四川大學(xué)華西醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)試驗(yàn)技能培訓(xùn)及考核形態(tài)學(xué)教學(xué)大綱

1、本科實(shí)驗(yàn)教學(xué)大綱一、課程基本信息課程名稱：基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)技能培訓(xùn)及考核（形態(tài)學(xué)）英文名稱：Basicmedicallaboratoryskillstrainingandassessment（morphology）教學(xué)專業(yè)：基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)基地班（本科）課程類型：實(shí)踐課學(xué)時(shí)：24（不含課外附加）學(xué)分：2二、教學(xué)目的及要求：本課程是針對(duì)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)專業(yè)的實(shí)驗(yàn)技能訓(xùn)練課程。課程教學(xué)的目的是讓學(xué)生掌握顯微形態(tài)學(xué)關(guān)鍵技術(shù)環(huán)節(jié)的實(shí)驗(yàn)操作，并熟悉其技術(shù)原理。包括組織灌注取材、常規(guī)顯微制片、組織化學(xué)檢測(cè)、體外培養(yǎng)等，要求學(xué)生能夠在實(shí)驗(yàn)室獨(dú)立進(jìn)行相關(guān)操作。三、教學(xué)內(nèi)容1.手術(shù)取材和組織固定（4學(xué)時(shí)）掌握：A.常用醛類固定液的

2、配方和工作原理；B.經(jīng)心臟灌注固定操作。了解：A.特殊固定液的配方和原理；B.影響固定效果的因素。2.冰凍切片法（1學(xué)時(shí)）掌握：A.冰凍切片標(biāo)本的預(yù)處理操作；B.冰凍切片操作。了解：A.冰凍保護(hù)劑。3.石蠟包埋（6學(xué)時(shí)，不占課堂時(shí)間）掌握：A.常用標(biāo)本脫水流程及原理；B.石蠟包埋操作。了解：包埋石蠟制備。4.石蠟切片法（3學(xué)時(shí)）掌握：A.石蠟切片操作；了解：A.玻片防脫劑配方及工作原理；B.輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)和滑行切片機(jī)的工作原理。5.H-E染色法（2學(xué)時(shí)）掌握：A. H-E染色的技術(shù)原理和影響染色結(jié)果的因素;B. H-E染色操作流程；了解：A.H-E染色法的替代性操作研究進(jìn)展；B.其它常用廣譜染色

3、技術(shù)。6 .特殊染色法（2學(xué)時(shí)）熟悉：A.Giemsa染色法原理和操作流程；B.尼氏染色法原理和操作流程；C.鍍銀和還原銀染色的原理；D.活體染色的原理和常用方法了解：A.顯示細(xì)胞器的特殊染色法；7 .組織化學(xué)術(shù)（4學(xué)時(shí)）掌握：A.免疫組織化學(xué)的原理和操作流程。熟悉：A.常規(guī)組織化學(xué)的原理及其分類；8 .常用組織化學(xué)反應(yīng)；C.原位雜交組織化學(xué)的原理的操作流程；D.酶組織化學(xué)的原理和操作流程。8.形態(tài)學(xué)圖像分析（2學(xué)時(shí)）掌握：A.顯微圖像的報(bào)告、描述和常規(guī)定量方法;B.卡瓦列里原理及應(yīng)用；C.分子表達(dá)定量測(cè)定的正確方法。熟悉：A.顯微尺度測(cè)定的方法；B.顯微計(jì)數(shù)原理和方法；了解：A.光學(xué)偽差對(duì)分

4、析的影響；B.虛擬切片技術(shù)；C.顯微斷面圖像的三維重建。9.體外培養(yǎng)技術(shù)（6學(xué)時(shí)）掌握：A.細(xì)胞生存、生長(zhǎng)和分化的必要液相條件;B.無(wú)菌術(shù)的原理和常用消毒、滅菌操作；C.原代動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)操作；D.傳代動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)操作；了解：A.培養(yǎng)基的配方和原理；B.細(xì)胞純化技術(shù)；C.體外培養(yǎng)技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用；D.常用細(xì)胞系和細(xì)胞株。四、教材與參考資料手稿復(fù)印件實(shí)用組織學(xué)基本技術(shù)作為講義課外參考資料：(1)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)一基本操作指南，科學(xué)出版社，2004,英國(guó)弗雷謝尼編著；(2)組織學(xué)技術(shù)，人民衛(wèi)生出版社，2007,英國(guó)班克羅夫特等編著。五、成績(jī)?cè)u(píng)定課堂考勤占10%(嚴(yán)重遲到或早退者扣分)；操作評(píng)分占40%;

5、當(dāng)次標(biāo)本成品/結(jié)果占30%;實(shí)驗(yàn)報(bào)告作業(yè)占20%(并非每次有報(bào)告作業(yè))；上述3項(xiàng)評(píng)分為每次課的平時(shí)成績(jī)，期末取平均作為課程成績(jī)。附件：顯微形態(tài)學(xué)技術(shù)操作考核參考標(biāo)準(zhǔn)第一類：光學(xué)顯微鏡制片技術(shù)操作1:組織標(biāo)本的手術(shù)切取內(nèi)容：從麻醉動(dòng)物開(kāi)始，到取下規(guī)定的器官或組織標(biāo)本放入固定液。考核要點(diǎn)：(1)動(dòng)物抓持和麻醉操作；(2)手術(shù)取材的手法、熟練度及止血情況(包括識(shí)別器官)(3)標(biāo)本切割和定型的技巧。時(shí)間：20min。操作2:石蠟包埋操作內(nèi)容：從蠟液取出標(biāo)本，用包埋模具包埋、冷卻并修塊。考核要點(diǎn)：(1)臨時(shí)包埋模具的準(zhǔn)備；(2)石蠟包埋操作的流程、手法和熟練度；(3)冷卻的正確方法；(4)石蠟塊修結(jié)的操

6、作。時(shí)間：25min。操作3:石蠟切片操作內(nèi)容：從包埋蠟塊切出46仙而勺切片，并標(biāo)貼在載玻片上?？己艘c(diǎn)：(1)輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)的準(zhǔn)備和操作；(2)石蠟切片操作的技術(shù)要領(lǐng)；(3)展片和裱片的技巧。時(shí)間：15min。操作4:HE染色操作1內(nèi)容：石蠟切片脫蠟入水，完成HE染色主要操作?？己艘c(diǎn)：(1)脫蠟入水過(guò)程中停留時(shí)間和脫蠟程度的把握；(2)蘇木素染色的準(zhǔn)備、染色過(guò)程、分色與返藍(lán)操作；(3)伊紅染色程度的把握；(4)保證充分、恰當(dāng)脫水透明的操作；(5)封片和標(biāo)記的操作。時(shí)間：35min。第二類：電子顯微鏡制片技術(shù)(未來(lái)如條件具備，待擴(kuò)展)操作1:經(jīng)心臟血管灌注固定內(nèi)容：麻醉動(dòng)物，綁定并完成灌注固定

7、的全過(guò)程，直到全身固定充分?？己艘c(diǎn)：(1)動(dòng)物抓持和麻醉操作；(2)灌注手術(shù)的技巧；(3)灌注效果的判斷和評(píng)價(jià)。時(shí)間：30min。第三類：細(xì)胞體外培養(yǎng)技術(shù)操作1:試劑無(wú)菌分裝內(nèi)容：把1瓶無(wú)菌液體無(wú)菌分裝到10個(gè)小管中?？己艘c(diǎn)：(1)超凈臺(tái)的準(zhǔn)備和使用；(2)無(wú)菌操作的意識(shí)、方法與熟練度；(3)分裝后的無(wú)菌程度評(píng)價(jià)(次日)。時(shí)間：30min。操作2:原代培養(yǎng)標(biāo)本的獲取和預(yù)處理內(nèi)容：從實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)取出待培養(yǎng)的標(biāo)本，并完成培養(yǎng)前的準(zhǔn)備和預(yù)處理考核要點(diǎn)：(1)超凈臺(tái)的準(zhǔn)備和使用；(2)動(dòng)物標(biāo)本的消毒處理；(3)無(wú)菌操作的意識(shí)、方法與熟練度；(4)正確分離待培養(yǎng)標(biāo)本的方法和預(yù)處理措施。時(shí)間：30mi

8、n。操作3:細(xì)胞原代外植操作內(nèi)容：從完成預(yù)處理的標(biāo)本開(kāi)始，進(jìn)行切割、分離和外植的操作考核要點(diǎn)：(1)無(wú)菌操作的意識(shí)、方法與熟練度；(2)組織切割、分離、標(biāo)記的操作技巧和熟練度；(3)外置細(xì)胞或組織的密度控制。時(shí)間：30min。操作4：培養(yǎng)細(xì)胞的染色觀察內(nèi)容：將培養(yǎng)狀態(tài)下的細(xì)胞進(jìn)行固定、染色和鏡下觀察。考核要點(diǎn)：(1)體外培養(yǎng)物的固定方法；(2)培養(yǎng)細(xì)胞的染色操作；(3)倒置顯微鏡的操作使用。時(shí)間：15min。第四類：分子原位檢測(cè)技術(shù)操作1:冰凍切片操作內(nèi)容：冷凍標(biāo)本恒冷箱切片、漂片和貼片的操作。考核要點(diǎn)：(1)恒冷箱切片機(jī)的使用和操作；(2)冰凍切片操作；(3)貼片法和漂片法的操作技巧。時(shí)間：

9、20min。操作2:石蠟切片組織化學(xué)檢測(cè)前處理內(nèi)容：石蠟切片用于免疫組織化學(xué)檢測(cè)前的預(yù)處理操作。考核要點(diǎn)：(1)免疫組化預(yù)處理的流程；(2)切片脫蠟入水過(guò)程中停留時(shí)間和脫蠟程度的把握；(3)切片孵育和漂洗的操作規(guī)范和操作技巧。時(shí)間：30min。操作3:第一抗體孵育操作內(nèi)容：3張切片從結(jié)束預(yù)處理到第一抗體開(kāi)始孵育之間的操作。考核要點(diǎn)：(1)濕盒的準(zhǔn)備和操作；(2)抗體稀釋和使用的規(guī)范(包括加樣槍操作)；(3)切片漂洗、孵育的操作技巧。時(shí)間：20min。第四類：圖像分析和處理技術(shù)操作1:染色強(qiáng)度的光學(xué)分析內(nèi)容：測(cè)定組織顯微染色照片上特定結(jié)構(gòu)的平均光密度、面積和積分光密度考核要點(diǎn)：(1)圖像分析軟件的了解和使用；(2)灰度和光密