(zhǔn)強毒或者弱毒，以免疫原性優(yōu)良為制造滅活苗的

7、菌種和毒株，應(yīng)該是標(biāo)準(zhǔn)強毒或者弱毒，以免疫原性優(yōu)良為基本條件，必須經(jīng)過嚴(yán)格的審查與鑒定，要求一切性狀必須典型。如基本條件，必須經(jīng)過嚴(yán)格的審查與鑒定，要求一切性狀必須典型。如規(guī)程規(guī)程規(guī)定，制造豬丹毒滅活苗，必須選擇典型光滑型、圓形、露珠狀的小菌落。制規(guī)定，制造豬丹毒滅活苗，必須選擇典型光滑型、圓形、露珠狀的小菌落。制造弱毒苗的毒種與菌種，毒力必須穩(wěn)定，形態(tài)特征典型，不易變異，特別應(yīng)注造弱毒苗的毒種與菌種，毒力必須穩(wěn)定，形態(tài)特征典型，不易變異，特別應(yīng)注意其與強毒株生物學(xué)性狀區(qū)別的要點。意其與強毒株生物學(xué)性狀區(qū)別的要點。 生物制品主要是用于預(yù)防、治療和診斷畜禽等傳染性疾病的免疫制劑，因生物制品主要是

8、用于預(yù)防、治療和診斷畜禽等傳染性疾病的免疫制劑，因此要求生物制品生產(chǎn)用的菌種和毒種必須具有良好的抗原性和免疫原性。此要求生物制品生產(chǎn)用的菌種和毒種必須具有良好的抗原性和免疫原性。 對制備活疫苗的菌種和毒種，必須嚴(yán)格篩選、嚴(yán)格檢驗。特別應(yīng)注意其安對制備活疫苗的菌種和毒種，必須嚴(yán)格篩選、嚴(yán)格檢驗。特別應(yīng)注意其安全性，包括菌種和毒種本身及外源性污染兩個方面。全性，包括菌種和毒種本身及外源性污染兩個方面。( (三三) )血清型相符血清型相符 在菌種和毒種選擇與鑒定時，需特別注意菌種和毒種特性與血清型與在菌種和毒種選擇與鑒定時，需特別注意菌種和毒種特性與血清型與疫苗使用地區(qū)流行的病原相符。疫苗使用地區(qū)流

9、行的病原相符。 ( (四四) )遺傳性狀穩(wěn)定遺傳性狀穩(wěn)定 菌種和毒種在保存、傳代和使用過程中，受各種因素影響而變異，因菌種和毒種在保存、傳代和使用過程中，受各種因素影響而變異，因此保證其遺傳性狀穩(wěn)定是保證生物制品質(zhì)量的重要因素之一。此保證其遺傳性狀穩(wěn)定是保證生物制品質(zhì)量的重要因素之一。 微生物種是以群體形式存在，遺傳學(xué)純一性和相對穩(wěn)定性是指群體變異幅度微生物種是以群體形式存在，遺傳學(xué)純一性和相對穩(wěn)定性是指群體變異幅度必須有嚴(yán)格的限制。為保持種的純一和相對穩(wěn)定，生產(chǎn)生物制品的菌、毒種應(yīng)通必須有嚴(yán)格的限制。為保持種的純一和相對穩(wěn)定，生產(chǎn)生物制品的菌、毒種應(yīng)通過定期傳代、篩選、檢定等工作進行控制。過

10、定期傳代、篩選、檢定等工作進行控制。 生產(chǎn)用的病毒毒種是否具有同質(zhì)性，直接關(guān)系到生物制品的質(zhì)量。我國用于生產(chǎn)用的病毒毒種是否具有同質(zhì)性，直接關(guān)系到生物制品的質(zhì)量。我國用于生產(chǎn)畜禽用活疫苗的病毒毒種，一類是我國自行分離培育的弱毒株；另一類是從生產(chǎn)畜禽用活疫苗的病毒毒種，一類是我國自行分離培育的弱毒株；另一類是從國外引進的。二者大部分都未進行過純化和標(biāo)準(zhǔn)化，均屬于群體國外引進的。二者大部分都未進行過純化和標(biāo)準(zhǔn)化，均屬于群體( (多克隆多克隆) )病毒，病毒，病毒粒子的大小與構(gòu)造、增殖速度、蝕斑形成能力。病毒粒子的大小與構(gòu)造、增殖速度、蝕斑形成能力。三、菌種和毒種選育三、菌種和毒種選育 ( (一一)

11、 )強毒力菌種和毒種選育強毒力菌種和毒種選育 強毒菌種和毒種廣泛用于診斷制品、抗病血清、滅活疫苗和疫苗制強毒菌種和毒種廣泛用于診斷制品、抗病血清、滅活疫苗和疫苗制品的效力檢驗。用作人工培育弱毒的原始毒種，并用于微生物學(xué)、免疫品的效力檢驗。用作人工培育弱毒的原始毒種，并用于微生物學(xué)、免疫學(xué)及傳染病學(xué)等研究。學(xué)及傳染病學(xué)等研究。 強毒菌種和毒種常來自疾病流行地區(qū)的典型患病動物體內(nèi)分離。在疾強毒菌種和毒種常來自疾病流行地區(qū)的典型患病動物體內(nèi)分離。在疾病流行初期，從臨床癥狀和病理變化典型而又未經(jīng)任何治療的患病動物病流行初期，從臨床癥狀和病理變化典型而又未經(jīng)任何治療的患病動物體分離到毒力強和抗原性良好的

12、自然強菌株和毒株，如我國的石門系豬體分離到毒力強和抗原性良好的自然強菌株和毒株，如我國的石門系豬瘟病毒和多殺性巴氏桿菌瘟病毒和多殺性巴氏桿菌C44-1C44-1等。然后，用從各地分離的自然強菌株和等。然后，用從各地分離的自然強菌株和毒株中篩選出符合標(biāo)準(zhǔn)的菌株和毒株，供生物制品的制造和檢驗。毒株中篩選出符合標(biāo)準(zhǔn)的菌株和毒株，供生物制品的制造和檢驗。 病毒或細(xì)菌分離病毒或細(xì)菌分離雞胚雞胚凍干、冷凍或冷藏保存凍干、冷凍或冷藏保存篩選出毒力強，生長穩(wěn)定、純凈的毒株，用于制備疫苗、診斷液篩選出毒力強，生長穩(wěn)定、純凈的毒株，用于制備疫苗、診斷液和治療用抗體活用于疫苗效力檢驗等和治療用抗體活用于疫苗效力檢驗

13、等穩(wěn)定性試驗穩(wěn)定性試驗抗原性試驗抗原性試驗致病力試驗致病力試驗純粹性試驗純粹性試驗原動物原動物抗原性抗原性細(xì)胞細(xì)胞LD50ELD50免疫原性免疫原性實驗實驗動物動物EID50攻毒保護攻毒保護試驗試驗血清學(xué)血清學(xué)試驗試驗TICD50( (一一) )強毒力菌種和毒種選育強毒力菌種和毒種選育 1 1毒力鑒定毒力鑒定 常用本動物、易感實驗動物、雞胚或易感細(xì)胞測定分離菌株和毒常用本動物、易感實驗動物、雞胚或易感細(xì)胞測定分離菌株和毒株株MLD(MLD(最小致死量最小致死量) )、LDLD5050( (半數(shù)致死量半數(shù)致死量) )、CELDCELD5050( (雞胚半數(shù)致死量雞胚半數(shù)致死量) )、CEIDCE

14、ID5050( (雞胚半數(shù)感染量雞胚半數(shù)感染量) )或或TCIDTCID5050( (細(xì)胞半數(shù)感染量細(xì)胞半數(shù)感染量) ) 2 2免疫原性測定免疫原性測定 菌株和毒株的抗原性包括：抗原與抗體結(jié)合發(fā)生特異性反應(yīng)的反菌株和毒株的抗原性包括：抗原與抗體結(jié)合發(fā)生特異性反應(yīng)的反應(yīng)原性和刺激機體產(chǎn)生抗體及致敏淋巴細(xì)胞的免疫原性。反應(yīng)原性多應(yīng)原性和刺激機體產(chǎn)生抗體及致敏淋巴細(xì)胞的免疫原性。反應(yīng)原性多采用血清學(xué)方法測定，以抗體滴度或效價表示；免疫原性多采用對免采用血清學(xué)方法測定，以抗體滴度或效價表示；免疫原性多采用對免疫動物用定量原強毒菌株和毒株攻擊測定保護效力。無論致病力測定疫動物用定量原強毒菌株和毒株攻擊測

15、定保護效力。無論致病力測定或抗原測定，均應(yīng)設(shè)陰陽性對照，否則無效?；蚩乖瓬y定，均應(yīng)設(shè)陰陽性對照，否則無效。 3 3穩(wěn)定性測定穩(wěn)定性測定 對適應(yīng)于培養(yǎng)基、雞胚或易感細(xì)胞上增值培養(yǎng)和傳代的菌株或毒對適應(yīng)于培養(yǎng)基、雞胚或易感細(xì)胞上增值培養(yǎng)和傳代的菌株或毒株的毒力（致病力）和抗原性還要進行穩(wěn)定性測定，以證明其后代特株的毒力（致病力）和抗原性還要進行穩(wěn)定性測定，以證明其后代特性不變，才有使用價值，并參與篩選擇優(yōu)。性不變，才有使用價值，并參與篩選擇優(yōu)。 4 4綜合判定，凍干保存綜合判定，凍干保存 根據(jù)致病力、抗原性和穩(wěn)定性測定結(jié)果，篩選出毒力強、形狀穩(wěn)根據(jù)致病力、抗原性和穩(wěn)定性測定結(jié)果，篩選出毒力強、形狀

16、穩(wěn)定的菌株或毒株，經(jīng)增值后進行凍干保存。凍干后菌種于定的菌株或毒株，經(jīng)增值后進行凍干保存。凍干后菌種于4C4C保存，保存，凍干的病毒種保存于凍干的病毒種保存于-20-20以下，可保存多年。通常經(jīng)鑒定的菌株或以下，可保存多年。通常經(jīng)鑒定的菌株或毒種批，按需分裝后凍干保存，可使用多年。凍干菌株或毒種一經(jīng)動毒種批，按需分裝后凍干保存，可使用多年。凍干菌株或毒種一經(jīng)動物傳代，即應(yīng)重新分離、鑒定和檢測后方能供種子或種毒用。物傳代，即應(yīng)重新分離、鑒定和檢測后方能供種子或種毒用。 生產(chǎn)與檢驗用菌（毒、蟲）種的研究資料生產(chǎn)與檢驗用菌（毒、蟲）種的研究資料1. 生產(chǎn)用菌（毒、蟲）種來源和特性。2. 生產(chǎn)用菌（毒

17、、蟲）種種子批建立的有關(guān)資料。3. 生產(chǎn)用菌（毒、蟲）種基礎(chǔ)種子的全面鑒定報告。4. 生產(chǎn)用菌（毒、蟲）種最高代次范圍及其依據(jù)。5. 檢驗用強毒株代號和來源。6. 檢驗用強毒株純凈、毒力、含量測定、血清學(xué)鑒定等試驗的詳細(xì)方法和結(jié)果。中華人民共和國農(nóng)業(yè)部公告第442號 根據(jù)獸藥管理條例和獸藥注冊辦法的規(guī)定，我部制定了獸用生物制品注冊分類及注冊資料要求、化學(xué)藥品注冊分類及注冊資料要求、中獸藥、天然藥物分類及注冊資料要求、獸醫(yī)診斷制品注冊分類及注冊資料要求、獸用消毒劑分類及注冊資料要求、獸藥變更注冊事項及申報資料要求和進口獸藥再注冊申報資料項目，現(xiàn)予以發(fā)布，自2005年1月1日起施行。二四年十二月二

18、十二日第一部分第一部分 預(yù)防用獸用生物制品預(yù)防用獸用生物制品( (二二) )弱毒菌種和毒種的選育弱毒菌種和毒種的選育 用途：用途：弱毒菌種和毒種主要用于弱毒活疫苗、部分診斷制品以及抗血清的制造。特性：特性：致病力極微弱或無致病力，免疫原性優(yōu)良，能使免疫動物獲得堅強的免疫力。來源：來源：從自然界篩選，或以人工改變野生型強毒株的遺傳特性進行培育獲得。 無論自然弱毒株或人工培育弱毒株，均是由微生物基因核苷酸堿基的改變，而導(dǎo)致遺傳性狀突變及毒力降低的結(jié)果。1.1.弱毒菌種和毒種弱毒菌種和毒種弱毒菌（毒）種的選育弱毒菌（毒）種的選育化學(xué)途徑化學(xué)途徑人工誘變致弱人工誘變致弱同源動物同源動物(如如NDV L

19、aSota株株)自然弱毒株的分離自然弱毒株的分離異源動物異源動物(如如HVT FC126株株)物理途徑物理途徑生物途徑生物途徑亞硝基胍亞硝基胍醋酸鉈醋酸鉈洗衣粉洗衣粉 高溫高溫紫外線紫外線 非易感動物非易感動物雞胚、細(xì)胞雞胚、細(xì)胞雜交減毒雜交減毒 2.2.弱毒菌種和毒種的選育途徑弱毒菌種和毒種的選育途徑2.2.經(jīng)典方法誘發(fā)突變?nèi)醵局甑倪x育經(jīng)典方法誘發(fā)突變?nèi)醵局甑倪x育 原理和方法：原理和方法： 某些化學(xué)藥物可引起微生物基因核苷酸堿基發(fā)生改變，從而使該微生物遺傳性狀產(chǎn)生變化，這類物質(zhì)為誘變劑。 物理因素也能引起微生物突變，使其代謝類型發(fā)生變化，從而獲得遺傳性狀不同于祖代的毒株。 異種非易感動物能使

20、強迫進入的微生物經(jīng)傳代誘變、適應(yīng)而發(fā)生遺傳性狀不同于祖代的突變，也能育成弱毒株。 此外，也可通過細(xì)胞或禽胚等傳代發(fā)生突變而育成弱毒株。 以上這些途徑，既可單獨使用，也可交叉聯(lián)合使用。以上這些途徑，既可單獨使用，也可交叉聯(lián)合使用。 1.1.自然弱毒株的選育自然弱毒株的選育 自然弱毒株又稱自發(fā)突變毒株，由自然強毒株在自然因素作用下因遺傳基因突變形成了與祖代性狀(特別是致病力和抗原性)不盡相同的生物株。這些自然因素，如異種非易感動物、溫度、日光、干燥、紫外線等都可能是導(dǎo)致細(xì)菌和病毒自發(fā)突變的原因。因此，人們往往有意或無意地從自然中分離、篩選和育成一些弱毒菌(毒)株，作為獸醫(yī)生物制品的種毒。 例如，雞

21、新城疫出例如，雞新城疫出LaSotaLaSota弱毒株和弱毒株和D10D10，是分別從自然雞群和鴨群中分離，是分別從自然雞群和鴨群中分離到的，然后再通過克隆、挑選等途徑育成。雞馬立克氏病火雞皰疹病毒到的，然后再通過克隆、挑選等途徑育成。雞馬立克氏病火雞皰疹病毒FC126FC126株株即分離于火雞，對雞無致病性，其抗原性與雞馬立克氏病病毒一致。然而，微即分離于火雞，對雞無致病性，其抗原性與雞馬立克氏病病毒一致。然而，微生物自發(fā)突變率往往很低，形成具有穩(wěn)定遺傳性狀的過程比較長，因此獲得的生物自發(fā)突變率往往很低，形成具有穩(wěn)定遺傳性狀的過程比較長，因此獲得的機率不高。機率不高。 (1)(1)通過化學(xué)途

22、徑選通過化學(xué)途徑選 微生物在體外培養(yǎng)傳代過程中，經(jīng)誘變劑處理，可極大地提高其基因突變微生物在體外培養(yǎng)傳代過程中，經(jīng)誘變劑處理，可極大地提高其基因突變率，從而獲得弱毒菌株或毒株。例如，用亞硝酸基胍處理支原體育成了雞支原率，從而獲得弱毒菌株或毒株。例如，用亞硝酸基胍處理支原體育成了雞支原體疫苗株；豬副傷寒沙門氏菌強毒株則在含有體疫苗株；豬副傷寒沙門氏菌強毒株則在含有1/5001/5001/40001/4000醋酸鉈的肉湯培養(yǎng)醋酸鉈的肉湯培養(yǎng)基中培養(yǎng)傳代基中培養(yǎng)傳代5050代次，培育成弱毒株用于制造疫苗。代次，培育成弱毒株用于制造疫苗。 (2)(2)通過物理途徑選育通過物理途徑選育 熱和干燥等物理因

23、素可干擾熱和干燥等物理因素可干擾DNADNA的復(fù)制，從而引起突變，導(dǎo)致遺傳性狀的的復(fù)制，從而引起突變，導(dǎo)致遺傳性狀的改變。改變。18811881年巴斯德將炭疽強毒菌株在年巴斯德將炭疽強毒菌株在42.542.5高溫下長期傳代培養(yǎng)，導(dǎo)致了遺高溫下長期傳代培養(yǎng)，導(dǎo)致了遺傳性狀變異，從而育成了炭疽弱毒菌株作為制造用菌種；傳性狀變異，從而育成了炭疽弱毒菌株作為制造用菌種；18851885年又將含有狂犬年又將含有狂犬病病毒的腦脊髓置于干燥條件中處理，制成弱毒疫苗。日本乙型腦炎病毒強毒病病毒的腦脊髓置于干燥條件中處理，制成弱毒疫苗。日本乙型腦炎病毒強毒株則經(jīng)紫外線照射后引起突變，從而出現(xiàn)遺傳性狀分離，再進行

24、蝕斑挑選，育株則經(jīng)紫外線照射后引起突變，從而出現(xiàn)遺傳性狀分離，再進行蝕斑挑選，育成了弱毒株。成了弱毒株。 (3)(3)通過生物途徑選育通過生物途徑選育 通過生物途徑育成的弱毒株，其生物穩(wěn)定性極佳，但育成過程比較長。迄通過生物途徑育成的弱毒株，其生物穩(wěn)定性極佳，但育成過程比較長。迄今為止，大部分活疫苗的菌種和毒種是由該途徑選育而成。常用育成路線有今為止，大部分活疫苗的菌種和毒種是由該途徑選育而成。常用育成路線有: : 1)1)適應(yīng)非易感動物適應(yīng)非易感動物 ( (非自然宿主非自然宿主) ) 通常用兔、小鼠、地鼠、豚鼠、雞等實驗動物，其優(yōu)點是動物來源廣、飼通常用兔、小鼠、地鼠、豚鼠、雞等實驗動物，其

25、優(yōu)點是動物來源廣、飼養(yǎng)管理方便、成本低及操作簡便。多采取大劑量腹腔、靜脈或腦內(nèi)接種。如我養(yǎng)管理方便、成本低及操作簡便。多采取大劑量腹腔、靜脈或腦內(nèi)接種。如我國的豬瘟兔化弱毒株，是將豬瘟病毒強毒株通過兔體傳國的豬瘟兔化弱毒株，是將豬瘟病毒強毒株通過兔體傳400400余代后育成的；鴨瘟余代后育成的；鴨瘟雞胚化弱毒株則是將強毒株通過鴨胚雞胚化弱毒株則是將強毒株通過鴨胚9 9代和雞胚代和雞胚2323代后培育而成。代后培育而成。 2)2)適應(yīng)細(xì)胞適應(yīng)細(xì)胞 通常多采用同源或異源動物組織的原代細(xì)胞，或者是一種細(xì)胞，或者用通常多采用同源或異源動物組織的原代細(xì)胞，或者是一種細(xì)胞，或者用2 2種種細(xì)胞。國外育成的

26、豬瘟細(xì)胞。國外育成的豬瘟GPEGPE弱毒株是將豬瘟弱毒株是將豬瘟ALDALD強毒株通過豬睪丸細(xì)胞強毒株通過豬睪丸細(xì)胞142142代和牛代和牛睪丸細(xì)胞睪丸細(xì)胞3636代后，再在豚鼠腎細(xì)胞傳代后，再在豚鼠腎細(xì)胞傳4141代后育成的。我國的馬傳染性貧血驢白代后育成的。我國的馬傳染性貧血驢白細(xì)胞弱毒株，是將馬傳貧驢強毒株通過驢白細(xì)胞傳代育成的。細(xì)胞弱毒株，是將馬傳貧驢強毒株通過驢白細(xì)胞傳代育成的。 3)3)雜交減毒雜交減毒 將兩種遺傳性狀不同的菌株或毒株，在傳代培育中進行自然雜交，以導(dǎo)致將兩種遺傳性狀不同的菌株或毒株，在傳代培育中進行自然雜交，以導(dǎo)致不同菌株或毒株間基因發(fā)生交換而育成有使用價值的弱毒株

27、。如流行性感冒弱不同菌株或毒株間基因發(fā)生交換而育成有使用價值的弱毒株。如流行性感冒弱毒株的育成，是將溫度敏感弱毒株毒株的育成，是將溫度敏感弱毒株( (抗原性較低抗原性較低) )與流行強毒株進行混合培養(yǎng)傳與流行強毒株進行混合培養(yǎng)傳代，便兩者毒力基因發(fā)生交換，其后代即成為毒力低和抗原性強的毒株，再用代，便兩者毒力基因發(fā)生交換，其后代即成為毒力低和抗原性強的毒株，再用于制造弱毒疫苗。于制造弱毒疫苗。 由于微生物變異的方向難以預(yù)測，所以只能在培育過程中對各個表現(xiàn)遺傳由于微生物變異的方向難以預(yù)測，所以只能在培育過程中對各個表現(xiàn)遺傳性狀的群體按照需要進行選擇，以求篩選出目的變異株。這種選擇首先從外表性狀的群體按照需要進行選擇，以求篩選出目的變異株。這種選擇首先從外表觀察和檢查開始；然后再作系統(tǒng)的檢測篩選。觀察和檢查開始；然后再作系統(tǒng)的檢測篩選。 初選依據(jù)包括初選依據(jù)包括: : 細(xì)菌菌落特征變異，如菌落大小、形狀，色澤、粗糙或細(xì)菌菌落特征變異，如菌落大小、形狀，色澤、粗糙或光滑稱熒光等；病毒蝕斑的變異；對溫度敏感性變異；對藥物敏感性變光滑稱熒光等；病毒蝕斑的變異；對溫度敏感性變異；對藥物敏感性變異；對營養(yǎng)要求變異，如對氨基酸的特殊需要；對宿主動物易感性變異。異；對營養(yǎng)要求變異，如對氨基酸的特殊需要；對宿主動物易感