實驗四微生物的顯微鏡直接計數(shù)法和大小

1、本次實驗內(nèi)容本次實驗內(nèi)容:一一 微生物大小的測定微生物大小的測定;二二 顯微直接計數(shù)法顯微直接計數(shù)法;三三 放線菌形態(tài)學(xué)觀察放線菌形態(tài)學(xué)觀察;四四 微生物的斜面接種微生物的斜面接種; 一一 微生物大小的測定微生物大小的測定 微生物大小的概述微生物大小的概述u 對于病毒、細(xì)菌、放線菌、真菌和原生動物等不同類型的微對于病毒、細(xì)菌、放線菌、真菌和原生動物等不同類型的微生物來說，它們的大小存在很大的差異；生物來說，它們的大小存在很大的差異；u在同一類型中不同種類的微生物，或同一種類中不同時期的微在同一類型中不同種類的微生物，或同一種類中不同時期的微生物個體，它們的大小也存在很大的差異。如生物個體，它們

2、的大小也存在很大的差異。如: :細(xì)菌的大小細(xì)菌的大小. .一一 實驗?zāi)康膶嶒災(zāi)康膗 學(xué)會使用測微尺在顯微鏡下測定微生物大小的方法。學(xué)會使用測微尺在顯微鏡下測定微生物大小的方法。一一 微生物大小的測定微生物大小的測定二二 實驗材料實驗材料u測定菌株測定菌株: 大腸桿菌大腸桿菌;酵母菌。酵母菌。u主要器材：顯微鏡、目鏡測微尺、鏡臺測微尺。主要器材：顯微鏡、目鏡測微尺、鏡臺測微尺。三三 實驗原理實驗原理u 測定微生物大小的的工具：測定微生物大小的的工具： 鏡臺測微尺；目鏡測微尺鏡臺測微尺；目鏡測微尺實物照片實物照片三三 實驗原理實驗原理1 測量時，用目鏡測微尺的格數(shù)度量微生物的大小，而目鏡測微尺每格

3、代表的實際長度用鏡臺測微尺來校定。目鏡測微尺每格的長度= ? 正確答案: 2.5 m 目鏡測微尺鏡臺測微尺三三 實驗原理實驗原理 2 目鏡測微尺每格實際代表的長度隨放大倍數(shù)而改變，也會因使用不同的顯微鏡而產(chǎn)生誤差，因此在使用前, 必須用鏡臺測微尺測定每臺顯微鏡不同放大倍數(shù)下目鏡測微尺每格實際代表的長度。 3 適用 范圍：四四 實驗步聚實驗步聚1 目鏡測微尺的校正：在目鏡測微尺的校正：在40鏡下，看清鏡臺測微尺的刻度后，轉(zhuǎn)動目鏡，鏡下，看清鏡臺測微尺的刻度后，轉(zhuǎn)動目鏡，使目使目鏡測微尺與鏡臺測微尺的刻度平行鏡測微尺與鏡臺測微尺的刻度平行，移動載物臺，使目鏡測微尺的，移動載物臺，使目鏡測微尺的0點

4、與鏡臺點與鏡臺測微尺的某一刻度重合，然后，仔細(xì)尋找兩尺第二個完全重合的刻度。計數(shù)兩測微尺的某一刻度重合，然后，仔細(xì)尋找兩尺第二個完全重合的刻度。計數(shù)兩重合刻度間目鏡測微尺的格數(shù)和鏡臺測微尺的格數(shù)。每種放大倍數(shù)取重合刻度間目鏡測微尺的格數(shù)和鏡臺測微尺的格數(shù)。每種放大倍數(shù)取2次觀察次觀察結(jié)果的均值。結(jié)果的均值。 目尺每格長度目尺每格長度(m)=（臺尺格數(shù)臺尺格數(shù)10）/目尺格數(shù)目尺格數(shù)2 菌體大小的測定菌體大小的測定(取取3個菌的平均值個菌的平均值)： 1) 大腸桿菌大小的測定；制片大腸桿菌大小的測定；制片 測定大腸桿菌的長和寬測定大腸桿菌的長和寬 2) 酵母菌大小的測定；制片酵母菌大小的測定；制

5、片 測定酵母菌的直徑測定酵母菌的直徑2 菌體大小的測定結(jié)果：菌體大小的測定結(jié)果： 五五 實驗結(jié)果實驗結(jié)果1 目鏡測微尺的校正結(jié)果目鏡測微尺的校正結(jié)果 不同放大倍數(shù)下目鏡測微尺每格代表的實際長度(m) 1010 1040 10100菌株 在不同放大倍數(shù)下菌株的大小1010104010100大腸桿菌大腸桿菌_酵母菌酵母菌_一一 實驗?zāi)康膶嶒災(zāi)康膗 明確血球計數(shù)板的計數(shù)的原理；明確血球計數(shù)板的計數(shù)的原理；u學(xué)習(xí)使用血球記數(shù)板測定微生物數(shù)量的方法。學(xué)習(xí)使用血球記數(shù)板測定微生物數(shù)量的方法。二二 顯微直接計數(shù)法顯微直接計數(shù)法二二 實驗材料實驗材料u測定菌株測定菌株: 酵母菌。酵母菌。u主要器材：顯微鏡、血

6、球記數(shù)板。主要器材：顯微鏡、血球記數(shù)板。三三 實驗原理實驗原理 微生物數(shù)量測定的方法：顯微直接計數(shù)法；平板菌落計數(shù)法；光電比濁法。微生物數(shù)量測定的方法：顯微直接計數(shù)法；平板菌落計數(shù)法；光電比濁法。1 顯微直接計數(shù)法的計數(shù)原理：顯微直接計數(shù)法的計數(shù)原理：2 1ml菌液中的總菌數(shù)菌液中的總菌數(shù)= N104B=A/525104B N: 大方格的總菌數(shù)；大方格的總菌數(shù)； A: 五個中方格的總菌數(shù)；五個中方格的總菌數(shù)； B：菌液的稀釋倍數(shù)；：菌液的稀釋倍數(shù)；3 血球計數(shù)板計數(shù)的適用范圍：血球計數(shù)板計數(shù)的適用范圍：三三 實驗原理實驗原理 1ml菌液中的總菌數(shù)菌液中的總菌數(shù)= ？ 答案：答案：(3+4+4+

7、3+2)525104 =8105個個/ml3 血球計數(shù)板計數(shù)的適用范圍：血球計數(shù)板計數(shù)的適用范圍：1 制備酵母菌液：制備酵母菌液：2 取清潔無油的血球計數(shù)板，在計數(shù)室上面加蓋血蓋片。取清潔無油的血球計數(shù)板，在計數(shù)室上面加蓋血蓋片。 3 取酵母菌液，搖勻，用滴管由蓋玻片邊緣滴一小滴，使菌液自行滲入，計數(shù)取酵母菌液，搖勻，用滴管由蓋玻片邊緣滴一小滴，使菌液自行滲入，計數(shù) 室內(nèi)不得有氣泡。室內(nèi)不得有氣泡。4 用用10鏡觀察并將計數(shù)室移至視野中央。鏡觀察并將計數(shù)室移至視野中央。 5 在在10鏡下計數(shù)：計數(shù)鏡下計數(shù)：計數(shù)4個（或個（或5個）中格的平均值，然后求得每個中格的平均值。乘上個）中格的平均值，然

8、后求得每個中格的平均值。乘上16（或（或25）就得出計數(shù)區(qū)總菌數(shù)，最后再換算到每）就得出計數(shù)區(qū)總菌數(shù)，最后再換算到每mL菌液中的含菌數(shù)。菌液中的含菌數(shù)。6 注意事項：注意事項：計上不計下，計左不計右，出芽計一半。計上不計下，計左不計右，出芽計一半。四 實驗步聚請確保血球計數(shù)板清洗干凈！將顯微計數(shù)結(jié)果記錄于下表中。T表示五個中方格中的總菌數(shù)；B表示菌液稀釋倍數(shù)。 各中格中菌數(shù)TB二室平均值個/ml12345第一室 第二室 五五 實驗結(jié)果實驗結(jié)果問題與討論問題與討論為什么目鏡測微尺必須用鏡臺測微尺來為什么目鏡測微尺必須用鏡臺測微尺來校正？校正？在顯微鏡下直接測定微生物數(shù)量有什么在顯微鏡下直接測定微生物數(shù)量有什么優(yōu)缺點？優(yōu)缺點？一一 實驗?zāi)康膶嶒災(zāi)康?三三 放線菌的形態(tài)觀察放線菌的形態(tài)觀察二二 實驗材料實驗材料u觀察菌株觀察菌株: 放線菌。放線菌。u主要器材：培養(yǎng)皿、玻片、顯微鏡。主要器材：培養(yǎng)皿、玻片、顯微鏡。u主要試劑：高氏主要試劑：高氏1號培養(yǎng)基；結(jié)晶紫染色液。號培養(yǎng)基；結(jié)晶紫染色液。三三 實驗原理實驗原理五五 實驗方法（實驗方法（）六六