抗腫瘤藥物藥效學(xué)指導(dǎo)原則

1、抗腫瘤藥物藥效學(xué)指導(dǎo)原則 一、基本原則1. 抗腫瘤藥物分類(1) 細(xì)胞毒類藥物 (cytotoxic agent) ：包括干擾核酸和蛋白質(zhì)合成、抑制拓?fù)?異構(gòu)酶及作用于微管系統(tǒng)的藥物等；(2) 生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑 (biological response modifier) ；(3) 腫瘤耐藥逆轉(zhuǎn)劑 (resistance reversal agent)；(4) 腫瘤治療增敏劑 (oncotherapy sensitizer) ；(5) 腫瘤血管生成抑制劑 (tumor angiogenesis inhibitor) ；(6) 分化誘導(dǎo)劑 (differentiation inducing age

2、nt)；(7) 生長因子抑制劑 (growth factor inhibitor)；(8) 反義寡核苷酸 (antisense oligonucleotide) 。2. 抗腫瘤藥物藥效學(xué)需研究內(nèi)容2.1 包括體外抗腫瘤試驗，體內(nèi)抗腫瘤試驗。2.2 評價藥物的抗癌活性時，以體內(nèi)試驗結(jié)果為主，同時參考體外試驗結(jié)果以 做出正確的結(jié)論。2.3 I 類抗腫瘤新藥應(yīng)進(jìn)行藥物作用機(jī)制初步研究。二、體外抗腫瘤活性試驗1. 試驗?zāi)康?.1 對候選化合物進(jìn)行初步篩選；1.2 了解候選化合物的抗瘤譜；1.3 為隨后進(jìn)行的體內(nèi)抗腫瘤試驗提供參考，如劑量范圍、腫瘤類別等2. 試驗方法選用 10-15 株人癌細(xì)胞株，根據(jù)

3、試驗?zāi)康倪x擇相應(yīng)細(xì)胞系及適量的細(xì)胞接種濃度，按常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)法進(jìn)行培養(yǎng)；推薦使用四氮唑鹽MTT還原法、XTT還原法、 磺酰羅丹明 B 染色法、或 51Cr 釋放試驗、集落形成法等測定藥物的抗癌作用。 藥物與細(xì)胞共培養(yǎng)時間一般為 48-72 小時，貼壁細(xì)胞需先貼壁 24 小時后再給 藥。試驗應(yīng)設(shè)陽性及陰性對照組， 陽性對照用一定濃度的標(biāo)準(zhǔn)抗腫瘤藥， 陰性對 照為溶媒對照。3. 評價標(biāo)準(zhǔn) 以同一樣品不同濃度對腫瘤細(xì)胞抑制率作圖可得到劑量效應(yīng)曲線，然后采用 Logit 法計算半數(shù)有效濃度 (IC50 值或 EC50 值) 。體外試驗至少重復(fù)一次 附注：評價藥物抗癌活性的方法：1. MTT 還原法1.1

4、 基本原理：四氮唑 MTT,3-(4,5-dimethylibiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazoliumbromide 是一種能接受氫原子的染料。 活細(xì)胞線粒體中與 NADP 相關(guān)的脫氫酶 在細(xì)胞內(nèi)可將黃色的 MTT 轉(zhuǎn)化成不溶性的藍(lán)紫色的甲 月替 (formazan) ，而 死的細(xì)胞則無此功能。 用二甲基亞諷 （DMSO） 溶解甲 月替 后，在一定波長下用 酶標(biāo)儀測定光密度值，即可定量測出細(xì)胞的存活率。1.2 操作步驟 :1.2.1 選用對數(shù)生長期的貼壁腫瘤細(xì)胞，用胰酶消化后，用含 10 小牛血清的 RPMI 1640培養(yǎng)基配成5000個/ml的細(xì)胞懸液，接種在

5、96孔培養(yǎng)板中，每 孔接種 2001, 37 C, 5%CO2 培養(yǎng) 24 h 。1.2.2 實驗組換新的含不同濃度被測樣品的培養(yǎng)基，對照組則換含等體積溶劑 的培養(yǎng)基，每組設(shè)35平行孔，37 C, 5 %CO2培養(yǎng)45 d。1.2.3 棄去上清液，每孔加入200卩新鮮配制的含0.2 mg / ml MTT的無血 清培養(yǎng)基.37 T繼續(xù)培養(yǎng)4 h。小心棄上清，并加入200卩l(xiāng) DMSO，用微型超 聲振蕩器混勻后，在酶標(biāo)儀上以試驗波長為 570 nm ，參比波長為 450 nm 測 定光密度值。1.3 結(jié)果評定 :按下式計算藥物對腫瘤細(xì)胞生長的抑制率：腫瘤細(xì)胞生長抑制率= （1- OD實驗/OD對

6、照）X100 % 以同一樣品的不同濃度對腫瘤細(xì)胞生長抑制率作圖可得到劑量反應(yīng)曲線， 從中求 出樣品的半數(shù)殺傷濃度IC50。合成化合物或植物提取純品的IC50 V 10 yg/ m1或植物粗提物的IC50 V 20卩/m1時，則判斷樣品在體外對腫瘤細(xì)胞有 殺傷作用。2. 生長曲線法的基本原理：在最適條件下， 腫瘤細(xì)胞在培養(yǎng)液中呈指數(shù)生長， 如取細(xì)胞數(shù)的對數(shù)與培養(yǎng)時間 作圖可得一條直線， 故稱此時為對數(shù)生長期。 隨著細(xì)胞密度不斷增高， 由于代謝 產(chǎn)物的積聚及營養(yǎng)物的消耗， 細(xì)胞生長逐漸減慢以致停止， 此時稱高坪期或穩(wěn)定 期。因此藥物對細(xì)胞生長的影響可通過生長曲線反映出來。3. 染料排斥試驗的基本原

7、理： 活細(xì)胞有排斥某些染料如伊紅、 臺盼藍(lán)、 苯胺黑等的能力， 而死細(xì)胞由于膜完整 性的破壞，可被著色。因此培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞中加入這些染料，一定時間后，對著 色和未著色的細(xì)胞進(jìn)行計數(shù)，即可算出被殺死的細(xì)胞比例。4. 集落形成法的基本原理： 克隆原細(xì)胞具有持續(xù)增殖能力，當(dāng)單個細(xì)胞分裂 6 代或 6 代以上時，其后代所 組成的群體 （集落）便含 50 個以上細(xì)胞。通過集落計數(shù)可對克隆原細(xì)胞作定量分 析。它反映了單個細(xì)胞的增殖潛力， 故能較靈敏地測定抗癌藥的活性， 日前被認(rèn) 為是一種較理想的檢測方法。 常用的集落形成法可分為貼壁法及半固體培養(yǎng)法兩 種。5. SRB 法的基本原理：SRB（sulforh

8、odamine 是一種蛋白質(zhì)結(jié)合染料，粉紅色，可溶于水。 SRB 可 與生物大分子中的堿性氨基酸結(jié)合。其在 515 nm 波長的 OD 讀數(shù)與細(xì)胞數(shù)呈 良好的線性關(guān)系。故可用作細(xì)胞數(shù)的定量。 MTT 法的一個缺點是 OD 值可隨放 置時間而變，而 SRB 法無此現(xiàn)象。因此更適用于進(jìn)行大規(guī)模的試驗。三、體內(nèi)抗腫瘤試驗體內(nèi)抗腫瘤試驗必須選用三種以上腫瘤模型， 其中至少一種為人癌裸小鼠移植模 型或其它人癌小鼠模型。 試驗結(jié)果三種模型均為有效， 再重復(fù)一次也為有效， 評 定該化合物對這些實驗性腫瘤具有治療作用。鼓勵使用人類腫瘤裸鼠移植瘤模型和多種類的移植瘤模型、 原位接種模型和中空 纖維測定 (hol

9、low-fiber assay) 等方法。1. 動物 動物要求健康，符合等級動物要求，有實驗動物合格證。雌雄均可，但同一批實 驗中動物性別必須相同。小鼠鼠齡為 5-6 周，體重為 18-22 克。評價同一物質(zhì) 的活性時，不同批次的實驗必須采用同一品系的小鼠。2. 腫瘤模型2.1 小鼠腫瘤模型淋巴細(xì)胞白血病腹水瘤 L1210 和 P388 、白血病 L-615 、宮頸癌 U14 、肝癌 H22 、Lewis 肺癌、黑色素瘤 B16 、網(wǎng)織細(xì)胞瘤 M5076 、腸癌 26 、腸腺癌 38 、 乳腺癌CD8F1、艾氏腹水瘤(EAC)、肉瘤-180等，以及各種小鼠腫瘤的亞 型和耐藥株等。2.2 人癌裸

10、小鼠移植瘤模型 應(yīng)選用體外試驗敏感細(xì)胞株進(jìn)行體內(nèi)抗人癌裸小鼠移植瘤試驗。 模型建立和使 用應(yīng)注意：(1) 移植瘤一般由相應(yīng)的細(xì)胞株移植而建立，對細(xì)胞株和移植瘤的化療敏感性 應(yīng)予了解。(2) 移植瘤復(fù)蘇后一般應(yīng)傳 2-3 代后再用于體內(nèi)抗腫瘤試驗。(3) 對模型生長情況應(yīng)全面了解，尤其是生長快的模型(4) 為了保持移植瘤的生物學(xué)特性和遺傳特性，復(fù)蘇后移植瘤體內(nèi)傳代應(yīng)少于15-20 代3. 試驗過程3.1 接種： 腫瘤接種方法主要有皮下接種、腹腔接種和原位接種。3.1.1 皮下腫瘤模型選擇腫瘤生長旺盛且無潰破的荷瘤小鼠， 頸椎脫臼處死， 在無菌條件下 (超凈臺 或接種罩)，用碘酒、酒精或新潔爾滅消

11、毒動物皮膚，切開皮膚，剝離腫瘤。將 瘤組織剪成 1.5 mm3 左右，用套管針接種于動物一側(cè)或雙側(cè)腋窩皮下； 或制成 細(xì)胞懸液， 然后按一定比例加入無菌生理鹽水， 一般每只小鼠接種腫瘤細(xì)胞數(shù)量 為(1-5 ) X106。3.1.2 腹水瘤模型無菌條件下， 消毒動物皮膚， 吸取生長良好的動物腹水， 以生理鹽水按一定比例 稀釋后接種于動物腹腔，接種細(xì)胞數(shù)量一般為(1-5 ) X106。3.1.3 原位接種模型 原位接種是指將來源于某臟器的腫瘤接種在動物的某臟器， 如將人肝癌接種在裸小鼠的肝臟。原位接種不是常規(guī)的方法，但有其優(yōu)越性，是鼓勵使用的方法。主要有肺、肝、胃、腸、乳腺、顱內(nèi)等原位接種方法。3

12、.2 動物分組3.2.1 試驗設(shè)陰性對照組、陽性對照組、治療組。3.2.2 治療組設(shè)高、中、低三個劑量組。小鼠腫瘤和腹水瘤接種后次日將動物隨機(jī)分組，裸鼠移植瘤用游標(biāo)卡尺測量移植瘤直徑，待腫瘤生長至100 300mm3 后將動物隨機(jī)分組。3.2.3 動物數(shù)普通小鼠每組 10 只，裸鼠 6 只。 陰性對照組動物數(shù)為治療組動物數(shù)X實驗組數(shù)1/23.3 劑量設(shè)置3.3.1 治療組設(shè)高、中、低劑量治療組，一般按 4:2:1 設(shè)置，高劑量使用最大 耐受量或 LD10 的劑量。3.3.2 陰性對照組給予相應(yīng)的溶劑；3.3.3 陽性對照藥選用對該動物敏感的、臨床應(yīng)用的抗腫瘤藥物，3.3.4 如受試物為一抗癌藥

13、物的衍生物或類似物時，必須選用該抗癌藥物作為 陽性對照藥。3.4 陽性對照藥選擇原則 療效確切；與被試物質(zhì)化學(xué)結(jié)構(gòu)類似；與被試物質(zhì)有類似的作用機(jī)理。3.5 藥物配制 溶于水的藥物，用生理鹽水或蒸餾水配制；如用酸、堿溶解者，可先用小量酸 (0.1-0.5N HCl) 或堿 (NaHCO3 、Na2CO3 、NaOH) 溶解，調(diào)節(jié) pH 在 4.5-9.0 的范圍內(nèi)。用乙醇、丙二醇、吐溫 80 、DMSO 助溶的藥物，或用吐溫 60 、吐 溫 80 、2-3% 淀粉、0.5% 羧甲基纖維素制成混懸液的藥物， 可腹腔注射或口服， 但必須設(shè)相同濃度的溶劑對照組。 用注射用花生油配制的溶液或乳劑可口服、

14、 皮 下或肌肉注射。3.6 給藥方案和給藥途徑分組當(dāng)日開始給藥， 根據(jù)不同藥物的代謝動力學(xué)和毒性反應(yīng)等確定給藥方案。 給 藥途徑應(yīng)與推薦臨床用藥的途徑相同。 給藥次數(shù)較多， 或被試物質(zhì)溶解性較差， 靜脈給藥有困難時， 可考慮使用腹腔給藥， 但在評價藥效時要注意這兩種給藥途 徑是有差別的。 可采取瘤周、瘤內(nèi)、肌肉、皮下給藥途徑。腹水瘤試驗時一般 不能應(yīng)用腹腔給藥途徑。4 評價標(biāo)準(zhǔn)4.1 腹水瘤模型 接種給藥后，觀察和記錄動物死亡時間，計算生存天數(shù)。如陰性對照組 20% 動 物存活時間超過 4 周，表明腹水瘤生長不良，實驗作廢。采用中位生存時間 (即 median survival time,MS

15、T )來評價每組的生存時間 ， 其計算公式為：每組鼠數(shù)的中間數(shù) - 中間生存天數(shù)前死亡的鼠數(shù)MST= （中間生存天數(shù) -0.5 ）+ 中間生存天數(shù)死亡的鼠數(shù) 治療組與對照組的比較，采用 T/C （% ）來表示，計算公式為：T MSTT/C % = X100%C MSTT MST ：治療組 MST ；C MST ：陰性對照組 MST。評價標(biāo)準(zhǔn)以125%為界，當(dāng)T/C%> 125%時。視為有效，反之則無效4.2 裸鼠移植瘤模型推薦使用測量瘤徑的方法， 動態(tài)觀察受試物抗腫瘤的效應(yīng)。 腫瘤直徑的測量次數(shù) 根據(jù)移植瘤的生長情況而定，一般為每周 2-3 次,每次測量同時還需稱鼠重。 腫瘤體積 （tu

16、mor volume,TV） 的計算公式為：V = 1/2 XaXb2 或 n /6 X aX bXc其中 a、b、c 分別表示長寬高。兩公式的相關(guān)性極好，可采用任一公式。 根據(jù)測量結(jié)果計算出相對腫瘤體積（ relative tumor volume ， RTV）， RTV = Vt / V0 。其中 V0 為分籠給藥時 （即 d0） 測量所得腫瘤體積， Vt 為每一次測 量時的腫瘤體積?？鼓[瘤活性評價指標(biāo)為相對腫瘤增殖率 T/C （ % ）TRTVT/C % =X100%CRTVTRTV ：治療組 RTV ； CRTV ：陰性對照組 RTV。療效評價標(biāo)準(zhǔn)：T/C % >40 % 為無效

17、；T/C % < 40%，并經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理P<0.05 為有效。4.3 小鼠腫瘤模型 生長較慢小鼠腫瘤采用與裸鼠移植瘤同樣的測量瘤徑的評價方法。 生長較快小鼠腫瘤可采用稱瘤重的方法評價。 試驗結(jié)束后處死動物， 稱體重， 解 剖剝離瘤塊，稱瘤重。陰性對照組腫瘤平均瘤重小于 1 克，或 20% 腫瘤重量小 于 400 毫克，表示腫瘤生長不良，試驗作廢。療效評價公式：給藥組平均瘤重 - 陰性對照組平均瘤重腫瘤生長抑制率=X100%陰性對照組平均瘤重 評價標(biāo)準(zhǔn)：腫瘤生長抑制率<40% 為無效；腫瘤生長抑制率 > 40%，并經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理 P<0.05 為有效。4.4 原位接種

18、模型不同原位接種模型可采用不同評價方法， 主要有瘤重和生存時間評價法。 如肝原 位接種可用瘤重評價， 顱內(nèi)接種可用生存時間評價。 評價方法、 標(biāo)準(zhǔn)和注意事項 同腹水瘤模型和小鼠腫瘤模型。四、抗腫瘤藥物的特殊要求I 類抗腫瘤新藥應(yīng)進(jìn)行藥物作用機(jī)制的初步研究。非細(xì)胞毒類藥物除完成體內(nèi)外 抗腫瘤試驗，還應(yīng)進(jìn)行特定抗腫瘤作用研究。1. 生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑 藥效學(xué)包括 ：體內(nèi)抗癌試驗和免疫功能研究。1.1 體內(nèi)抗癌試驗注意點： 模型：裸鼠是免疫缺陷動物，一般應(yīng)用正常免疫鼠腫瘤模型。 給藥時間：可按常規(guī)給藥，也可在接種前預(yù)先給藥，接種后繼續(xù)給藥或停藥。 腫瘤細(xì)胞接種量：可比細(xì)胞毒類藥物低一個數(shù)量級，一般為 (

19、1-5)?105 個瘤細(xì) 胞/ 小鼠。給藥方法：可單獨給藥， 也可與其它抗腫瘤藥物合并使用， 觀察增效或減毒作用。1.2 免疫功能試驗方法 具有抑瘤作用的生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑，還需作免疫功能測定 ,以明確其抑瘤作用是否 與免疫功能調(diào)控有關(guān)。免疫功能測定包括細(xì)胞免疫和體液免疫兩方面。 免疫功能測定有：1)巨噬細(xì)胞功能測定2)天然殺傷細(xì)胞 (natural kill cell)測定3)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗4)淋巴因子活化的殺傷細(xì)胞測定(lymphocyte- activated killer cell)5)各種細(xì)胞因子測定，如 IL-2 、IL-6、IL-12、IFN- 丫、TNF- a等。6)遲發(fā)型超敏反

20、應(yīng)檢測2. 腫瘤耐藥逆轉(zhuǎn)劑2.1 體外抗耐藥活性試驗選擇 2-3 對腫瘤耐藥 / 敏感細(xì)胞株，采用 MTT 法或 SRB 法測定細(xì)胞毒性。一般 在無毒劑量或相當(dāng)于 IC10 的劑量下設(shè)三個劑量， 并設(shè)立相應(yīng)的陽性和陰性對照 組。評價逆轉(zhuǎn)效果用逆轉(zhuǎn)倍數(shù) (fold reversal, FR) 表示： FR=IC50( 不加逆轉(zhuǎn) 劑)/IC50(加逆轉(zhuǎn)劑)。注意的方面：耐藥株的耐藥性： 耐藥株因傳代， 尤其是撤藥后耐藥性可改變或消失； 試驗前必 須對試驗?zāi)退幹赀M(jìn)行耐藥倍數(shù) (FR) 測定，確保試驗的可 * 性。若非逆轉(zhuǎn)多藥耐藥 (MDR) 而是逆轉(zhuǎn)單藥耐藥，則實驗的瘤株中需有針對該藥的耐藥細(xì)胞株。

21、陽性對照藥建議采用維拉帕米(verapamil) 10環(huán)抱菌素 A (cyclosporin A) 3 卩 M 。2.2 體內(nèi)抗腫瘤耐藥活性試驗小鼠敏感和對應(yīng)的耐藥腫瘤和人癌裸鼠敏感和對應(yīng)的耐藥移植瘤2.3 耐藥基因及其表達(dá)產(chǎn)物測定 可測定腫瘤細(xì)胞內(nèi)的藥物濃度變化和耐藥基因及其表達(dá)產(chǎn)物， 初步明確其逆轉(zhuǎn)耐 藥機(jī)制。包括多藥耐藥基因及其編碼蛋白 (multidrug resistancegene/p-glycoprotein,Mdr1/Pgp) resistance-related protein, MRP) resistance-related protein, LRP)、多藥耐藥相關(guān)蛋白 (

22、multidrug、肺耐藥相關(guān)蛋白 (lung 、其它與耐藥相關(guān)的基因 / 蛋白及酶等。3. 抗腫瘤轉(zhuǎn)移藥物 腫瘤是否轉(zhuǎn)移不僅依賴于腫瘤細(xì)胞本身具有的內(nèi)在轉(zhuǎn)移潛能， 而且也取決于機(jī)體 抗轉(zhuǎn)移因素的消長。 所以，抗轉(zhuǎn)移藥物只有在動物體內(nèi)模型上才能得出符合實際 的結(jié)果。3.1 體外試驗測定候選化合物作用下腫瘤細(xì)胞對基底膜的侵襲、 粘附和腫瘤細(xì)胞趨化性運動的 能力。3.2 體內(nèi)試驗3.2.1 模型：小鼠 B16 黑色素瘤、小鼠 Lewis 肺癌等和人癌裸鼠移植高轉(zhuǎn)移瘤模型。3.2.2 接種方法： 常用靜脈注射方法，也可用皮下接種等方法。3.2.3 評價指標(biāo)接種給藥后， 觀察記錄動物死亡時間， 計算生

23、存天數(shù)。 試驗結(jié)束后， 稱動物體重、 肺重、移植瘤重，解剖顯微鏡下計數(shù)肺轉(zhuǎn)移瘤灶、測瘤徑 (計算肺轉(zhuǎn)移瘤體積 ) 和病理組織學(xué)切片觀察等；計算轉(zhuǎn)移率轉(zhuǎn)移抑制率=1 -(治療組轉(zhuǎn)移率/對照組轉(zhuǎn)移率)X100% 。4. 腫瘤血管生成抑制劑4.1 體外試驗 體外試驗?zāi)Ｐ陀?:( 1 )人血管內(nèi)皮細(xì)胞模型： 人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞和人微血管(肺、皮膚等)內(nèi)皮細(xì)胞。( 2)血管形成促進(jìn)因子等刺激細(xì)胞 DNA 合成、增殖、遷移、血管形成 (tube formation) 來觀察藥物的抗血管形成作用。如血管內(nèi)皮生長因子 (vascular endothelial growth factor,VEGF)或堿性成

24、纖維細(xì)胞生長因子 (basic fibroblast growth factor,bFGF)（3）腫瘤細(xì)胞模型：主要應(yīng)用國內(nèi)已建立的人實體癌細(xì)胞系，確定VEGF、FGF 等高分泌的細(xì)胞株。檢測細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移能力及血管形成因子的基因表達(dá)狀況來評價藥物。4.2 體內(nèi)試驗4.2.1 血管抑制試驗 經(jīng)典的血管形成評價方法有：雞絨毛膜尿囊和卵黃膜囊（CAM ）、嚙齒動物虹膜和角膜等。也可用如皮下移植塑料或多孔的 polytetrafluoroethylene 管、 皮下移植無菌的海綿； 一些自然的或化學(xué)修飾的物質(zhì)如 Matrigel 和纖維凝膠等 用于體內(nèi)模型。4.2.2 抗腫瘤試驗 通過觀察新生血管生

25、成抑制劑的體內(nèi)抗腫瘤效應(yīng)檢測移植瘤的血管密度、 血管生 成因子和抑制因子的分泌和表達(dá)， 以及腫瘤的轉(zhuǎn)移情況等綜合評價腫瘤血管生成 抑制劑的作用和作用機(jī)制。5. 分化誘導(dǎo)劑分化誘導(dǎo)劑的藥效學(xué)研究包括體外和體內(nèi)研究模型； 目前的藥物主要能對急性白 血病進(jìn)行有效的分化治療。陽性對照藥選用維甲酸類 （retinoid） 化合物。5.1 體外試驗5.1.1 白血病的分化誘導(dǎo) 常用的細(xì)胞株有人急性早幼粒白血病細(xì)胞株 HL-60 、NB4 細(xì)胞、人紅白血病 K562 細(xì)胞等。可選擇以下試驗方法研究并判斷結(jié)果：（ 1）四唑氮藍(lán) （NBT） 還原試驗：對照組細(xì)胞的還原能力 10%，候選化合物的還原能力50% （

26、2）細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察： 可在光學(xué)顯微鏡與電鏡下觀察候選化合物作用后細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化， 對照組的早 幼粒細(xì)胞應(yīng) 90%-95% ，候選化合物組細(xì)胞分化，成熟粒細(xì)胞占比例越高，說 明該化合物的分化效果越好。5.1.2 實體瘤細(xì)胞的分化誘導(dǎo) 常用細(xì)胞株：人肝癌 HepG2 、SMMC7721 試驗方法及評價標(biāo)準(zhǔn) ：主要測定細(xì)胞的甲胎蛋白（AFP）、白蛋白含量，y-谷氨酸轉(zhuǎn)移酶（yGT）、酪氨 酸轉(zhuǎn)氨酶 （ TAT ） 活性及觀察細(xì)胞形態(tài)。分化細(xì)胞 AFP 含量、 TAT 和 y-GT 活性明顯降低，白蛋白含量增加，細(xì)胞胞質(zhì) 增加、核縮小。5.2 體內(nèi)試驗常用人癌細(xì)胞小鼠腎囊膜下移植試驗、 小鼠髓單核細(xì)

27、胞白血病試驗和人癌細(xì)胞裸 小鼠移植瘤模型等?？蛇x兩種模型， 根據(jù)腫瘤鼠生存時間、 腫瘤的體積及形態(tài)變化， 觀察分化誘導(dǎo)效 果。重復(fù)試驗一次。6. 腫瘤治療增敏劑 增敏劑主要是指放射治療增敏劑， 能增加臨床上惡性腫瘤放射治療或其它治療的 療效及降低治療后的復(fù)發(fā)率。6.1 體外試驗分別選擇對放射、 化療藥物具有中、 低度敏感的人腫瘤細(xì)胞株， 采用 MTT 、SRB 或細(xì)胞集落形成方法進(jìn)行化合物的細(xì)胞毒性試驗，以 IC50 值作為評價指標(biāo)。6.2 體內(nèi)試驗 選用對射線及化療藥物敏感性較小的三種實體瘤模型進(jìn)行試驗， 其中至少有一種 人癌裸鼠移植瘤模型。由強(qiáng)致癌物或病毒等因素誘發(fā)的腫瘤， 或者不是在同一

28、品系動物身上移植傳代的 腫瘤往往會出現(xiàn)免疫反應(yīng)，因此都不能用于腫瘤治療增敏劑研究。療效評價可參照體內(nèi)抗腫瘤試驗 。教你如何用 WORD文檔(2012-06-27 192246)轉(zhuǎn)載標(biāo)簽： 雜談1. 問： WORD 里邊怎樣設(shè)置每頁不同的頁眉？如何使不同的章節(jié)顯示的頁眉不同？答：分節(jié)， 每節(jié)可以設(shè)置不同的頁眉。 文件頁面設(shè)置版式頁眉和頁腳首頁 不同。2. 問：請問 word 中怎樣讓每一章用不同的頁眉？怎么我現(xiàn)在只能用一個頁眉，一改就全 部改了？答：在插入分隔符里， 選插入分節(jié)符， 可以選連續(xù)的那個， 然后下一頁改頁眉前， 按一下“同 前”鈕，再做的改動就不影響前面的了。簡言之，分節(jié)符使得它們獨

29、立了。這個工具欄上的 “同前”按鈕就顯示在工具欄上，不過是圖標(biāo)的形式，把光標(biāo)移到上面就顯示出”同前“兩 個字來。3. 問：如何合并兩個 WORD 文檔，不同的頁眉需要先寫兩個文件，然后合并，如何做？答：頁眉設(shè)置中，選擇奇偶頁不同與前不同等選項。4. 問： WORD 編輯頁眉設(shè)置，如何實現(xiàn)奇偶頁不同 比如：單頁浙江大學(xué)學(xué)位論文，這一 個容易設(shè)；雙頁： (每章標(biāo)題) ，這一個有什么技巧啊？答：插入節(jié)分隔符，與前節(jié)設(shè)置相同去掉，再設(shè)置奇偶頁不同。5. 問：怎樣使 WORD 文檔只有第一頁沒有頁眉，頁腳？答：頁面設(shè)置頁眉和頁腳，選首頁不同，然后選中首頁頁眉中的小箭頭， 格式邊框和底 紋，選擇無，這個只

30、要在“視圖”一一“頁眉頁腳”，其中的頁面設(shè)置里，不要整個文檔，就可以看到一個“同前”的標(biāo)志，不選，前后的設(shè)置情況就不同了。6. 問：如何從第三頁起設(shè)置頁眉？ 答：在第二頁末插入分節(jié)符， 在第三頁的頁眉格式中去掉同前節(jié)， 如果第一、 二頁還有頁眉， 把它設(shè)置成正文就可以了在新建文檔中，菜單一視圖一頁腳一插入頁碼一頁碼格式一起始頁碼為0,確定；菜單一文件一頁面設(shè)置一版式一首頁不同，確定；將光標(biāo)放到第一頁末， 菜單一文件一頁面設(shè)置一版式一首頁不同一應(yīng)用于插入點之后，確定。第2步與第三步差別在于第 2步應(yīng)用于整篇文檔,第 3 步應(yīng)用于插入點之后。這樣,做兩次首頁不同以后,頁碼從第三頁開始從1 編號,完

31、成。7. 問： WORD 頁眉自動出現(xiàn)一根直線,請問怎么處理？答：格式從“頁眉”改為“清除格式” ,就在“格式”快捷工具欄最左邊；選中頁眉文字和 箭頭,格式邊框和底紋設(shè)置選無。8. 問：頁眉一般是 ,上面寫上題目或者其它, 想做的是把這根線變?yōu)殡p線, WORD 中修改頁眉的那根線怎么改成雙線的答：按以下步驟操作去做：選中頁眉的文字，包括最后面的箭頭格式-邊框和底紋選線性為雙線的在預(yù)覽里， 點擊左下小方塊，預(yù)覽的圖形會出現(xiàn)雙線確定上面和下面自己可以設(shè)置，點擊在預(yù)覽周圍的四個小方塊,頁眉線就可以在不同的位置。9問：Word中的腳注如何刪除？把正文相應(yīng)的符號刪除，內(nèi)容可以刪除，但最后那個格式還在,應(yīng)

32、該怎么辦？答：步驟如下：1、切換到普通視圖，菜單中“視圖”一一“腳注”，這時最下方出現(xiàn)了尾注的編輯欄。 2、在尾注的下拉菜單中選擇“尾注分隔符” ,這時那條短橫線出現(xiàn)了,選中它, 刪除。 3、再在下拉菜單中選擇 “尾注延續(xù)分隔符” ,這是那條長橫線出現(xiàn)了, 選中它, 刪除。 4、切換回到頁面視圖。尾注和腳注應(yīng)該都是一樣的。10. 問： Word 里面有沒有自動斷詞得功能常常有得單詞太長了,如果能設(shè)置下自動斷詞就好了答：在工具一語言一斷字一自動斷字，勾上， word還是很強(qiáng)大的。11. 問：如何將 word 文檔里的繁體字改為簡化字？答：工具一語言一中文簡繁轉(zhuǎn)換。12. 問：怎樣微調(diào) WORD

33、表格線？ WORD 表格上下豎線不能對齊,用鼠標(biāo)拖動其中一條 線,可是一拖就跑老遠(yuǎn),想微調(diào)表格豎線讓上下對齊,請問該怎么辦？答：選定上下兩個單元格,然后指定其寬度就可以對齊了,再怎么拉都行pressAlt ,打開繪圖,其中有個調(diào)整坐標(biāo)線, 單擊, 將其中水平間距與垂直間距都調(diào)到最小值即可。 打開繪圖, 然后在左下腳的繪圖網(wǎng)格里設(shè)置,把水平和垂直間距設(shè)置得最小。13. 問：怎樣微調(diào) word 表格線？我的 word 表格上下豎線不能對齊，用鼠標(biāo)拖動其中一條 線，可是一拖就跑老遠(yuǎn)，我想微調(diào)表格豎線讓上下對齊，請問該怎么辦？答：可以如下操作：按住 ctl 鍵還是 shift，你 have a try

34、 double click the line, try it ） 打開繪圖，設(shè)置一下網(wǎng)格（在左下角）。使水平和垂直都為最小，試一把！？ press Alt14. 問：怎么把 word 文檔里已經(jīng)有的分頁符去掉？答：先在工具一一選項一一視圖一一格式標(biāo)記，選中全部，然后就能夠看到分頁符，delete 就 ok 了。15. 問： Word 中下標(biāo)的大小可以改的嗎答：格式一字體16. 問： Word 里怎么自動生成目錄啊答：用“格式樣式和格式”編輯文章中的小標(biāo)題，然后插入-索引和目錄17. 問： Word 的文檔結(jié)構(gòu)圖能否整個復(fù)制 論文要寫目錄了， 不想再照著文檔結(jié)構(gòu)圖輸入一 遍，有辦法復(fù)制粘貼過來嗎

35、？答：可以自動生成的，插入索引目錄。18. 問：做目錄的時候有什么辦法時右邊的頁碼對齊？比如：1.1 標(biāo)題 11.2標(biāo)題2答：畫表格，然后把頁碼都放到一個格子里靠右或居中，然后讓表格的線條消隱就可以了， 打印出來就很整齊。19. 問：怎樣在 word 中將所有大寫字母轉(zhuǎn)為小寫？比如一句全大寫的轉(zhuǎn)為全小寫的答：格 式-更改大小寫 -小寫20. 問：在存盤的時候，出現(xiàn)了問題，癥狀如下：磁盤已滿或打開文件過多，不能保存，另 開新窗口重存也不管用。如何解決？答：把word文檔全選，然后復(fù)制，然后關(guān)掉word，電腦提示你粘貼板上有東西，要不要用于別的程序，選是，然后，再重新打開word，然后粘貼，然后，

36、保存。21. 問： WORD 中的表格一復(fù)制粘貼到 PPT 中就散掉了，怎么把 WORD 里面的表格原樣粘貼到 PPT 中？WORD 文件，然后插入對象，選由文答： 1）比較好的方法是：先把表格單獨存為件創(chuàng)建，然后選中上面的 WORD 文件，確定； 2）還可以先把表格 copy 到 excel 中，然后 copy 到 PPT 中，這個也是比較好的辦法； 3）可以先做成文本框，再粘貼過去； 4）復(fù)制粘 貼，但是在 PPT 中不能粘在文本框里面； 5）拷屏，做成圖片，再弄到 PPT 里面。22. 問：有沒有辦法將 PPT 的文字拷入 WORD 里面？答：另存就可以了。只要以 .rtf 格式另存即可

37、23. 問： word 中圖片的分欄如何處理？假如有： 1 2 圖 3 4 這樣的結(jié)構(gòu)，我想實現(xiàn)： 1 3 圖 （要橫跨兩欄） 2 4 但是，試了半天總是： 1 2 圖 3 4 怎么辦呀？ help！答：設(shè)置圖片格式一一版式一一高級一一文字環(huán)繞一一環(huán)繞方式選上下型一一圖片位置一一 對齊方式選居中一一度量依據(jù)選頁面，要先改文字環(huán)繞，然后才能改圖片位置24. 問：用 word 寫東西時字距老是變動， 有時候自動隔得很開， 有時候進(jìn)入下一行的時侯， 上一行的字距又自動變大了，這是為什么？怎么糾正??？答：是因為自動對齊的功能， 格式段落對齊方式可以選。 還有允許斷字的功能如果 check 上，就不會出

38、現(xiàn)你說的情況了。25. 問：在使用 WORD 的樣式之后，如標(biāo)題 1、標(biāo)題 2 之類的，在這些樣式前面總會出現(xiàn) 一個黑黑的方塊， 雖然打印的時候看不到， 但看著總是不舒服， 有沒有辦法讓它不要顯示呢？ 答：“視圖”“顯示段落標(biāo)志” ，把前面的勾去掉。其實這個很有用，可以便于知道哪個 是標(biāo)題段落26. 問：文章第一頁下面要寫作者聯(lián)系方式等。通常格式是一條短劃線，下面是聯(lián)系方式， 基金支持等。這樣的格式怎么做出來？就是注明頁腳嗎？答：插入腳注和尾注27. 問：文字雙欄，而有一張圖片特別大，想通欄顯示，應(yīng)該怎么操作？ 答：可以選擇的內(nèi)容，按雙欄排。選擇其他內(nèi)容，按單欄排。28. 問： Word 里面

39、如何不顯示回車換行符？答：把視圖 -顯示段落標(biāo)記的勾去掉或工具 -選項 -視圖 -段落標(biāo)記29. 問：有沒有方法把 WORD 里的軟回車一下子替換掉？識別出來的文字全帶著軟回車， 能把他們一次全刪掉嗎？答：查找+替換，按 CTRL+H ;軟回車好象是Al，在特殊字符里有30. 問：在 WORD 里的框框里怎么打勾？答：畫個文本框，文本框里寫一個鉤，然后拖過去；或者先在WORD里插入符號“V”然后選中“V” ，到-格式-中文版式-帶圈字符-選“”31. 問：還是不行，這樣拷過去的框框字體是 windings 的，而原來的是宋體的，兩者有很 大的區(qū)別。答：根據(jù)模板新建專業(yè)型 ，里面有框，雙擊后打勾

40、， copy 就 ok32. 問： Word 中怎么在一個英文字母上打?qū)μ枺看穑和该鞣绞讲迦雸D片對象，內(nèi)容是一個V33. 問： WORD 里怎么顯示修訂文檔的狀態(tài)？文檔修訂后，改后標(biāo)記很多，但是在菜單里 沒有“顯示修訂最終狀態(tài)”等，怎么調(diào)出來？ 答：工具自定義命令類別（工具）命令（修訂）把“修訂”等拖到工具欄上34. 問：怎樣把許多分開的 word 文檔合并成一個文檔。我的論文是按照章節(jié)分開寫的，但 現(xiàn)在圖書館要提交電子版的學(xué)位論文， 是一個文檔的， 我找了很多選項但好象不能合并， 選 擇插入文件功能，可以加入內(nèi)容，但文檔中的頁眉卻插不進(jìn)去，有誰有高見？答： acrobat6 可以直接把多個文

41、檔打印成一個 pdf 文檔。可以提交 pdf 格式的論文，先一 個一個 word 文檔轉(zhuǎn)換為 pdf 格式的， 然后在 pdf 文檔菜單的文件菜單中， 選上作為 pdf 格 式打開，追加上就可。35. 問： Word 里面要寫方程式怎么辦啊？答：插入對象公式編輯器equation,如果沒有公式編輯器Equation，要自己從光盤中安裝，或者安裝 Mathtype 公式編輯器按右鍵把它拖出來插入命令自定義工 具應(yīng)該是倒過來36. 問：想在 WORD 里面表示矩陣,怎樣才能畫出那個很大的矩陣?yán)ㄌ枺?答：裝公式編輯器 mathtype 好了 ：）37. 問： Word 的公式編輯器怎么安裝？ 答：工

42、具自定義插入公式編輯器,把它拖到工具條上即可；或者安裝OFFICE 后,再次安裝,選增加功能吧,會有提示的38. 問： Word2000 下調(diào)用公式編輯器的快捷鍵 答：點擊菜單 工具 -自定義 ，點擊對話框下方 鍵盤 ，在類別 里選擇 插入 ，在命令里選 擇 InsertEquation ，指定你的快捷方式39. 問： WORD 中出現(xiàn)公式的行往往要比只有文字的行來得寬，如何把這些行改的跟只有 文字的行一樣寬？答：段落行距設(shè)為固定值即可。這樣會有一個問題，比如設(shè)置為 18 磅，有些公式符號（特 別是有下標(biāo)的） 不能全部顯示打印稿可以顯示。 怎么解決這個問題？這個如何解決還需要考 慮。40. 問

43、：我的文檔就是公式多，應(yīng)該怎么辦？答：公式多的時候， 最好的消除這個問題的辦法就是每打幾個公式就要存盤， 如果連續(xù)打太 多，就會出現(xiàn)這個問題。出現(xiàn)問題的時候：選中所有內(nèi)容，Ctrl + C把WORD所有文檔關(guān)閉。最關(guān)鍵：出現(xiàn)一條信息，務(wù)必選擇“是” 重新打開 WORD編輯器， Ctrl + V，粘貼 Ctrl + S，存盤41. 問：怎樣在 word 里面的公式編輯器中輸入空格？ 答： Ctrl+shift+spaCe42. 問：如何使 word 中公式全都小一號？一個一個選實在麻煩答：在 Mathtype公式編輯器中：首先，在Mathtype中的菜單 Size中選define,定義所需的字號

44、大??；再次，在 Mathtype 中的菜單 preferenCes 中的 equation preferenCe 的 save to file 存 貯所定義的字號文件；返回 word中：在 Mathtype菜單中選 Format equation1 ）在MathType preferenee file中，選你剛才所定義的文件；2）在 Range中，選 Whole document。最后，選 OK ，即 OK 了。43. 問：如何將 WORD 中的公式編緝拉到外面答：工具自定義命令插入右邊找公式編輯器，往上脫44. 問：怎樣可以去掉 word 里面公式，或是圖片上方總是出現(xiàn)的灰色的橫條?。恳郧皼]

45、有 的，不知道怎么跑出來了，看著怪暈糊的。 。答：工具選項 -視圖 -域底紋，選不顯示，或選取時顯示，就可以了45. 問：整個論文用一個 WORD 文檔，太大，不好編輯，一個地方有增刪，后面那么長一 個文檔版面分布會變得亂七八糟， 特別是圖表之類的東東。 想讓每章的偶數(shù)頁自動顯示自己 的章號和題目， WORD 里這個能夠自動實現(xiàn)嗎？答：不要整個論文放一個 WORD 文檔，一章一個，然后每章就可以奇偶分開處理了46. 問：論文按照章節(jié)寫的，想把它們合并成一個文件，并保持原有的文件格式。采用了在 文件末尾插入分節(jié)符的方法，但插入后有些文件的部分格式發(fā)生了變化，請問如何解決？ 答：用主控文檔的方法比

46、較好， 在大綱模式里設(shè)置的；采取插入文件的方式，格式有些變化47. 問： WORD 里邊怎么樣顯示行號？ 答：在頁面設(shè)置那里，板式選項，最下面有個行號選項48. 問： Word 里面怎么插入半個空格？答：先在 word 的工具欄上，點中雙箭頭那個紐，就可以看到原先看不到的空格，然后再編 輯一下這個空格的大小，比如小五或小四什么的。49. 問：只要一回車，或是改變光標(biāo)位置的任何操作，都會使上一行的）變成=，有人遇到 過這個問題么？答：是不是設(shè)置了自動替換啊，符號里的自動替換看看吧！50. 問： WORD 有沒有可以按單詞的首字母進(jìn)行排序？就是從 A-Z 進(jìn)行排 答：表格中的內(nèi)容可以按照拼音排序，

47、弄到 excel 里，排序，再回來51. 問：怎么在 word里面打 RA2答：先打R2，然后用鼠標(biāo)選中2,同時按Ctrl，“shift ”和+52. 問： Word 中發(fā)現(xiàn)空格都是小圓點， 是怎么回事情？每輸入一個空格就出現(xiàn)一個小圓點， 怎么把它消除掉啊？這個空格會打印出來嗎？ 答：不會打印出來，如果想不顯示：工具選項視圖格式標(biāo)記中前面的勾去掉即可53. 問： word 如何使兩個表格能排在一起？我做的表格每一個都比較小，但是表格數(shù)比較 多，我想兩個表格排成一行，請問該怎么做？ 答：試試在局部分欄，每個分欄中一個表格。54. 問：為什么換機(jī)器打開 WORD 文檔排版變了？在一臺機(jī)器上排好板的

48、 WORD 文檔換 在另一臺機(jī)器打開就變了？頁碼都不對了，怪哉。答：是默認(rèn)的頁面設(shè)置不一樣吧，或者版本不同55. 問： Word 里面插入表格的問題，同一表格前后兩行被分在了不同的頁上，想他們在同一頁怎么做？答：轉(zhuǎn)換成圖文框可能更容易排版一點，或者加個文本框56. 問：怎么在 word 里畫坐標(biāo)圖在 word 里有了坐標(biāo)圖，文字卻加不加去怎么辦 答：作圖時直接將文字加上去； word 中的繪圖工具條，文字環(huán)繞里面尋找合適的方案，把 圖放在文字的底層57. 問： WORD 文件有密碼，怎么辦呢？ 答：找破解軟件，比如 advanced_office_2000_password_recovery_

49、pro_v1.03 ，但不一定好用。58. 問：怎么給 word 文檔加密？答：打開文檔，另存為一工具一常規(guī)選項一打開、修改權(quán)限密碼，保存59. 問： Word 文件怎么轉(zhuǎn)化為 postscript 文件？ 答：先轉(zhuǎn)化為 pdf ，然后打印到文件，通過 distiller 生成 ps。60. 問： Word 無法識別 origin 中的漢字怎么辦？用 origin 做的圖形中有漢字， copy 到 word 中就成了問號，因此我不得不先用 export 把圖形變?yōu)?jpg 文件才能解決這個問題，有沒有 方便的解決辦法？答： ORIGIN 里面的字體改成宋體或者仿宋61. 問：請教怎么把 Ori

50、gin 中的圖表拷貝到 Word？ 答：點 origin 的 Edit 菜單里的 copy page 到 word 里粘貼就行了62. 問：把 origin 的圖復(fù)制粘貼到 word ，總有一大塊的空白，這個空白有什么工具可以去 掉嗎？還有就是用 word 自帶的圖表工具畫圖時， 也是有一大塊空白去不掉， 這個可以解決 嗎？ 答：右鍵選擇圖片工具欄，點裁減63. 問：插入的圖片為什么老是處于頁面的頂端，想拖下來放到其他地方，卻又自動跑到頂 端去，就是拖不下來，請問該如何處理答：改變圖片的屬性，就可以了。64. 問：如何保證一幅圖像固定在某一段的后面，另一段的前面，而不會因為前面段落的刪 減而位

51、置改變？答：右鍵點擊圖片-設(shè)置對象格式一版式一嵌入型65. 問：如何把在 WORD 里面圖形工具畫的圖轉(zhuǎn)化為 jpg？ 答：另存為 html 格式，然后在 html 文件對應(yīng)的文件夾里找66. 問：請問什么格式的圖片插入 word 最清晰？手頭持有 png 和 tif 格式，復(fù)制粘貼到 word 中模糊一片， 請問轉(zhuǎn)換成什么圖片格式用于 word 最清晰？什么方法 （插入圖片來自文件還 是直接復(fù)制粘貼）對清晰度有否影響？答： emf， eps 等矢量圖最清晰，不會因為縮放損失分辨率，而jpeg， bmp 等點陣圖就不行了。67. 問：在 WORD 中如何讓圖片的左、上、下邊都是文本？ 答：在分

52、欄的數(shù)量為 1 的情況下實現(xiàn)。 圖片選中后右鍵， 設(shè)置圖片格式 -版式 -四周型就可以 了68. 問： jpg 文件插入 word 文件以后怎么讓文件變小？ jpg 格式圖片插到 word 文件以后文 件變的巨大，有什么方法可以讓它小一點？最好能一張軟盤放的下。答：兩個方法： 用 photoshop 改變圖片的分辨率， 當(dāng)然要看得清楚， 然后插入 word word 有強(qiáng)大的壓縮功能，把文檔另存為比如：temp.doc,看看是不是小了很多。69. 問： Matlab 仿真圖片大家一般怎么弄到 word 里面的相對橫軸和縱軸修改一下的說 答：一般都是在 Matlab 里面把所有的直接修改好了，然后再保存的時候用jpg 格式，在word 中間導(dǎo)入就好了70. 問：如何向 WORD 中的圖片添加文本？想在圖片上輸入一些